Repositório RCAAP

O Aedes aegypti é o principal vetor da dengue em todo o mundo. Por causa da natureza doméstica deste mosquito, a importância relativa do Macroclima na modelação da sua distribuição tem sido um assunto controverso. Neste trabalho capturaram-se as condições macroclimáticas dos locais ocupados pelo A. aegypti no século passado e avaliou se a capacidade desta informação para prever a distribuição observada da espécie. Também foi projetada a distribuição futura da espécie (2010-2039) sob dois cenários de mudança climática. Os resultados indicam que o macroclima é em grande parte responsável pela definição do limite de alcance máximo do A. Aegypti, e continuará a ser no futuro. Paralelamente, muita da variedade da espécie em regiões temperadas e subtropicais é sustentada pelos ambientes artificiais. Globalmente, estas análises sugerem que, se os ambientes domésticos normalmente explorados por esta espécie estiverem disponíveis, a sua distribuição pode expandir-se consideravelmente num futuro próximo.

A evolução dos modelos urbanos preditivos que simulam de forma eficaz os padrões espaciais do crescimento urbano deve-se, sobretudo, aos rápidos avanços na informática e na tecnologia geoespacial. Na geografia, a modelação do crescimento urbano é, comumente, realizada através de uma abordagem baseada nos autómatos celulares (AC) aliada a uma estrutura SIG. Este estudo procura conceber uma metodologia de modelação e análise espacial, com abordagem às propriedades emergentes e auto-organizadas, através da definição de parâmetros espaciais e regras de transição, que relacionam o efeito de escala com os processos de crescimento urbano. Deste modo, a variação do efeito de escala foi representada pela configuração da dimensão (3x3, 5x5, 7x7, 9x9 e 11x11) e forma (Rectângulo, Círculo, Anel) da janela de vizinhança e pela dimensão da célula (50m, 100m, 150m, 200m, 250m e 300m), a fim de simular cenários futuros para parte da área de Lisboa e Vale do Tejo.

As regiões metropolitanas são marcadas por níveis consideráveis de consumo de espaço, colocando pressões sobre os solos agrícolas. Em Portugal, essas pressões ocorrem sobretudo na faixa litoral, com destaque para as áreas metropolitanas de Lisboa e do Porto. A diminuição e fragmentação de área agrícola tem impacto na produção de alimentos, na multifuncionalidade da paisagem, e na protecção do solo enquanto recurso escasso, colocando desafios em termos de política para o ordenamento do território. Do ponto de vista do apoio à decisão em ordenamento do território torna-se imprescindível compreender os processos inerentes à transformação das áreas agrícolas. Ora, esses processos são desenvolvidos essencialmente por agentes que actuam no território (agricultores, proprietários de terrenos, promotores imobiliários, decisores políticos). Neste estudo propomos a construção de um modelo conceptual em sistema multiagentes (SMA) para modelação das interacções entre actores e território e das decisões que daí decorrem para prever cenários de alterações de uso e ocupação do solo agrícola.

A utilização de Sistemas de multi-agentes (SMA) em ciências sociais tem ganho importância devido ao potencial que demonstram para modelação de fenómenos complexos. A Teoria da Complexidade tem aplicação em vários campos científicos, nomeadamente em turismo os investigadores começam a analisar o sistema enquanto complexo. Contudo, há pouca aplicação de SMA como ferramenta para explorar e prever padrões em turismo. O objectivo do trabalho é desenvolver um SMA que contribua para o conhecimento do processo de tomada decisão do turista na selecção de um destino de férias. SMA permitem: (i) considerar fenómenos turísticos de natureza complexa, (ii) fornecer ferramentas para explorar relações complexas entre componentes do sistema, (iii) retirar pistas sobre o funcionamento do sistema e do processo de tomada de decisão do turista. A motivação individual e a influência da rede social são discutidas quanto à importância que detêm no processo de tomada de decisão de destino de férias pelos turistas.

