Repositório RCAAP

Introdução: Atualmente, os dados relativos às características da aorta torácica em Portugal são escassos e as recomendações para a prática clínica em relação à patologia da aorta torácica baseiam-se em populações fenotipicamente diferentes da portuguesa e podem não estar adaptadas à nossa população. Uma vez que não existe um programa de rastreio disponível para analisar a morfologia da aorta torácica e a prevalência de aneurismas, procurámos utilizar as tomografias computorizadas (TC) de doentes admitidos por COVID-19, uma vez que no nosso Centro Hospitalar foi utilizada uma política de TC torácica a todos os doentes admitidos. Objetivos: Este estudo teve como objetivo definir o diâmetro "standard" e o seu respetivo desvio padrão para os vários segmentos da aorta torácica, ajustados para sexo e idade, calcular a prevalência de ectasia e aneurismas da aorta torácica e calcular as diferenças entre sexos e idades. Métodos: Foi realizado um estudo transversal, analisando uma amostra aleatória de TC de doentes internados por COVID-19. Os diâmetros foram medidos por dois investigadores em diferentes localizações anatómicas da aorta pré-determinadas. O diâmetro de referência para classificação de ectasia (diâmetro médio + 2 DP) ou aneurisma (diâmetro médio x 1,5) foi calculado utilizando médias e desvios-padrão ponderados e ajustados de acordo com o sexo. A prevalência foi calculada de acordo com o número de casos identificados sobre o número de casos estudados. Foram avaliadas as diferenças entre género e idade. A idade também foi avaliada na forma de variável categórica, utilizando grupos de 50: 50-75 e 75 anos de idade. Adicionalmente, foi avaliada a prevalência de arco aórtico bovino (origem comum da artéria inominada e carótida esquerda). Resultados: Foram incluídos no estudo 763 pacientes, com idade média de 65 (± 18,3) anos e 55,8% dos doentes eram do sexo masculino. A idade e o sexo masculino foram correlacionados com um maior diâmetro médio da aorta em todos os segmentos aórticos medidos. A ectasia/aneurisma da aorta foi encontrada em 8% (n=61) dos doentes e aneurismas foram encontrados em 0,79% (n=6). O arco aórtico bovino teve uma prevalência de 13,8% e foi menos associado a ectasia e aneurisma. Conclusão: O estudo apresentou valores de referência para os diâmetros da aorta torácica. Tanto o sexo masculino como a idade mais avançada tiveram uma correlação positiva com maiores diâmetros aórticos. Calculámos uma prevalência de aneurismas da aorta torácica superior à descrita em estudos clínicos anteriores, uma maior prevalência no sexo feminino e um possível fator de proteção relativamente à dilatação da aorta para doentes com arco bovino.

Phosphorylation of glutamate -amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) receptors by Protein Kinase A (PKA) is known to regulate AMPA receptor (AMPAR) trafficking and stabilization at the postsynaptic membrane, which in turn is one of the key mechanisms by which synaptic transmission and plasticity are tuned. However, not much is known as to how Gs-coupled receptors contribute to endogenous PKA-mediated regulation of AMPA receptor function. Here we report that activation of the excitatory A2A adenosine receptor by 2-[4-(2-p-carboxyethyl)phenylamino]-5′-N-ethylcarboxamidoadenosine (CGS 21680, 1–30 nM) facilitates AMPA-evoked currents in CA1 pyramidal neurons, by a mechanism dependent on PKA activation, but not on protein synthesis. This modulation of AMPA currents was mimicked by forskolin (1 μM) and did not occur in stratum radiatum interneurons. Superfusion of the A2A receptor agonist also caused an increase in the amplitude of miniature excitatory postsynaptic currents (mEPSCs), as well as in the membrane levels of GluR1 subunits phosphorylated at the PKA site (Ser845). The impact of this increase on GluR1-containing AMPA receptor expression was evidenced by the potentiation of LTP at the CA3-CA1 synapse that followed brief activation of A2A receptors. We thus propose that in conditions of increased adenosine availability, A2A receptor activation is responsible for setting part of the endogenous GluR1 Ser-845 phosphorylation tonus and hence, the availability of the GluR1-containing AMPA receptor extrasynaptic pool for synaptic insertion and reinforcement of synaptic strength.

Introdução – Os Acidentes Vasculares Cerebrais (AVC) Isquémicos são a principal causa de morte em Portugal. O tratamento baseia-se na trombólise intravenosa e no tratamento endovascular(TEV). A pandemia COVID-19 teve bastante impacto mundial sobretudo nos sistemas de saúde. O objetivo principal do estudo foi avaliar o impacto desta pandemia no tratamento endovascular do AVC Isquémico Agudo. | Métodos – Estudo retrospetivo, a partir da base de dados do Serviço de Neuroimagiologia do Hospital Santa Maria (HSM), onde se registam todos os doentes ali submetidos a TEV. Foram selecionados os doentes sem infeção SARS-CoV-2 até 5 dias antes da intervenção, no período entre Março e Maio de 2020, comparando-os com os meses homólogos de 2019. Resultados – Foram incluídos 123 indivíduos sem infeção COVID, 68 de 2020 e 55 referentes a 2019; 51% dos indivíduos eram do sexo masculino e 49% do feminino, com uma idade média de 73 anos. As idades variaram em 2019 entre 39 e 96anos e em 2020 entre 21-91anos. O tempo desde os sintomas à admissão no HSM, aumentou 39 minutos em 2020 face ao período homólogo em 2019. Os tempos “Door-to-Needle” e “Door-to-Recanalization” aumentaram em 2020. Em relação às recanalizações bem-sucedidas, o número de casos com Thrombolysis In Cerebral Infarction scale (TICI)2C foi 15,55% superior em 2020 e a transformação hemorrágica às 24h reduziu 9,6%. Pacientes com escala de RANKIN modificada (mRS)2 aumentaram 6,5% em 2020 (p=0,540). O número de óbitos em internamento foi 5 vezes superior no grupo de 2020. Conclusão – As restrições impostas pela pandemia de COVID-19 exigiram adaptações constantes dos serviços de saúde, justificando assim o aumento dos tempos pré e intra-hospitalares. Apesar disso, os outcomes imagiológicos e de recanalização foram melhores em 2020, possivelmente devido aos avanços na TEV e à experiência acumulada dos neurorradiologistas de intervenção. No entanto, houve um aumento inexplicável de óbitos em internamento, que necessita de investigação dirigida.

Contexto: Um acesso vascular fiável é necessário para os doentes em tratamento crónico de hemodiálise (HD). O mapeamento vascular por ultrassonografia com doppler duplex (DUS) pode ajudar no planeamento da construção do acesso vascular. A força muscular está independentemente associada ao risco de mortalidade e pode ser avaliada através da força de preensão manual. Objetivos: Este estudo tem como objetivo descrever e analisar as características clínicas, antropométricas e laboratoriais dos doentes referenciados para mapeamento vascular antes da criação do acesso vascular, assim como avaliar os dados do mapeamento vascular, da força de preensão manual e do Índice Tornozelo-Braço (ITB). Desenho do estudo: Análise Prospetiva. População: Doentes adultos com Doença Renal Crónica que foram referenciados para mapeamento vascular num centro terciário, entre Março de 2021 e Agosto de 2021. Nenhum doente foi excluído. Métodos: O mapeamento vascular por DUS foi realizado por um único nefrologista experiente. A força de preensão manual foi medida usando um dinamómetro de mão e a doença arterial periférica foi definida como ITB<0,9. De acordo com o tamanho da vasculatura distal (<2mm), foram analisados subgrupos. Resultados: Oitenta pacientes foram incluídos: 67.5% eram do sexo masculino, com idade média de 65.7 ± 14.7 anos e 51.3% estavam em terapêutica de substituição renal (TSR). Doze (15%) doentes tinham DAP. A força de preensão manual foi superior no braço dominante (20.5 ± 12.0 kg vs 18.8 ± 11.2 kg). Cinquenta e oito (72.5%) doentes tinham vasculatura distal com diâmetro inferior a 2 mm. Não houve diferenças significativas entre os grupos em relação aos dados demográficos e comorbilidades (diabetes e DAP). A força de preensão manual foi significativamente superior nos doentes que tinham vasculatura distal superior ou igual a 2 mm de diâmetro (26.1 ± 15.5 kg vs 18.4 ± 9.7 kg, p=0.010). Conclusão: Força de preensão manual superior foi associada a vasos distais mais desenvolvidos. Força de preensão manual baixa pode ser um sinal indireto de piores características vasculares, o que pode ajudar a prever os outcomes da construção e maturação dos acessos vasculares.

