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The article analyses Silvino Santos’s Filmogramas, a collection of hitherto neglected domestic films the Portuguese-Brazilian filmmaker (1886-1970) made in the late 1920s while accompanying his employer’s family, the Araújos, in Portugal. Combining archival research, interviews, and film analysis, I reconnect the Amazonian and European experiences of (colonial) conquest and domesticity that Santos’s life trajectory and film production depict and embody. The aim is to move beyond regional and hagiographic historiographies and build a more critical and anthropologically informed entangled history of a figure and an epochal milieu that continue to permeate and shape contemporary understandings of the past.

In the present article, we investigate how a person’s power affects the way we infer traits from their behavior. In Experiment 1, our results suggest that, when faced with behavioral descriptions about others, participants infer both positive and negative traits about powerless actors, whereas for powerful and control (power irrelevant) actors, only positive but no negative traits are inferred, an effect we call the benevolence bias. In the second experiment, (a) we replicate this effect, (b) we show that it does not depend on the specific traits used in Experiment 1, and (c) we show that it is also detected when an implicit measure of inferences is used. Experiment 3 further shows that this effect generalizes to a more generic power manipulation. Theoretical explanations for these findings are discussed.

The purpose of the present work was to measure the stereotypic content of several professional groups, by determining the culturally shared stereotypic attributes, their accessibility and typicality. Study 1 used a spontaneous attribute-generation-task to collect the stereotypic content of 28 professional groups in a Portuguese samples. The frequency of generation was used to measure consensus on the attributes generated. The order of generated attributes was used to determine their accessibility. To further explore the link between attributes and the professional group, a new sample (Study 2) rated how typical each attribute was of the professional group. We map out the usefulness of studying professional stereotype's content.

Introdução: A Arterite de Células Gigantes (GCA) é uma vasculite que se pode apresentar numa grande variedade de sintomas e sinais. De forma a compreender como reconhecer e tratar rapidamente esta doença, que pode levar a complicações, apresentamos três casos com sintomas incomuns. Casos: O primeiro caso trata-se de um homem de 81 anos com curta cefaleia noturna diária que o acordava entre as 3 e 5 da manhã, sem sintomas autonómicos. Um estudo doppler e uma biópsia da artéria temporal foi compatível com Arterite de Células Gigantes. Este aparenta ser primeiro caso reportado de Arterite de Células Gigantes manifestando-se como cefaleia hípnica. O segundo caso é de uma mulher de 63 anos que se apresenta com ptose direita e diplopia após o início de uma cefaleia intensa. Embora a cefaleia tenha desaparecido com o início de corticoterapia, a parésia incompleta do terceiro par craniano tornou-se permanente. Este caso ilustra a importância de se investigar a possibilidade de Arterite de Células Gigantes em sintomas oftálmicos, mesmo quando não se trata de diminuição da acuidade visual. O terceiro caso relata a apresentação de um homem de 77 anos com sintomas consistentes com Acidente Vascular Cerebral, tais como hemiparesia esquerda, confusão e assimetria facial. A investigação etiológica mostrou oclusão da artéria vertebral devido a Arterite de Células Gigantes. Tal caso deve servir como aviso para não descartar Arterite de Células Gigantes como potencial causa de Acidente Vascular Cerebral. Conclusão: Os casos supracitados devem ser tidos em conta por qualquer clínico que exerça num contexto de cuidados primários ou emergência. O reconhecimento rápido e correto de possíveis apresentações de Arterite de Células Gigantes permitirá a iniciação rápida de terapia e evitará as suas complicações, sejam elas de morbilidade ou mortalidade.

