Repositório RCAAP

Si le nom d’Albert Camus continue de s’imposer, aujourd’hui, comme une figure incontournable de la littérature et de la pensée françaises du XXe siècle, il n’en est pas moins demeuré une personnalité cosmopolite, sensible à ce que la culture ne s’accomplit véritablement qu’en l’absence du sectarisme, qu’en présence de l’autre. Ce livre sur l’oeuvre de Camus montre l’exceptionnelle variété et actualité de son œuvre inscrite dans une vocation humaniste. Celle-ci ne s’entend pas dans un sens moraliste mais dans un sens existentiel, qui veut que chacun se définisse par le souci qu’il a de l’autre, et que l’humanité s’apparaisse comme le perpetuum mobile de l’histoire en même temps que son point fixe, son sens dernier, s’il en est un. Aussi, cinquante ou cent ans après, la lecture de Camus n’est-elle pas un hommage à une figure du passé, mais une incitation pour le présent à l’invention d’un avenir.

Despite being a longstanding and well-established concept, alexithymia is unfamiliar for many clinicians. This article aimed to address the alexithymia concept from a clinical perspective based on a review of the research on alexithymia intervention. Several strategies are proposed to help clinicians better work with alexithymic clients in psychotherapy. Alexithymia assessment, its impact on the therapeutic alliance, and the difficulties in emotional tasks are highlighted points. Considering alexithymia will inform clinicians’ current diagnosis and conceptualization and provide specific targets and venues for intervention, increasing the effectiveness of psychotherapy.

A neoplasia do pulmão é um problema de saúde major, constituindo a principal causa de morte por cancro a nível mundial. Em Portugal, cerca de 75% dos casos são diagnosticados em estadio localmente avançado ou metastático, conferido uma taxa de sobrevivência a cinco anos de apenas 6%. De acordo com a histologia, esta patologia pode ser classificada em carcinoma pulmonar de pequenas células e carcinoma pulmonar de não-pequenas células, que representa a grande maioria dos casos diagnosticados. Com o decorrer dos avanços científicos e tecnológicos, surgiu uma nova abordagem terapêutica personalizada e altamente seletiva, a imunoterapia. Através da intervenção do sistema imunitário na regulação dos mecanismos de controlo e proliferação tumoral, a imunoterapia tem vindo a melhorar outcomes clínicos e a transformar o prognóstico desta neoplasia. Um dos exemplos mais representativos das terapêuticas imunológicas são os inibidores do checkpoint imunitário, com destaque para o atezolizumab, nivolumab e pembrolizumab. Apesar do impacto clínico significativo associado à utilização destes fármacos, apenas 20% a 40% dos doentes exibem taxas de sobrevivência duradouras, após o término da terapêutica. Desta forma, urge investigar e compreender as propriedades farmacocinéticas intrínsecas a estes fármacos e o seu contributo para as variações intra e interindividuais observadas, tanto na exposição, como na resposta à terapêutica. Ademais, estudos recentes têm demonstrado que, ao serem administradas doses previamente estabelecidas pelas autoridades reguladoras competentes são alcançados níveis sobre-terapêuticos no estado estacionário. Todavia, pouca importância tem sido atribuída à análise destas discrepâncias e permanecem dúvidas quanto à metodologia preferencial a adotar no estabelecimento de regimes posológicos para estes fármacos: doses fixas pré-estabelecidas versus doses ajustadas ao peso corporal. Com a evolução da medicina de precisão, surge a monitorização farmacocinética da terapêutica, que através da individualização farmacoterapêutica, assegura a maximização da eficácia clínica e, reduz a ocorrência de exposições sub-terapêuticas ou níveis de toxicidade inaceitáveis. Neste âmbito, é também necessário investir na validação de biomarcadores, capazes de prever e monitorizar a resposta à terapêutica com estes fármacos.

Temperature is an important selective pressure, especially for ectotherms that depend on external environment to maintain homeostasis, making them vulnerable to small environmental changes. Temperature variations can trigger responses at the ATP metabolism level, regulated by the mitochondria. Detecting mitochondrial genes involved in adaptation can elucidate key environmental selective pressures and their effects on metabolism. The Squalius genus are obligatory freshwater fish inhabiting different environm ents. In the Iberian Peninsula, there are six diploid species with distinct thermal environments, characterized by increasing temperatures and drought propensity from north to south. Moreover, Squalius alburnoides , an allopolyploid hybrid is found in sympatry with most of the other Squalius species. Here, to reconstruct the phylogenetic relationships between species and detect genes under selection potentially due to temperature and metabolism, we compared the whole mitochondrial genome sequence of diploid Squalius species from different environments, as well as with sympatric S. alburnoides . We performed a de novo assembly and annotation of the mitochondrial genome for each of the Iberian chub species. The whole mitochondrial genome phylogeny shows three larger clades, such as previous results. S. alburnoides mitochondrial sequences do not form a monophyletic clade. Instead, they generally cluster with the sympatric species, supporting local introgression of mitochondria between local diploid specie s and sympatric S. alburnoides populations. Then, to detect molecular signatures of selection we applied dN/dS based tests which showed the existence of signals of selection, both positive and negative, associated with protein thermostability. The selection test results found a common site under positive selection for S. carolitertii and S. alburnoides from Tua River, suggesting that S. alburnoides and its sympatric species could be under the same selective pressures. Lastly, our results also allowed to dra w important conclusions about the type, amount and variety of data that should be applied in phylogeny reconstructions and selection tests.