O cancro do pulmão é uma doença oncológica de elevado interesse clínico, bem como epidemiológico. Segundo dados da GLOBOCAN 2020, trata-se da neoplasia com maior mortalidade e da 2ª neoplasia mais frequente em todo o mundo, sendo ultrapassado apenas pelo cancro da mama no número de novos casos. No panorama nacional os dados são semelhantes, sendo o cancro com maior número de óbitos e o 4º com maior número de novos casos, por ano, traduzindo-se numa mortalidade de 88.6%. É neste contexto que surge a necessidade de implementar um plano de rastreio em Portugal, de modo a identificar e tratar estes casos o mais precocemente possível, diminuindo a sua morbimortalidade. Este trabalho pretende explorar os diferentes meios de rastreio atualmente disponíveis, os grupos de risco, os custos associados e a viabilidade da implementação do rastreio do cancro do pulmão em Portugal, do ponto de vista epidemiológico e económico.

A Trombose Venosa Cerebral (TVC) é uma localização anatómica particular para a ocorrência de uma trombose venosa. Com uma incidência anual global de 12.1 casos por milhão, a TVC é significativamente menos frequente do que outros acidentes vasculares cerebrais. A sua incidência duplica nas mulheres entre as idades 31 e 50 anos, com 2.78 por 100 mil pessoas-ano, de acordo com estudo efetuado nos Países Baixos (Coutinho et al., 2012). Além disso, a incidência de TVC parece ser superior em países de médios e baixos rendimentos. Existem fatores predisponentes e fatores precipitantes já identificados que se associam a TVC, mas que não explicam totalmente a doença. A mortalidade dos doentes com TVC tem vindo a diminuir ao longo dos anos principalmente devido a métodos de diagnóstico de maior qualidade, como a Ressonância Magnética (RM) e que permitem um diagnóstico mais precoce de casos menos graves. Além disso, melhorias na abordagem e tratamento destes doentes também contribuíram para este decréscimo (Coutinho et al., 2014). Ainda assim, em cerca de um terço dos doentes não se verifica um retorno laboral, particularmente nas mulheres e em doentes com lesões no parênquima cerebral de acordo com Lindgren et al. (2018). As TVC têm um espectro de apresentação clínica muito variável. Os sintomas podem ser agrupados em síndromes clínicos, sendo o mais frequente o síndrome de hipertensão intracraniana. Outros apresentações mais graves são a síndrome focal, encefalopatia e coma, segundo Ferro et al. (2004). As crises epiléticas agudas, que podem ocorrer desde o início dos sintomas até 2 semanas após o diagnóstico de TVC, são também um sintoma comum de apresentação de TVC. Contrariamente, as crises remotas ocorrem após este período temporal. Vários fatores de risco estão descritos para crises agudas em doentes com TVC, tais como sinais neurológicos focais à apresentação e lesões supratentoriais do parênquima cerebral, envolvimento do seio sagital superior e das veias corticais em exames de neuroimagem (Ferro, Canhão, et al., 2008; Li et al., 2019; Lindgren et al., 2020; Masuhr et al., 2006). A meta-análise realizada por Gasparini et al. (2022) concluiu que fatores preditores de crises remotas incluíam história de crises agudas, alterações do estado de consciência e sinais neurológicos focais à apresentação. Outros fatores são o componente hemorrágico em lesões do parênquima cerebral e envolvimento do seio sagital superior em exames de neuroimagem. A identificação de fatores preditores para a ocorrência de crises agudas e remotas em doentes com diagnóstico de TVC é útil para a identificação de doentes de alto risco e contribui para melhorar a seleção de doentes em futuros estudos sobre o benefício do tratamento profilático com antiepiléticos. A evidência sobre estes fatores com origem em grandes cohorts internacionais é escassa. O objetivo deste estudo é a identificação da incidência e de fatores preditores de crises agudas e remotas em doentes adultos com TVC e que foram incluídos no estudo EXCOA-CVT (The Benefit Of Extending Oral Anticoagulant Treatment After Acute Cerebral Vein Thrombosis). Para o presente estudo foram utilizados os dados dos doentes incluídos no estudo EXCOA-CVT, um ensaio clínico aleatorizado, prospetivo e multinacional, com um período total de seguimento programado de 24 meses. O objetivo deste ensaio é a comparação da eficácia e segurança da anticoagulação com duração curta (3-6meses) e duração longa (12 meses) na prevenção de eventos tromboembólicos venosos após um episódio de TVC. A análise da incidência e fatores preditores para crises agudas e remotas em doentes com TVC está predefinida no desenho deste ensaio. Detalhes sobre a metodologia deste ensaio são descrito no protocolo do ensaio (Miranda et al., 2018). Os critérios de inclusão definidos foram a idade superior ou igual a 18 anos, ocorrência de uma TVC, radiologicamente confirmada por venografia por tomografia computorizada (TC) ou ressonância magnética (RM) ou angiografia, um consentimento informado escrito e estar clinicamente estável com possibilidade de parar anticoagulação parentérica. Todos os doentes foram incluídos prospectivamente e tiveram origem em 38 centros de 21 países. O período de inclusão variou entre hospitais, tendo ocorrido globalmente entre fevereiro 2011 e agosto 2021. O desenvolvimento do presente estudo foi feito seguindo The TRIPOD Statement (Moons et al., 2015) - guideline para estudos que desenvolvam ou validem um modelo clínico preditivo com múltiplas variáveis. Os dados extraídos da base de dados do EXCOA-CVT incluem características demográficas, análises laboratoriais e resultados de exames de neuroimagem. Formulários standard foram usados por todos os investigadores e todos os doentes assinaram consentimento informado. O estudo foi aprovado pelos comités de ética locais. O diagnóstico de TVC foi confirmado com por venografia por TC/RM ou angiografia. As crises foram diagnosticadas e abordadas pelo respetivo médico assistente. O tipo de início de TVC foi classificado de acordo com o tempo desde o início dos sintomas até à admissão: início agudo (<48 horas), subagudo (48 horas a 30 dias) e crónico (>30 dias). A presença de lesões hemorrágicas em exames de neuroimagem inclui a existência de enfarte hemorrágicos e hematomas intracerebrais. A presença de edema ou enfarte sem hemorragia são classificadas como lesões do parênquima cerebral não-hemorrágicas. As características demográficas, clínicas e radiológicas de base foram comparadas entre os doentes com ou sem crises agudas e remotas. Associações significativas (valor p < 0.05) entre características base e a ocorrência de crises agudas ou remotas foram investigadas usando o Teste de Fisher ou Qui-quadrado para variáveis dicotómicas e o teste Mann-Whitney-U para variáveis contínuas. Os potenciais fatores preditores foram selecionados com base na plausibilidade clínica, resultados de estudos prévios e as análises bivariadas realizadas (valor p < 0.05). Foi calculado Odds-Ratio (OR), intervalo de confiança de 95% e realizada análise de regressão logística múltipla com seleção backward Likelihood Ratio (LR) para identificação dos fatores preditores. Entre fevereiro 2011 e agosto 2021, 937 doentes com TVC de 38 centros em 21 países foram registados na base de dados EXCOA-CVT. Após exclusão de um doente com diagnóstico prévio de epilepsia, foram incluídos 936 doentes adultos para a análise de crises agudas. Para análises de crises remotas foi necessário excluir 184 doentes com dados em falta no seguimento ou morte na fase aguda, deixando um total de 752 doentes neste cohort. A idade mediana era 38 anos e a proporção de doentes do sexo feminino era 65,6% (614 doentes). A mediana do tempo de seguimento foi de 24 meses. Dos 936, 324 (34.6%) doentes tiveram pelo menos uma crise aguda. Selecionaramse como possíveis fatores preditores na análise de crises agudas o sexo masculino, mono ou hemiparesia na apresentação, envolvimento do seio sagital superior e das veias corticais, assim como evidência de lesão hemorrágica cerebral em exames imagiológicos, com base na análise bivariada realizada. A idade foi também selecionada com base na plausibilidade clínica e estudos prévios. Os fatores preditores identificados foram envolvimento do seio sagital superior (OR = 1.972) e das veias corticais (OR = 2.796), assim como evidência de lesão hemorrágica cerebral (OR = 3.571). Na análise de crises remotas, a mediana da idade era 37 anos e a proporção de doentes do sexo feminino era 65,7% (494). Dos 752 doentes, 41 (5.5%) tiveram pelo menos uma crise remota, durante um tempo de seguimento mediano de 24 meses. Cinco doentes (12.2%) tiveram recorrência de crises remotas durante um tempo de seguimento mediano de 18 meses após a primeira crise. Selecionaram-se como possíveis fatores preditores de crises remotas a idade, crise aguda, afasia na apresentação e evidência de lesões cerebrais hemorrágicas em exames de neuroimagem, com base nas análises bivariadas efetuadas. O sexo masculino foi selecionado com base na plausibilidade clínica e estudos prévios. Os fatores preditores identificados foram crises epiléticas agudas (OR = 4.541) e afasia como sintoma à apresentação (OR = 5.339). Concluímos assim que a incidência de crises epiléticas agudas é de 35% em doentes com diagnóstico de TVC e que 6% tem pelo menos uma crise remota. Envolvimento do seio sagital superior, trombose das veias corticais e lesões hemorrágicas constituem fatores de risco para o desenvolvimento de crises agudas em doentes com TVC. Adicionalmente, a ocorrência de pelos menos uma crise na fase aguda e afasia como sintoma de apresentação constituem fatores de risco para crises remotas após uma TVC.

