Repositório RCAAP

Cystic Fibrosis (CF) is the most common lethal genetic recessive disorder of Northern Europe, affecting between 1/2,500 and 1/6,000 newborns of European ascent. CF is caused by mutations in the CF Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) gene, which encodes a cAMP-regulated chloride (Cl-) and bicarbonate (HCO3 -) channel expressed at the apical membrane of epithelial cells, that also regulates other epithelial channels and transporters. Due to its function as an ion channel and as a regulator of other channels, CFTR influences the ion and water content of the airway surface liquid (ASL) and its dysregulation leads to reduced ASL volume and consequently thick and dehydrated airway mucus. This thick mucus impairs mucociliary clearance (MCC) and causes the accumulation of bacteria and other pathogens, leading to persistent infections, inflammation and eventually to airway fibrosis and lung destruction, which is the primary cause of morbidity and mortality among people with CF (pwCF). CFTR is synthesised at the endoplasmic reticulum (ER) where it is co-translationally core-glycosylated, generating an immature form (called band B). The protein is then processed during its trafficking through the Golgi apparatus to produce its fullyglycosylated mature form (band C) that functions as a channel at the cell surface. Although more than 2,100 variants have been reported to date in the CFTR gene, disease liability is only confirmed for about 400. The most common mutation – F508del – is present in ~80% of pw CF worldwide. This mutant causes CFTR misfolding leading to ER retention by the ER quality control (ERQC), premature degradation and failure to reach the apical plasma membrane (PM) of epithelial cells. Identification of small molecules that rescue F508del-CFTR defect resulted in the approval of three corrector drugs currently available for individuals with CF: VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor) or VX-445 (elexacaftor – combined with VX-661) used in combination with VX-770 (ivacaftor), a gating potentiator. Ultimately, all variants result in abnormal Cl- secretion by epithelial cells and, according to the impact in CFTR, they may result in “classical” or “atypical” forms of CF disease, associated with total absence or residual Cl- transport through CFTR, respectively. CFTR mutations have been grouped into seven classes according to the defect caused. In class I mutations, there is no protein production; class II mutations cause CFTR retention in the ER; class III and IV mutations lead to defects in channel function; class V mutations result in decreased CFTR levels; in class VI mutations, CFTR is poorly stable in the cell membrane; and finally, class VII mutations lead to no CFTR mRNA production, and are therefore very difficult to correct pharmacologically. Elucidation of the molecular and cellular effects of rare mutations on CFTR protein 3Dstructure and function is crucial to predict disease severity and response to CFTR modulators. The use of cellular models is very useful to clarify these mechanisms, particularly because most of the rare mutations are present in heterozygosity. Here we proposed: i) To characterize rare ("orphan") CFTR mutations and to test the efficacy of approved corrective CFTR drugs; ii) To validate results using patient-derived materials (intestinal organoids) – when available; iii) To identify putative therapeutic targets for the correction of the unrescuable class II CFTR mutations. We started by developing cellular models stably expressing CFTR bearing 22 rare variants. Then these variants were characterised in terms of their impact in CFTR expression and function and their response to modulators, particularly to the two correctors (tezacaftor and elexacaftor) – which are part of the approved triple combination Trikafta® (US)/Kaftrio® (EU) - both in cellular models constitutively expressing CFTR mutants and, when available, in patient-derived materials (intestinal organoids). Our results show that 14 of the 22 variants studied present a processing defect, being characterised as class II mutations (i.e., defective traffic), 7 exhibit both immature and mature CFTR forms, suggesting a functional defect (classes III or IV) and 1 complex allele that causes the total abrogation of CFTR function (class VII). Among the 22 variants characterised, 8 were corrected with VX-661 alone, 9 were corrected with the combination VX-661+VX-445 and 5 did not show correction with any of the CFTR modulators tested. Moreover, to further characterise and to find novel therapeutic targets for 4 of the CFTR mutations under study (W57G, R560S, H1079P, Q1100P), we used an siRNA-based assay targeting genes that, when knocked-down, were described to rescue F508del. For N1303K, a similar approach was used, with siRNAs targeting proteins shown to be differentially expressed in a proteomic study performed in our lab. We were able to identify potential drug targets for the rescue of CFTR bearing R560S, H1079P or N13030K mutations. Altogether, the data presented here illustrate how complementary in vitro and ex vivo studies can contribute to understand the defect of rare CFTR mutations and to assess their response to CFTR modulator drugs for possible translation into clinical use. Furthermore, our data shows that the knowledge about CFTR folding is still insufficient to understand the defect caused by many class II mutations.