A alopécia, é uma condição dermatológica que se caracteriza pela perda gradual ou súbita de cabelos, podendo ter um impacto psicossocial e uma diminuição na qualidade de vida dos indivíduos. Existem vários tipos de alopécia no ser humano, com apresentações e características clínicas diferentes entre si. No caso da alopécia androgenética, a terapêutica gold standard aprovada é o minoxidil e a finasterida e no caso da alopécia areata é o minoxidil e corticosteróides. No entanto, a resposta em cada indivíduo é muito variável e a frequência de reações adversas como, dermatites e disfunção sexual, levam a uma baixa adesão terapêutica. Assim, é essencial o desenvolvimento de novas opções terapêuticas que levem a uma maior adesão e eficácia terapêutica e a uma diminuição dos efeitos adversos, permitindo um melhor controlo desta condição. Existem várias novas alternativas farmacológicas em contexto de ensaio clínico, tendo por base a fisiopatologia da alopécia, o complexo altamente organizado do folículo capilar e as vias de sinalização envolvidas no crescimento capilar e no ciclo capilar. Contudo, a patogénese da alopécia androgenética e da alopécia areata ainda não estão completamente esclarecidas, sendo essencial continuar a investigação nesta área. Alguns fármacos que estão neste momento em ensaios clínicos e que têm demonstrado ter um papel na diminuição da queda capilar são os análogos das prostaglandinas, a cetirizina, o ácido valpróico, o baricitinib e a toxina botulínica. Para além de fármacos, existem algumas estratégias que podem ser adotadas para estimulação do crescimento capilar como a fotoestimulação, o plasma rico em plaquetas e o microneedling. Opções naturais como vitaminas, minerais e plantas já demonstraram ser essenciais para o normal crescimento e função celular, regulando a atividade micromolecular e influenciar a expressão de mediadores inflamatórios. Para além disto, produtos cosméticos existentes no mercado como champôs e séruns constituídos por cafeína, aminexil, lespedeza ou biocanina A têm demonstrado ser um complemento interessante às terapêuticas farmacológicas convencionais.

Self-supervised learning has proven to be an effective way to learn representations in domains where annotated labels are scarce, such as medical imaging. A widely adopted framework for this purpose is contrastive learning and it has been applied to different scenarios. This thesis seeks to advance our understanding of the contrastive learning framework by exploring a novel perspective: employing multi-organ datasets for pre-training models tailored to specific organ-related target tasks. More specifically, our target task is breast tumour segmentation in ultrasound images. The pre-training datasets include ultrasound images from other organs, such as the lungs and heart, and large datasets of natural images. Our results show that conventional contrastive learning pretraining improves performance compared to supervised baseline approaches. Furthermore, our pre-trained models achieve comparable performance when fine-tuned with only half of the available labelled data. Our findings also show the advantages of pre-training on diverse organ data for improving performance in the downstream task.

An increasing lifespan of the European population has become nowadays a major concern, not only in terms of health but also well being of an aged population. Neurodegenative diseases emerge as a growing and worrying health problem of the 21st century, perhaps the most disturbing one. Dietary phytochemicals have been suggested to play an important role in the prevention of degenerative diseases. They may exert beneficial effects on the central nervous system by protecting neurons against stress-induced injury, by suppressing neuroinflammation, and by improving vascular blood flow to the brain, all leading to the maintenance of cognitive function. Oxidative stress has been referred to play a crucial role in a number of diseases, including cancer and neurodegenerative disorders. Reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS) are highly reactive with proteins, lipids, carbohydrates and nucleic acids, leading to cellular dysfunction. The main aim of this study was to develop and optimize methods that are able to access the oxidative stress effects in biological molecules and also evaluate the neuroprotective effect of blackberry serum available metabolites in human neuroblastoma cells submitted to an oxidative injury. Thiol content, lipid peroxidation and protein carbonyl levels were the three main parameters evaluated. Techniques as HPLC, spectrophotomety, western blot analysis and flow cytometry were used in order to compare different conditions that the SK-N-MC cell line was exposed. A variable behavior of cells was observed during increasing times of exposition to stress conditions; time-course profile of the neuroblastoma cell line was crucial to evaluate possible neuroprotective effects of berries and any potential amelioration of the metabolic conditions of the cells. Further studies involving the determination of oxidative stress parameters will be crucial to have a better understanding of mechanisms underlying neurodegenerative diseases and to foresee alternatives in the prevention and fight of these diseases.