Background: Grip strength (GS) is associated to both multimorbidity and depression, however its possible moderating effect is unknown. This study aimed to investigate GS moderating effect on the association between multimorbidity and depression. Methods: Data from SHARE wave 8 was used. Participant were 41457 middle-aged and older adults (17954 men) from 18 European countries. A regression analysis was conducted for the moderating effect of sex- and age-specific GS quartiles (W) on the association between number of chronic diseases (X1) or multimorbidity (X2) and depression symptoms (Y). Results: More chronic diseases were associated with greater depressive symptomatology (men: B = 0.39, 95 % CI: 0.35, 0.42; women: B = 0.42, 95 % CI: 0.39, 0.45). On the other hand, being in a higher GS quartile was associated with fewer depression symptoms, and this association was stronger the higher the quartile was. Having a higher GS represented a decrease in depression symptoms associated with multimorbidity for men (quartile 1: B = 0.85, 95 % CI = 0.74, 0.95 vs. quartile 4: B = 0.49, 95 % CI = 0.38, 0.61) and women (quartile 1: B = 1.08, 95 %CI = 0.97, 1.19 vs. quartile 4: B = 0.59, 95 %CI: 0.47, 0.70). Conclusions: Strategies aiming to reduce the impact of multimorbidity on mental health should promote muscle-strengthening physical activity among middle-aged and older adults.

Crohn's disease is a chronic inflammatory disease of the gastrointestinal tract that might lead to progressive bowel damage and disability. The exact cause of Crohn's disease is unknown, but evidence points towards multifactorial events causing dysregulation of the innate immune system in genetically susceptible people. Commonly affecting the terminal ileum and proximal colon, Crohn's disease inflammation is often discontinuous and patchy, segmental, and transmural. Identification of characteristic findings on ileocolonoscopy and histology remains the diagnostic gold standard, but complete assessment involves laboratory abnormalities, including micronutrient deficiencies, cross-sectional imaging to identify transmural disease extent, severity and complications, and a psychosocial assessment. Treatment strategies for patients with Crohn's disease now go beyond achieving clinical remission to include deeper targets of endoscopic healing and consideration of adjunctive histological and transmural targets to alter disease progression potentially further. The use of early effective advanced therapies and development of therapies targeting alternative novel pathways with improved safety profiles have resulted in a new era of healing in Crohn's disease management. Future combination of advanced therapies with diet or other biological drugs and small molecules, together with improvements in tight control monitoring tools and predictive biomarkers might continue to improve outcomes for patients with Crohn's disease.

