Repositório RCAAP

Background Explanations for the ecological dominance of ants generally focus on the benefits of division of labour and cooperation during foraging. However, the principal innovation of ants relative to their wasp ancestors was the evolution of a new phenotype: a wingless worker caste optimized for ground labour. Ant workers are famous for their ability to lift and carry heavy loads, but we know surprisingly little about the morphological basis of their strength. Here we examine the consequences of the universal loss of flight in ant workers on skeletomuscular adaptations in the thorax for enhanced foraging on six legs. Results Using X-ray microcomputed tomography and 3D segmentation, we compared winged queens and wingless workers in Euponera sikorae (subfamily Ponerinae) and Cataglyphis savignyi (subfamily Formicinae). Workers are characterized by five major changes to their thorax: i) fusion of the articulated flight thorax (queens) into a rigid box optimized to support the muscles that operate the head, legs and abdomen, ii) redesign of internal cuticular structures for better bracing and muscle attachment, iii) substantial enlargement of the neck muscles for suspending and moving the head, iv) lengthening of the external trochanter muscles, predominant for the leg actions that lift the body off the ground, v) modified angle of the petiole muscles that are key for flexion of the abdomen. We measured volumes and pennation angles for a few key muscles to assess their increased efficacy. Our comparisons of additional workers across five genera in subfamilies Dorylinae and Myrmicinae show these modifications in the wingless thorax to be consistent. In contrast, a mutillid wasp showed a different pattern of muscle adaptations resulting from the lack of wing muscles. Conclusions Rather than simply a subtraction of costly flight muscles, we propose the ant worker thorax evolved into a power core underlying stronger mandibles, legs, and sting. This contrasts with solitary flightless insects where the lack of central place foraging generated distinct selective pressures for rearranging the thorax. Stronger emphasis is needed on morphological innovations of social insects to further our understanding of the evolution of social behaviours.

O presente estudo teve como propósito central conhecer as conceções de professores formadores, que intervêm na componente de Prática de Ensino Supervisionada, relativamente aos contributos da mesma, na Formação Inicial de professores do 1.º Ciclo. A presente dissertação encontra-se estruturada em duas partes, sendo que a primeira comporta o enquadramento teórico, no qual são abordadas temáticas relativas à Formação Inicial de Professores, à profissão docente e competências que lhe são inerentes. Por sua vez, a segunda parte é constituída pelo estudo empírico no qual interpretámos as representações, dos já referidos sujeitos, acerca das finalidades e indicadores da qualidade da unidade curricular de Prática Supervisionada em 1.º Ciclo do Ensino Básico. Analogamente, neste estudo, são dadas a conhecer as conceções destes formadores acerca dos contributos desta disciplina na aquisição/desenvolvimento de saberes e competências profissionais na Formação Inicial de professores do 1.º Ciclo. Neste sentido, desenvolvemos uma investigação de carácter qualitativo, na qual recorremos à técnica da entrevista semi-diretiva para obtermos dados pertinentes que nos possibilitassem corresponder aos objetivos propostos. Da análise dos dados obtidos, muito sucintamente, foi-nos possível depreender que estes indivíduos consideram que esta disciplina possibilita experienciar a prática de forma contextualizada sendo, a mesma, suportada por referenciais metodológicos, práticos e reflexivos que propiciam a construção da articulação teoria-prática, no processo de Formação Inicial, possibilitando o desenvolvimento da profissionalidade do docente, nas várias dimensões que a profissão comporta.