Na sequência dos novos modelos formativos, mais precisamente os cursos de Educação e Formação de Adultos, houve uma abertura das escolas a estas novas ofertas formativas, o que fez com que um novo público começasse a chegar em massa à escola, adultos de etnia cigana, que iniciam a sua escolaridade ou dão continuidade à mesma, em função da certificação obtida anteriormente. O objectivo geral deste projecto consiste em perceber de que forma cultura e educação se encontram associadas na etnia cigana e qual a obrigatoriedade deste povo em participar neste espaço formativo, bem como as razões que os levam ao abandono e quais as expectativas daqueles que decidem permanecer. Na sequência da análise interpretativa, resultante das entrevistas feitas aos entrevistados de etnia cigana, foi manifestada, de um modo particular, a consciencialização da necessidade de mudança, nas questões de educação, de forma a que ambos os sexos, homens e mulheres, possam ir à escola, fazendo com que a analfabetização e abaixa escolarização deixem de existir, e que este espaço formativo passe a ser encarado como um local, não só de aquisição e partilha de saberes, mas também de convívio, onde novas dinâmicas serão postas em prática, passando a educação a ser vista numa perspectiva formal e não formal, onde os conhecimentos já adquiridos e valorizados no seu grupo de pertença, passem a ter significado na escola, havendo assim uma interligação entre cultura e educação, nestes cidadãos, não minimizando a sua auto-estima ou marginalizando-os.

The authors comment on cognitive malleability and the wisdom of independent aggregation of choices, judgment, or responses on implicit tests of stereotyping and prejudice. They discuss the malleability of social stereotypes and other social knowledge structures and the similarities and differences between the bias of crowds model and explicit indices of stereotyping. They raise questions about intraindividual malleability and interindividual stability and nature of human cognition.

Após interagirem com linfócitos T foliculares helper (TFH), os linfócitos B do centro germinal (CG) produzem anticorpos de alta afinidade. A reação CG é regulada por linfócitos TFR. O estudo dos linfócitos TFR humanos do tecido linfoide está condicionado pela inexistência de uma forma eficaz de isolar estas células, visto que o fator de transcrição Foxp3 não pode ser marcado para manter a viabilidade celular. Os linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide correspondem a diferentes populações, não se conhecendo a sua capacidade supressora relativa. Avaliámos a eficácia de uma nova estratégia que seleciona linfócitos TFR do tecido linfoide CXCR5lo/int CD25+ em vez de CXCR5hi CD25+ (normalmente utilizada), simulando ambas as estratégias e medindo o número de linfócitos TFR Foxp3+ hipoteticamente isolados. Também comparámos a capacidade supressora dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, ao fazer co-culturas com linfócitos B naïve, TFH e TFR, que foram estimuladas com antigénio, para avaliar os níveis de ativação dos linfócitos B e de proliferação dos linfócitos TFH. Finalmente, estudámos a expressão de 361 proteínas em linfócitos TFR para identificar futuros marcadores que possam substituir o CD25 para isolar linfócitos TFR CXCR5hi. Observámos que, ao selecionar linfócitos TFR de amígdalas humanas CXCR5lo/int ao invés de CXCR5hi, obtemos maiores frequências relativas de linfócitos TFR CD25+. Quando comparámos a supressão dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, detetámos que os últimos reduzem mais eficazmente o número de linfócitos TFH que proliferam, quando comparados com os linfócitos TFR circulantes. Identificámos também o GARP, LILRA-2, SSEA-3 e TRA-1-81 como marcadores promissores para isolar linfócitos TFR do tecido linfoide viáveis. Apesar de ser necessário validar estes achados, acreditamos que os mesmos evidenciam a heterogeneidade funcional dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide.

A fibrilhação auricular é a patologia arrítmica mais frequente quer na população geral, quer na população atleta, caraterizando-se por uma disfunção da condução elétrica auricular, levando a uma contratilidade ineficiente desta estrutura. Por este motivo está associada a um conjunto particular de sinais e sintomas e a um risco aumentado de complicações com bastante impacto na morbilidade e mortalidade dos doentes afetados por esta patologia. No entanto, a população atleta, apesar de poder apresentar uma clínica sobreponível com a população não-atleta, está sujeita a diferenças em termos de abordagem diagnóstica, terapêutica e prognóstica, diferenças estas que não são do conhecimento da maioria dos médicos, em parte por os atletas constituírem uma reduzida percentagem da população total de doentes afetados por esta patologia e como tal não serem os casos mais frequentes na prática clínica. Contudo, o conhecimento de tais diferenças tem implicações relativas ao controlo eficaz da FA nesta população, na possibilidade de estes doentes continuarem a sua prática desportiva regular e na satisfação dos doentes quanto aos cuidados prestados. Assim esta tese de final de mestrado pretende abordar a temática da fibrilhação auricular no contexto do doente atleta, fazendo uma compilação da melhor evidência disponível e da informação mais consensual dentro da comunidade médica relativamente aos parâmetros de epidemiologia, etiologia, fisiopatologia, apresentação clínica, abordagem diagnóstica, abordagem terapêutica e prognóstico, por forma a colmatar as lacunas anteriormente referidas e assim permitir uma abordagem mais dirigida a esta população de doentes.