O gene CFTR (cystic transmenbrane conductance regulator) codifica um canal de cloreto e bicarbonato, presente na membrana apical de células epiteliais. A abundância e função desta glicoproteína é fisiologicamente determinante. Além de promover o equilíbrio iónico nas secreções epiteliais, é essencial para a eliminação de agentes patogénicos, proteção epitelial contra xenobióticos e produtos tóxicos libertados por agentes patogénicos, regulação do pH luminal e pela manutenção da hidratação da superfície epitelial. Deficiências na sua função, causadas por mutações no gene CFTR, estão na base do desenvolvimento da doença autossómica recessiva fibrose quística (CF). Contudo, o défice funcional de CFTR também pode ser adquirido num contexto genético selvagem, pela ação de fatores externos, como a exposição ao fumo do tabaco, álcool, metais pesados, hipoxia e acidose locais, toxinas bacterianas, stress oxidativo e inflamação capazes de comprometer a função ou abundância do canal na superfície celular e promover o desenvolvimento de doenças como a doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), asma, pancreatite aguda e a cólera. Esta glicoproteína é constituída por dois domínios transmembranares (TMD1 e TMD2), dois domínios citoplasmáticos de ligação a nucleótidos (NBD1 e NBD2) e um domínio regulatório central (domínio R). A sua atividade é regulada pela fosforilação do domínio R, que induz a ligação de ATP aos domínios NBD, promovendo a abertura do canal iónico. A síntese da proteína CFTR envolve a translocação da cadeia polipeptídica, proveniente do ribossoma, através da membrana do retículo endoplasmático (ER). Quando esta se encontra no lúmen do ER sofre uma N-glicosilação, que distingue a sua forma imatura com ~150 kDa, designada banda B, em ensaios de Western blot (WB). A CFTR segue o caminho da via secretora desde o ER até ao complexo de Golgi, onde é processada por várias glicosiltransferases (GTFs) de forma a atingir a sua forma madura, com 170-180 kDa, identificada como banda C. Ao atingir a forma madura é armazenada em vesiculas trans-Golgi que promovem a inserção do canal na membrana plasmática (PM). A deslocação destas vesiculas até à PM ocorre através das fibras do citoesqueleto de actina e é facilitada pela miosina Vb (Myo5b), que é recrutada pela GTPase, Rab11. Este transporte até à PM requer a ligação do domínio C-terminal da CFTR com o domínio PDZ da proteína adaptadora NHERF-1 formando um complexo. Quando este complexo é inserido na PM, a adaptadora NHERF-1 interage com a proteína de ancoragem ao citoesqueleto, ezrina, que permite a retenção da CFTR na superfície celular, impedindo a sua endocitose. A endocitose e consequente remoção da CFTR da PM é mediada pela proteína clatrina, e é desencadeada após dissociação do complexo CFTR/NHERF1/ezrina. Sabia-se que a sinalização a jusante da via de proteínas cinase mitogénicas (MAPK) estava envolvida no processo de internalização da CFTR, no entanto, os mecanismos regulatórios que promovem a remoção desta proteína da PM não estavam claros. Em estudos anteriores, o laboratório de acolhimento descreveu um mecanismo em que a quantidade e prevalência de CFTR na PM de células epiteliais brônquicas é regulada através da via de sinalização SYK/SHC-1. Este mecanismo é desencadeado pela fosforilação da CFTR, ancorada na PM, no resíduo de tirosina 512 (Y512), pela tirosina cinase citoplasmática SYK. A fosforilação da CFTR permite o recrutamento e ligação da proteína adaptadora citosólica SHC-1, através do domínio PTB desta última. A proteína SHC-1 possui também um domínio SH2 que a direciona a interagir com recetores fosforilados na PM. Ao interagir com os recetores na PM, a SHC-1 recruta outras proteínas adaptadoras citoplasmáticas, como proteínas da família GRB, e fatores de troca de nucleótidos de guanina (GEFs) da família SOS, por exemplo. Estes GEFs ativam GTPases da família RAS na PM que, por sua vez, ativam cascatas de sinalização, como a via MAPK. Assim, a proteína SHC-1 funciona como um ponto de ligação entre o sinal para a internalização, fornecido pela fosforilação da CFTR pela SYK, e a maquinaria a jusante da via MAPK que promove a remoção do canal da PM, via endocitose mediada pela clatrina. Recentemente, um grupo de investigação da Universidade de Davis (Califórnia, EUA), com o qual o laboratório de acolhimento tem uma colaboração, determinou que o fármaco idebenone (IDE), bem como alguns compostos seus derivados, conseguiam bloquear a interação da SHC-1 com o recetor da insulina (IR) em hepatócitos, interação esta também mediada pelo domínio PTB da SHC-1. Com base nestes dados, postulámos que talvez fosse possível utilizar estes compostos para interferir com a interação da SHC-1 (via domínio PTB) com a CFTR fosforilada pela SYK no resíduo Y512, impedindo assim a sua internalização em células epiteliais brônquicas. Nos estudos em hepatócitos, o tratamento com IDE inibia também a sinalização da via MAPK a jusante do IR, o que a verificar-se nas células epiteliais brônquicas poderia também contribuir para reduzir a internalização da CFTR fosforilada. No entanto, é sabido que esta via de sinalização desempenha um papel fundamental no processo de renovação celular necessário à manutenção da integridade e função do epitélio respiratório. Assim, quisemos também avaliar o grau de compromisso da viabilidade celular que o tratamento com estes fármacos acarretaria. Deste modo, o principal objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia dos inibidores recentemente desenvolvidos para a proteína adaptadora SHC-1 na modulação da prevalência de CFTR na PM. Além disso, procurámos compreender o impacto destes inibidores na via de sinalização das MAPK e na viabilidade das células epiteliais. A hipótese central deste estudo postula que os inibidores da SHC-1, nomeadamente o IDE e seus derivados, poderiam modular seletivamente a interação SHC-1/pY512- CFTR e consequentemente reduzir a internalização da CFTR na PM sem comprometer a viabilidade celular. Começámos por avaliar a capacidade dos inibidores, IDE e composto C#3, em elevar os níveis de CFTR na PM através da técnica de biotinilação, que permitiu a marcação seletiva da proteína CFTR presente na superfície celular com uma molécula de biotina após o tratamento com os inibidores, e posteriormente, a sua extração com streptavidin e análise através de WB. Os níveis de fosforilação da proteína ERK (p-ERK) também foram analisados por WB após tratamento com os inibidores, uma vez que são um indicador chave da ativação da via de sinalização MAPK. Seguidamente, realizámos ensaios de MTT para analisar a viabilidade celular nas três linhas celulares em estudo. Ao avaliar a presença de CFTR na membrana verificámos que nas três linhas celulares que utilizámos como modelos experimentais, CFBE-CFTR, 16HBE e Caco-2, nenhum dos inibidores, IDE e composto C#3, conseguiram bloquear de forma seletiva e significativa a internalização do canal. Este resultado sugere que o efeito do IDE pode ser somente específico para a interação entre a SHC-1 e o domínio NPEY fosforilado do IR, não afetando a interação da SHC-1 com outras proteínas fosforiladas, como a CFTR. Um outro resultado que apoia a especificidade dos inibidores para a interação SHC-1/IR e a incapacidade de modular a via de sinalização das MAPK, é a ausência de efeito significativo de ambos os inibidores nos níveis de p-ERK. A incapacidade de ambos os inibidores em modular eficazmente a via de sinalização das MAPK é ainda destacada pelo impacto reduzido na viabilidade das três linhas celulares em estudo, revelado pelo MTT. Notavelmente, o tratamento com IDE à concentração de 10 µM induziu uma redução significativa na viabilidade às 24 h especificamente nas células CFBE-CFTR, o que não foi replicado pelo composto C#3 em nenhuma concentração ou tempo. A comparação deste efeito com o do selumetinib e com os níveis de p-ERK1/2, sugere uma especificidade desta linha celular e da dose, possivelmente resultante do processo clonal de seleção, para o efeito do IDE. Além disso, nas células 16HBE, o composto C#3 pareceu aumentar ligeiramente os níveis de p-ERK nas concentrações mais baixas do fármaco. Esta observação está de acordo com a literatura, que sugere que as respostas ao tratamento com IDE e os seus derivados podem variar em diferentes contextos celulares. Em suma, o conjunto dos nossos resultados não apoiam a nossa hipótese inicial, levantando questões sobre a adequação do IDE e do composto C#3 como inibidores da SHC-1 fora do contexto da interação SHC-1/IR nos hepatócitos. Uma perspetiva futura seria desenvolver uma metodologia de triagem semelhante à utilizada por Tomilov et al. (2018), utilizando péptidos específicos para CFTR para revelar compostos capazes de interferir seletivamente com a interação SHC-1/pY512-CFTR, e consequentemente promover o aumento da prevalência do canal na PM. Esta abordagem permitiria ainda compreender os possíveis efeitos destes compostos no tratamento de doenças, em que tanto a função da CFTR como a via de sinalização MAPK estão desreguladas, e minimizá-los, permitindo o desenvolvimento de terapias mais específicas e eficazes.

The Daily Egg Production Method (DEPM) is one of the sources about the information on the abundance of the horse mackerel (Trachurus trachurus) of the southern stock, (ICES area 9a: Cape TrafalgarCape Finisterra). These campaigns are carried out triennially and are used to estimate the spawning biomass of horse mackerel. To obtain the spawning stock estimate, the DEPM surveys are directed to the egg abundance and spawning area definition for daily egg production determination and at adult sampling for daily fecundity calculation. Ichthyoplankton samples, fishing hauls, and environmental data are obtained over the entire spawning region. In this project the focus is the ichthyoplankton sampling design, and three analyses were made in order to evaluate the spatial sampling design currently used by IPMA (Portuguese Institute for the Sea and Atmosphere) for inference on the abundance of horse mackerel eggs. First a set of simulations of the spawning area was made to “sample” with different sampling designs and estimate the spawning area. Then, an evaluation of the daily egg production estimate was conducted with the re-sampling of a reference campaign to different sample sizes. Lastly, a reference campaign was used as a base for “sampling” with different sampling designs, to estimate both the spawning area and the daily egg production. The results of this project don’t point to one ideal sampling design, but rather look at how the estimates behave when more or less stations are sampled at sea as the result of the application of different sampling designs. The results based on the simulation of possible realities showed to be useful for the analysis of the spawning area estimate, but not as much for the analysis of the daily egg production estimate. This is possible because to evaluate the adequacy of the procedures used to estimate production would require to simulate the highly complex reality behind egg production. Estimating the daily egg production is challenging because egg data are zero-inflated and over-dispersed. As a result, the evaluation of the 15 sampling designs simulated don’t show plausible results. It seems that it is best to use designs that sample more stations, and that the distance between stations showed to be more important then the distance between transects. Differences in the accuracy of each sampling design considered proved to be mainly influenced by the number of stations sampled and by the number of empty stations to consider for the estimation of the parameters.