Riemann mostrou em 1857 que a equação hipergeométrica pode ser reconstruída a menos de isomorfismo a partir do conhecimento das suas monodromias locais. Esta classificação de tipo topológico e algébrico está na origem do moderno conceito da correspondência de Riemann-Hilbert. Tendo em vista o estudo da equação hipergeométrica de um ponto de vista moderno, classificam-se as representações 2x2 do grupo livre com dois geradores. O propósito do estudo destas representações centra-se nos seguintes factos: o sistema local associado à equação hipergeométrica tem rank 2 e o grupo fundamental do espaço topológico subjacente a esse mesmo sistema local é um grupo livre com dois geradores.

A energia tem um papel central na nossa vida e sobretudo nas economias dos países. Nas últimas décadas tem-se assistido a um aumento do consumo de energia muito devido à contínua expansão urbana. Esse aumento de consumo tem originado um impacto negativo sobre o ambiente, levando a uma procura por soluções energéticas alternativas que visem o equilíbrio entre a viabilidade económica e o abastecimento energético sobretudo nas áreas urbanas, como o caso da energia solar. No entanto para que seja possível promover o uso da energia solar em ambiente urbano é necessário, em primeiro lugar, conhecer as características e a distribuição geográfica das melhores localizações para se implementar sistemas solares. Neste contexto, o presente trabalho tem como objectivo criar um modelo solar que permita caracterizar, estimar e quantificar o potencial solar dos espaços públicos. Este modelo será testado numa área teste no concelho de Lisboa recorrendo aos Sistemas de Informação Geográfica.

In Portugal, soil mapping remains incomplete, and there are also significant problems with the existing cartography. Digital Soil Mapping uses advanced computerbased techniques such as Artificial Neural Networks (ANN) for mapping soil classes in a cheaper, more consistent and flexible way, using surrogate landscape data. This work used five different training sets to evaluate the impact that sampling has on the predictive accuracy of ANNs. The testes were carried out in IDRISI Taiga for two catchments in northern Portugal, using an ANN method known as multi-layer perceptron. Results show that sampling design is very important for the accuracy of soil mapping with ANNs.

In order to face the challenges of urban planning, there is an increasing need to monitor and quantify urban occupation. This study, conducted within the research project "FURBS: Sustainable Urban Form - Methodological development for Portugal (PTDC/GEO/69109/2006), seeks to examine the urban form of the Lisbon Metropolitan Area (LMA), and its occupation between 1990 and 2000, using spatial metrics. The LMA congregates nearly 3 million inhabitants, around 26% of the Portuguese total population. A relevant characteristic of the region is that it has been subject to a constant opening of new areas of urbanization, which had caused in this region, an increase of 18.6% of housing units between 1991 and 2001, while the total population grew only 4.3%. In this study, we sought to apply the use of spatial metrics to CORINE Land Cover urban classes, analysing the evolution of urban area with a wide range of spatial metrics in order to quantify the urban evolution in the region. Spatial metrics have been used in ecology studies where they are known as landscape metrics. These metrics represent the geometric characteristics of the landscape units and the spatial relationships between them. Only recently these metrics started to be used to analyse and classify the urban form in a more systematic way. The applications of quantitative indicators are one of the methodologies showing greatest potential in characterizing urban form, allowing researchers a tool to evaluate the urban form. In a nutshell we aim to contribute to the knowledge of the LMA and to the development of one of the most innovative approaches to the study of urban dynamics.

A colite ulcerosa (UC) é uma doença inflamatória intestinal (DII) crónica de etiologia desconhecida que afeta o cólon e o reto. A UC foi descrita pela primeira vez por Samuel Wilks em 1859 e é mais comum relativamente à doença de crohn (DC) em todo o mundo. Esta doença do foro intestinal tem, nos últimos anos, levantando algumas preocupações devido à sua elevada incidência em países desenvolvidos e um aumento substancial da mesma em países em desenvolvimento. Estima-se, que a incidência e a prevalência são relatadas em 1,2 a 20,3 e 7,6 a 245 casos por 100 000 pessoas/ano, respetivamente. Antecedentes genéticos, fatores ambientais, desregulação primária imunológica da mucosa intestinal, têm sido alguns dos fatores de risco descritos que contribuem para o desenvolvimento desta patologia. A sintomatologia clássica da UC inclui diarreia com vestígios de sangue com ou sem muco, urgência em defecar, tenesmo e dor abdominal que muitas da vezes é aliviada pela defecação. A terapêutica medicamentosa convencional (aminossalicilatos, tiopurinas e corticosteróides (CIs)) permitiu uma alteração do paradigma da doença melhorando significativamente a morbilidade que lhe é associada. No entanto, muitos destes esquemas não são totalmente eficazes apresentando recidivas ao longo do tempo. Deste modo, surgiram ao longo dos últimos anos, novos alvos terapêuticos e fármacos biológicos, a farmacoterapia inovadora atualmente disponível, visa induzir e manter a remissão da sintomatologia, promover a cicatrização da mucosa e evitar qualquer intervenção cirúrgica. Consequentemente, os meios de diagnóstico foram aprimorados com a finalidade de monitorizar a atividade da doença com maior precisão. Apesar de todos estes avanços, uma percentagem substancial de doentes, nomeadamente aqueles que apresentam recidiva da doença sobre terapêutica ou aqueles que desenvolvem cancro colorretal, ainda necessitam de intervenções cirúrgicas restauradoras (proctocolectomia).