Introdução: A depressão é um problema de saúde global, face à sua prevalência, morbilidade e distribuição internacional. Atualmente, o tratamento de primeira linha baseia-se em antidepressivos em monoterapia, com resultados modestos. Em contrapartida, os psicostimulantes constituem uma classe heterogénea cuja farmacodinâmica subjacente tem o potencial de poder complementar a ação dos antidepressivos e atuar nas bases fisiopatológicas da depressão, aportando, assim, benefícios clínicos. Objetivos: Avaliar a eficácia da utilização de psicostimulantes adjuvantes a antidepressivos em adultos deprimidos. Métodos de pesquisa: A 11/02/2023, foram realizadas buscas no PubMed, no Web of Science Core Collection e no ClinicalTrials.gov. Critérios de seleção: Foram incluídos ECAs que avaliassem a eficácia da utilização de psicostimulantes em adjuvância a antidepressivos, em comparação com placebo adjuvante. Considerou-se uma população de adultos de ambos os sexos com um diagnóstico de PDM (DSM ou ICD). Recolha e análise de dados: O autor extraiu os dados e avaliou o risco de viés. O outcome contínuo “Mudança na gravidade da depressão do início ao final do estudo” foi analisado com SMD e um IC de 95%, ao passo que o outcome dicotómico “Remissão no final do estudo” foi analisado com OR e um IC de 95%. As meta-análises foram realizadas com recurso a modelos de efeitos aleatórios. Resultados: Foram incluídos treze ECAs (2478 participantes). As meta-análises revelaram que a adjuvância com psicostimulantes reduziu significativamente a gravidade dos sintomas depressivos [N=1827; SMD=-0.18; 95% CI (-0.36, -0.01); p=0.04, I2=65%], mas não demonstraram um aumento significativo nas taxas de remissão [N=1709; OR=1.30; 95% CI (0.97, 1.75); p=0.08, I2=32%]. Conclusões: A evidência sugere que a utilização de psicostimulantes melhora a sintomatologia depressiva. Não obstante, os dados obtidos não sugerem um benefício no que toca à remissão. Houve limitações significativas, pelo que serão necessários maiores ensaios de qualidade que avaliem uma maior variedade de psicostimulantes.

The association between nightmare frequency (NMF) and suicidal ideation (SI) is well known, yet the impact of the COVID-19 pandemic on this relation is inconsistent. This study aimed to investigate changes in NMF, SI, and their association during the COVID-19 pandemic. Data were collected in 16 countries using a harmonised questionnaire. The sample included 9328 individuals (4848 women; age M[SD] = 46.85 [17.75] years), and 17.60% reported previous COVID-19. Overall, SI was significantly 2% lower during the pandemic vs. before, and this was consistent across genders and ages. Most countries/regions demonstrated decreases in SI during this pandemic, with Austria (-9.57%), Sweden (-6.18%), and Bulgaria (-5.14%) exhibiting significant declines in SI, but Italy (1.45%) and Portugal (2.45%) demonstrated non-significant increases. Suicidal ideation was more common in participants with long-COVID (21.10%) vs. short-COVID (12.40%), though SI did not vary by COVID-19 history. Nightmare frequency increased by 4.50% during the pandemic and was significantly higher in those with previous COVID-19 (14.50% vs. 10.70%), during infection (23.00% vs. 8.10%), and in those with long-COVID (18.00% vs. 8.50%). The relation between NMF and SI was not significantly stronger during the pandemic than prior (rs = 0.18 vs. 0.14; z = 2.80). Frequent nightmares during the pandemic increased the likelihood of reporting SI (OR = 1.57, 95% CI 1.20-2.05), while frequent dream recall during the pandemic served a protective effect (OR = 0.74, 95% CI 0.59-0.94). These findings have important implications for identifying those at risk of suicide and may offer a potential pathway for suicide prevention.

