Repositório RCAAP

Muçarela de búfala é um queijo fresco, de massa filada, que apresenta características como coloração branca, sabor adocicado e alto valor nutricional e que tem grande aceitação pelos consumidores, dispostos a pagar preços diferenciados pela peculiaridade do produto. No entanto, o queijo está sujeito à violação de autenticidade, tanto pela sazonalidade da produção do leite da búfala quanto pelo alto preço do leite e do queijo, quando comparado aos similares oriundos da vaca, bem como à contaminação microbiana. Assim, este trabalho teve por objetivos avaliar a ocorrência de fraude na muçarela de búfala por adição de leite de vaca, e a influência da sazonalidade da produção do leite de búfala na frequência desta adulteração, bem como avaliar a presença de alguns patógenos no queijo comercializado no município de São Paulo. Amostras de muçarela de bolinha cujo rótulo identificava o uso exclusivo de leite de búfala foram submetidas à pesquisa de DNA bubalino e bovino, usando primers para detecção do gene citocromo b (cytb), e à análise microbiológica. A fraude foi detectada em 73% das amostras (77/106), não havendo influencia da sazonalidade; em duas amostras (2/106) apenas o DNA bovino foi detectado. Do ponto de vista microbiológico, todas as amostras apresentaram ausência de Listeria monocytogenes e de Salmonella spp. em 25 gramas, mas 7% (10/138) foram consideradas impróprias para o consumo humano por apresentar Coliformes termotolerantes e/ou Staphylococcus coagulase positiva acima dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Conclui- se que a fraude por adição de leite de vaca é muito frequente e não é motivada apenas pela redução sazonal da oferta do leite bubalino. Além disso os problemas microbiológicos detectados estão associados às inadequadas condições de higiene da matéria prima e/ou do processo de fabricação e/ou abuso de temperatura de armazenamento do queijo.

Rickettsia rickettsii é uma bactéria Gram-negativa, intra-celular obrigatória, causadora de uma grave riquetsiose em humanos, chamada no Brasil de Febre Maculosa Brasileira (FMB). Os carrapatos vetores de R. rickettsii para humanos, conhecidos até o momento no Brasil são Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. O presente estudo avaliou o tempo mínimo de parasitismo de A. aureolatum (ninfas não-alimentadas, machos adultos em jejum e pré-alimentados), infectadas por R. rickettsii, para que ocorra a transmissão da bactéria para o hospedeiro vertebrado. Para a produção de ninfas infectadas, foi mantida uma colônia de carrapatos em laboratório, infectados por R. rickettsii através de infestação em cobaias (Cavia porcellus) inoculadas por essa bactéria (Cepa Taiaçu). Para os experimentos com as ninfas de A. aureolatum, dividiram-se as cobaias em dez grupos de duas, sendo essas infestadas com dez ninfas cada uma. Após 2 horas da infestação (fixação da primeira ninfa), o primeiro grupo (G1) teve todas suas ninfas removidas. Após 4 horas de infestação, um segundo grupo (G2) de cobaias teve todas suas ninfas removidas de forma semelhante. Este procedimento foi repetido com os demais grupos, cada um em um determinado número de horas após a infestação: após 6 (G3), 8 (G4), 12 (G5), 18 (G6), 24 (G7), 36 (G8) e 48 (G9) horas. Para um último grupo (G10), as ninfas foram deixadas em parasitismo até seu desprendimento natural (cerca de 10 dias). Os experimentos realizados com carrapatos machos adultos em jejum seguiram os mesmos períodos utilizados para as ninfas, para fixação e retirada de carrapatos, assim como o número de cobaias. Nos experimentos com carrapatos machos adultos previamente alimentados - 48 horas em coelhos (Oryctolagus cuniculus), utilizaram-se os períodos de fixação e retirada de carrapatos idênticos aos experimentos anteriores, e além desses foi necessária a utilização de períodos menores de fixação de A. aureolatum, variando entre um minuto e uma hora. As cobaias foram avaliadas clinicamente todos os dias, e sacrificadas 21 dias após a infestação. Amostras de sangue foram colhidas e testadas para presença de anticorpos anti-R. rickettsii. Carrapatos retirados das cobaias de todos os grupos foram testados por PCR, a fim de se certificar que estavam infectados por R. rickettsii. De acordo com os resultados obtidos, ninfas não alimentadas de carrapatos A. aureolatum, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 12 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; carrapatos adultos não alimentados, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; e carrapatos adultos infectados por R. rickettsii e pré-alimentados em coelhos por 48 horas, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 minutos, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado, utilizando-se cobaias como modelo experimental.