Autism Spectrum Disorder (ASD) is a heterogeneous neurodevelopmental disorder characterized by deficits in social communication and interaction and repetitive and restricted behaviors. While heritability estimates support a role for gene-environment interactions in ASD etiology, there is a paucity of strategies that integrate both components. The objective of this work was to identify gene-environment interactions involved in ASD risk. Through a systematic literature review we identified neurotoxic xenobiotics previously implicated in ASD, including air pollutants and endocrine disruptors. Using a school-based screening strategy we provide an updated prevalence estimate for 7-9 years old children from Centro Region of Portugal, of 0.5% (95% CI: 0.3-0.7). Leveraging public air quality monitoring data we estimated early-life exposure to criteria air pollutants in 217 ASD-subjects, and show that exposure to particulate matter during critical neurodevelopmental windows is associated with a higher clinical severity of ASD. In silico inspection of large genetic datasets (N=6224) showed that ASD-subjects carry predicted-damaging variants in a panel of 77 genes involved in the regulation of detoxification and physiological barriers (blood-brain barrier and placenta) permeability (XenoReg genes). Database query indicates that these genes interact with ASD-implicated xenobiotics. Through biochemical analyses of neonatal dried blood spots and the piloting of an early-life exposures assessment questionnaire we retrospectively collected environmental data for 70 ASD-children. The integration of environmental and sequencing data revealed a group of 13 patients for whom gene-environment interactions likely contributed to disease etiology. We present evidence that genetically-susceptible subjects might be at higher risk of ASD due to an increased vulnerability to early-life exposures. Possible underlying neuropathological mechanisms, including neuroinflammation, oxidative stress, endocrine disruption and epigenetics, warrant experimental validation. This work reinforces the need for clinical stratification and for monitoring early-life exposures, providing knowledge that, prospectively, may be translated to personalized medicine strategies applied in clinical practice.

Introduction Behavioural and psychological symptoms of dementia (BPSD) affect the majority of patients. The personality of the caregiver has significant influence on the responses to the care experience. We hypothesized that the personality influences the caregiver's depression, burden and distress related to the BPSD; and the personality is associated with specific strategies used by family caregivers to deal to the BPSD. Materials and Methods Participants were 105 consecutive patients with dementia and their family caregivers, living at home, attending a Dementia Outpatient Clinic. A cross-sectional design was used with a structured interview applied at home. Assessments included: Cognitive function (MMSE), Stage of Dementia (GDS), BPSD (NPI), Personality (NEO-FFI), Burden (ZBI), Depression (CESD), Distress related to BPSD (NPI-distress), and an open question to identify the strategies used by caregivers when faced with BPSD. The qualitative analysis of content was guided by Bardin. Path analysis was developed to 7 test hypothetical causal and mediation effects between personality traits, depression, burden and distress related to the BPSD; generalized linear model was used to appraise the influence of depression on use of strategies to deal with BPSD; a logit general linear model with binomial probability distribution, using the different strategies as repeated measures, to test the association between personality and strategies, followed by multiple logistic regression for each strategy. Results Neuroticism increased, whereas extraversion decreased, both caregiver’s depression and burden. Agreeableness was also found to decrease the burden. The personality characteristics only indirectly influenced the caregiver’s distress related to BPSD. Depression did not have a significant effect over the use of strategies. Only extraversion determined the use of caregiver strategies to deal with BPSD and more extroverted caregivers using “confronting” strategy less often. Conclusion Assessment of caregiver’s personality characteristics should be taken into account for the planning of intervention programs.