Na Alemanha, as Pensões de Empresas são um dos três pilares que fundamentam as fontes de rendimento de reforma. As Pensões de Empresa, geralmente designadas de planos de pensões prometem, aos participantes dos planos, benefícios em caso de reforma por velhice, reforma antecipada, reforma por invalidez ou pensão em caso de sobrevivência. O tema em estudo foca-se nos planos de pensões enquanto planos de benefício definido, onde um montante de benefício é previamente definido por uma fórmula, sendo necessária a realização de avaliações atuariais periódicas de modo a calcular o valor das responsabilidades das empresas para com os participantes do plano. No contexto de estágio realizado na Mercer, surge o presente trabalho, tendo como principais objetivos: (i) a recolha de um referencial teórico de apoio para as avaliações atuariais de planos de benefício definido; (ii) a aplicação dos conceitos teóricos a um caso real, no contexto alemão. Para isso foi disponibilizado pela Mercer uma base de dados real e software específico para tratamento de dados e cálculos das responsabilidades, cujos procedimentos metodológicos seguidos foram semelhantes aos aplicados internamente. As responsabilidades da avaliação atuarial em estudo foram calculadas para fins do código fiscal alemão (TAX), para efeitos comerciais e locais de acordo com as normas contabilísticas alemãs (TRADE) e para fins de relatórios internacionais (IFRS), tendo cada uma destas finalidades os seus pressupostos atuariais. Como metodologia foram utilizados dois métodos atuariais: o método Entry Age e o método Projected Unit Credit. Obtidos os resultados do caso prático foram ainda realizadas algumas análises de sensibilidade que permitiram constatar o enorme impacto que os fatores económicos e demográficos têm sobre os resultados das responsabilidades dos planos de pensões. Em suma, este trabalho deve ser encarado como o projeto resultante da atividade profissional desenvolvida em contexto e ambiente empresarial.

A significant number of debilitating human diseases are associated with the deposition of protein aggregates. These include Alzheimer’s disease, Huntington’s disease and Parkinson’s disease, among others. Under pathological conditions, proteins or peptides that are abnormally soluble undergo aggregation and generate stable insoluble fibers that accumulate in a variety of organs. Oculopharyngeal Muscular Dystrophy (OPMD; OMIM 164300) is a dominant late-onset disease, characterized by progressive ptosis, dysphagia and proximal limb weakness. The OPMD mutation consists of short expansions of a (GCN)10 repeat coding for a polyalanine tract at the N-terminus of the polly(A)-binding protein nuclear 1 (PABPN1) (Brais et al., 1998). This results in an alanine-expanded form of PABPN1, which aggregates and forms dense, insoluble intranuclear inclusion bodies in skeletal muscle of OPMD patients. PABPN1 is ubiquitously expressed and is involved in poly(A) tail synthesis and poly(A) tail length control (Kuhn and Wahle, 2004). The molecular mechanisms leading from PABPN1 mutation to OPMD phenotype and the role of aggregate formation in the progression of the disease are poorly understood. In the present study we proposed to contribute to the understanding of OPMD pathophysiology. Our first goal was to elucidate the mechanisms involved in the formation of OPMD nuclear inclusions. We developed a cellular model of PABPN1 aggregation based on the exogenous over-expression of different protein variants in both HeLa and myogenic C2 cells. We were able to show that normal PABPN1 is inherently aggregation-prone when overexpressed. The formation of insoluble aggregates was observed upon expression of PABPN1 variants containing either a polyalanine expansion or a complete deletion of the polyalanine tract, indicating that the OPMD-causing mutation is not essential for the formation of inclusions. Conversely, PABPN1 variants containing deletions or point mutations in any of the domains involved in PABPN1 function in polyadenylation fail to form aggregates, strongly suggesting that the in vivo aggregation of PABN1 is tightly coupled to its function in polyadenylation. We monitored the dynamics of PABPN1 interactions within the inclusions by photobleaching analysis and observed that both normal and alanine-expanded PABPN1 molecules are not irreversibly sequestered into aggregates, they are in constant Exchange between the inclusions and the nucleoplasm. Taken together, these observations raise serious questions concerning OPMD models based on the over-expression of PABPN1 and argue against a pathological role of the aggregates by the irreversible trapping of other nuclear components. Our next goal was to identify mechanisms of cellular dysfunction underlying OPMD. We developed a cellular model of the disease based on the stable expression of normal (10 alanines) and mutant (17 alanines) PABN1 in myogenic C2 cells. Gene expression profiling of our cellular model identified Evi3 as a consistently up-regulated gene in muscle cells expressing mutant PABPN1. The human homolog to mouse Evi3, ZNF521, encodes a transcription factor which is known to interact with Smad proteins and to participate in BMPdependent transcriptional activation (Bond et al., 2004). We tested the BMP-dependent transcription of a reporter gene in our cellular model of OPMD. Whereas cell lines expressing normal PABPN1 displayed strong transcriptional activation in response to BMP, cell lines expressing mutant PABPN1 failed to activate transcription of this BMP-responsive element. The differential expression of the human homolog to Evi3 was validated in primary muscle cell lines derived from OPMD patients. Analysis of ZNF521 mRNA levels in OPMD and control sternocleidomastoideus muscle corroborated the up-regulation observed in the celular model. In contrast, we observed a down-regulation of ZNF521 mRNA in cricopharyngeus muscle from OPMD patients when compared to control. This controversial result may reflect the specificity of the cricopharyngeal muscle, which renders it more susceptible to OPMD dysfunction. Morphological mitochondrial abnormalities in OPMD muscle biopsies were reported several times (Julien et al., 1974; Pauzner et al., 1991; Pratt and Meyers, 1986; Wonget al., 1996) but tended to be considered as a non-specific secondary phenomenon of the disease. We proposed to address the role of mitochondrial dysfunction in OPMD through the evaluation of mitochondrial alterations in muscle biopsies from patients and in the celular model of the disease. We found that muscle biopsies from OPMD patients display na increased number of cytochrome c oxidase (COX)-negative fibers when compared to similarly aged controls. In addition, analysis of our cellular model revealed that cell lines. expressing mutant PABPN1 produce higher protein levels of the 39 kDa subunit from the.mitochondrial respiratory chain complex I. Although requiring further investigation, these.results are indicative of a role for mitochondrial dysfunction in the progression of OPMD. In summary, our work produced important information concerning the role of PABPN1 aggregates in OPMD. In addition, we identified altered BMP-dependent transcription as a candidate mechanism for OPMD pathology. Finally, we provided evidence that mitochondrial alterations may contribute to the disease phenotype. Hopefully, the further investigation of these lines of work will prove valuable to the full understanding of OPMD pathophysiology.