Objective: Epilepsy management employs self-reported seizure diaries, despite evidence of seizure underreporting. Wearable and implantable seizure detection devices are now becoming more widely available. There are no clear guidelines about what levels of accuracy are sufficient. This study aimed to simulate clinical use cases and identify the necessary level of accuracy for each. Methods: Using a realistic seizure simulator (CHOCOLATES), a ground truth was produced, which was then sampled to generate signals from simulated seizure detectors of various capabilities. Five use cases were evaluated: (1) randomized clinical trials (RCTs), (2) medication adjustment in clinic, (3) injury prevention, (4) sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP) prevention, and (5) treatment of seizure clusters. We considered sensitivity (0%-100%), false alarm rate (FAR; 0-2/day), and device type (external wearable vs. implant) in each scenario. Results: The RCT case was efficient for a wide range of wearable parameters, though implantable devices were preferred. Lower accuracy wearables resulted in subtle changes in the distribution of patients enrolled in RCTs, and therefore higher sensitivity and lower FAR values were preferred. In the clinic case, a wide range of sensitivity, FAR, and device type yielded similar results. For injury prevention, SUDEP prevention, and seizure cluster treatment, each scenario required high sensitivity and yet was minimally influenced by FAR. Significance: The choice of use case is paramount in determining acceptable accuracy levels for a wearable seizure detection device. We offer simulation results for determining and verifying utility for specific use case and specific wearable parameters.

Purpose: Immune checkpoint inhibitors (ICIs) have revolutionized cancer treatment, though uncertainty exists regarding their immune-related safety. The objective of this study was to assess the comparative safety profile (odds ratio) of ICIs and estimate the absolute rate of immune-related serious adverse events (irSAEs) in cancer patients undergoing treatment with ICIs. Methods: We searched for randomized trials till February 2021, including all ICIs for all cancers. Primary outcome was overall irSAEs, and secondary outcomes were pneumonitis, colitis, hepatitis, hypophysitis, myocarditis, nephritis, and pancreatitis. We conducted Bayesian network meta-analyses, estimated absolute rates and ranked treatments according to the surface under the cumulative ranking curve (SUCRA). Results: We included 96 trials (52,811 participants, median age 62 years). Risk of bias was high in most trials. Most cancers were non-small cell lung cancer (28 trials) and melanoma (15 trials). The worst-ranked ICI was ipilimumab (SUCRA 14%; event rate 848/10,000 patients) while the best-ranked ICI was atezolizumab (SUCRA 82%; event rate 119/10,000 patients). Conclusion: Each ICI showed a unique safety profile, with certain events more frequently observed with specific ICIs, which should be considered when managing cancer patients.

Introdução: Eventos adversos de vida são acontecimentos ameaçadores, que excedem os recursos de adaptação ou interrompem as metas de um indivíduo. A exposição a eventos adversos de vida está associada a piores resultados de saúde mental e física. Para melhor se compreender o seu impacto nas trajetórias de desenvolvimento, detetar indivíduos em risco e implementar medidas preventivas é necessário dispor de instrumentos válidos e fiáveis. Objetivos: Traduzir e validar o Questionnaire of Stressful Life Events (QSLE) para a população portuguesa; avaliar a frequência, a perceção de stress e a idade de ocorrência de eventos adversos de vida; e avaliar a associação entre eventos adversos de vida, saúde física, saúde mental e vinculação. Método: O QSLE foi traduzido para a língua portuguesa de forma independente por dois tradutores. Participaram 124 pessoas, preenchendo o QSLE, o Questionário de Saúde Física (QSF), o Inventário de Saúde Mental-5 (MHI-5) e o Experiences in Close Relationships – Relationship Structures Questionnaire (ECR-RS). Resultados: A versão traduzida do QSLE revelou uma boa consistência interna (α = .83). O evento adverso mais frequente foi “início de uma relação amorosa” e o evento mais stressante e que ocorreu em idade mais precoce (M = 10 anos) foi “sofrer abusos ou maus-tratos”. A frequência e o stress percecionado de eventos adversos de vida associaram-se positivamente com uma pior saúde física. Uma pior saúde física associou-se positivamente com o evitamento na vinculação. Uma pior saúde mental correlacionou-se com uma pior saúde física e com níveis mais elevados de ansiedade e evitamento na vinculação. Conclusões: o QSLE revelou ser um instrumento válido e fiável para a população portuguesa para avaliar eventos adversos de vida. A ocorrência de eventos adversos de vida associou-se a uma pior saúde física.