As espécies de delfinídeos apresentam um alto nível de inteligência que se reflecte nas suas complexas organizações sociais. A obtenção de conhecimento sobre a organização social de delfinídeos contribui para aumentar a compreensão sobre os factores envolvidos na evolução e na convergência social de mamíferos de grande cérebro. O golfinho comum (Delphinus delphis) vive em sociedades fluidas, sendo por isso uma espécie interessante para o desenvolvimento de estudos sociais. Esta é uma das espécies de cetáceos mais abundantes em Portugal, no entanto o conhecimento acerca da sua biologia e ecologia é muito limitado. Esta tese pretende fornecer informações detalhadas sobre a complexidade da vida social dos golfinhos comuns presentes no Sul de Portugal. O Capítulo 2, demonstra que os níveis de clorofila a e os valores de temperatura superficial da água influenciam a abundância desta espécie, dependendo da composição do grupo. Os Capítulos 3 e 4, foram dedicados ao estudo do comportamento e organização social do golfinho comum. Mais especificamente, o Capítulo 3, demonstra que o tamanho do grupo, o comportamento e a taxa de fissão-fusão do golfinho comum são influenciados principalmente pela presença de pares mãe-cria. O Capítulo 4, através da utilização de uma nova metodologia de estudo, recorrendo a drones comerciais para a realização de surveys aéreos, demonstra que a formação de grupos compostos por pares mãe-cria servem para evitar a predação, evitar o assédio sexual por parte de machos e reduzir a competição scramble. O Capítulo 5, revela que a utilização de drones comerciais para estudos comportamentais em golfinhos (Delphinus delphis e Tursiops truncatus) causam poucos impactos sobre os animais. Em conclusão, esta dissertação mostra que a abundância de golfinhos comuns no Algarve é influenciada por factores ambientais e pela composição do grupo, e que esta espécie apresenta uma alta flexibilidade na sua organização social, exibindo elevadas taxas de fissão-fusão. Adicionalmente, esta tese demonstra que a presença de pares mãe-cria exerce um papel crucial na dinâmica de grupo desta espécie e pretende contribuir para a compreensão das estratégias maternais em mamíferos. Por último, este trabalho pretende realçar a importância da região do Algarve no Sul de Portugal como uma área fundamental para a ocorrência de golfinhos comuns, revelando-se como uma zona de reprodução e berçário para esta espécie.

“Cuidar” é sinónimo de preservar e pode definir-se como a ação de ajudar os outros, promover o seu bem-estar e evitar o sofrimento. Esta palavra aplica-se, simultaneamente, aos protagonistas intervenientes nesta monografia: os farmacêuticos e os cuidadores informais. Ser farmacêutico vai muito além de garantir o uso consciente de medicamentos, enquanto profissional de saúde multidisciplinar, pauta-se pelo desenvolvimento de capacidades como a comunicação, confiança, engagement e assertividade e o investimento em momentos formativos permitiu a estes profissionais de saúde diferenciar os seus serviços para melhor servirem a população. Tendo em conta o envelhecimento ativo em que Portugal se encontra, e contabilizando as comorbilidades que provocam uma progressiva degeneração cognitiva, o recurso a cuidadores que, de um modo formal ou informal, são responsáveis por gerir o dia-a-dia da pessoa cuidada, incluindo a administração e revisão da medicação instituída, permite mitigar um decaimento mais agravado. Para elevar o papel dos cuidadores, foi criado em 2019 o Estatuto do Cuidador Informal, que procura explanar os seus direitos, deveres e medidas de apoio providenciadas pelas entidades sociais e regulamentares. No entanto, ainda são evidentes as condições precárias e o excesso de trabalho a que estes se encontram submetidos, criando assim alguma instabilidade pessoal e profissional que interfere com a sua saúde física e mental. Esta problemática cria uma oportunidade para os profissionais de saúde intervirem de uma forma direta e essencial. Deste modo, e apesar de diferenciados pelas suas profissões, torna-se óbvia a contiguidade entre farmacêuticos e cuidadores, pelo papel importantíssimo na comunidade, pela sua aproximação ao utente e pelo objetivo comum em cuidar, independentemente das circunstâncias, da melhor forma possível. É fundamental a elaboração de algumas soluções imediatas como a consulta farmacêutica, preparação individual de medicamentos e programas individualizados às necessidades do cuidador informal e pessoa cuidada. Rapidamente se concluiu que, em articulação com organizações e associações inerentes à área da saúde, a criação de práticas centralizadas na partilha de dados clínicos relevantes, conduzirá a cuidados de saúde personalizados e cada vez mais focados no bem-estar do utente.

Motor neuron diseases (MND) encompass a spectrum of motor neuron (MN) degenerative conditions associated to numerous genetic alterations, the most common of which are ALS and SMA-5q. Despite years of research, the molecular mechanisms underlying MN degeneration remain unclear. The present work aimed to contribute to answer two outstanding questions: 1) how do MND phenotypes arise from changes in distinct cellular pathways; and 2) how can the alteration of ubiquitously expressed proteins generate MNspecific diseases. We made use of network biology principles to investigate the tissuespecific interactomic context of MND genes and elucidate transversal characteristics shared by distinct MNDs. Two novel network-based methods were developed to characterize the functional landscape of tissue-specific interactomes (BioInt-U); and to identify bottleneck proteins connecting pairs of diseases with similar phenotypes (S2B). The application of the BioInt-U method to human PPI networks revealed tissue-specific functional specialization of ubiquitous proteins, with effective prediction of disease phenotypes. The S2B method was applied to prioritize candidates connecting ALS and SMA-linked genes in human and Drosophila brain networks, revealing coherent functional roles. RNA-seq data from Drosophila models was used to identify neuronal genes that are directly and indirectly regulated by the fly orthologs of the ALS and SMA causal genes TARDBP, FUS and SMN1. This work revealed a phenotypic convergence onto common protein functional modules, albeit through independent targets. In conjugation with the BioInt method, it further provided insights into the origin of MN specific phenotypes. Finally, the candidate genes identified in human and Drosophila networks using S2B and Drosophila transcriptome data, complemented by a publicly available dataset from ALS patients, were subjected to an integrative analysis by mapping onto BioInt units. Taken together, the work presented here provides novel insights regarding the molecular mechanisms underlying MNDs, while developing computational methods that can be used to address other diseases.