A tuberculose continua neste momento a ser um dos problemas mais importantes da saúde pública a nível mundial, com uma estimativa de 10 milhões de novos casos por ano, apesar de contar com já 90 anos de vacinação. A Organização Mundial da Saúde confirmou que em 2020, 63% dos menores de 15 anos infetados com o bacilo não receberam a assistência necessária ou nem sequer usufruíram de serviços de diagnóstico e consagra-se como sendo, atualmente, uma das principais causas de mortalidade nos países subdesenvolvidos. A parede celular das micobactérias circunda e protege as células, funcionando enquanto interface principal com o ambiente envolvente, sendo a biossíntese da parede celular um processo fulcral no que toca à sobrevivência micobacteriana. É consabido que a bactéria da tuberculose é composta por inúmeras proteínas essenciais ao seu ciclo de vida e, entre elas, a oxiredutase decaprenil-fosforil-ribose 2'-epimerase (DprE1), identificada em 2009, que foi caracterizada como um alvo primário para um mecanismo baseado em inibidores. Assim, a proteína apresenta-se como uma excelente candidata, uma vez que desempenha um papel essencial na síntese da parede celular bacteriana tendo a função de formar lipoarabinomanano e arabinogalactano. Com esta monografia, pretende-se expor as diversas moléculas com o potencial de inibir esta proteína, por mecanismos covalentes, essencialmente pela redução do grupo nitro mas também referir mecanismos não covalentes. Deste modo, o leitor ficará com uma noção abrangente de que existem várias moléculas com uma elevada capacidade de inibir o crescimento das bactérias em causa e eventualmente chegarem ao mercado na forma de medicamentos eficazes e seguros no tratamento da tuberculose. Além disto, os medicamentos anti-tuberculares não revelam uma eficácia total relativamente à eliminação dos bacilos, na medida em que os mesmos têm a capacidade de permanecerem na forma latente dentro dos macrófagos e provocar novamente uma reinfeção. Assim, podemos dotar o profissional de saúde, no futuro com um maior arsenal terapêutico a fim de combater esta ameaça global.

Os agentes químicos de guerra (AQG) são compostos que servem para matar ou ferir gravemente pessoas civis ou militares. Embora o uso deste tipo de compostos tenha sido proibido há muitos anos, ainda continua a ser uma séria ameaça nos dias de hoje. Por esta razão, novos métodos de deteção e descontaminação de agentes químicos de guerra continuam a ser uma prioridade para a NATO. Neste trabalho é descrito o uso de líquidos iónicos como novos métodos de descontaminação de AQG. Este trabalho foi desenvolvido no âmbito do projeto da NATO (EnzIL - Biofriendly decontamination of Chemical Warfare Agents, G5713), que visa o desenvolvimento de métodos de descontaminação biocompatíveis. Assim, foram sintetizados diferentes líquidos iónicos e mistura eutéticas, e feita a sua análise como sorventes de simulantes de AGQ.