Introdução: O impacto dos eventos adversos de infância na patologia orgânica são conhecidos há mais de duas décadas com estudos subsequentes a demonstrarem também o impacto na saúde mental e desempenho académico. Por sua vez a qualidade da vinculação e a capacidade de mentalização podem constituir factores mediadores do impacto destes eventos. Objetivo: Avaliar a relação entre os eventos adversos de infância, a saúde geral e o desempenho académico de estudantes de medicina e avaliar o papel mediador da vinculação e mentalização. Método: Participaram 68 estudantes de medicina portugueses, preenchendo um questionário sobre eventos adversos de infância (QHAI), saúde geral (ISM), envolvimento académico 3 (USEI), desempenho académico, mentalização (QMZ) e vinculação (ECR-RS). Resultados: 31 estudantes (62%) relataram pelo menos uma exposição a eventos adversos de infância e 9 (18%) relataram ≥ 4 exposições. Verificaram-se associações significativas entre a exposição a violência doméstica e o número de anos curriculares em atraso. Os estudantes que foram expostos a violência doméstica na infância ou que conviveram com parentes com doença mental ou tentativas de suicídio apresentaram uma menor capacidade de mentalização do que aqueles que não relataram exposição a estes eventos. Não se verificou um efeito mediador da vinculação ou capacidade de mentalização. Conclusões: Uma percentagem considerável de estudantes de medicina relata exposição a múltiplos eventos adversos de infância com consequências a nível de desempenho académico e capacidade de mentalização.

Com os mais recentes avanços tecnológicos, é cada vez mais fácil monitorizar vários parâmetros fisiológicos com sensores portáteis. Este facto proporciona novas oportunidades para a área médica, permitindo a monitorização contínua dos referidos parâmetros. Nesse sentido, foi concebido o presente estudo, que consiste em uma revisão sistemática da literatura sobre o uso da tecnologia vestível em doenças cardiovasculares, com ênfase no atendimento intra-hospitalar. A pesquisa foi realizada por meio de uma revisão sistemática em bases de dados de referência no período de 26 de dezembro de 2022 a 2 de janeiro de 2023. Foram incluídos na revisão apenas os artigos presentes que atenderam aos critérios de elegibilidade. Os resultados são apresentados da seguinte forma: (1) seleção dos estudos, (2) avaliação do risco de viés, (3) descrição da população estudada e (4) desfechos. A pesquisa incluiu 14 estudos, todos observacionais. Todos os estudos tinham um elevado risco de viés quando avaliados com a ferramenta RoB 2. Estes artigos incluíram uma população de 5447 doentes com uma idade média de 60 anos. Devido ao elevado risco de viés e à qualidade dos artigos analisados, não foi possível chegar a qualquer conclusão relativamente à eficácia, segurança, adesão e redução da mortalidade com a utilização de cardio-desfibrilhadores portáteis em doentes com elevado risco de morte súbita cardíaca. No entanto, os estudos apontam para a possibilidade desta terapêutica ter uma elevada adesão por parte dos doentes, ser segura e eficaz na terminação das taquidisritmias ventriculares. Com base nos resultados apresentados, para que se possa recomendar a utilização destas tecnologias vestíveis na prática clínica tem de haver um esforço para fornecer evidência de maior qualidade. Ao mesmo tempo que se desenvolvem as tecnologias vestíveis, é necessário que haja um desenvolvimento correspondente dos registos médicos electrónicos e do processamento de dados, de modo a obter informações úteis para a prática clínica.

No âmbito da prática de ensino supervisionada, este estudo reflecte sobre o uso do texto literário como material didáctico no ensino do Inglês como língua estrangeira. Inicialmente apresenta-se e justifica-se o tema. Depois são citados os métodos e as abordagens que ao longo do século XX têm acolhido ou rejeitado o texto literário no ensino da língua estrangeira e como se adequaram as diferentes opções metodológicas às aulas leccionadas. Enquanto tal, apresenta-se a Unidade Didáctica integrada na planificação anual da disciplina, no programa do Inglês do 9º ano definido pela Escola Cooperante, em acordo com os programas oficiais. Reflecte-se sobre as potencialidades informativas do texto literário e da sua articulação com outros materiais autênticos visuais, auditivos e audiovisuais e ao modo como foram inseridos na Unidade Curricular. Faz-se, de igual modo, referência às virtualidades formativas do texto literário e da sua relevância no ensino do Inglês como língua estrangeira no contexto escolar, do saber e da sociedade actual. Apresentam-se, ainda, os objectivos, critérios e instrumentos da prática avaliativa, formativa e sumativa, integrante no processo de ensino aprendizagem. Conclui-se o Relatório com uma reflexão crítica sobre o trabalho realizado e uma análise dos resultados obtidos, tendo em conta o papel reflexivo do professor no processo de ensino e de aprendizagem, concretamente, do Inglês como língua estrangeira.