Apesar de o Brasil ser um país de destaque na produção e comercialização de produtos agropecuários, o setor produtivo de pescado ainda está em desenvolvimento no país. Os estudos sobre os sistemas agroalimentares são importantes ferramentas que permitem conhecer as cadeias produtivas, identificar entraves, formular estratégias e políticas públicas e privadas, visando o desenvolvimento do setor. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo caracterizar o sistema agroindustrial do pescado no Brasil, identificar seus principais entraves e analisar a atuação governamental perante tais problemas. Para tal, foram consultados órgãos governamentais, associações, bancos de dados, publicações e pessoas relacionadas ao segmento. O sistema agroindustrial, dividido em pesca, aquicultura, indústria e comércio, foi caracterizado quanto ao volume de produção, valores financeiros e número de estabelecimentos e trabalhadores. Após a identificação de entraves ao desenvolvimento do setor, como o estado de sobrepesca dos principais recursos pesqueiros, os diversos problemas enfrentados pela aquicultura, a baixa qualidade higiênico-sanitária dos produtos comercializados, a escassez de informações setoriais publicadas e o baixo consumo de pescado no Brasil, a atuação dos serviços oficiais foi analisada e discutida. Foram identificados como problemas de gestão governamental a sobreposição de funções dos diversos órgãos administradores, a falta de coordenação entre esses órgãos, a ausência de fiscalização do cumprimento da legislação, a carência de políticas públicas claras, a dificuldade na obtenção de crédito para o investimento, a escassez de informações setoriais publicadas, entre outros. Algumas sugestões para o ordenamento do segmento do pescado foram feitas, como a reorganização institucional e definição de governança, a atualização da legislação, a contratação e treinamento de pessoas para a fiscalização, a definição de políticas claras para a aquicultura, o incentivo a pesquisas por informações setoriais e divulgação de dados confiáveis e atualizados. Apesar do desenvolvimento setorial após a criação da Secretaria Especial de Pesca e Aquicultura, o setor ainda enfrenta muitos problemas que necessitam solução a fim de desenvolver esse sistema produtivo e elevar o Brasil a um nível de maior importância na produção mundial de pescado.

Cães e seres humanos compartilham os mesmos caminhos por pelo menos 14-100 mil anos e, atualmente, o cão doméstico (Canis lupus familiaris) é a espécie de carnívoro mais abundante e difundida do planeta, está presente em todos os continentes, exceto Antártida. Como conseqüência, cães representam um desafio global tanto para conservação da biodiversidade como para saúde pública, e esta problemática é ainda mais grave entre cães mantidos soltos e cães ferais em áreas rurais. No entanto, apesar da abrangência e da gravidade do problema, tanto a intensidade dos impactos causados por cães domésticos, como a eficácia de estratégias de manejo, ainda são incertas. Isso ocorre, pois estudos raramente quantificam aspectos básicos da ecologia dos cães. Aspectos que são cruciais tanto para compreensão dos processos de invasão biológica, como para elaboração de modelos epidemiológicos de dispersão de doenças. É nesta lacuna de conhecimento que buscamos nos aprofundar na presente tese de doutorado. Utilizando como modelo a população de cães de um agroecossistema de Cerrado no Brasil Central, realizamos um estudo longitudinal buscando elucidar como é a estrutura e a dinâmica populacional dos cães; de que forma eles utilizam o espaço e que fatores determinam seus caminhos; e como a população e o movimento dos cães podem ser modulados pelas pessoas. Com os estudos aqui apresentados, trouxemos avanços metodológicos, e reflexões de manejo, que contribuirão de forma substancial para aprofundar nossa compreensão de uma problemática comum a todas as partes do planeta. Vimos que, mesmo em uma população de tamanho estável, a estrutura populacional pode ser extremamente dinâmica, e este fluxo de indivíduos é regido essencialmente pelas pessoas. Observamos também que os cães têm um uso considerável da paisagem, ainda que eles permaneçam a maior parte do tempo ao redor de suas casas. Além disso, constatamos que os padrões de uso do espaço variam substancialmente a depender das características do indivíduo, do manejo e do papel social do cão na comunidade. Por fim, propomos estratégias de manejo que possam simultaneamente mitigar os impactos causados por cães e aprimorar o desempenho de suas funções na comunidade.

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório amplamente disseminado pelo mundo. Estima-se que um terço da população mundial esteja cronicamente infectada por esse coccídio. No Brasil, essa prevalência chega a ser estimada em 70% em algumas regiões do país. Apesar de apresentar uma alta prevalência, a primo-infecção por T. gondii acaba passando despercebida em pacientes imunocompetentes, com quadros subclínicos ou com sintomas semelhantes aos de uma gripe. Em pacientes imunocomprometidos e em mulheres grávidas, infecções recentes merecem grande atenção, pois a evolução clínica da doença é mais severa, podendo levar ao desenvolvimento de sequelas irreversíveis ou até à morte. Uma das manifestações mais comuns da infecção sistêmica por T. gondii é a forma ocular, acometendo principalmente a retina e a coroide. O isolamento de T. gondii a partir de amostras de seres humanos é imprescindível para verificar se existe ou não uma correlação entre a expressão fenotípica da doença e a linhagem do parasita. No Brasil, ainda há poucos relatos de isolamentos obtidos a partir de amostras humanas. O objetivo do presente estudo foi determinar a epidemiologia da toxoplasmose ocular em Bancos de Olhos das cidades de Ribeirão Preto (BORP) e São José do Rio Preto (BOSJRP), no interior do Estado de São Paulo. Foram recebidos um total de 395 globos oculares correspondentes a 201 doadores. Destes globos oculares, 289 foram captados pelo BORP, enquanto 106 foram captados pelo BOSJRP. Dentre os doadores do BORP, 42/148 (28,3%) possuíam ambos os tecidos (olhos e sangue) disponíveis para pesquisa e 5,4% (8/148) dos doadores possuíam lesões sugestivas para toxoplasmose ocular (TO). Três deles apresentavam lesões macroscópicas bilaterais, isto é, em ambos os olhos, e cinco possuíam lesões unilaterais. Dentre os 53 doadores do BOSJRP, 86,8% (46/53) possuíam ambos os tecidos disponíveis para pesquisa e nenhuma amostra de tecido ocular apresentava lesões sugestivas para TO. Do total de 88 soros analisados, 70,5% (62/88) apresentavam apenas anticorpos IgG anti-T. gondii, 6,8% (6/88) foram positivos para ambos os anticorpos (IgG e IgM) anti-T. gondii e 22,7% (20/88) foram considerados soronegativos. Todos os globos oculares com lesão potencialmente causada por T. gondii foram submetidos ao bioensaio em camundongos para tentativa de isolamento do parasita. Ao término do período de bioensaio, nenhum camundongo apresentou anticorpos anti-T. gondii no Teste de Aglutinação Modificado (MAT) ou cistos nos tecidos analisados durante a necropsia. Na cPCR, a amplificação dos fragmentos de interesse do gene B1 e da região repetitiva do genoma REP-529 foi observada em uma amostra que não apresentava lesão macroscópica aparente; esta amostra foi designada como PS-TgOTBrSP1. Além dessa amostra, outras oito apresentaram amplificação para os marcadores selecionados na PCR em tempo real, portanto, 2,3% (9/395) dos globos oculares foram diagnosticados como positivos para T. gondii. As demais amostras, incluindo todas as onze amostras com lesão macroscópica sugestiva para TO, foram diagnosticadas como negativas. A amostra PS-TgOTBrSP1 foi identificada como não-arquétipa por meio da análise de 15 marcadores microssatélites e um genótipo incompleto, não-arquétipo, foi obtido por meio de PCR-RFLP. O genótipo MS de T. gondii da amostra PS-TgOTBrSP1 é um genótipo único, o que contribui para corroborar a baixa circulação de linhagens clássicas clonais e a ampla diversidade genética de T. gondii no Brasil. E, embora só tenha sido possível examinar um número reduzido de amostras, o presente estudo também contribui para validar dados encontrados em outros estudos que apontam que 50-80% da população adulta tem anticorpos para T. gondii no Brasil.