Holistic processing of words has been previously observed. When readers have to decide whether the target part of a study and test words are the same, their performance is affected by the irrelevant part. The goal of the present study was to provide an empirical test of the idea that holistic word processing is involved in expert reading (fast and parallel letter reading pattern) by exploring the perceptual expertise limits of the neuronal systems dedicated to reading. We presented adult readers with words in the composite paradigm that were degraded by word rotation (22.5º and 67.5º). Rotations were applied clockwise or counterclockwise. A word rotation of 22.5º is below the threshold of the perceptual expertise of the Visual Word Form (VWF) System, while a rotation of 67.5º is above the threshold of the perceptual expertise of the VWF system. The word composite effect was found only for a degree of rotation within the field of expertise of the ventral visual system, thus within the limits for fast, parallelletter reading. We thus showed that word holistic processing occurs within the functional, fast, and parallel reading route.

O presente relatório baseia-se no estágio curricular realizado na IndieLisboa – Associação Cultural, na área da Tradução Audiovisual (TAV), nomeadamente a tradução para a legendagem. Esta experiência foi realizada como parte integrante do Mestrado em Tradução da Faculdade de Letras da Universidade de Lisboa (FLUL). O relatório tem como objetivo realizar uma exposição sobre as abordagens e temáticas associadas à tradução, enfocando-se no meio audiovisual e nas estratégias de tradução comumente empregadas no contexto da legendagem. No primeiro ponto, será realizada uma descrição do estágio curricular, bem como das tarefas realizadas ao longo do mesmo e os recursos utilizados. No segundo ponto, seguir-se-á a apresentação e definição dos conceitos de tradução num enquadramento teórico. É neste enquadramento que se abordarão as estratégias que foram relevantes para o trabalho prático realizado. Com base nestes conceitos e estratégias, o terceiro ponto pretende realizar uma análise ilustrativa de casos práticos que surgiram ao longo da duração do estágio curricular. O seu objetivo será refletir sobre as estratégias de tradução empregadas e sobre as dificuldades que podem surgir durante a prática de legendagem, mediante as necessidades de tradução. A análise realizada ao longo deste relatório prende-se com questões de natureza lexical e sintática, considerando ainda aspetos teóricos sobre a TAV.

As células T Reguladoras (Tregs) são uma subpopulação de células T caracterizada pela expressão do recetor de alta afinidade para a IL-2 (CD25) e do fator de transcrição FOXP3. Estas células desempenham um papel essencial no sistema imunitário humano, uma vez que possuem a função de suprimir e controlar respostas imunitárias. A sua ação impede o desenvolvimento de respostas imunes exageradas e por isso permite a manutenção da tolerância a auto-antigénios, prevenindo o desenvolvimento de doenças autoimunes. Como todas as células T, o desenvolvimento das Tregs ocorre no timo e envolve diversos subtipos celulares, incluindo fibroblastos, macrófagos e células apresentadoras de antigénio. Apesar de todos estes tipos celulares desempenharem um papel importante no desenvolvimento dos timócitos (nome atribuído a células T em desenvolvimento), incluindo a produção de citocinas que permitem a diferenciação e migração das células em desenvolvimento para regiões específicas do timo e a apresentação de ligandos em processos de seleção, há evidências que interações entre os próprios timócitos em desenvolvimento são também relevantes durante este processo. O paradigma prevalente no que toca ao desenvolvimento das Treg envolve sinalização de intensidade intermédia via o recetor das células T (TCR). Esta sinalização resulta no desenvolvimento de precursores Treg que expressam CD25 (CD25+ TregP). Estes precursores vão então começar a expressar FOXP3 após estimulação via as citocinas IL-2 e IL-15, culminando no desenvolvimento de Tregs maduras (CD25+ FOXP3+). Recentemente, estudos em ratinho descreveram a existência de um segundo tipo de precursores Treg, caracterizados pela expressão de FOXP3, mas ausência de CD25 (FOXP3lo TregP), e a sua existência em humanos foi também sugerida. Cada um destes precursores contribui de maneira única para o repertório TCR de Tregs maduras. No geral, a existência de vias alternativas de desenvolvimento de Tregs e a importância da qualidade e intensidade de sinalização (quer seja via citocinas ou TCR) é indicativo de diferentes vias de modulação no processo de geração de Tregs. CD1a é uma glicoproteína que atua como molécula não-clássica de apresentação de antigénios, uma vez que apresenta antigénios lipídicos em vez dos clássicos péptidos ao TCR. Este sistema tem a particularidade de não existir no modelo de ratinho pelo que o seu estudo diretamente em humanos é essencial. Os TCRs que reconhecem CD1a também têm a particularidade de poderem interagir com o CD1a em si, em vez do antigénio que este apresenta. Este sistema apresenta assim autorreatividade intrínseca e é negativamente regulado por inibidores endógenos que são preferencialmente capturados pelo CD1a. Por esta razão, a natureza do lípido a ser apresentado por esta glicoproteína é extremamente relevante para o seu papel na modulação da sinalização via TCR. A observação de um aumento na frequência de Tregs e células CD1a-reativas após exposição ao veneno de abelha, que é maioritariamente composto por uma enzima capaz de modular o ambiente lipídico das células, sugere um possível papel para o CD1a durante o desenvolvimento das Tregs em humanos. Além do mais, o CD1a é altamente expresso em timócitos mas na periferia (fora do timo) encontra-se presente em células apresentadoras em determinados tecidos, nomeadamente na pele. Assim sendo, esta molécula tem sido extensivamente estudada relativamente ao seu papel na pele humana, contudo a sua função no timo permanece desconhecida. Para além disso, o timo é também caracterizado pelo processo de involução tímica. Este processo ocorre com o avançar da idade e é acompanhado pela substituição do tecido tímico funcional por gordura. Tendo tudo isto em consideração, este projeto teve como primeiro objetivo produzir uma caracterização detalhada da expressão de CD1a durante os principais estádios de desenvolvimento das células T, incluindo a revelação de timócitos que interagem com CD1a. Ao mesmo tempo, esta caracterização foi feita com timos de diferentes classes etárias pediátricas, investigando tendências nas populações de precursores Treg tímicas. Finalmente, aprofundámos o nosso conhecimento relativamente ao papel de CD1a durante o desenvolvimento das Tregs através da realização de experiências de cultura envolvendo modulação de CD1a na presença de estimulação via citocinas ou TCR. A nossa análise detalhada da expressão de CD1a durante o desenvolvimento das células T confirmou o que já tinha sido descrito: CD1a começa a ser expresso em estádios precoces do desenvolvimento e a sua expressão é mínima nos estádios mais maduros. Contudo, esta análise mais detalhada revelou que a expressão desta molécula é máxima especificamente no estádio de desenvolvimento onde a expressão de CD3 é intermédia. A utilização de tetrâmeros da molécula CD1a permitiu também confirmar a deteção de números muito reduzidos de células que interagem com esta glicoproteína, onde algumas não expressam CD3, sugerindo a existência de um outro ligando, que não o TCR, para o CD1a. A nossa caracterização detalhada também sugere que o CD1a poderá ter um papel diferente entre células CD4+ e CD8+ , mais especificamente entre Tregs e células T convencionais (Tconvs), uma vez que a nossa análise revelou que as células CD4+ Tconv exprimem mais CD1a que CD4+ Tregs, enquanto o oposto é observado em células T CD8+ . No entanto, esta diferença na expressão de CD1a entre Tconvs e Tregs poderá também refletir apenas diferentes cinéticas de desenvolvimento. No que toca à expressão de CD1a nas Tregs, demonstrámos que nos estádios maduros de desenvolvimento, as células que apenas exprimem CD25 (supostas CD25+ TregP) mantêm a expressão de CD1a enquanto os supostos progenitores que só expressam FOXP3 (FOXP3lo TregP) a perderam. Estas observações sugerem que o CD1a poderá ter diferentes papéis nos diferentes progenitores, ou que na realidade as células FOXP3+ não são progenitores. De facto, outros resultados obtidos também apontam para a necessidade de mais estudos com o objetivo de esclarecer a natureza destes potenciais progenitores. A nossa análise de amostras tímicas de crianças de idades mais novas e mais velhas revelou que timos de dadores mais velhos estão enriquecidos numa subpopulação de células CD4+ CD8+ altamente proliferativas que exprime CD1a, apontando assim para o eventual favorecimento de uma via de desenvolvimento Treg específica com o avançar da idade, mais especificamente células CD8 que só expressam FOXP3. Procurámos também investigar o impacto da modulação de CD1a na presença de diferentes tipos de estimulação. Para isso, timócitos foram cultivados durante um curto período (72 horas) na presença de IL-2, IL-4, IL-7 e IL-15 em presença ou ausência de um anticorpo bloqueador de CD1a. Os resultados revelaram impactos modestos, mas derivados deste bloqueio. Mais especificamente, o bloqueio de CD1a na presença de IL-2 resultou numa menor percentagem de Tregs CD4+ maduras (CD25+ FOXP3+) e isto foi acompanhado de diminuição na intensidade de CD25. Por isso, CD1a poderá estar envolvido na capacidade das Tregs responderem a sinalização via IL-2. Uma segunda experiência de cultura foi realizada, com o objetivo de revelar um potencial papel do CD1a na presença de sinalização TCR e a capacidade de sinalização intracelular via desta glicoproteína. Os resultados sugerem que o CD1a poderá de facto sinalizar na célula que o expressa e esse sinal estar envolvido na sobrevivência dos timócitos. No geral, este projeto consistiu num estudo preliminar sobre o papel do CD1a durante o desenvolvimento de Tregs. Apesar de as experiências de modulação apenas terem revelado pequenos efeitos desta molécula, deixam ainda em aberto a possibilidade de intervenção do CD1a no desenvolvimento tímico de Tregs e uma eventual utilização deste conhecimento na manutenção ou expansão ex-vivo de populações Treg especificas, potencialmente relevante para o desenvolvimento de terapias tendo com alvo células Treg em autoimunidade ou transplantação.