The distal parts of the legs of Sceliphron caementarium (Sphecidae) and Formica rufa (Formicidae) are documented and discussed with respect to phylogenetic and functional aspects. The prolegs of Hymenoptera offer an array of evolutionary novelties, mainly linked with two functional syndromes, walking efficiently on different substrates and cleaning the body surface. The protibial-probasitarsomeral cleaning device is almost always well-developed. A complex evolutionary innovation is a triple set of tarsal and pretarsal attachment devices, including tarsal plantulae, probasitarsomeral spatulate setae, and an arolium with an internal spring-like arcus, a dorsal manubrium, and a ventral planta. The probasitarsal adhesive sole and a complex arolium are almost always preserved, whereas the plantulae are often missing. Sceliphron has retained most hymenopteran ground plan features of the legs, and also Formica, even though the adhesive apparatus of Formicidae shows some modifications, likely linked to ground-oriented habits of most ants. Plantulae are always absent in extant ants, and the arolium is often reduced in size, and sometimes vestigial. The arolium contains resilin in both examined species. Additionally, resilin enriched regions are also present in the antenna cleaners of both species, although they differ in which of the involved structures is more flexible, the calcar in Sceliphron and the basitarsal comb in Formica. Functionally, the hymenopteran distal leg combines (a) interlocking mechanisms (claws, spine-like setae) and (b) adhesion mechanisms (plantulae, arolium). On rough substrate, claws and spine-like setae interlock with asperities and secure a firm grip, whereas the unfolding arolium generates adhesive contact on smooth surfaces. Differences of the folded arolium of Sceliphron and Formica probably correlate with differences in the mechanism of folding/unfolding.

Spiders are among the most diverse and yet threatened groups of arthropods in Macaronesia. Found in most habitat types, they occupy the vertical gradient of native forests from ground to canopy level. We hypothesize that their vertical distribution is influenced by the colonization origin. As introduced species should arrive using shipping containers and similar means, they should mostly occupy the lower levels in the gradient, with potential negative effects on the indigenous epigean fauna. Spiders were sampled from epigean to arboreal microhabitats (maximum height varying between 2 and 4 m) on 45 sites across five islands belonging to three archipelagos. The mean and range of vertical stratification were obtained for each captured species. These values were then compared between different colonization origins at Macaronesian and archipelagic levels. Native non-endemic species were found at significantly higher vertical strata than both endemic and introduced species. Likewise, native non-endemics had a larger vertical range. These patterns were largely replicated across archipelagos, although there were exceptions. Overall, introduced species do not seem to occur mostly at lower strata in the native forests of Macaronesia (at least in the studied vertical range) but seem to be vertically restricted in most settings with the exception of Madeira.

Este trabalho encontra-se inserido no contexto de conclusão do Mestrado em Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa, sendo composto por duas partes. A primeira parte diz respeito ao Relatório de Estágio, tendo o estágio profissional sido realizado no Laboratório de Análises Clínicas Dr. Joaquim Chaves no período de 21 de abril de 2022 a 16 de janeiro de 2023. O laboratório encontra-se dividido em várias áreas analíticas distintas, sendo que este relatório irá incidir-se em três destas áreas: Microbiologia, Hematologia e Química Analítica. É desenvolvido com maior detalhe as diversas atividades desenvolvidas nestes departamentos sendo descritos diversos parâmetros analíticos. Esta descrição incluí uma pequena introdução teórica acerca da importância semiológica do parâmetro, o tipo de amostra biológica e o método utilizado. A segunda parte diz respeito à Monografia nomeada: “O papel da microglia no desenvolvimento da Esclerose Múltipla”. A esclerose múltipla é uma doença crónica inflamatória do sistema nervoso central e trata-se de uma doença autoimune desmielinizante, na qual se verifica a destruição da bainha de mielina dos axónios. Nesta doença verifica-se uma auto reatividade da resposta imunitária inata e adaptativa, que desencadeia uma resposta inflamatória e consequente ativação da microglia (células imunocompetentes do sistema nervoso). Esta monografia aborda o papel da microglia e a sua dualidade no que diz respeito à resolução da lesão – onde os seus efeitos benéficos são mais relevantes – e à evolução desta doença – em que os efeitos prejudiciais são mais marcantes. Deste modo, permite salientar a importância da microglia para uma melhor compreensão da patogénese da esclerose múltipla, bem como, o seu potencial como possível alvo terapêutico para o desenvolvimento de novas terapias.