A legislação permite o uso de leite cru para fabricar queijos com maturação superior a 60 dias em temperatura acima de 5°C, mas falta comprovação científica sólida sobre a eficácia desse processo quanto à inativação de importantes patógenos que podem estar presentes no leite, como o Mycobacterium bovis; além disso, não há metodologia oficial para pesquisa deste agente em alimentos. Desta forma, este trabalho se propôs a estabelecer um protocolo para estudar a curva de inativação do Mycobacterium bovis durante a cura do queijo. Foram fabricadas três partidas de queijo do tipo parmesão com leite pasteurizado e contaminado com uma cepa de Mycobacterium bovis isolada de bovinos abatidos no estado de São Paulo. O queijo foi curado a 18°C e analisado semanalmente até o 63ºdia. As amostras foram submetidas à diluição decimal seriada, semeadas em duplicata em meio Stonebrink-Leslie, acrescido de antibióticos, e incubadas a 37°C por 45 dias. Os resultados de um queijo foram perdidos por contaminação por fungos. O valor D18°C médio, ponderado pelas incertezas, foi de 37,5 dias ± 5,3 dias. Esse resultado indica a necessidade de outros estudos para ampliar o número de queijos estudados e obter, portanto, um resultado mais representativo do efeito da cura sobre o decaimento da população de M. bovis. Há também necessidade de melhorar o poder inibitório do meio de cultura para evitar perdas devido ao crescimento de fungos.

Os fatores de virulência presentes em Escherichia coli (E. coli) patogênicas vêm sendo estudados em diversas espécies animais devido à importância de algumas cepas. Estas podem ser classificadas em sorotipos ou mais recentemente através de patotipos, de acordo com algumas técnicas de biologia molecular. Os patotipos mais conhecidos atualmente incluem as ETEC, STEC, EPEC, EIEC, UPEC e APEC. Vários patotipos encontrados causando doenças em animais têm também afetado gravemente seres humanos. Diversas espécies de aves também revelaram possuir patotipos de E. coli capazes de causar infecções zoonóticas. Além do aspecto zoonótico, infecções por bactérias Gram-negativas em aves silvestres têm especial importância, pois o Taxon Psittacidae contém muitas das espécies que mais estão ameaçadas de extinção, e sua manutenção e reprodução em cativeiro é comprometida por infecções bacterianas constantes, em especial por E. coli. Nesse estudo 174 amostras de swabs cloacais de aves sintomáticas e assintomáticas e de casos de necropsias foram testadas através da técnica da PCR para a detecção de fatores de virulência e a classificação em grupos filogenéticos. Detectaram-se 93 amostras (53.45%) positivas para associações de fatores de virulência, em especial para os patotipos EPEC, APEC e UPEC e a classificação de grande parte das amostras de necropsias no grupo filogenético A. O gene iss foi encontrado com maior freqüência, sendo esta de 51.7% (n=30) nas aves sintomáticas e 23.2% (n=23) naquelas assintomáticas. Os resultados demonstraram serem de interesse não apenas com relação ao potencial zoonótico dessas aves em cativeiro, mas também para programas de conservação que visem à liberação de aves no meio selvagem.