O cancro é um problema mundial e, apesar dos avanços da ciência e medicina na compreensão da sua biologia e genética, é a segunda causa de morte. Durante muito tempo, o seu tratamento baseou-se na cirurgia, radioterapia e quimioterapia. Embora estas terapias tenham apresentado resultados positivos, apresenta taxas de sucesso variáveis devido à falta de especificidade e toxicidade sistémica inerente. A medicina de precisão introduz uma mudança de paradigma no campo médico, mostrando-se promissora no diagnóstico atempado, bem como na melhoria das condições de vida dos doentes com cancro. O objetivo é avaliar dados genéticos, estilo de vida e ambientais do paciente, com recurso a tecnologia de ponta, como testes moleculares e sequenciamento de última geração, para fornecer um diagnóstico preciso num estadio inicial, bem como um tratamento apropriado. Assim, a medicina de precisão pode permitir a prevenção de doenças e, ao mesmo tempo, reduzir os custos e efeitos colaterais da terapêutica. Atualmente, o campo com maior pesquisa e aplicação em medicina de precisão, é a oncologia. O cancro do pulmão é um exemplo proeminente do sucesso desta inovação no tratamento de tumores sólidos malignos. O cancro de pulmão é um grande problema de saúde pública, sendo a principal causa mundial de morte relacionada com o cancro. Isto deve-se a um diagnóstico em estadios avançados, em consequência da ausência de sintomas na fase inicial da doença, o que a torna muitas vezes incurável. Assim, a realização do perfil molecular é uma ferramenta ideal para o diagnóstico e deteção atempados. A caracterização molecular abrangente do cancro de pulmão expandiu a nossa perceção das origens celulares e vias moleculares afetadas em cada um dos subtipos. Além disso, muitas das alterações genéticas encontradas representam potenciais alvos terapêuticos (biomarcadores) para os quais novos fármacos estão em constante desenvolvimento. Esta monografia pretende dar uma visão geral da atual medicina de precisão no cancro, bem como as suas perspetivas futuras. Foi dado destaque ao cancro do pulmão, mais precisamente ao subtipo de cancro do pulmão de células não pequenas, devido à sua alta incidência e mortalidade.

A Diabetes Gestacional pode ser explicada pela Hipótese de Pederson, Freinkel, Metzger e Barker, como um conflito entre dois sistemas, materno e fetal, no qual hiperglicémia materna conduz a hiperinsulinémia e adipogénese fetais, sobretudo no terceiro trimestre da gestação. Os potenciais alvos mecanísticos da resistência à insulina serão o IRS-1, a PI3K, o GLUT-4, os PPARs e a PC-1. E como marcadores surgirão a progesterona, os recetores de prolactina, os micro-RNAs como o 326, e citocinas como TNF-alfa, leptina, adiponectina e IL-6. Os principais fatores de risco serão o peso antes e durante a gestação, a dieta, a idade materna, uma DG prévia, a PCOS e a etnicidade. As complicações podem advir de três parâmetros: hiperglicémia materna, hiperglicémia e hiperinsulinémia fetais. Esses levam à produção de AGEs que potenciarão pré-eclâmpsia, a formação de ROS que despoletará alterações congénitas, e a promoção do anabolismo que culminará na macrossomia e adiposidade, podendo ainda findar em lesões microcirculatórias e hipóxia. E, mais grave ainda, na angústia respiratória do recém-nascido. O tratamento pode ser comportamental baseado-se numa dieta de baixo índice glicémico, recomendando-se um regime mediterrânico pois promove um bom consumo de polifenóis e PUFAs. Completando com exercício físico o sucesso rondará entre os 75 a 80% dos casos. Farmacologicamente a primeira linha poderá ser a insulina ou a metformina. A insulina permite o melhor controlo glicémico, não atravessa a placenta e logo não promove imprinting metabólico. Já a metformina, evita a hipoglicémia e macrossomia neonatais, além de possibilitar melhor controlo de peso. Como segunda linha, existe a glibenclamida que é inferior em eficácia e segurança. Durante a gestação, além da glicémia deve-se vigiar a proteinúria e o ganho de peso, e a partir de testes antenatais decidir-se se se deve induzir o parto antes das 39 semanas. Recomendar-se-á cesariana se o peso fetal for superior a 4,5kg. Após a gravidez, deve-se seguir a utente, observando a HbA1c e promovendo o bom estilo de vida que reduz a incidência de diabetes em 35%. A DG é um marcador de doença cardiovascular e, como tal, essa família deve ser acompanhada pelo sistema nacional de saúde.