A doença de fígado gordo não alcoólica (NAFLD, do inglês non-alcoholic fatty liver disease) é uma patologia hepática comum associada à obesidade e à síndrome metabólica. Esta patologia é caracterizada pela acumulação de gordura nos hepatócitos, o que pode levar a inflamação, fibrose e, em casos graves, cirrose e insuficiência hepática. Embora a fisiopatologia exata da NAFLD não seja totalmente compreendida, acredita-se que a disbiose intestinal desempenha um papel crucial no desenvolvimento e progressão da doença. Os probióticos, microrganismos vivos que conferem benefícios para a saúde do hospedeiro, estão a emergir como uma abordagem promissora para prevenir e tratar a NAFLD. A utilização de probióticos na NAFLD baseia-se no conceito de modulação da microbiota intestinal para restabelecer o equilíbrio normal entre bactérias e o epitélio intestinal. Os doentes com NAFLD têm uma composição alterada da microbiota intestinal, caracterizada por uma redução de Bifidobacterium e Lactobacillus e um aumento de Escherichia coli e Enterobacteriaceae. Esta disbiose poderá promover o desenvolvimento da NAFLD ao induzir a permeabilidade intestinal e a inflamação. Os probióticos melhoram a NAFLD através de vários mecanismos. Em primeiro lugar, podem restaurar a função da barreira intestinal, reduzindo a permeabilidade intestinal e, como tal, a translocação de bactérias ou produtos bacterianos. Podem, ainda, modular o sistema imunitário no intestino e no fígado, reduzindo a atividade de citocinas pró-inflamatórias como a IL-1β, a IL-6 e o TNF-α. Por fim, podem contribuir para reduzir a acumulação de gordura no fígado, regulando o metabolismo lipídico e reduzindo a lipogénese de novo (DNL). Foram estudadas várias estirpes de probióticos relativamente aos seus efeitos na NAFLD, incluindo Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus casei Shirot e Bifidobacterium bifidum. Ensaios clínicos demonstraram que os probióticos podem melhorar a função hepática, reduzir a esteatose hepática e melhorar a sensibilidade à insulina. No entanto, a estirpe, a dose e a duração ideais da suplementação com probióticos ainda não são claras, sendo necessários mais estudos para estabelecer a sua eficácia e segurança.

Estima‑se que 76.3 milhões de pessoas tenham pro‑ blemas ligados ao consumo de álcool e que seja a causa de morte de 2.5 milhões de pessoas todos os anos. Pelo que urge estudar o fenómeno, nomeada‑ mente, os fatores psicológicos ligados ao consumo de álcool. A presente investigação visa estudar a regulação da satisfação das necessidades psicológi‑ cas, dificuldades na regulação emocional e funcio‑ namento esquemático no contexto da dependência do álcool. A literatura tem vindo a demonstrar uma associação significativa destas variáveis entre si e uma boa capacidade de preverem a sintomatolo‑ gia psicopatológica. Assim, pretendemos estudar se estas relações se mantêm em indivíduos com dependência do álcool e de que modo diferem na predição da sintomatologia, assim como se existem diferenças entre os diferentes graus de severidade da dependência. Foram aplicados a 94 sujeitos com dependência do álcool, em regime de internamento, cinco instrumentos de autorrelato relativos a cada variável em estudo. Concluiu‑se que existe uma forte presença de esquemas precoces mal‑adapa‑ tivos, dificuldades na regulação emocional e na satisfação das necessidades psicológicas, estando interrelacionadas na predição da sintomatologia. O funcionamento esquemático revelou ser a variá‑ vel mais explicativa da sintomatologia, ambas apre‑ sentando diferenças significativas entre os graus de severidade. Estes resultados revelam‑se potencial‑ mente pertinentes para a concetualização de caso e fornecem pistas para a intervenção psicológica.

Miocardiopatia dilatada (MCD) é uma etiologia prevalente de insuficiência cardíaca não isquémica. A MCD compreende um espectro heterogéneo de condições que afetam o tecido miocárdio e consiste na dilatação do ventrículo esquerdo ou de ambos os ventrículos, com disfunção sistólica, que não é explicada por doença arterial coronária significativa ou condições de sobrecarga. Embora tenham ocorrido melhorias significativas no prognóstico da MCD nas últimas décadas, com avanços significativos no tratamento da insuficiência cardíaca, a previsão de arritmias ventriculares e a subsequente morte súbita cardíaca (MSC) ainda representam um grande desafio. A utilização de desfibriladores cardioversores-desfibrilhadores implantáveis (CDIs) tem se mostrado eficaz no tratamento dos pacientes de alto risco. No entanto, devido às limitações atuais na identificação dos indivíduos de alto risco, muitos pacientes são submetidos a implante desnecessário de CDIs, levando a morbidade associada, enquanto outros em risco, não são reconhecidos, resultando em mortalidade evitável. Esta revisão fornece uma visão geral das características da MCD, incluindo etiologia, diagnóstico, progressão e prognóstico, salientando como uma avaliação diagnóstica precisa e a compreensão da etiologia subjacente são fundamentais para uma estratificação de risco eficaz. Além disso, esta revisão tem como objetivo fornecer uma análise abrangente das evidências disponíveis que apoiam os marcadores das atuais guidelines para avaliar o risco de MSC e a utilização de CDIs na prevenção primária. Por fim, este trabalho explora os novos marcadores de risco com o potencial de prever o risco de arritmias ventriculares e MSC em pacientes com MCD, marcadores que reconhecem que, ao longo do tempo, tanto a natureza dinâmica da patologia quanto o risco arrítmico associado mudam.