Dentre as espécies conhecidas do gênero Arcobacter, as espécies A. butzleri, A. cryaerophilus e A. skirrowii são consideradas potecialmente zoonóticas, podendo ser transmitidas por alimentos de origem animal. O presente estudo teve como objetivos isolar e caracterizar fenotipica e genotipicamente cepas de Arcobacter spp. provenientes de carcaças de suínos e amostras de ambiente de abatedouro localizado no Estado de São Paulo. As cepas isoladas foram submetidas a reação em cadeia pela polimerase para a identificação e detecção de um grupo de genes de virulência. A concentração inibitória mínima frente a nove antimicrobianos usados para o controle da infecção pelo agente foi determinada e as cepas foram analisadas através do PFGE e pelo AFLP. Dentre as 30 carcaças avaliadas, 25 foram positivas para o agente e 70 cepas foram selecionadas e identificadas como Arcobacter spp. As espécies isoladas foram A. butzleri (n=61), A. cryaerophilus (n=7) e A. skirrowii (n=2). A frequência dos possíveis genes de virulência encontrada variou de 71,4% a 100% para os genes tlyA, pldA, cj1349, ciaB, cadF e mviN. Não foram detectados os genes hecA, hecB e irgA. O perfil de virulência ciaB/ cj1349/ mviN/ cadF/ pldA/ tlyA foi o mais frequente e detectado em 66% das cepas. Todas as cepas foram sensíveis à gentamicina e tetraciclina e 77,1% foram multirresistentes, dentre estas o perfil mais frequente foi de resistência a azitromicina/ florfenicol/ ácido nalidíxico/ telitromicina/ clindamicina Houve grande diversidade genotípica entre as cepas através do PFGE e do AFLP, e ambas a técnicas apresentaram o mesmo poder discriminatório na análise das cepas isoladas.

Avaliou-se a atividade conservante do Borato de Sódio para amostras de tecidos com lesão tuberculosa. Inicialmente, foi feito um teste de inoculação experimental em hamsters. A partir dos resultados observados neste estudo, foram selecionadas as variáveis para a segunda etapa do experimento, com lesões de abatedouro de bovinos. Noventa hamsters foram inoculados experimentalmente com Mycobacterium bovis e foram eutanasiados 40 dias após a inoculação, quando foi feita a colheita dos baços. Esses órgãos foram, individualmente, armazenados em solução saturada de Borato de Sódio, em quatro períodos de armazenamento distintos (30, 60, 90 e 120 dias após a eutanásia), em duas temperaturas (27ºC e 37ºC), exceto o grupo controle processado no dia da eutanasia. Na segunda etapa do experimento, 69 lesões de órgãos de bovinos foram colhidas de um abatedouro e armazenadas em solução de borato de sódio em três períodos de armazenamento distintos (30, 60 e 90 dias após a colheita), na temperatura de 27ºC, exceto o grupo controle, processado no dia de entrada no laboratório. As análises dos dois experimentos foram feitas separadamente e mostraram-se concordantes. Em relação aos períodos de armazenamento dos órgãos em Borato de Sódio foram consideradas duas variáveis, a proporção de isolados de micobactérias a partir dos órgãos e o número de U.F.C. de micobactérias desses mesmos órgãos. Com base nos resultados observados em ambos os testes, concluiu-se que o armazenamento de tecidos com lesões tuberculosas em solução de Borato de Sódio pode ser feito por até 30 dias em altas temperaturas, 27ºC a 37ºC. Além disso, observou-se que conforme a temperatura ambiente aumenta, diminui a sensibilidade do isolamento de M. bovis a partir de amostras armazenadas em solução saturada de Borato de Sódio.

A Tuberculose vem acometendo animais selvagens desde o surgimento das primeiras coleções organizadas. Particularmente, macacos são altamente suscetíveis as micobactérias, gerando grandes perdas econômicas para as instituições, além do risco de transmissão para o homem e animais. As principais micobatérias, que causam a doença em primatas em cativeiro, são o Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium bovis. Acredita-se que primatas do "novo mundo" são menos suscetíveis do que os do "velho mundo", entretanto observa-se que tuberculose tem sido documentada em várias espécies. A principal forma de transmissão é através de aerossóis contendo os bacilos. A doença pode evoluir para a forma ativa ou latente, dependendo do estado imunológico do animal. Os sinais clínicos podem ser insidiosos, com somente uma alteração comportamental, seguido por anorexia e letargia, alterações respiratórias ou simplesmente o animal pode aparecer morto no recinto. O diagnóstico clínico é difícil e problemático, sendo que muitas vezes as lesões consistentes com a doença só são observadas na necropsia. Por isso o uso de outras ferramentas de diagnóstico é importante, como o teste de tuberculinização, cultivo e isolamento bacteriano, que são os mais usados na rotina das instituições, e os exames radiográficos do tórax e abdômen, testes moleculares e sorológicos. Toda instituição que mantém primatas em cativeiro deveriam possuir programas de prevenção para evitar a entrada da micobactéria dentro da coleção, principalmente ao se adquirir novos animais. Por isso, o emprego de medidas de biossegurança é essencial para diminuir o risco de doenças para o homem e para os animais dentro das instituições. Essas medidas consistem na implantação de uma série de procedimentos e normas operacionais rígidas, como programas de quarentena, programas de saúde para os funcionários e formação de equipe capacitada e treinada.