Holistic processing has been regarded as a hallmark of face perception, indicating the automatic and obligatory tendency of the visual system to process all face parts as a perceptual unit rather than in isolation. Studies involving lateralized stimulus presentation suggest that the right hemisphere dominates holistic face processing. Holistic processing can also be shown with other categories such as words and thus it is not specific to faces or face-like expertize. Here, we used divided visual field presentation to investigate the possibly different contributions of the two hemispheres for holistic word processing. Observers performed same/different judgment on the cued parts of two sequentially presented words in the complete composite paradigm. Our data indicate a right hemisphere specialization for holistic word processing. Thus, these markers of expert object recognition are domain general.

A estatística espacial é uma área da estatística que se dedica ao estudo e análise de dados que possuem uma componente espacial, isto é, estão geograficamente localizadas. De entre os tipos de dados espaciais existentes, os padrões pontuais espaciais ocupam um lugar de destaque. A capacidade de identificar padrões espaciais, prever eventos futuros e aplicar esse conhecimento em situações do mundo real torna a estatística espacial e, em especial, os processos pontuais espaciais, uma ferramenta essencial quando se pretende estudar a distribuição de algumas espécies, como por exemplo os tubarões de profundidade, Etmopterus spinax e Etmopterus pusillus. Estas espécies enfrentam desafios na conservação das suas populações devido à sua captura acidental pela pesca comercial. O Instituto Português do Mar e da Atmosfera (IPMA) realiza campanhas de investigação anuais de arrasto de fundo desenhadas para monitorizar algumas espécies de interesse comercial, em que estas espécies de tubarão de profundidade são capturadas acessoriamente. O principal objetivo deste trabalho é identificar as zonas nas quais as duas espécies ocorrem e quais os fatores que levam a essa distribuição espacial. Os dados disponíveis compreendem uma série temporal de 1997 a 2018, que permitiu modelar a intensidade da distribuição espacial. Para tal, utilizámos ferramentas de análise espacial de processos pontuais de Poisson, incluindo processos pontuais marcados, com recurso ao pacote spatstat do R. Os resultados sugerem a existência de regiões onde há uma concentração significativamente maior de tubarões destas duas espécies. Para além disso, os modelos construídos permitem identificar zonas de concentração de tubarões juvenis. As conclusões deste estudo irão contribuir para possíveis medidas de proteção e preservação das populações de ambas as espécies.

This master’s project involved designing and implementing the FlexIoTPlatform, an IoT platform independent of domain to support application services. This type of platform is essential because it allows for a multi-domain oriented solution, in contrast to current IoT solutions that are single-domain oriented. The main objective of this project was to design and implement a solution that was as domain-independent as possible, and that could be extended in the future. To achieve this objective, designing and implementing an architecture and a data model that fits the problem was necessary. The FlexIoTReport platform can be adapted to different domains due to the architecture and data model chosen for the designed solution. The architecture is microservices-based, allowing new microservices to be added to perform new tasks and allowing services to be removed. However, the data model has a critical role because it is through the combination of relational and non-relational databases that more flexibility can be provided to the system, obtaining the benefits of both data models. The non-relational model has an important role because it allows storing data without a rigid structure, thus allowing the platform to adapt to different domains. In this work, a prototype of the platform was implemented and tested. Accessibility tests, performance tests and evaluation of defined requirements were carried out. After these tests, it was concluded that the platform could fulfil the requirements. In terms of accessibility, it also obtained entirely satisfactory results. In terms of performance, the results presented are not the best, but these results come from the lack of computational resources where the prototype was evaluated.