Esta revisão sistemática pretende reunir informação sobre a infeção congénita pelo vírus Zika, com foco nos mecanismos patogénicos envolvidos, e ressalvar a importância do diagnóstico e seguimento dos fetos infetados. Para isso, realizou-se uma pesquisa bibliográfica na base de dados PubMed, recorrendo às palavras-chave: “Zika Virus”, “Microcephaly” e “Congenital Zika Syndrome”. O vírus Zika é um arbovírus da família Flaviviridae, género Flavivirus, que foi isolado pela primeira vez no Uganda, em 1947, tendo sido associado aos humanos pela primeira vez em 2007, na Micronésia. Em 2015, ocorreu um surto de maiores dimensões, com ínicio na América do Sul, que atingiu numerosos países, tendo sido declarado pela Organização Mundial de Saúde como uma Emergência de Saúde Pública de Preocupação Internacional, em 2016. A transmissão do vírus Zika faz-se essencialmente por via vetorial, através de mosquitos do género Aedes, mas também por via sexual, sanguínea e vertical. Esta última tem particular relevo, uma vez que as principais consequências da infeção pelo vírus Zika incidem sobre os fetos, levando ao desenvolvimento da Sindrome Congénita do vírus Zika, que abrange uma gama alargada de anomalias no desenvolvimento fetal, nomeadamente anomalias morfológicas, cerebrais, oculares e motoras, sendo dado destaque à microcefalia e às sequelas que advêm da diminuição do perímetro cefálico. Todas as sequelas da infeção pelo vírus Zika durante a gestação estão associadas ao tropismo deste vírus, que tende a infetar preferencialmente as células progenitoras do sistema nervoso. No sentido de proteger os fetos dessas sequelas, desenvolveram-se medidas de prevenção da infeção a serem adotadas pelas mulheres grávidas. No entanto, estas não são realmente eficazes, pelo que, nos últimos anos, se têm vindo a estudar os mecanismos patogénicos envolvidos, de forma a ser possível o desenvolvimento de protocolos farmacológicos, bem como de vacinas que reforcem a prevenção da infeção.