Os modelos dos Estudos Farmacoepidemiológicos foram sofrendo alterações desde o início da sua utilização, com o intuito de colmatar novas necessidades ou limitações na obtenção de resultados sobre a segurança e eficácia dos medicamentos. Como consequência desta evolução, os estudos observacionais ganharam um maior destaque dentro da comunidade científica, na medida em que trouxeram uma nova abordagem para responder a algumas barreiras sentidas nos ensaios clínicos randomizados (ECRs). Os estudos observacionais apresentam várias metodologias, dependendo do objetivo do estudo. Adicionalmente, a recolha de informação pode ser feita a partir de estudos de campo ou através da análise de registos ou bases de dados. Há, portanto, vantagens relativamente aos ECRs, já que o desenho dos estudos é mais flexível e permite obter evidências robustas de forma rápida e numa população mais abrangente. Face à importância da farmacoepidemiologia observacional, houve alterações recentes na regulamentação da farmacovigilância que incentivam ou exigem (em alguns casos) a realização de estudos de segurança e eficácia pós-autorização de introdução do medicamento no mercado. As autoridades reguladoras têm também trabalhado no sentido de orientar a utilização destes estudos para que as evidências de vida real que são geradas possam complementar o conhecimento existente sobre os medicamentos, de forma a serem usadas em tomadas de decisão. Existem, ainda, vários fatores internos e externos que representam obstáculos aos estudos observacionais, colocando em debate a confiabilidade e utilidade dos mesmos comparativamente aos ECRs. Deste modo, a presente monografia contém uma análise dos pontos fortes e fracos desta metodologia, assim como das oportunidades e ameaças que a mesma enfrenta. De facto, os pontos de melhoria deste modelo de estudo são diversos, assentando grandemente na potencialidade da utilização de bases de dados reais. Ainda assim, há uma grande janela de oportunidades para o crescimento dos estudos observacionais na avaliação da segurança e efetividade, destacando a possível combinação de abordagens dos ECRs e destes ensaios não randomizados.

O envelhecimento populacional tem ganho expressão nos países desenvolvidos, incluindo em Portugal, existindo cada vez mais idosos polimedicados com esquemas terapêuticos complexos. Deste modo, importa não só otimizar os esquemas terapêuticos mas também auxiliar na gestão da medicação, promovendo a adesão à terapêutica, reduzindo erros de medicação e reações adversas, e contribuindo em última instância para o uso responsável do medicamento e para a melhoria das condições de saúde dos idosos. Neste campo, revela-se extremamente importante a intervenção do farmacêutico comunitário através da implementação de serviços farmacêuticos nas farmácias comunitárias, tanto pelo seu conhecimento técnico-científico como por este se encontrar próximo do idoso ou do seu cuidador. Com recurso a um inquérito, implementado numa farmácia comunitária no concelho de Sintra, destinado a idosos polimedicados ou seus cuidadores, pretendeu-se identificar dificuldades na gestão da medicação, as quais foram identificadas maioritariamente por cuidadores, salientando-se, as dificuldades no saber a forma correta de tomar os medicamentos e na gestão de horários dos mesmos. Para além disso, pretendeu-se caracterizar quem conhece e utiliza os serviços farmacêuticos prestados pelas farmácias, tendo-se observado que são os cuidadores quem mais os conhecem mas que são os idosos quem mais os utilizam. Não se identificou nenhum padrão associado à utilização dos mesmos, uma vez que as características dos utilizadores são muito dispersas entre si. Ainda assim, verificou-se que na sua maioria os inquiridos, tanto idosos como cuidadores, desconheciam a existência destes serviços, sendo a consulta farmacêutica e a preparação individualizada da medicação os mais referidos pelos inquiridos que conhecem os serviços. A identificação de vantagens na utilização destes serviços pelos inquiridos foi unânime, destacando-se a redução do stress do doente/cuidador, o melhor controlo das doenças crónicas, a possível identificação de medicamentos inapropriados, de interações ou duplicações terapêuticas, e a toma à hora correta. Relativamente ao pagamento pela sua utilização, os inquiridos revelaram-se na sua maioria dispostos a pagar.