The Rho guanine nucleotide exchange factor 10 (ARHGEF10) is a guanine exchange factor (GEF) from the DBL family involved in the activation of the Rho family of small GTPases (Rho GTPases) from the Rho subfamily by accelerating the exchange of guanosine diphosphate (GDP) for guanosine triphosphate (GTP). ARHGEF10 participates in several cellular mechanisms, such as the regulation of cell contractility, membrane trafficking, cell migration, and cell-cell tight junctions. Several mutations in ARHGEF10 have indicated that it is linked with peripheral and central neurodevelopmental disorders associated with locomotor and behavioral dysfunctions in several organisms, namely slowed nerve conduction velocity associated with thin myelin fibers, developmental delay, motor coordination problems, attention deficit, hyperactivity, aggressiveness, epilepsy, and schizophrenia in humans; peripheral neuropathies in humans and dogs; Autism Spectrum Disorder (ASD) in mice; and locomotor abnormalities in zebrafish larvae. However, the molecular and cellular mechanisms linking the gene to the behavior effects are unclear. In this thesis, we followed up a preliminary finding from our group that locomotor abnormalities were present in Drosophila melanogaster ARHGEF10 (darhgef10) mutants, indicating that the role of ARHGEF10 in controlling locomotor function could be conserved across animals, to gain insight into the cellular basis of the D. melanogaster darhgef10 mutant locomotor phenotype. Using two different methods to characterize the fly locomotor behavior, we found that both sex mutants showed impaired locomotor behavior that is, however, more pronounced in males than in females. Male cell-specific darhgef10 knockdown indicated that the impaired fly locomotor activity caused by the darhgef10 deletion could be better explained by the neuronal rather than the glial darhgef10 knockdown. Finally, the darhgef10-dependent locomotor phenotype rescue attempt revealed no rescue and distinct spontaneous locomotor behavior phenotypes between the sexes. The differences between gender locomotor behaviors observed for all experiments suggest that darhgef10 may have specialized sex-specific functions.

O cancro do pulmão é o segundo cancro mais comum e o responsável por mais causas de morte. A taxa de incidência é elevada por todo o mundo e a taxa de mortalidade permanece elevada contrariamente a outros tipos de cancro que têm vindo a diminuir ao longo dos anos. De todos os fatores de risco envolvidos no aparecimento do cancro, o consumo de tabaco e o envelhecimento permanecem os mais relevantes. O prognóstico do cancro do pulmão é relativamente mau e na maioria dos casos deve-se aos doentes já serem diagnosticados numa fase sintomática, ou seja, numa fase já avançada do cancro do pulmão. A importância de rastrear os indivíduos de alto risco e a utilização de ferramentas de diagnóstico fiáveis e que impliquem o menor tempo possível de diagnóstico são cruciais para obtenção de um tratamento eficaz. Por estas razões têm surgido novas abordagens de diagnóstico, como o aparecimento da tomografia computorizada, os biomarcadores e as biópsias líquidas que visam obter, cada vez mais, um diagnóstico rápido e eficaz. O cancro do pulmão pode ser divido histologicamente em dois tipos, o cancro do pulmão de pequenas células e o cancro do pulmão de “não pequenas células”, sendo que o último é o mais frequente. Com esta subdivisão, com a análise individual de cada doente e consoante o estadio da doença há a possibilidade de direcionar um melhor tratamento para cada tipo de doente. Nos últimos anos ocorreram mudanças significativas na área da terapêutica dirigida aos doentes com mutações celulares mais típicas, como por exemplo as mutações EGFR, ALK e ROS1 permitindo que estes doentes recebam tratamentos individualizados com base nestes marcadores. Existem atualmente diversos ensaios clínicos, ainda em desenvolvimento, para estas terapêuticas. Outro desenvolvimento recente que veio a mudar o panorama do tratamento do cancro do pulmão foi a imunoterapia com os inibidores de checkpoint imunológico. Esta terapia já faz parte de tratamentos de primeira linha para alguns doentes com cancro do pulmão de não pequenas células, seja em monoterapia, em combinação com quimioterapia ou mesmo após a quimio e radioterapia. Estes avanços irão provavelmente diminuir as taxas de mortalidade e melhorar os resultados de sobrevivência dos doentes num futuro próximo.

O 5-Fluorouracil (5-FU) tem sido um importante fármaco anticancerígeno até à data. É um dos fármacos citotóxicos mais utilizados em vários tipos de cancro, como os gastrointestinais, da mama, da pele, da cabeça e do pescoço, e pode ser administrado por via intravenosa ou tópica, dependendo do tipo de cancro e da região a tratar. Após a sua ativação, os metabolitos do 5-FU podem exercer efeitos citotóxicos através da inibição da timidilato sintetase (TS), ou através da sua incorporação no RNA e DNA, eventos que acabarão por induzir citotoxicidade e morte celular. Apesar da sua elevada aplicabilidade, está comummente associada a efeitos secundários adversos que podem comprometer a sua utilização, como por exemplo cardiotoxicidade, mielossupressão, mucosite intestinal, diarreia grave e até o desenvolvimento de resistências à quimioterapia. Com o aumento do conhecimento do seu mecanismo de ação, foram desenvolvidas nas últimas décadas várias estratégias para aumentar a sua atividade anticancerígena e colmatar as suas desvantagens, que incluem a modificação química, o que deu origem a novas moléculas químicas, e a implementação de regimes baseados em análogos de 5-FU. Os pró-fármacos de 5-FU, por exemplo, capecitabina, tegafur, apresentam alterações químicas concebidas para serem melhor absorvidos através da mucosa gastrointestinal e aumentar a biodisponibilidade de 5-FU numa dose terapêutica mais baixa. Outra estratégia que está a receber atenção no tratamento do cancro é a sua associação a sistemas de veiculação de fármacos, com o objetivo de modular o seu perfil de biodistribuição. Alguns dos sistemas de veiculação de fármacos focados no presente trabalho foram os lipossomas, com alta afinidade por membranas biológicas; os niossomas, com alta estabilidade química; os transferssomas, com estrutura ultra-deformável; os etossomas, utilizando etanol como co-solvente; as microemulsões, altamente estáveis termodinamicamente; as microesponjas, com sua superfície altamente porosa; e as microagulhas. Outras formulações estão ainda a ser concebidas e testadas, como uma folha de duas camadas para a libertação controlada e local do fármaco por exemplo no cancro do pâncreas. De um modo geral, as estratégias descritas no presente trabalho pretendem melhorar o índice terapêutico do importante fármaco anticancerígeno, o 5-FU.