A Brucella canis é a espécie de Brucella que acomete os cães, acarretando problemas reprodutivos e prejuízos econômicos aos proprietários de canis comericias, além do risco que representa para os manipuladores e os proprietários dos cães, os quais podem adquirir a infecção pelo contato com os animais infectados e/ou materiais contaminados por B. canis. Vários métodos de diagnósticos foram desenvolvidos com o intuito de diagnosticar a brucelose nos cães, no entanto cada teste apresenta um desempenho diferente em relação à sensibilidade, especificidade, rapidez e praticidade na identificação dos cães acometidos. Estudos indicam que a PCR em tempo real tende a apresentar maior sensibilidade e especificidade, além da rapidez na execução. Diante disso o objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real para diagnóstico da brucelose canina causada por B. canis utilizando amostras de sangue total de cães. Um total de 56 cães de canis comercias e animais domiciliados, foram submetidos à hemocultura, sorodiagnóstico, PCR convencional (PCRc) e PCR em tempo real (PCRtr) e posteriormente os resultados obtidos em cada teste foram comparados por meio do coeficiente Kappa. Na padronização das reações de PCRtr foram testados três conjuntos de primers e sondas (PCRtr-A, B e C), utilizando-se diferentes temperaturas de annealing e concentrações de primers. A PCRtr-B teve melhor desempenho sob temperatura de annealing de 59° C, utilizando 900 nM de primers tendo detectado um maior número de cães positivos em relação à hemocultura e PCRc. Porém o teste não se apresentou confiável, uma vez que ocorreram reações inespecíficas em amostras provenientes de cães não infectados, sugerindo uma baixa especificidade do teste. Portanto, as técnicas de hemocultura e PCRc apresentaram melhor desempenho do que a PCRtr avaliada para o diagnóstico de B. canis.

Apesar de o protozoário Toxoplasma gondii ser considerado a única espécie válida para o gênero, são reconhecidas três linhagens clonais, denominadas Tipo I, Tipo II e Tipo III, predominantes em países da Europa ocidental e Estados Unidos. Com a pesquisa de amostras deste parasito provenientes de outras regiões do mundo, como no caso do Brasil, várias outras configurações genotípicas diferentes das dos arquétipos mencionados acima vêm sendo encontradas. Neste trabalho, quarenta galinhas/galos (Gallus domesticus) de criação livre de oito propriedades rurais de áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia no estado do Mato Grosso do Sul foram eutanasiadas e amostras de sangue, cérebro e coração foram coletadas. O sorodiagnóstico foi realizado através do Teste de Aglutinação Modificado (MAT) e, com um pool de órgãos dos animais positivos, foi realizado bioensaio em camundongos. Foram obtidos, após o bioensaio, 11 isolados de T. gondii. O DNA foi extraído dos tecidos dos camundongos infectados e a tipificação dos isolados foi realizada utilizando 12 marcadores PCR-RFLP, genericamente denominados SAG1, 5´3´SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Vinte e sete galinhas (67,5%) foram sorologicamente positivas para T. gondii e 13 (32,5%) foram negativas. Das amostras soropositivas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 (3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1280, 2 (7,4%) em 1:2560, 4 (14,8%) em 1:5120 e 2 (7,4%) em 1:10240. Quanto à genotipagem, cinco genótipos foram revelados nos 11 isolados de galinhas de cinco propriedades do município de Aquidauana e uma propriedade do município de Rio Verde do Mato Grosso, incluindo um genótipo misto encontrado em um isolado (TgCkBr198) que demonstrou um complexo cujos padrões são uma combinação de 2 alelos observados em oito loci. Dois genótipos foram descritos pela primeira vez, considerando os 140 isolados de galinhas de diferentes regiões brasileiras avaliadas em estudos anteriores. Os resultados corroboram com estudos anteriores sobre os isolados de T. gondii no Brasil, confirmando sua diversidade e atipicidade.

Leite integral de búfala foi experimentalmente contaminado com Mycobacterium fortuitum e Listeria monocytogenes. Foi feita a análise quantitativa dos agentes imediatamente antes e depois de dois tratamentos térmicos: pasteurização (do leite) e filagem (da Mozzarella). Na análise da Listeria, foi empregada metodologia adaptada para a obtenção do NMP, usando os meios UVM, Fraser e Palcam como pré-enriquecimento, enriquecimento seletivo e isolamento, respectivamente. O Mycobacterium foi semeado em placas com meio Löwenstein-Jensen modificado. Os resultados mostraram que a pasteurização do leite reduziu em média 6,0 log NMP/mL de Listeria sp e 4,0 log UFC/mL de Mycobacterium sp. A filagem da coalhada reduziu em média 8,37 log NMP/g de Listeria sp e 6,3 log UFC/g de Mycobacterium sp. Concluiu-se que a filagem da Mozzarella foi mais eficiente que a pasteurização do leite na redução do inóculo de Listeria monocytogenes e Mycobacterium fortuitum em cerca de 2 logaritmos de cada agente.