A Espondilite Anquilosante é uma doença inflamatória crónica e hereditária, que apresenta uma grande diversidade de manifestações clínicas, afetando principalmente as articulações sacroilíacas, a coluna vertebral e as enteses, mas pode também afetar as articulações periféricas, como os joelhos e os ombros. Quando se trata de um estado avançado da doença, esta caracteriza-se pela fusão das articulações sacroilíacas e da coluna vertebral, o que resulta na perda progressiva do movimento da coluna. É uma doença que afeta tanto os homens como as mulheres, mas é mais prevalente nos homens. Apesar de não ter cura, os doentes recorrem à terapêutica farmacológica para alívio dos sintomas. No entanto, esta terapêutica apresenta alguns efeitos adversos associados e também tem a desvantagem dos medicamentos biológicos, que são muitas vezes utilizados, terem um custo elevado. Por isso, cada vez mais os doentes têm procurado alternativas à terapêutica convencional de forma a contornar estas problemáticas. Nesta monografia, procurou-se, numa primeira parte, abordar de forma sistematizada, a Espondilite Anquilosante, enquanto doença que afeta o Sistema Locomotor, clarificando a sua definição, contexto histórico, epidemiologia e custos associados, sinais e sintomas, fatores de risco, patogénese, terapêutica (não farmacológica e farmacológica), diagnóstico e prognóstico. Na segunda parte da monografia, encontra-se descrito o papel da fitoterapia no alívio das manifestações clínicas associadas à doença, como alternativa ou complemento da terapêutica farmacológica convencional. É feita uma introdução à legislação europeia e portuguesa da fitoterapia e, em seguida, são enfatizadas duas plantas medicinais, a Curcuma longa e o Sinomenium acutum, que demonstraram ter um papel inibitório ao nível dos mecanismos fisiológicos que conduzem à inflamação sendo, por isso, muito útil a sua administração ou aplicação. São também abordadas outras plantas que revelaram um papel promissor, no futuro, nesta doença, mas são necessários mais estudos para o comprovar. Cada vez mais, a fitoterapia tem sido utilizada, tendo o farmacêutico comunitário um papel importante na sensibilização dos utentes para este tipo de alternativas (na forma de suplementos alimentares, por exemplo), o que resulta numa diminuição dos custos e numa maior qualidade de vida para os utentes.

This chapter assesses the politicisation of the EU in six European countries, by looking at the media coverage of 29 legislative elections held between 2002 and 2017. Using a combination of automated and manual methods of content analysis, this chapter goes beyond the existing studies to examine how the Eurozone crises impacted the traditional media coverage of the EU not only in terms of magnitude but also in terms of framing and content. Using a unique dataset of 165,341 news items, from 12 mainstream newspapers, this study answers three questions relevant to the main goal of this book: (1) does EU politicisation vary between left- and right-leaning newspapers; (2) is there a difference between news and opinion articles in terms of EU salience and tone; (3) what dimensions of EU debates are more prevalent in the media. Our analysis shows that, after the crisis, the countries’ politicisation of the EU diverged more in terms of content than magnitude. However, when we only consider opinion articles, the differences within mainstream media, from the left and right, become more salient. These results confirm the role and importance of the media for EU politicisation and its potential impact on national politics.