Social media is an internet-based form of communication adopted by billions of people around the world to share information and make connections. One of the most famous social networks is Twitter, which is often used to give opinions and report news or situations that have been witnessed by the users themselves. In case of emergencies, some of these situations experienced by users can be useful to identify critical requests. These requests become more frequent during mass disasters, so the ability to detect critical requests coming from Twitter can improve rescue services by optimizing the resources available and helping in the decision-making process during the occurrence of a certain MCI (Mass Casualty Incident). The system developed in this work aims to monitor social networks during MCIs, using relevant keywords to find tweets and AI algorithms to categorize tweet texts. By splitting the tweets into certain categories, it is possible to identify those that reveal urgent information. A correlation algorithm was also included in the system in order to identify possible associations between emergency call information and tweets. The BERT model was chosen to address the problem after multiple experiments with machinelearning models since it achieved an average of 85% precision, 88% recall, and 86% F1 score in categorizing the tweets using the testing set. The categorization of most tweets without errors, the ability to detect urgent tweets, and the possibility of correlating tweets with emergency call information make this system a useful tool that can complement the current methods used to monitor MCIs.

A degenerescência macular relacionada com a idade (DMRI) é uma das principais causas de cegueira em adultos com 60 anos ou mais. Trata-se de uma doença que afeta o olho e que pode eventualmente danificar a mácula. A mácula é a parte central da retina cheia de fotorreceptores e é caracterizada por depósitos focais ou difusos ricos em lipoproteínas chamados drusas. Existem 2 tipos de DMRI: húmida e seca. A maioria da população afetada tem DMRI seca que, tende a progredir lentamente ao longo de vários anos, no entanto, as pessoas com DMRI húmida sofrem de perda de visão mais rápida. Esta perda de visão mais acelerada é causada quando um vaso sanguíneo anormal cresce irregularmente a partir da coroide ou da circulação da retina tendo este crescimento anormal o nome de neovascularização macular. Estes novos vasos sanguíneos ao contrário dos vazos normais tendem a verter fluidos do sangue incluindo glóbulos vermelhos. A direção do crescimento deste vaso sanguíneo pode alterar drasticamente a velocidade da perda de visão, mais especificamente se a neovascularização crescer em direção à própria retina. Se o vaso sanguíneo anormal crescer em direção à retina, pode causar uma perda de visão mais rápida pois o verter de fluidos do sangue para a retina pode imediatamente distorcer a visão, e ao longo de vários meses estes fluidos podem matar os fotorreceptores que se encontram presentes nesta parte do olho. A neovascularização macular não tem cura, no entanto, existem possíveis terapias para atrasar o crescimento anormal do vaso sanguíneo, o mais notável sendo injeções de aflibercept, esta trata-se de uma glicoproteína que inibe proliferação endotelial, permeabilidade vascular, e neovascularização. No entanto, o facto deste método não se tratar de uma cura estabelece uma necessidade de profissionais de saúde determinarem um prognóstico para a perda de visão de um paciente, determinando quanto tempo irá durar a acuidade visual de um paciente será necessário saber a direção de crescimento do vaso sanguíneo. Até recentemente, não havia forma de prever com precisão a direção de crescimento destes vasos sanguíneos anormais e, por conseguinte, não havia forma de obter um prognóstico preciso da perda de visão devido à DMRI húmida, mas, entretanto, foram realizados novos estudos que descobriram uma correlação entre a concentração de drusas na mácula e a direção de crescimento destes vasos sanguíneos anormais. Drusas são depósitos focais de material extracelular que se formam entre a lâmina basal do epitélio pigmentado da retina e a camada de colágeno interna da membrana de Bruch, estas são amarelados e totalmente assintomáticos, no entanto quanto maior a concentração de drusas numa especifica direção da neovascularização macular, maior a probabilidade de o vaso crescer nessa direção. Esta descoberta está a levar à exploração de possíveis alternativas para determinar a direção de crescimento destes vasos sanguíneos, de modo a fornecer aos doentes um prognóstico mais preciso da perda de visão. Nesta dissertação, decidimos explorar a possibilidade de utilizar algoritmos de aprendizagem automática como alternativa para a previsão da direção de crescimento destes vasos sanguíneos anormais. Os algoritmos criados para testar estas possibilidades utilizaram imagens de tomografia de coerência ótica obtidas de diversos pacientes. As imagens foram obtidas na escala de cinzento, cada paciente forneceu 2 imagens sendo estas a tomografia realizada no diagnostico e uma subsequente tomografia uns meses depois. Cada imagem obtida foi processada obtendo um total de 4 imagens diferentes por cada paciente, sendo estas uma imagem da tomografia de diagnostico, uma imagem binarizada da tomografia de diagnostico na qual as drusas se encontram destacadas a branco, uma imagem binarizada da tomografia de diagnostico na qual a neovascularização macular se encontra destacada a branco, e finalmente uma imagem binarizada da tomografia tirada uns meses pós o diagnóstico na qual a neovascularização macular se encontra destacada a branco. Através deste procedimento foi criada uma base de dados de vários pacientes que incluía as 4 imagens de cada um. Esta base de dados foi fornecida pelos Vitreous Retina Macula consultants of New York para o desenvolvimento desta dissertação. Esta base de dados, no entanto era demasiado pequena fornecendo dados de apenas 17 indivíduos e como tal medidas foram tomadas para alongar esta base de dados, indivíduos eram escolhidos aleatoriamente e as suas imagens eram copiadas com ligeiras alterações, nomeadamente as imagens eram rodadas um número de graus aleatório para criar uma nova adição á base de dados, este processo foi repetido 100 vezes de forma a criar um total de 100 pacientes artificiais cada um com as suas respetivas 4 imagens. A obtida base de dados foi utilizada para a criação de diversos modelos de aprendizagem automática. Para criar um modelo de aprendizagem automática é necessário organizar os dados numa matriz de informação com apenas uma coluna de alvo, esta matriz contém instâncias em cada linha e as suas correspondentes colunas contêm dados para prever o seu correspondente resultado na coluna alvo. Um modelo de aprendizagem automática será fornecido com vários exemplos de instâncias e os seus respetivos resultados e tentará prever os resultados de outras novas instâncias que não estejam incorporados nos exemplos fornecidos ao modelo, os resultados obtidos são comparados aos valores reais para obter métricas de avaliação do desempenho do modelo. Mas para realizar este processo a criação da matriz será necessária, como tal cada paciente foi dividido em 25 instâncias diferentes cada uma correspondendo a um porção de imagem correspondendo a uma abertura de um ângulo em torno do centro da neovascularização macular, as 4 imagens sendo divididas de igual forma. A matriz foi criada obtendo métricas destas porções de imagens que foram utilizadas como valores para as colunas sendo que a coluna alvo corresponderia a uma previsão do crescimento nessa particular direção. A partir das porções de imagens foram obtidas diversas métricas que corresponderam aos valores das colunas, sendo estes valores: o número de pixéis brancos na porção de imagem correspondente a drusas, o numero de zonas de maior densidade de drusas, a média do tamanho destas áreas de maior densidade, a distancia entre o centro da neovascularização macular e a zona com maior densidade, a quantidade de pixéis brancos nessa zona de maior densidade, o número de pixéis brancos correspondendo á neovascularização macular nessa particular porção de imagem, as características de Haralick, e finalmente a característica alvo que o modelo tentará prever, existindo 3 possíveis alternativas todas elas representando o crescimento da neovascularização nessa respetiva porção da imagem. Após a criação da matriz os modelos foram criados utilizando diversos algoritmos, sendo estes: árvores de decisão, diversos métodos de regressão linear, Naïve Bayes, k-vizinhos mais próximos, máquina de vetores de suporte, e métodos de conjunto. Após testar os diversos modelos podemos descobrir quais características calculadas presentes na matriz são redundantes e como tal poderão ser retiradas sem causar grande impacto no modelo. Os modelos obtidos após retirar as características redundantes foram avaliados e comparados para determinar se os modelos de Aprendizagem Automática podem ser utilizados para prever a direção de crescimento de um vaso sanguíneo anormal na mácula e qual o modelo com melhor desempenho global para este objetivo. Os modelos obtidos tiveram um bom desempenho, o que me leva a crer que um modelo de aprendizagem automática pode levar a um melhor prognóstico da perda de visão na AMD húmida, observando também que os modelos de Floresta Aleatória tiveram um desempenho superior aos restantes.