Apesar dos aspectos positivos da interação dos seres humanos com os cães há situações indesejáveis, tais como as agressões, que são um grave problema de saúde pública em todo o mundo. As mordeduras podem levar a infecções secundárias, traumas psicológicos, lesões que requerem cirurgias reconstrutivas e hospitalizações e, até à morte da vítima. Uma das doenças que podem ser transmitidas por meio dessas agressões é a raiva, considerada uma das zoonoses de maior importância em saúde pública, não só por sua evolução letal, mas também por seu custo social e econômico. Estudos sugerem que haja dezenas de milhões de lesões por ano causadas por cães no mundo. Tal situação sugere a necessidade de se criarem instrumentos de investigação e implantar ações de vigilância epidemiológica, que permitam esclarecer quais as circunstâncias e características dessas agressões, de forma a fornecer bases para o planejamento de ações e medidas de intervenção, que visem à redução do risco de novos agravos. Com o objetivo de analisar e caracterizar as agressões causadas por cães, o perfil das vítimas e dos animais agressores e as circunstâncias de ocorrência desses agravos, este estudo observacional descritivo, que teve início em abril de 2009 e término em dezembro de 2012, foi realizado nos distritos administrativos de Vila Guilherme, Vila Maria e Vila Medeiros, no município de São Paulo. Os dados foram obtidos por meio de entrevistas das vítimas de agressões e preenchimento da Ficha de Vigilância de Agressões. Foram feitas as distribuições de frequências das variáveis, associação entre variáveis duas a duas, análise de correspondência simples e múltipla, e análises espaciais. A maior parte dos agravos ocorreu nas proximidades do local de residência da vítima; a maior proporção de agressões no sexo masculino ocorreu na faixa etária de 13 a 17 anos (66,2%); teve como região do corpo mais atingida os pés (63,3%); teve a maior proporção de lesões profundas (60,0%); teve como raça referida do cão agressor, SRD ou mestiço (57,8%); a vítima não tinha nenhum contato com o cão agressor (63,0%). A maior proporção de agressões no sexo feminino foi causada por cães esterilizados (66,1%) e ocorreu na interação de separar brigas dos animais (67,4%). A maior proporção de agressões na faixa etária de 18 a 59 anos causou lesões superficiais (49,6%). A maior proporção de agressões nas mãos foi causada por cães machos (34,8%) e sem histórico de agressões anteriores (35,7%). Concluiu-se que há que se reconhecer a relevância dos agravos causados por cães e a importância da investigação desses casos em âmbito municipal e, até mesmo em âmbito estadual ou federal; a investigação dos casos de agressões causadas por cães e o planejamento de ações, com vistas à redução dos riscos e agravos causados por esses animais, devem ser incorporadas às ações de promoção e vigilância em saúde.

Brazil is one of the countries that has the strongest bovine production worldwide, with 2.5 thousand million farms and 178 thousand million bovines distributed in its national territory. The number of farms and animals in the country present a major challenge to animal disease control since have high surveillance coverage in this scenario is expensive and inefficient process. Therefore, it is necessary to identify and focus the resources on groups of farms with an increased risk of infection and which strongly contribute to disseminate a disease widely in the national territory. The main objective of the present study is to provide information and tools which may help decision makers to build efficient animal disease control programs. In general, in the present study we focused on the surveillance of bovine tuberculosis (bTB) and used the state of Espírito Santo (ES) in southeast Brazil to apply our methodologies. We divided this study into four sections: (1) provide information on the situation of bTB in ES and farms characteristics associated with this infectious disease; (2) complement the previous study with the identification of risk factors associated with the characteristic of animal transit and the distribution of cases of the disease that were reported in ES; (3) describe the characteristic of the cattle transit in ES and propose a methodology fir targeted surveillance of farms based on the structure of the trade network; (4) develop a methodology to predict farm locations based on the spatial information of trade partners. In conclusion, this study provided information and tools which can help to the decision makers to complement animal disease surveillance programs in ES and Brazil.

Avaliou-se a correlação entre alteração ambiental e ocorrência de focos de raiva em herbívoros na região do vale do rio Paraíba do Sul paulista e alto Tiete no período de 1996 a 2006, por meio da aplicação de técnica de sensoriamento remoto e sistemas de informação geográfica. Foram utilizadas imagens do satélite Landsat-5, sensor TM, órbitas 218 e 219, ponto 76, bandas 3 e 4 na obtenção do índice de vegetação com diferença normalizada (NDVI). Foi feita a subtração de NDVI para obtenção da alteração de cobertura vegetal ou vigor de biomassa em intervalos de um ano, e dados de ocorrência de focos de raiva agregados por município corrigidos pelo efetivo herbívoro no respectivo ano. Diferenças significativas foram obtidas na comparação das médias de alteração de NDVI para ganho, perda e alteração geral em todo período pelo teste de Wilcoxon, exceto de 1996 a 1997 e seqüência de somatória de rankings negativos de 1998 a 2002. A análise de correlação entre diminuição de NDVI e focos de raiva corrigidos foi significativa em 2002 e 2003. Para ganho de NDVI, foi significativo em 1998 e 2003. Para alteração geral foi significativa em 2002. Houve correlação significativa de aumento de NDVI e focos de raiva corrigidos em 2000, 2002 e 2004, com r > 0 em todo período, exceto 2002 e observadas correlações entre alteração, geral e de perda, e tamanho de rebanho significativas em 2000, 2002, 2004 e 2006. A correlação positiva entre alteração de NDVI e rebanho herbívoro sugere a alteração do tamanho do rebanho como um fator de alteração da cobertura vegetal e conseqüente aumento da ocorrência de raiva pela alteração do habitat do morcego hematófago, principal hospedeiro do vírus rábico na América do Sul. A implantação da Coordenadoria de Defesa Agropecuária (CDA) da Secretaria de Agricultura e Abastecimento de São Paulo, em 1999 e a obrigatoriedade da vacinação contra a raiva, a partir de 2002, podem ter encoberto a correlação positiva encontrada no período anterior, de 1996 a 1999. Após o controle da raiva ter se consolidado, a alteração de NDVI voltou a apresentar correlação positiva, devendo ser considerada de fato fator de risco para a ocorrência de raiva nos herbívoros. A metodologia proposta no estudo pode ser uma alternativa no estudo de alteração ambiental como fator de risco na epidemiologia de doenças infecciosas, porém refinamento da técnica pode ser considerado a fim de controlar influências de condições atmosféricas e época do ano nas imagens utilizadas