A hipertensão pulmonar está associada a uma alta mortalidade e morbilidade nos recém nascidos. O tratamento desta patologia passa pela administração de diferentes fármacos, nomeadamente o sildenafil. No entanto, nem todas as formas farmacêuticas são passiveis de serem administradas a esta população. As soluções e suspensões aparentam ser as formas farmacêuticas mais comumente utilizadas na produção de medicamentos para crianças, ainda que, na grande maioria das vezes, apresentem um valor de osmolalidade superior à recomendada pela Associação Americana de Pediatria para preparações entéricas, podendo levar ao desenvolvimento de patologias graves, como a enterocolite necrotizante. Assim, as formas farmacêuticas sólidas têm vindo a ganhar destaque nesta população, uma vez que evitam o problema da osmolalidade, são formulações mais simples, e fáceis de armazenar e conservar. Por outro lado, é importante ter em consideração que a população pediátrica apresenta características e necessidades físicas, sociais, cognitivas e farmacocinéticas distintas de acordo com a faixa etária em que se insere, estando estas diferenças mais marcadas nos recém-nascidos, que apresentam maior imaturidade do organismo. Neste sentido, a escolha dos excipientes e a formulação individualizada do medicamento ganha uma relevância maior nesta população. A impressão 3D apresenta-se como uma tecnologia inovadora e promissora no que diz respeito à formulação individualizada do medicamento, permitindo a produção de diversas formas farmacêuticas com formulações bastante simples, ideais à administração em recém-nascidos. Neste trabalho foi utilizada a impressão 3D por extrusão com o objetivo de desenvolver filmes bucais de citrato de sildenafil para aplicação em pediatria. A qualidade da impressão nesta tecnologia depende em grande parte do polímero utilizado, pelo que a gelatina foi o polímero de eleição por ser barato e seguro na administração em crianças. A impressão dos filmes bucais mostrou ser um desafio, devido ao comportamento reológico atípico da formulação, não se tendo conseguido obter filmes uniformes. Ainda assim, consideramos que a obtenção de formas farmacêuticas sólidas através da impressão 3D é uma realidade, embora possa não ser aplicável a todas as substâncias ativas.

A presente dissertação de doutoramento se propõe a enfrentar um dos temas que mais geram polêmica hodiernamente no que tange à estrutura do Estado, o ativismo judicial. O estudo se desenvolve nomeadamente no âmbito do Supremo Tribunal Federal (STF), sem prejuízo da verificação no direito comparado, com ênfase nos Estados Unidos da América – berço da expressão –, país onde foram analisadas várias Cortes, sobretudo a Corte Warren (ativismo progressista) e a Corte Rehnquist (ativismo conservador). Analisa-se a relação da jurisdição constitucional com a democracia, bem como as principais teorias jusfilosóficas que gravitam em torno deste embate teórico. A investigação considera os reflexos da Carta Republicana de 1988, que fortaleceu a figura do Poder Judiciário, em especial do STF, no contexto político, conferindo maiores poderes aos juízes constitucionais no arranjo institucional (ascensão institucional), e, ao mesmo tempo, fomentou o aumento da judicialização. Verifica-se se houve e quais são os fundamentos da mudança paradigmática da autolimitação ao ativismo judicial do STF e sua proeminência em temas controvertidos, discussões políticas ou morais, a gerar, ao menos no campo teórico e acadêmico, um quadro de preocupação com os limites ao exercício da jurisdição constitucional, dada a usurpação de funções constitucionais e a violação ao postulado da separação de poderes. No âmbito da judicialização da política e a atuação expansiva do STF, averígua-se a legitimidade do Tribunal no equacionamento de questões políticas, sejam políticas públicas promotoras de direitos fundamentais ou mesmo de “política pura”, em função das implicações do princípio constitucional da inafastabilidade da tutela jurisdicional e vedação ao non liquet (art. 5º, inciso XXXV, CF), fixando-se quais seriam os limites e possibilidades da atuação da Corte no contexto brasileiro. Examinam-se os principais estudos quanto à divisão dos poderes e sua ligação com a releitura da teoria da separação dos poderes na atualidade e com o ativismo judicial. Investiga-se o ativismo judicial num caráter interdisciplinar, no plano histórico, político e institucional, traçando suas principais causas e apontando à comunidade científica caminhos, meios ou posturas para controlar o ativismo do STF e harmonizar as relações interinstitucionais. Analisa-se a crise da democracia brasileira e seus reflexos no protagonismo do STF, formula-se, de forma inovadora, classificação – com critérios distintivos – do ativismo judicial do STF em moderado e imoderado e defende-se a adoção de medidas práticas como solução mais factível ao estabelecimento de mecanismos de controle institucional do seu ativismo judicial.