A profundidade de fecho corresponde à profundidade a partir da qual o perfil de praia não sofre modificações morfológicas significativas. Este é um conceito fundamental para definir a extensão da praia submarina, com relevância para um conjunto alargado de tópicos que interessam para a gestão costeira. No entanto, na maior parte dos casos, esta profundidade é calculada unicamente através de fórmulas empíricas a partir do conhecimento da altura significativa e o período das ondas, havendo poucos trabalhos baseados em dados de campo e geralmente representativos de um único local. O objetivo deste estágio foi avaliar a profundidade de fecho ao longo do litoral de Portugal continental, com base nos dados recentemente adquiridos no âmbito Programa de Monitorização da Faixa Costeira de Portugal Continental – COSMO relativos aos anos de 2018 a 2021. Para cumprir este objetivo foi desenvolvido um método de análise automático (em linguagem de programação Python) baseado no cálculo adimensional da variabilidade morfológica ao longo do perfil. Foi ainda calculada a profundidade de fecho através de três equações empíricas e posteriormente comparadas com os valores experimentais. A profundidade de fecho experimental calculada ao longo da costa ocidental de Portugal foi cerca de 11 m (NMM) enquanto no Algarve foi de cerca de 6m (NMM). De entre as fórmulas empíricas analisadas para o cálculo da profundidade de fecho, a de Birkemeier demonstrou ser a mais adequada em comparação com os dados de campo analisados. Aos valores apresentados têm as limitações inerentes à quantidade e qualidade dos dados disponíveis, um problema que tem especial acuidade no Algarve onde o reduzido número de perfis e o facto de estes serem geralmente adquiridos no verão poderá levar à subestimação da profundidade de fecho obtida no âmbito deste trabalho.