A barreira hematoencefálica (BHE) é a interface que separa o tecido neuronal do sangue em circulação, tendo como principal componente as células endoteliais da microvasculatura encefálica. Esta barreira é composta pela membrana basal e por astrócitos, pericitos, microglia e neurónios, cujo conjunto é designado por unidade neurovascular. A BHE tem como principais funções: (1) assegurar a correta nutrição do encéfalo, (2) prevenir a entrada de substâncias ou moléculas que possam causar dano ao tecido neuronal e (3) controlar a passagem de iões entre a corrente sanguínea e o parênquima encefálico. Os estudos mais recentes relacionados com a BHE têm gerado resultados muito promissores. No entanto, a maioria utiliza modelos de duas dimensões (2D) que não têm a capacidade de recapitular algumas das características in vivo, tais como as interações com a matriz extracelular e a geometria cilíndrica da microvasculatura encefálica. Para ultrapassar esta limitação, modelos tridimensionais (3D) foram implementados como forma de criar modelos que se aproximem mais das condições in vivo e, desta forma, aumentar a sua relevância fisiológica. Estes modelos são fabricados através da produção de canais incorporados em géis 3D, que são semeados com diferentes tipos de células, tais como células endoteliais, de forma a mimetizar as características in vivo. Dada a relevância científica deste tema, propusemo-nos desenvolver um modelo tridimensional da BHE. Este projeto teve assim três principais objetivos: (1) a fabricação de moldes da microvasculatura da BHE; (2) o estabelecimento das condições experimentais ideais para a formação de monocamadas de células endoteliais, recapitulando o endotélio da BHE; (3) e por fim a caracterização das suas propriedades. O primeiro passo do nosso trabalho passou pelo desenvolvimento de um dispositivo de polidimetilsiloxano (PDMS). O PDMS foi devidamente preparado através da mistura de dois regentes (o agente de cura e a base) e seguidamente colocado num exsicador ligado a uma bomba de vácuo para retirar as bolhas de ar presentes na mistura. Uma vez sem bolhas, o PDMS foi colocado num molde metálico, solidificando a 70º C, durante 2 horas. Este dispositivo foi devidamente cortado e foram abertas portas com tamanhos, localizações e funções diferentes. As portas de entrada e saída, localizadas na zona inicial e final do microvaso, respetivamente, correspondem ao local onde ocorre a perfusão de células e onde é implementado um fluxo continuo de solução dentro do vaso. Por outro lado, as portas de agarose, localizadas a uma distância de 1,4 cm de distância das portas de entrada e de saída, são o local onde são inseridos tanto o gel de colagénio, responsável por replicar a matriz extracelular, como a agarose, que irá dar suporte ao gel, de forma a este não perder a sua estrutura. Posteriormente à preparação e limpeza do dispositivo, é inserida uma agulha (150 µm de diâmetro) que irá ser o molde para o microvaso. A primeira otimização deste trabalho foi relativa à concentração do gel de colagénio usada. Foram testadas diferentes concentrações de colagénio de forma que fosse possível criar um canal dentro do gel capaz de manter a sua estrutura uma vez removida a agulha. De entre as concentrações testadas (1, 3, 5 e 7 mg/mL), apenas a concentração mais elevada permitiu obter um canal capaz de manter a sua estrutura, aquando da injeção da suspensão de células. A segunda otimização realizada foi referente ao tempo necessário para a hidratação do gel de colagénio. Inicialmente, realizou-se uma hidratação do gel com o meio de cultura de células, por um período de 20 minutos. No entanto, após a sua perfusão, as células não se encontravam aderentes ao gel e apresentavam uma morfologia arredondada. Assim, aumentou-se o tempo de hidratação para cerca de 90 minutos, e após este período, as células já se encontravam aderentes ao gel de colagénio, apresentando uma morfologia mais alongada característica das células endoteliais. De seguida, otimizou-se a concentração de células na perfusão, com o objetivo de obter um maior número de células aderentes e diminuir o tempo necessário para se obter um microvaso confluente. Conclui-se com os nossos resultados que, utilizando uma densidade celular de 3x106 e 20x106 células/mL, era possível obter microvasos com células endoteliais confluentes em cerca de 5-6 dias e 2 dias, respetivamente. Através da análise por imunofluorescência da proteína dos complexos juncionais, β-catenina, avaliou-se a formação das junções intercelulares, bem como a integridade dos microvasos. Concluiu-se que a densidade mais elevada resultava numa maior expressão de β-catenina ao longo do plano equatorial, num maior número de células por cada secção de 700 µm do microvaso, e num menor número de zonas com ausência de células. No entanto, a expressão da proteína estava maioritariamente presente a nível citoplasmático, e não na zona membranar como seria de esperar duma proteína juncional. Uma vez que em estudos já realizados está descrito que o fluxo a que as células são sujeitas, que cria uma tensão de cisalhamento dentro do microvaso, influencia não só a expressão das proteínas dos complexos juncionais, mas também a morfologia das mesmas, o fluxo que antes era de 0.2 mL/h (correspondendo a uma tensão de cisalhamento de 1-2 dynes/cm2) induzido por uma bomba de seringa, foi aumentado para um fluxo mais próximo do fisiológico, de 0.5 mL/h (correspondendo a uma tensão de cisalhamento de 4-6 dynes/cm2). A indução deste fluxo foi realizada quer por uma bomba de seringa, quer por gravidade, onde se induziu uma diferença de altura entre dois reservatórios, um em cada porta de entrada e saída, criando um fluxo dentro do microvaso. Novamente, através de análise por imunofluorescência verificou-se que com o aumento do fluxo, a expressão de β-catenina na membrana aumentou. Para além disso, realizou-se uma análise comparativa relativamente às diferenças a nível da morfologia celular entre os diferentes fluxos. Foi possível verificar que as células sujeitas a um fluxo mais elevado apresentavam uma morfologia mais alongada comparativamente com o fluxo mais baixo, onde as células apresentavam uma forma mais arredondada. Desta forma, concluiu-se que o aumento do fluxo levou a uma elevada expressão de proteínas presentes na membrana e a uma alteração significativa na morfologia das células. Foram também iniciados estudos com o objetivo de analisar a permeabilidade dos microvasos. Para este efeito, foi utilizada a fluoresceína sódica, uma substância com um tamanho reduzido, capaz de atravessar o microvaso por via paracelular. Nestes estudos foi avaliada a passagem de fluoresceína com base na análise da sua presença no colagénio por microscopia de fluorescência. No futuro, será interessante otimizar as condições experimentais de modo a obter uma melhor localização membranar de proteínas juncionais tais como a β-catenina e a zonula occludens-1. Para atingir este objetivo, antevê-se que seja necessário aumentar o fluxo, uma vez que se sabe que tem influência na interação entre as células. Um outro teste será enriquecer o meio de cultura das células com proteínas que possam induzir a formação dos complexos juncionais, como o cAMP e a hidrocortisona. Além disso, devem ser realizados testes de permeabilidade utilizando moléculas maiores para avaliar o limiar de permeabilidade do endotélio, para uma caracterização mais robusta dos microvasos. Finalmente, será interessante usar este modelo para estudar o mecanismo subjacente à formação de metástases encefálicas, juntamente com o processo de extravasamento que ocorre durante a cascata metastática do cancro da mama, que tem sido intensamente estudado no nosso grupo. Dada a importância da BHE para a proteção do encéfalo contra diferentes moléculas prejudiciais e o fornecimento de nutrientes, tendo um papel importante em doenças neuronais específicas, é essencial aumentar o conhecimento já existente sobre a funcionalidade da BHE e ter uma melhor compreensão das suas características. Assim, através da construção de um modelo 3D da vasculatura encefálica que permita recapitular a função e propriedades in vivo da BHE, este projeto abre caminho para estudos mais robustos da BHE, constituindo uma ferramenta inestimável na compreensão dos mecanismos celulares associados ao desenvolvimento de perturbações do sistema nervoso central.