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In 2009, Machuqueiro and Baptista used Desulfovibrio vulgaris Hildenborough type I cytochrome c3 in the validation of their new implementation of the stochastic titration method, the constant-(pH,E) MD method. DvH-TpI-c3 is a small globular and monomeric tetraheme protein present in the periplasm of the sulfate reducing bacteria DvH. It is constituted by 107 residues plus four hemes covalently bound to cysteines in the polypeptide chain together with bis-histidinyl axial ligation. Therefore, it constitutes a tight densely packed structure where the heme reduction potentials are very close, making it a very demanding test case in terms of prediction. When tested, this method was shown to yield better results when a high dielectric constant, ", was assigned to the protein region. This dependence on " was never found in previous constant-pH MD simulations and poor heme charge parameterization may have been responsible for this effect. Hence, the main goal of this work was to refine the QM parameterization of the redox centers, i.e. obtain new and more accurate charge sets, incorporate them in the new 53A6 GROMOS force field, and finally run constant-(pH,E) MD simulations with a " of 2. Single and multi-conformational approaches were tested using the RESP scheme. Merz-Kollman and CHELPG methods were also used. All tested charge sets and respective charge parameterization methods were found to be valid, and there is not enough margin to unequivocally select one method as the absolute best. Still, the RESP fitting procedure is much more versatile than CHELPG and Merz-Kollman, making it a better suited tool for a generalized derivation of partial atomic charges. When applied to the constant-(pH,E) MD method, these new and more accurate charge sets, enabled us to improve Machuqueiro and Baptista's results. We were, however, unsuccessful in fully reproducing all experimental data. Theoretical and experimental results systematically disagreed when predicting the Ehalf values for hemes III and IV. The reason behind this incongruity is something we plan to investigate in future work.

O crime organizado é um fenómeno crescente, de dimensões mundiais, e que desafia a conhecida ordem jurídica penal e processual penal a buscar defini-lo, embora afastada a unanimidade sobre o entendimento desse problema social. Sua atuação inspira sensação de insegurança na sociedade, que muitas vezes, inadvertidamente, pede por intervenção estatal com soluções mais duras, em prejuízo até mesmo de direitos fundamentais. Ele apresenta contornos difusos, atua em diversas áreas, podendo variar de acordo com o local ou objeto do crime. No Brasil, o crime se organizou pela primeira vez dentro dos presídios, partindo da prática de delitos comuns, para se especializarem no tráfico de drogas, tendo este como objeto da empresa criminosa, mas passando por outras dezenas de delitos para garantir o sucesso da empreitada. Para a prática de delitos, bem como para garantir sua impunidade, é comum ao crime organizado o uso do ambiente virtual, utilizando ferramentas consideradas maliciosas, muitas delas de uso proibido, portanto não autorizadas para uso durante a investigação pela polícia judiciária. O objetivo deste trabalho foi analisar a utilização de meios considerados maliciosos, e por isso chamados malware, como método de obtenção de prova na investigação do crime organizado, seja em relação a delitos já cometidos, seja em relação a delitos que estão em andamento ou em vias de acontecer. Tal análise foi feita tanto quanto ao aspeto técnico operacional, quanto ao aspeto jurídico de respeito aos princípios constitucionais do direito ao silêncio, à proporcionalidade e à ponderação. Na análise do uso de malware, a atenção está fincada no seu uso como agente infiltrado virtual, não se prendendo a um tipo de malware especificamente, podendo adotar qualquer uma de suas variações, tais como Trojan horse, spyware, adware, keylogger, entre outras, constituindo método de obtenção de prova que realiza sua atividade, mesmo quando ausente fisicamente o investigador judiciário. A possibilidade de ausência do investigador durante a coleta remota das provas, bem como a escolha dos dados a serem utilizados, cálculos feitos imediatamente pelo malware programado para tanto, garantem maior cobertura e agilidade na coleta de provas, facilitando o trabalho de sua recolha bem como de indícios que possam vir, inclusive, a evitar a prática delitiva. Por não respeitar limite ou balizamento legal para sua atuação, o crime organizado apresenta grande agilidade quando atua em ambiente virtual, sendo fundamental o estreitamento das janelas de passagem para sua atuação em tal terreno. Cabe ao Estado encontrar alternativas e possibilidades para aí investigar, como já iniciou com a Lei do Cibercrime, mas que ainda precisa avançar, garantindo à sociedade que é possível realizar uma investigação do crime organizado de maneira mais eficiente, utilizando as ferramentas tecnológicas disponíveis, sem que isso implique mitigar direitos fundamentais.