O presente trabalho é o relato da tentativa de se implantar boas práticas de fabricação em pequenas propriedades produtoras de leite de cabra. Foram estudadas três propriedades no Estado de São Paulo, todas associadas à Associação Paulista de Caprinocultores. Foi feita uma visita inicial para o diagnóstico de situação de cada propriedade, onde os funcionários foram entrevistados, a fim de se determinar seu perfil sócio-econômico e educacional, e sua relação com o trabalho. Nesta mesma visita, a planilha de análise de boas práticas de fabricação foi preenchida. Na segunda e terceira visitas, foram coletadas amostras de leite e swab das mãos dos ordenhadores, no início, meio e final da ordenha. Estas amostras foram analisadas em laboratório para contagem de microrganismos aeróbios mesófilos e psicrotróficos, contagem de coliformes totais e fecais, contagem de Staphylococcus aureus coagulase positiva e presença ou ausência de Salmonella spp, no leite cru. Apenas as duas últimas análises foram feitas nas amostras de swab de mãos. A capacitação foi feita através de aula expositiva dialogada com uso de cartões ilustrados contendo textos curtos sobre os temas \"boas práticas de fabricação\" e \"modo ideal de ordenha\", e sugestões foram dadas para a melhoria do processo. As sugestões foram simples, de fácil aplicação e baratas, e foram aceitas tanto pelo ordenhador quanto pelo proprietário. Após 1 a 2 meses da capacitação foi feita nova coleta de amostras, nova observação do trabalho na ordenha e aplicação de novo questionário. Os valores das contagens de microrganismos em leite cru observadas no presente estudo estão de acordo com aqueles relatados na literatura em várias partes do mundo, inclusive no Brasil, e estão dentro do padrão esperado pela Portaria no 56 de 07/12/99 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Entretanto, estas contagens demonstraram não serem ferramentas sensíveis para a determinação da eficácia do processo de capacitação dos funcionários da ordenha. Com relação à determinação do perfil do ordenhador, as entrevistas foram gravadas e analisadas pelo método do Discurso do Sujeito Coletivo mostrando que os ordenhadores eram homens do campo, com prévia experiência em ordenha de animais, que gostavam do que faziam, gostariam de aprender mais, mas não tinham sugestões claras com relação à melhoria do seu fluxo de trabalho. Para os questionários e observação após a capacitação, verificou-se que nenhuma das sugestões feitas para melhoria da ordenha foi implantada, e as razões para que isso não ocorresse foram abordadas e discutidas, de maneira a se orientar veterinários e demais profissionais responsáveis pela higiene de locais produtores de alimentos sobre possíveis entraves a serem encontrados em programas de capacitação de funcionários desta área.

A leptospirose é causada por bactérias do gênero Leptospira e constitui um problema de saúde pública mundial, por acometer humanos e animais. Sua patogênese ainda é pouco esclarecida, especialmente quanto aos processos de invasão, adesão e colonização dos hospedeiros. Recentemente, proteínas secretadas por leptospiras foram identificadas por proteômica e análises in silico, algumas das quais apresentam possível envolvimento no desenvolvimento de quadros hemorrágicos, bem como podem ser possíveis antígenos para diagnóstico. Sendo assim, o presente trabalho propôs a clonagem em vetor de expressão heteróloga bacteriano das sequências codificantes das proteínas Sph2, LipA, ColA e LipL32 de L. interrogans sorovar Copenhageni, caracterização funcional das proteínas recombinantes purificadas e estudo do seu potencial uso no diagnóstico para a leptospirose. Essas proteínas foram escolhidas por possivelmente estarem envolvidas na patogênese de leptospiras. Para tanto, as sequências correspondentes aos genes das proteínas foram clonadas nos vetores de expressão em Brevibacillus choshinensis e Escherichia coli. A produção de soro policlonal e técnicas de ELISA, western-blotting e imuno-histoquímica foram realizadas para avaliar a funcionalidade das proteínas recombinantes purificadas. Também foram realizados testes de comprovação e caracterização da atividade enzimática para proteína LipA, que se apresenta como uma provável lipase na análise in silico. Os resultados obtidos mostraram que o sistema de expressão em Brevibacillus foi eficiente na expressão das proteínas, porém com baixo rendimento na purificação das proteínas Sph2, ColA e LipA. A proteína recombinante LipL32 purificada não apresentou diferença na sua atividade antigênica, em relação aos dois sistemas de expressão utilizados. Experimentos de Western - blotting demonstraram a presença de proteína LipA em diferentes sorovares patogênicos de Leptospira spp. A proteína LipA apresentou atividade lipásica sobre ésteres graxos de p-nitrofenil, sendo uma provável lipase euritérmica. Os dados obtidos com a análise de imuno-histoquímica sugerem que esta proteína possa participar dos eventos que levam a lesões na membrana celular no tecido hepático. Resultados de ELISA com soro de pacientes mostraram que as proteínas ColA e Sph2 são potenciais antígenos para diagnóstico da leptospirose. Apenas a proteína ColA apresentou ação hemorrágica na pele de camundongos. Estes resultados indicam que as proteínas LipA, ColA e Sph2 podem estar envolvidas em mecanismos patogênicos na leptospirose.