A Diabetes Mellitus Gestacional consiste numa patologia metabólica em que existe uma intolerância crónica adquirida à glicose. Esta intolerância surge e é diagnosticada pela primeira vez durante a gravidez. A sua etiologia está focada nas alterações fisiológicas que ocorrem durante o processo de desenvolvimento fetal, das quais resulta um aumento da resistência à insulina por disfunção ao nível das células pancreáticas β. A prevalência da Diabetes Gestacional na população mundial tem vindo a aumentar significativamente nas últimas décadas. Embora seja evidente uma melhoria progressiva a nível do rastreio, diagnóstico precoce e vigilância durante e após a gravidez, o que diminui substancialmente a taxa de mortalidade materna e neonatal, a taxa de morbilidade mantém-se bastante elevada. Os fatores de risco para o desenvolvimento de Diabetes Gestacional englobam, entre outros, o excesso de peso, a idade avançada na gravidez e o historial familiar de qualquer tipo de Diabetes. Para além das complicações a curto prazo, como a macrossomia a nível do feto e o aumento do risco de desenvolvimento de doença cardiovascular e Diabetes Mellitus tipo 2 a nível materno, a hiperglicémia durante a gravidez pode ser também responsável por consequências a longo prazo, atualmente alvos de estudos, principalmente associadas ao aumento do risco de Diabetes tipo 2, doença cardiovascular e obesidade no neonato. Ao longo dos anos foram estudadas e aprofundadas estratégias terapêuticas preventivas, não farmacológicas e recorrentes à utilização de fármacos, priorizando a eficácia e a segurança da administração de fármacos durante a gravidez, de forma a favorecer o controlo da patologia com vista à diminuição dos efeitos adversos decorrentes da Diabetes Gestacional. Simultaneamente, é notória a iniciativa de padronização dos critérios de diagnóstico, de forma a incrementar a unanimidade entre os profissionais de saúde e as entidades responsáveis pela gestão destes critérios. Esta monografia destaca as etapas de rastreio e os critérios de diagnóstico adotados e utilizados atualmente em Portugal, as medidas terapêuticas e preventivas com maior evidência científica a nível de eficácia e segurança, os parâmetros de vigilância durante a gestação e o seguimento a adotar após o parto.