Sob o conceito de substituição jurisdicional modificativa de normas da função legislativa, analisa-se, na presente dissertação, a viabilidade constitucional da extracção de normas a partir de enunciados normativos sem observância da tabela de equivalências semânticas da língua, partindo-se do princípio, constitucionalmente justificado, da literalidade da norma enquanto significado de um enunciado editado por ocasião de um uso da língua marcado pelo respectivo carácter directivo, preciso e independente de contextos, através do uso da linguagem precisa e vulgar como garantia de certeza, embora ressalvadas, obviamente, as situações de incerteza da linguagem. Nessa conformidade, e tendo presente o sistema de fiscalização jurisdicional difusa da constitucionalidade vigente em Portugal, chega-se à conclusão de que os modos tradicionais de interpretação não literal, assim como os mais criativos meios de integração de lacunas, são afinal meios de tutela dos princípios constitucionais da igualdade e da proporcionalidade, pois o tipo de problemas a que tais procedimentos metodológicos respondem acabam por se reconduzir sempre a essas duas vertentes – adequação aos fins, alargamento ou restrição da previsão com base em argumentos de igualdade. Esta tutela dos princípios constitucionais é, todavia, uma tutela correctiva ou modificativa das normas da função legislativa, procedimento aqui legitimado sempre que a solução de alguma maneira se imponha por força de uma solução retirada de um princípio constitucional que não dê aso à escolha primária de opções, reservada, em Portugal, aos órgãos mais próximos da representatividade do povo. O que não se admite, em contexto algum, é a tomada de leis por inválidas ou modificadas com base em princípios ou pautas exteriores ao Direito positivo, por residir na Constituição a norma de reconhecimento interno do Direito em Portugal. O resultado final deste sistema de consideração jurisdicional das leis entronca, mutatis mutandis, na prática do Reino Unido, em que a validade de uma literal rule é moderada pela especiosidade da golden rule e da mischief rule.

The existing assessments of EU politicization have predominantly focused on the media and in the actors that are reported in that arena. This chapter offers a novel approach to the study of EU politicization by focusing, instead, on the institutional arena of six EU countries. Using the MAPLE dataset of parliamentary debates, with a total of 724,963 speeches covering a period of 20 years, this chapter offers a comparative and longitudinal analysis of EU politicization at the institutional level, assessing the impact that the Eurozone crisis had in the parliamentary debates of the EU. Automated and manual content analysis methods are used to answer three main questions: Has the EU been politicized at the institutional level? Did the Eurozone crisis affect the politicization of the EU in parliaments? What characteristics of political parties have determined the salience and contestation of the EU topic? Our results suggest that the EU has not been, in the past 20 years, a very salient nor contested topic at the institutional level. However, we find that the parties’ contribution to the democratic legitimacy of the European integration varies significantly, with the parties’ position on the EU topic being the strongest determinant of EU politicization.

Esta tese analisa, no romance À la recherche du temps perdu (Marcel Proust, 1913- 1927), o luto do protagonista pela avó e por Albertine, as duas maiores perdas de sua vida. A tese busca se diferenciar de duas posições da crítica: a que descreve Marcel como um enlutado incurável a lamentar o passo do tempo e a perda das pessoas que amou; e a que o descreve como um cínico que rapidamente supera e esquece as perdas pessoais. Em contrapartida, a tese oferece uma interpretação do protagonista como alguém que quer, sem sucesso, controlar e resolver o luto pela razão e pelo discurso – daí, por exemplo, anunciar tantas vezes já ter se tornado indiferente à Albertine e à avó. À revelia dos desejos de Marcel, o luto faz seu caminho de modo intermitente, emocional, persistente e não deliberado, sem concluir no apagamento do morto ou no lamento permanente. Busca-se, por fim, discutir, por meio de critérios não comportamentais, o alcance e a natureza das mudanças que o luto favorece em Marcel, nomeadamente a sua vocação para a escrita.

The development of irrigation technologies related with the different areas covered by irrigated crops in Portugal as well as in the Southern countries of the EU taking into account the relative importance of Agriculture, in what concerns the integration, Water Framework directive and the Eco-compatibility principles requires the capability for the management of big amount of spatial data, a detailed knowledge of their structure and links, the improvement and development of GIS skills at Local, Regional or National scale, integrating remote sensing data on different systems, allowing a better water use, allowing a better knowledge of spatial and temporal distribution of land Use, Soil Types, Crop Water requirements, water distribution network and a more rational management of the available water resource. The application of the GIS to the areas covered by the different Water Districts Management Boards, spread all over the country, gives the possibility for a better use of water for agriculture, on the frame of programs like the EU INTERREG II C Program.

The main purpose of the research presented in this paper is the development and validation, through the application to a case study, of an efficient form of satellite image classification that integrates ancillary information (Census data; the Municipal Master Plan; the Road Network) and remote sensing data in a Geographic Information System. The developed procedure follows a layered classification approach, being composed by three main stages: (1) Pre-classification stratification; (2) Application of Bayesian and Maximum-likelihood classifiers; (3) Post-classification sorting. Common approaches incorporate the ancillary data before, during or after classification. In the proposed method, all the steps take the auxiliary information into account. The proposed method achieves, globally, much better classification results than the classical, one layer, Minimum Distance and Maximum-likelihood classifiers. Also, it greatly improves the accuracy of those classes where the classification process uses the ancillary data.