Atualmente, temos observado importantes mudanças nos padrões de transmissão da leishmaniose tegumentar (LT) e visceral (LV) em áreas endêmicas do Brasil. Além disso, a LV vem avançando rapidamente para novas áreas antes consideradas indenes. Os flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) são pequenos dípteros com grande relevância em ciências médicas e veterinárias, por serem vetores de vírus, Bartonella bacilliformis e principalmente Leishmania spp. Os estudos sobre esses insetos são fundamentais para uma melhor compreensão da complexa epidemiologia das leishmanioses, revelando os aspectos biológicos desses vetores e suas relações com o parasita e seus reservatórios. Atualmente, abordagens moleculares vêm sendo incluídas nesses estudos e mostram-se ser ferramentas poderosas em pesquisas sobre esses dípteros. O objetivo desse trabalho, foi investigar os aspectos bioecológicos de flebotomíneos em área endêmica de LT e LV no estado de São Paulo, Brasil. Assim, foi realizado um levantamento entomológico para descrever a fauna, sazonalidade, taxa de PCR positivo para o DNA de Leishmania spp. e as fontes de repasto sanguíneo de flebotomíneos na área de estudo. Os insetos foram triados, identificados e o tórax e abdômen das fêmeas amostradas submetidas a extração de DNA e posterior PCR para a detecção do DNA do Kinetoplasto (kDNA) de parasitas do gênero Leishmania. Em seguida, amostras de DNA de fêmeas ingurgitadas, semi-ingurgitadas e grávidas foram submetidas a PCR para a amplificação do gene mitocondrial citocromo B (CYT-B) de vertebrados. Os produtos amplificados nas reações de CYT-B foram purificados e submetidos ao sequenciamento genético. As sequências encontradas foram confrontadas com a base de dados GenBank, para identificação da espécie de vertebrado envolvido no repasto sanguíneo, das fêmeas de flebotomíneos. Por empregar ferramentas moleculares, nesse trabalho, também foi analisado o desempenho de alguns métodos de extração de DNA em amostras individuais de tórax e abdômen de fêmeas desses insetos. Em nosso estudo, foram encontradas doze espécies de flebotomíneos, entre vetores comprovados e suspeitos nos ciclos epidemiológicos de LT e LV. Não foram observados padrões sazonais entre os fatores climáticos estudados (temperatura, umidade relativa do ar e precipitação) e a fauna desses insetos, capturados com armadilhas luminosas do tipo CDC. Sobre os métodos de extração de DNA, os métodos comerciais são uma boa opção para esse tipo de amostra. Contudo, os métodos caseiros baseado em fenol/clorofórmio/álcool isoamílico ou em NaCl/ álcool apresentaram melhores resultados. As análises moleculares revelaram uma fêmea não ingurgitada de Ev. (Ald.) carmelinoi positiva na PCR do kDNA de Leishmania spp. A identificação das fontes de repasto sanguíneo revelou os suínos, humanos, cães, bovinos, galinhas e gambás como hospedeiros vertebrados de flebotomíneos na área em estudo. As implicações desses achados são aqui apresentadas na forma de dois artigos científicos submetidos para avaliação em revistas da área.

A cada ano a dengue tem preocupado cada vez mais os países e levado os sistemas de vigilância da saúde, nas diversas esferas, a adotar várias medidas para o seu controle, tendo em vista a iminência de uma grande epidemia de febre hemorrágica no mundo. Os estudos epidemiológicos ajudam esses sistemas de vigilância a melhorar e direcionar as ações preventivas para o controle da doença. O objetivo desse trabalho foi realizar um estudo epidemiológico dos casos notificados e confirmados de dengue, a partir do banco de dados do SINAN, nos anos de 2000 a 2005 no Município de Guarulhos (SP). Para se analisar a ocorrência da doença segundo variáveis sócio-demográficas (sexo, raça, faixa etária e a densidade demográfica de cada bairro) foi realizada uma análise estatística onde se observou as diferenças entre os casos do banco de dados e os indivíduos da população do município para cada variável. Para a variável sexo, não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre as proporções para cada sexo na amostra e na população do município (P=0,28); para a variável raça, não foi observada diferença estatística significativa entre as proporções de indivíduos das raças parda e indígena (P>0,05), porém nas outras comparações entre as raças (branca, negra, amarela e ignorado), foram observadas diferenças estatísticas (P<0,05) em comparação com a população do Estado. Para as faixas etárias, não foram observadas diferenças estatísticas significativas nas categorias de 15-19 anos, 20-24 anos, 25-29 anos, 55-59 anos, 60-64 anos e 70-74 anos (P>0,05) em relação às proporções nas faixas etárias correspondentes na população do município. Por outro lado, nas outras faixas etárias (0-4, 5-9, 10-14, 30-34, 40-44, 45-49, 50-54, 75+ anos) foram observadas diferenças estatísticas significativas (P<0,05). Procurou-se relacionar o número mensal de casos, ano a ano, tanto com o índice de Breteau quanto com os dados meteorológicos de precipitação total mensal e a temperatura média compensada mensal, porém foi observada uma baixa correlação estatística entre os casos da doença e este índice e entre os casos e a temperatura média compensada mensal e a precipitação total mensal. Também foi realizada uma análise da série histórica dos casos, onde foi possível observar o aumento de casos nos anos de 2002 e 2003. Na análise de sazonalidade foi observado que, nos meses de fevereiro a maio, o número de casos supera a média anual, ficando abaixo da média nos meses de junho a janeiro. Os casos foram distribuídos nos mapas georreferenciados por bairros e por ano de incidência e foi possível observar o processo de endemização da doença, com casos espalhados no município em todos os anos do estudo.