The present investigation has as main objective the analysis and critical reflection of the graphic design of film noir posters, developed in the United States of America, in the forties and fifties of the twentieth century, seeking to contextualize, interpret and understand its influence on the universe of contemporary visual culture. In this sense, will be developed a deconstruction of these printed formats, in the most diverse aspects, formal and symbolic. In a first phase, will be explored the North American sociocultural and historical question, during the forties and fifties, where will be analyzed historical and social factors of great impact, in order to allow a broader understanding of the contextual territory that circumscribed and influenced the visual expression and graphic languages presented in film noir posters. In the next phase, we will explore what is the Film Noir genre, its influences and characteristics, as well as the history and evolution of the cinematographic poster, in particular the posters created in the United States of America, in the period mentioned above, when the classic period of film noir is inserted. Another objective of this investigation is to establish a parallelism between the posters of film noir, in its original or classic examples, in contrast with most recent examples, to allow a critical understanding about the influence of these printed objects in the past and currently. Finally, it should be noted that the choice of this theme was due to the fact that film noir presents the particularity of assuming itself as a cinematographic genre with a capacity of significant transformation in the course of cinema history, evolving to updated versions and variations of the genre (such as neo-noir), that adapted (like the posters created for this type of movies) with great versatility to contemporary visual culture

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Astrocytes are glial cells with numerous physiological functions, among which the ability to modulate synaptic transmission in the hippocampus, a brain area intimately involved in memory and learning. Astrocytes modulate synaptic function through intracellular Ca2+ changes elicited by receptors such as type one cannabinoid receptor (CB1R). Moreover, CB1R effects can be modulated by adenosine A1 receptor (A1R) in neurons, however, nothing is known concerning astrocytes, and the implication of astrocytic A1R-CB1R crosstalk for synaptic plasticity. Thus, the objective of this work was to study the role of astrocytic CB1R on the long-term potentiation (LTP) at the hippocampal CA3-CA1 synapses from IP3R2-WT and IP3R2-KO mice (which lack astrocytic Ca2+ signals) and the modulation of this CB1R effect by A1R. Additionally, the impact of the acute administration of WIN 55,212-2, a CB1R agonist, was evaluated on mice’s learning and memory, and on hippocampal protein levels of CB1R, A1R, and NMDAR-NR2B. In IP3R2-WT mice, either the exogenous activation or the block of CB1R caused an impairment of LTP that was lost in IP3R2-KO mice. Moreover, while the blockage of A1R followed by the activation of CB1R did not change LTP in both IP3R2-WT and IP3R2-KO mice, the blockage of A1R by itself impaired LTP only in IP3R2-WT. No alterations were observed in IP3R2-WT and IP3R2-KO mice’s spatial working memory in the Y-Maze Spontaneous Alternation Test. However, in the Y-Maze Novel Arm Test, an improvement of spatial working memory was observed only in IP3R2-WT treated with WIN 55,212-2. Protein analysis revealed only the decrease in hippocampal NMDAR-NR2B and CB1R protein levels from IP3R2-KO treated with WIN 55,212-2 in males and females, respectively. These results reveal the involvement of astrocytes on the effect of CB1R modulation and CB1R-A1R interaction on glutamatergic transmission that may contribute to the development of therapies for neuropsychiatric-related disorders.