Os alcaloides bis-quinolidizínicos, como a esparteína e a lupanina, encontram-se em plantas da subfamília Faboideae do género Lupinus. Estas moléculas tem um núcleo comum de bispidina quiral e possuem diversas atividades biológicas, a esparteína, propriedades antiarrítmicas e anticonvulsivantes e a lupanina é moderadamente tóxica. O nosso grupo tem desenvolvido métodos sustentáveis para o isolamento de alcalóides, neste caso, a partir da extração de águas residuais que provêm do tratamento de sementes da espécie Lupinus (mais conhecidas como tremoço) conseguiu-se extrair o alcalóide lupanina na sua forma racémica. O interesse deste trabalho foi desenvolver novas metodologias para a funcionalização destes alcalóides e, posteriormente, avaliar derivados sintetizados em diversas aplicações biológicas. Foram exploradas duas estratégias de síntese, a síntese de derivados 17-substituídos da lupanina através da adição nucleofílica de reagentes de Grignard ao sal de imínio derivado da lupanina racémica e a síntese de sais de amónio através de reações de N-alquilação. Após se ter obtido um leque de derivados, realizaram-se ensaios biológicos de permeabilidade em células de glóbulos vermelhos de modo a se estudar a aplicabilidade destes como inibidores de aquaporinas; ensaios de atividade antibacteriana em Gram-negativas e Gram-positivas; ensaios de moduladores de correntes de K+ / Na+ e, por fim, realizaram-se ensaios de viabilidade celular contra células saudáveis para se auferir a toxidade dos derivados sintetizados. O derivado 17-rac-dehydrolupaninium triflate 44, induziu um efeito na corrente de K+ e de Na+ sendo que este resultado poderá ser importante para o controlo da neuroexcitabilidade e, como não apresentou toxicidade para as células saudáveis poderá ser testado em modelos de dor in vivo, principalmente, nos de dor neuropática crónica. Tendo em conta as propriedades farmacológicas associadas à sparteína este poderá ser um caminho de investigação futura, avaliando o efeito do derivado 17-rac-dehydrosparteinium triflate 44 sintetizado neste trabalho nas correntes de K+ / Na+.