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A instabilidade genética é uma propriedade constitutiva das células tumorais que contribui para a progressão do processo de cancerigénese. Trabalhos recentes indicam que esta instabilidade surge num estado bastante precoce da tumorigénese como consequência de defeitos de replicação (Halazonetis et al., 2008). Contudo, os mecanismos moleculares envolvidos não se encontram ainda bem esclarecidos. Os garfos de replicação são estruturas muito frágeis que encontram frequentemente obstáculos como complexos proteicos ou lesões de ADN. A paragem não controlada destes garfos pode provocar a formação de quebras cromossómicas (Tourrière et al., 2005) devido à acumulação de ADN de cadeia simples. Com o propósito de limitar esta instabilidade genómica durante a fase S, as células desenvolveram sistemas de vigilância chamados checkpoints da fase S, vias de transdução de sinal conservadas na evolução que estão frequentemente desreguladas nos cancros. Um conhecimento mais aprofundado destes mecanismos deverá permitir-nos compreender melhor a origem da instabilidade genética das células tumorais e, também, de potenciar o efeito de agentes genotóxicos que têm como alvo os garfos de replicação. Os mecanismos de replicação são altamente conservados entre os eucariotas, portanto a estratégia abordada no nosso laboratório é monitorizar as respostas a stress replicativo num modelo simples, a levedura de gemulação S. cerevisiae, e então realizar estes estudos em células humanas. Recentemente, iniciámos um estudo em grande escala que visa identificar novos factores implicados na detecção de paragens dos garfos de replicação em S. cerevisiae. Este estudo permitiu-nos identificar a proteína CTF18 como um novo mediador do checkpoint de replicação, essencial para a sua activação, implicado na manutenção da integridade dos garfos de replicação (Crabbé et al., in press). CTF18 (Chromosome Transmission Fidelity Factor 18 homolog) faz parte de um complexo RFC alternativo que realiza o loading da proteína PCNA, factor de processividade das polimerases epara o ADN. O complexo proteico heteropentamérico RFC é composto por uma subunidade grande (RFC1) e quatro pequenas subunidades (RFC2 a 5). Em eucariotas, foram identificados três complexos loaders de PCNA envolvidos em respostas checkpoint (Rad17-RFC), coesão entre cromatídios irmãos (CTF18-RFC) e manutenção da estabilidade genética (Elg1-RFC). CTF18 é necessário para a transmissão cromossómica precisa em leveduras e é altamente conservado em eucariotas. Ao contrário de outros complexos RFC, CTF18-RFC também se associa com os factores de coesão da cromatina Dcc1 e CTF8 para formar um complexo heteroheptamérico e é necessário para o estabelecimento da coesão entre cromatídios irmãos durante a fase S (Lengronne et al., 2006). Este complexo deposita também PCNA no ADN de cadeia simples numa reacção dependente de ATP. O objectivo do meu trabalho foi caracterizar a função de CTF18 na resposta ao stress replicativo em células humanas normais e tumorais. Em primeiro lugar mostrei que, como em S. Cerevisiae, CTF18 humano está associado à cromatina apenas na fase S. De seguida, procurei determinar em que medida esta proteína contribui para a activação do checkpoint de replicação. Para isto, utilizei diferentes siRNAs e shRNAs que permitem uma depleção parcial ou completa de CTF18 em diferentes linhas tumorais (HCT116, HeLa, HEK293T and U20S) assim como em fibroblastos primários (IMR90). A activação do checkpoint de replicação foi analisada em presença ou em ausência de HU (um inibidor da síntese de dNTPs) em células controle ou células com depleção de CTF18 através da análise de CHK1 fosforilada/activa. CHK1 é a cinase efectora do checkpoint de replicação de ADN que fosforila a fosfatase Cdc25 de forma a bloquear a progressão do ciclo celular em resposta a stress replicativo. Aquando da depleção de CTF18 com siRNAs e com a linha celular estável induzindo shRNAs, tanto na ausência como na presença de stress, não consegui detectar diferenças significativas na activação do checkpoint. Surpreendentemente, observei uma indução mais rápida do checkpoint de replicação de ADN em células deficientes em CTF18 expostas a HU, o que poderia indicar um aumento do colapso dos garfos de replicação nestas células sob stress replicativo. Para testar esta possibilidade, tenho utilizado a técnica de Combing Molecular de ADN para determinar se CTF18 é necessário na progressão normal dos garfos de replicação e/ou para recuperação após um stress genotóxico. Este método utiliza um menisco de ar/água para alongar e alinhar moléculas individuais de ADN de uma maneira uniforme. Neste processo, o ADN liga-se a lamelas silanizadas pelas extremidades e as moléculas alinhadas são estendidas a 150% do seu comprimento cristalográfico pelo menisco de ar que recua com uma velocidade constante exercendo assim uma força constante nas moléculas aderidas. Uma vez que o ADN adere às lamelas, é irreversivelmente fixado e não se separa mesmo quando é rehidratado (Bensimon et al., 1994). O Combing Molecular permite a análise dos parâmetros de replicação (velocidade dos garfos, taxa de início de replicação) quando o ADN é extraído de células que foram marcadas com análogos halogenados de timidina como BrdU, CldU e IdU. Em experiências típicas, culturas celulares assíncronas são marcadas com pulsos de IdU e CldU de forma a determinar a orientação dos garfos de replicação. Os nucleótidos halogenados são detectados ao longo das fibras de ADN utilizando anti-corpos fluorescentes e visualizados por imunofluorescência. As distâncias percorridas pelos garfos durante as marcações são medidas usando o software MetaMorph. Neste estudo, mais de 100 moléculas individuais de ADN foram analisadas relativamente à velocidade de progressão dos garfos de replicação para cada condição experimental. Nas células transfectadas com siRNAs contra CTF18, verifiquei que os garfos de replicação se movem mais lentamente na presença de HU, que é uma reminiscência do que foi observado nos mutantes de levedura ctf18(Crabbé et al., in press). Estes dados sugerem que CTF18 humano poderá estar implicado na manutenção dos garfos de replicação retidos durante a replicação. Visto que os mutantes ctf18de levedura acumulam sinais de dano de ADN nos garfos retidos por HU, verifiquei, de seguida, se é também o caso em células humanas deficientes em CTF18. Para este fim, utilizei a forma fosforilada da variante de histona H2AX (γH2AX), como marcador de quebras simples e duplas no ADN. γH2AX foi quantificada por Western blotting em ausência e presença de stress replicativo. Um ligeiro mas reprodutível aumento de γH2AX foi observado na presença de stress em células transfectadas com siRNA CTF18, o que é consistente com os meus resultados de Combing. Estes dados sugerem que os garfos de replicação são menos estáveis nas células deficientes em CTF18 expostas a HU e que os garfos danificados induzem uma activação do checkpoint mais rápida. Em conjunto, os meus dados sugerem que CTF18 tem uma função no replissoma para conservar os garfos de replicação retidos na presença de stress, mas não tem o mesmo papel na activação do checkpoint como nas leveduras. Várias razões podem ser invocadas para explicar esta diferença. Por exemplo, a quantidade de CTF18 restante após RNA de interferência poderá ser suficiente para desempenhar a sua função no checkpoint. Tentativas têm sido feitas para melhorar a depleção de CTF18 com construções de shRNA induzíveis mas não tiveram êxito. Para além disso, em células primárias, que têm menos CTF18, a maior a depleção obtida provoca um aumento da mortalidade celular e não permitiu uma análise adicional do checkpoint. Uma outra explicação poderia ser que CTF18 humano está de facto envolvido na resposta do checkpoint da replicação de ADN, mas o defeito deste checkpoint em células deficientes em CTF18 é mascarado pela resposta do dano de ADN induzida pelo colapso dos garfos em HU. Estudos em leveduras de gemulação têm mostrado que é realmente o caso (Crabbé et al., in press). No entanto, esta possibilidade é difícil de abordar em células humanas visto que, ao contrário das leveduras, as vias dos checkpoint do dano e da replicação de ADN são altamente interdependentes e não podem ser funcionalmente separadas. Experiências adicionais são, portanto, necessárias para concluir definitivamente se CTF18 medeia ou não a resposta da replicação do ADN em células humanas, como acontece nas leveduras de gemulação.