Uma questão central em neurociência comportamental é como é que o sistema nervoso central produz uma sequência de ações motoras para induzir comportamento, após a decisão para a sua execução ter sido sinalizada pelo cérebro. Para responder a esta pergunta, o organismo modelo Drosophila melanogaster tem sido amplamente utilizado, não só pela facilidade de ser mantido em laboratório e ferramentas genéticas disponíveis, mas também porque tem um sistema nervoso relativamente simples que é capaz de executar comportamentos complexos. Um desses comportamentos é o comportamento de oviposição, que oferece uma excelente oportunidade de explorar a arquitetura do controlo motor, pois é um comportamento inato, coordenado no tempo, sincronizado com o estado interior do animal e flexível para o animal ser capaz de superar mudanças inesperadas no ambiente. Assim, o comportamento de oviposição tem um impacto profundo na sobrevivência e fitness das espécies ovíparas. Em Drosophila, este comportamento é composto por um ciclo de fases que incluem deposição do ovo (egg deposition), contorções abdominais (abdominal contortions) e exploração (exploration), subdividido em sete comportamentos específicos. Estes sete comportamentos incluem: o contacto do ovipositor, uma estrutura em forma de tubo temporariamente expelida, com o substrato (ovipositor contact), enterrar o ovipositor (burrowing), fazer força para a expulsão do ovo (egg pushing), curvar o abdómen para cortar a ligação com o ovo posto (abdomen curling) e a limpeza do abdómen (grooming terminalia), durante a fase de deposição do ovo; alongamento (abdominal elongation) seguido de encurtamento (abdominal scrunch) do abdómen com ondulações e expulsão do ovipositor, durante a fase das contorções abdominais; extensão da probóscide (proboscis extension), contacto e enterrar o ovipositor no substrato, durante a fase de exploração. Todos estes elementos comportamentais são executados para promover a deposição do ovo, a ovulação e a degustação do substrato, respetivamente. É através do sistema nervoso central que a mosca consegue executar os comportamentos motores. Este é constituído pelo cérebro e pelo cordão nervoso ventral, uma estrutura análoga à medula espinal dos vertebrados. A informação sensorial do ambiente é recolhida e transmitida ao cérebro, onde a decisão para a execução do comportamento é tomada. A decisão é depois transmitida ao cordão nervoso ventral, que é constituído por unidades torácicas que controlam os movimentos das asas e patas e, na ponta, o gânglio abdominal, o qual induz à execução coordenada dos comportamentos reprodutivos. Apesar dos esforços, continua por se determinar como os neurónios do gânglio abdominal induzem os circuitos motores que controlam os comportamentos específicos de oviposição. A atividade de neurónios onde o fragmento H3 de um promotor de doublesex induz expressão – neurónios H3 – mostrou comportamentos de oviposição e o seu padrão de expressão mostrou corpos celulares no gânglio abdominal. Assim sendo, o presente estudo teve como objetivo determinar o papel dos neurónios H3 na oviposição (Objetivo 1) com o intuito de encontrar uma associação mais profunda entre o gânglio abdominal e os vários comportamentos de oviposição. Assim, testámos o efeito da ativação dos neurónios H3 através da expressão neuronal de canais sensíveis à luz vermelha CsChrimson, usando o sistema binário de expressão lexA-lexAop e enquanto gravámos os comportamentos em vídeo (Objetivo 1.1); usámos novamente o sistema lexA-lexAop para testar a contribuição dos neurónios H3 para a oviposição, através da expressão neuronal de canais potássio Kir2.1 que efetuam silenciamento, enquanto analisámos o comportamento e contámos o número de ovos postos (Objetivo 1.2). Para ambas as experiências usámos moscas sem promotor e com o sistema lexA-lexAop completo como controlo. No fim, caracterizámos o perfil de neurotransmissores dos neurónios H3 (Objetivo 2). Para isso usámos a técnica de co-localização, em que o sistema lexAlexAop foi usado para expressar uma proteína de fluorescência vermelha nos neurónios H3 e, ao mesmo tempo, o sistema de expressão GAL4-UAS foi usado para expressar a proteína de fluorescência verde nos neurónios que expressam transportador de glutamato vesicular, acetiltransferase de colina ou descarboxilase 1 de ácido glutâmico, que indicaram se os neurónios eram glutamatérgicos, colinérgicos ou GABAérgicos, respetivamente. Assim, os neurónios H3 que expressam cada um dos neurotransmissores, foram identificados através da sobreposição das cores escolhidas. O padrão de expressão dos neurónios H3 mostrou 13 corpos celulares no gânglio abdominal, que acreditamos estarem relacionados com comportamentos de oviposição e marcação dispersa no cérebro e restante cordão nervoso ventral, que duvidamos estarem relacionados com a execução dos comportamentos de oviposição. A ativação dos neurónios H3 levou à execução de comportamentos que anotámos como Abdominal Bending – curvatura no abdómen, em que a ponta final fica virada para o substrato; Abdominal Hook – o abdómen está direito na sua parte mais anterior e depois curva na ponta posterior em direção ao substrato; Ovipositor Extrusion – extrusão do ovipositor; Long Abdomen – aumento visível do comprimento do abdómen; e Round Abdomen – encurtamento do abdómen formando uma bola. Vimos que estes comportamentos eram incompletos, sendo parecidos com o início de comportamentos de oviposição apresentados por fêmeas grávidas, nomeadamente os comportamentos pertencentes à fase das contorções abdominais (Abdominal Hook, Ovipositor Extrusion e Round Abdomen). Descobrimos que a execução dos comportamentos de ativação podem ter a contribuição do cérebro ao analisarmos fêmeas após a remoção da cabeça. A análise do padrão de expressão e atividade dos neurónios H3 nos machos levaram à conclusão de que estes neurónios são sexualmente dimórficos, com dois dos comportamentos de ativação a serem específicos da fêmea (Ovipositor Extrusion e Round Abdomen). O silenciamento dos neurónios H3 levou a uma abolição de deposição de ovos em 78% das moscas, com disrupção dos elementos motores associados aos comportamentos de oviposição das três fases. As restantes moscas que puseram ovos foram capazes de realizar os comportamentos de oviposição. A redução drástica na oviposição não estava relacionada com problemas de acasalamento nem de oogénese. Ao analisarmos como a oviposição das moscas H3 silenciadas evoluía ao longo do tempo, descobrimos que todas as moscas eram capazes de pôr ovos, no entanto com um atraso, o que nos levou a questionar a influência do protocolo de privação de oviposição que executamos antes das experiências para induzir a deposição dos ovos. Assim, testámos se as moscas teriam um problema a reiniciar a oviposição depois de esta ter sido suspensa ou se teriam um problema em reter os ovos durante a privação. A partir deste ponto, em todas as experiências observámos que as moscas H3 silenciadas colocaram igual (1 hora) e superior (de 6 a 24 horas) quantidade de ovos, comparadas com o controlo. Assim, observámos que os resultados de menor frequência de oviposição das moscas H3 silenciadas são pouco robustos, o que nos mostrou um possível novo papel dos neurónios H3. Assim, o silenciamento dos neurónios H3 revelou que estes não são necessários para a execução dos comportamentos de oviposição, pois a inibição da atividade neuronal levou ao aumento dos eventos de deposição do ovo ao longo do tempo, comparativamente com o controlo. Este resultado indica que os neurónios H3 podem estar envolvidos num mecanismo de supressão de oviposição. Como as moscas controlo têm uma redução mais acentuada, ao longo do tempo, de oviposição do que as silenciadas, levou-nos a especular que os neurónios H3 podem estar envolvidos num mecanismo de controlo da densidade de ovos no ambiente. Em adição, ao juntarmos os resultados das experiências de ativação e silenciamento, acreditamos que os neurónios H3 podem estar a suprimir a expulsão do ovo no fim das contorções abdominais, até o local ideal para a descendência ser encontrado. Durante a experiência de silenciamento obtivemos informações importantes com interesse para futuras experiências com foco em oviposição. Observámos que para experiências de curta duração (ex. com captura de vídeo), usar o protocolo de privação de oviposição é vantajoso por incitar as fêmeas a depositarem mais ovos no novo ambiente. No entanto, para experiências mais longas (ex. contagem de ovos após 24 horas), o protocolo de privação não é necessário, permitindo poupar tempo e material utilizados para esse fim. Esta experiência também nos mostrou que usar comida em experiências que não seja necessário ver através do substrato, aumenta a frequência de oviposição, comparando com substrato de agarose (1%). Por fim, ao analisarmos o perfil de neurotransmissores dos neurónios H3, vimos que estes serão certamente colinérgicos. Este trabalho cria a oportunidade para melhor entender a comunicação ascendente e descendente com o cérebro e aumenta o conhecimento sobre a extensão neuronal e conetividade entre populações de neurónios subjacentes ao comportamento de oviposição, servindo de base para a descoberta de como diferentes circuitos estão conectados para coordenar comportamento e contribuindo para elucidar como as ações motoras estão codificadas no sistema nervoso central.

Holistic processing (HP) of faces is usually measured by the composite effect. While Weston and Perfect [2005. Effects of processing bias on the recognition of composite face halves. Psychonomic Bulletin & Review, 12, 1038–1042. doi:10.3758/BF03206440] found that priming at the local level speeded recognition of components of faces, Gao et al. [2011. Priming global and local processing of composite faces: Revisiting the processing-bias effect on face perception. Attention Perception & Psychophysics, 73, 1477–1486. doi:10.3758/s13414-011-0109-7] found that only global priming had an effect on HP of faces. The two studies used different versions of the composite task (the partial design, which is considered to be prone on bias, and the complete design). However, the two studies also differed in other respects and it is difficult to know to what extent issues with the partial design contributed to the differing conclusions. In the present study, the HP indexed by the complete design measure was augmented by global priming. In contrast, no effect was observed in the partial design index. We claim that the partial design index reflects other factors besides HP, including response bias, and conclude that HP can be understood within the context of domain-general attentional processes.