Segundo a Organização Mundial de Saúde, o cancro da mama afeta cerca de 2,3 milhões de mulheres todos os anos, provocando mais de 650000 mortes. Sendo por isso considerado o cancro mais comum nas mulheres, assim como, a causa mais comum de morte por cancro nas mulheres em todo o mundo. Todos estes factos constituem uma crescente preocupação de conhecer cada vez melhor os mecanismos celulares que levam à progressão deste tipo de cancro. Desta forma é urgente conjugar esforços para desenvolver novos métodos de prevenção e diagnóstico mais precoce, assim como a elaboração de novas terapias alvo cada vez mais direcionadas e eficazes tendo em conta o paciente em causa. Os diferentes tipos de cancro da mama podem ser categorizados com base na localização do tumor, como este se desenvolve e nas suas características histológicas. O carcinoma intraductal desenvolve-se nos ductos da mama, no entanto não é invasivo. O cancro invasivo pode disseminar-se até ao tecido mamário assim como aos nódulos linfáticos, atingindo outras partes do organismo. Este tipo de cancro invasivo manifesta-se ao nível dos ductos mamários ou ao nível dos lóbulos mamários. Por outro lado, o cancro da mama triplo negativo para além de ser um cancro invasivo, representa um dos tipos de cancro mais agressivos ocorrendo em mulheres mais jovens. O cancro da mama HER2 positivo é também um cancro agressivo devido à produção de uma grande quantidade de proteína HER2 que promove o crescimento de células cancerígenas. Outro dos tipos de cancro da mama invasivo agressivo, mas mais raro, é o cancro da mama inflamatório, no qual as células cancerígenas bloqueiam os vasos linfáticos, causando vermelhidão e inchaço da mama. Além disso, perto de 1% da população é afetada por outros tipos de cancro da mama menos comuns: doença de Paget, angiossarcoma ou tumor filoide. Um dos genes responsáveis pela supressão de tumores em humanos é o gene de suscetibilidade ao cancro da mama 2 ou gene BRCA2, envolvido na recombinação homologa, tão importante para a reparação de quebras de cadeia dupla de DNA. As mutações da linha germinal neste gene aumentam a probabilidades de desenvolver cancro ao longo da vida. Atualmente, este gene tem variadas funções: atua na resolução de RNA loops, assim como no processo de diferenciação das células mamárias, para além da sua função mais conhecida de reparação de danos no DNA por recombinação homóloga. Perceber melhor os mecanismos que envolvem este gene, permitirá assim entender como se desenvolve o cancro da mama, como preveni-lo e como diagnosticá-lo mais precocemente num estadio inicial. Mutações neste gene são frequentemente associadas ao cancro hereditário da mama e dos ovários (HBOC), caracterizado por um risco mais elevado de desenvolver cancro da mama ou ovário numa idade mais jovem. O objetivo deste projeto exploratório consistiu em desenvolver um modelo que permitisse perceber qual a importância das funções do BRCA2, através da sua degradação rápida e reversível. Desta forma, recorreu-se ao sistema de degradação induzido pela auxina (AID), descoberto inicialmente em plantas, já inserido em outros genes anteriormente, tal como descrito na literatura, para estudar funções de genes e de proteínas em células eucarióticas assim como em organismos-modelo. Este sistema de degradação induzido permite uma degradação rápida, reversível e específica na presença da fito-hormona auxina, permanecendo inativo na sua ausência. O sistema AID utiliza componentes da própria célula, como o SCF E3 ligase, com 3 subunidades: SKP1, Cullin1 (CUL1) e proteína F-Box, assim como componentes retirados das plantas, como a proteína F-box específica apenas das plantas, o TIR1. A proteína TIR1 combina-se com as proteínas CUL1 e SKP1 para formar o complexo E3 ubiquitina ligase funcional. No entanto, o AID apenas será identificado pelo TIR1, na presença da hormona auxina. De forma a evitar a degradação não especifica da proteína alvo pelo proteassoma, o sistema AID foi melhorado, acrescentando-se fatores de transcrição de resposta à auxina (ARF), que irão permanecer ligados ao AID, na ausência de auxina. Assim, a proteína alvo apenas será ubiquitinada e degradada na presença exclusiva desta fito-hormona. Este sistema altamente regulado permite verificar de imediato as alterações a nível molecular, celular e fenotípico da desregulação imediata da proteína alvo, sendo que após a adição da auxina, a expressão da proteína deverá ser reduzida num período de tempo de cerca de 20 a 30 minutos. E, quando a auxina for retirada, a expressão proteica deverá ser restabelecida na totalidade. Assim recorreu-se à utilização de células estaminais pluripotentes induzidas (iPSC), geradas através da reprogramação de células somáticas obtidas de amostras de sangue humano. Esta reprogramação é processada através da combinação de 4 fatores de transcrição, nomeadamente Oct3/4, Sox2, Klf4 e c-Myc. Estas células apresentam a grande vantagem da sua posterior diferenciação em qualquer tipo de célula humana, tornando-as assim candidatos ideias para o desenvolvimento de modelos humanos para a investigação de mecanismos moleculares de doenças, facilitando também o avanço de novas terapias-alvo. Neste projeto, as células estaminais pluripotentes induzidas foram utilizadas para gerar este modelo, permitindo assim a sua posterior diferenciação em células progenitoras mamárias. Com o intuito de desenvolver este novo modelo foi necessário recorrer a uma técnica de edição genómica que permitisse realizar alterações direcionadas e altamente específicas em loci precisos do genoma. Para este projeto, foram inseridos dois plasmídeos nas células em estudo, cada um deles em locus diferentes, através da técnica de inserção dirigida CRISPR-Cas9. Este processo iniciou-se com a inserção do plasmídeo ARF16-PB1-HA-P2A-OsTIR1, no locus seguro humano AAVS1, através da técnica de CRISPR-Cas9, nas iPSCs wild type não modificada. As células onde o plasmídeo ARF16-PB1-HA-P2A-OsTIR1 foi inserido com sucesso foram selecionadas através da adição de meio com antibiótico Puromicina, passando a denominar-se de linha celular TIR1-iPS. Após este procedimento, foi introduzido o plasmídeo AID-P2A-HygR, no C-terminal do gene BRCA2, no exão 27, na linha celular TIR1-iPS, através da mesma técnica de inserção dirigida CRISPRCas9. Nesta fase, tentou-se selecionar as células positivas através da adição de meio com antibiótico Higromicina, no entanto verificou-se a morte celular das mesmas. Repetiu-se o procedimento uma segunda vez, modificando o modo de seleção para a picagem de cerca de 500 clones, seguido de amplificação por PCR e análise do gel de eletroforese respetivo. Os resultados obtidos mostraram a existência de 3 clones positivos heterozigóticos, através da observação de duas bandas nos 489bp e nos 638bp, correspondentes à linha celular TIR1, apenas com a inserção TIR1, e à linha celular BRCA2-AID TIR1, com as duas inserções desejadas. Desta análise, resultaram os clones P7E1, P9F6 e P10A1. Finalmente, dos 3 clones obtidos, selecionou-se o clone que tinha maior expressão da proteína BRCA2 e, neste clone, testou-se o nível de degradação após a adição da fito-hormona auxina. Os resultados da técnica de western blot demonstraram uma compartimentação da proteína BRCA2 nos clones em que é acionado o sistema de degradação controlado pela adição da auxina em diferentes intervalos de tempo. Em suma, os resultados obtidos demonstraram que a degradação total da proteína não teve sucesso como desejado, sendo que não se observou a degradação da proteína BRCA2 na sua totalidade, mesmo prolongando o tempo de exposição ao estímulo da auxina. O método utilizado não possibilitou atingir o objetivo final, no entanto foi gerada com sucesso a linha celular TIR1 que poderá ser utilizada posteriormente para marcar diferentes proteínas de interesse. Uma das futuras possibilidades de continuação deste projeto poderá passar por testar a inserção deste modelo no N-terminal do gene BRCA2.