Existem várias técnicas de imagiologia, as quais se baseiam nos fundamentos da Medicina Nuclear e cujo objetivo é o diagnóstico de diversas patologias. Neste trabalho, aborda-se de forma detalhada uma dessas técnicas, a Tomografia por Emissão de Positrões (PET). A PET é uma técnica de imagiologia não invasiva que apresenta aplicações nos campos da oncologia, da neurologia e da cardiologia. O seu funcionamento tem como base a emissão de partículas β+, isto é, positrões, que colidem com eletrões, o que resulta numa reação de aniquilação, libertando energia na forma de dois fotões de aniquilação de igual energia. Nesta monografia, pretende-se explorar os radiofármacos já aprovados e em utilização, bem como os novos domínios em que existe uma investigação substancial para o desenvolvimento de novos radiofármacos. Ao nível do diagnóstico são utilizados diversos radionuclídeos, menos energéticos e com tempo de semi-vida curto. Como exemplo, salientam-se o 18F, o 11C, 13N e o 15O. Estes radionuclídeos são produzidos no local em que se realiza o exame, em ciclotrões de pequenas dimensões, sendo o mais utilizado o 18F. O radiofármaco 2-desoxi-2-(18F)-fluoro-D-glucose (18F-FDG), análogo da glucose, é o mais utilizado para diagnóstico, nomeadamente, em oncologia, em neurologia e em cardiologia, através da avaliação da captação de glucose por PET/CT. Devido às vantagens que a técnica PET/CT apresenta no diagnóstico precoce e na planificação e monitorização de terapêuticas, têm sido desenvolvidos novos radiofármacos, a maioria dos quais, marcados com o radionuclídeo 18F, para aplicação em estudos em diversos alvos, designadamente, a replicação do DNA, as placas β-amilóides presentes na doença de Alzheimer, a hipoxia tumoral e as metástases ósseas.

Este trabalho final de mestrado, na modalidade trabalho de projeto, centra-se na recriação literária da variação linguística em The Adventures of Huckleberry Finn, de Mark Twain, e na sua tradução de inglês norte-americano para português europeu, estruturando-se em função de três objetivos. Em primeiro lugar, identificar o estado da arte da investigação sobre a tradução de variação linguística, identificando um enquadramento teórico válido para a prática de tradução e a investigação sobre a tradução de variação linguística. Em segundo lugar, analisar comparativamente as traduções para português europeu já publicadas em Portugal, concentrando-se na manutenção ou alteração do perfil discursivo do narrador e de algumas personagens selecionadas, para compreender as estratégias de tradução de variação linguística predominantemente adotadas nas traduções publicadas em Portugal. Em terceiro lugar, apresentar, analisar e comentar três exercícios de retradução para português europeu: (i) uma retradução normalizante, (ii) uma retradução desviante por recurso a uma variedade regional (Terceira, Açores) e (iii) uma retradução que pretende manter os valores comunicativos e sociossemióticos recriados no texto de partida.

O cancro é uma doença cuja prevalência tem vindo aumentar ao longo dos anos e que na maioria dos casos leva à morte do individuo que a possui. A sua elevada taxa de mortalidade, assim como os custos que encarrega, levaram a indústria farmacêutica e a comunidade académica a juntar-se de modo a encontrar novas soluções terapêuticas. O uso de fármacos citotóxicos com elevada potência é uma das soluções. Contudo, estes possuem reduzida seletividade, podendo ser perigosos para o organismo. Foram então desenvolvidas terapêuticas alternativas para solucionar este problema. Uma destas terapêuticas, é o uso de conjugados fármaco-anticorpo (ADCs). A estrutura dos ADCs está dividida em 4 componentes: um anticorpo, um fármaco citotóxico, um espaçador e um elemento de bioconjugação. As propriedades dos ADCs podem ser otimizadas alterando as estruturas dos seus componentes para que sejam mais eficazes e melhor tolerados em condições fisiológicas. Outra terapêutica também do nosso interesse é a criação de aglomerados proteicos com capacidade de encapsulamento do fármaco e de o transportar até ao interior das células alvo libertando o mesmo no seu interior. Têm-se vindo então a estudar diferentes estruturas que consigam ligar duas proteínas entre si, mas que sejam facilmente degradadas no citoplasma da célula tumoral. Para a realização deste projeto, tivemos como alicerce os ácidos borónicos (BAs), que são bastante versáteis devido à sua elevada reatividade. Estes permitem não só o desenvolvimento de ADCs, mas também de “linkers” inter-proteicos, devido à capacidade de se ligar a péptidos, assim como de reagir com hidrazinas para a formação de diazaborinas, moléculas estáveis em condições fisiológicas. Tivemos também em consideração a sua orbital p livre que permite reagir com espécies reativas de oxigénio (ROS) que se encontram em abundância em ambientes tumorais, e que levam à degradação destas moléculas. Durante este projeto focámo-nos então em planear e construir uma molécula bivalente que pudesse ser usada tanto como ADC assim como “linker” inter-proteico, que simultaneamente fosse sensível as condições fisiológicas especificas das células tumorais.

A seguinte revisão bibliográfica prende-se com a análise da aplicação dos diferentes tipos de exames de diagnóstico da função pulmonar da Medicina Nuclear, especialmente, durante a pandemia por COVID 19. A Medicina Nuclear é uma especialidade médica em que se utilizam átomos instáveis como fonte de radiação, ligados a moléculas específicas, constituíndo os radiofármacos, de forma a realizar exames auxiliares de diagnóstico e também algumas terapêuticas com radiação. As moléculas usadas na Medicina Nuclear permitem a aquisição de imagens dos processos biológicos e fisiopatológicos ou doses terapêuticas diretas de radioatividade para o tratamento de doenças específicas, graças às suas propriedades únicas, tais como o tempo de semi-vida, o modo de decaimento e o tipo de radiação emitida. A presente monografia centrar-se-á também nas alterações propostas pela Organização Mundial de Saúde nos diversos departamentos da Medicina Nuclear durante a Pandemia, tanto a nível dos recursos humanos, financeiros ou materiais. Nesta monografia, vai ser abordada ainda, a relação da Inteligência Artificial com a Medicina Nuclear e quais as possíveis vantagens da sua utilização perante o desenvolvimento da Inteligência Artificial.