What drives MPs' constituency focus in party-centered systems? Party-centered systems are expected to offer fewer incentives for constituency-focused behavior as it is parties rather than candidates that primarily drive competition. However, MPs in these systems may find good reason to cater to constituents’ interests as it allows them to attain multiple goals and satisfy competing principals. This study develops a theoretical model of constituency focus comprising individual, party, and district-level factors and tests it in South Africa, a party-centered system. Drawing on 22,724 questions submitted by MPs to the parliament between 2006 and 2023, as well as biographic data and interviews, it demonstrates that variation in MPs' constituency focus is explained by their level of electoral vulnerability, and to a lesser degree their seniority and local ties. Moreover, whether MPs belong to clientelistic parties and their constituency is a party stronghold are also relevant factors. The findings highlight the importance of incentives that go beyond electoral institutions and reaffirm the relevance of constituency links in party-centered systems.

O presente trabalho representa o documento final de avaliação do Mestrado em Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa. Este é composto por duas partes. A primeira parte consiste no Relatório do estágio efetuado no Laboratório Central da Synlab. onde se descreve o trabalho realizado, nomeadamente os parâmetros analisados, metodologias mais comuns e sistema de avaliação da qualidade interno para cada uma das valências incluídas. A segunda parte corresponde à monografia, “Marcadores Bioquímicos para o Diagnóstico do Cancro do Pâncreas”. Sendo o cancro do pâncreas uma condição fatal de incidência crescente com índices de mortalidade muito elevados é crucial, para a diminuição da sua letalidade, a deteção precoce desta patologia. Isto passa, em grande parte, pela melhoria dos seus métodos de diagnóstico, entre os quais se inclui o uso de marcadores tumorais. Estes são substâncias cuja presença em níveis elevados pode indicar a presença de um tumor, sendo que um bom marcador deverá ter tanto uma alta sensibilidade como uma elevada especificidade para a doença que se quer diagnosticar. Assim, o tema proposto visa fazer uma revisão dos vários tipos de marcadores bioquímicos que podem ser utilizados no diagnóstico desta patologia, nomeadamente os marcadores CA19-9, CA50, CA242, CEA, DUPAN-2, a família de genes RAS e micro- RNAs.incluindo a especificidade e sensibilidade de cada um deles e a eventual utilidade no diagnóstico diferencial de outras doenças, explorando, sempre que possível, os mecanismos que levam à alteração dos seus valores no cancro do pâncreas. Irá, também, ser abordado o uso e as vantagens de painéis de marcadores com o mesmo objetivo.

As doenças periodontais, nomeadamente gengivite e periodontite, estão entre as condições mais prevalentes a nível global, sendo caracterizadas por serem patologias não comunicáveis, fruto de uma resposta inflamatória crónica, que afetam a cavidade oral. Recentemente, a progressão de periodontite tem sido associada a diversas repercussões sistémicas, incluindo infertilidade feminina e resultados adversos na gravidez, contudo, os mecanismos associados mantêm-se desconhecidos. Desta forma, este projeto tem como objetivo desenvolver um modelo animal de periodontite, em ratos, para avaliar a influência desta doença na fertilidade feminina, elucidando os mecanismos envolvidos. Assim sendo, foram desenvolvidos dois modelos animais de periodontite diferentes, de forma a perceber qual o mais adequado. O primeiro modelo animal foi desenvolvido através de administrações gengivais de lipopolissacarídeos, obtidos através de Porphyromonas gingivalis, e o segundo pela aplicação e manutenção de ligaduras nos molares superiores. Os ratos foram avaliados a nível de sinais clínicos e marcadores hematológicos, bioquímicos, endócrinos e imunológicos. Adicionalmente, foi feita uma avaliação macroscópica e microscópica na gengiva dos animais, bem como do sistema reprodutor. Considerando os resultados obtidos, o modelo animal de periodontite induzido através de ligaduras foi o mais adequado, tendo em conta o desenvolvimento de uma inflamação crónica no periodonto, bem como manifestações sistémicas que poderão estar associadas a infertilidade feminina. De facto, foi observada uma redução pronunciada na expressão de estradiol, triiodotironina e tiroxina, aliado a um aumento nos níveis de proteína c-reativa, imunoglobulina G e lactato desidrogenase. Concluindo, o objetivo principal para este projeto foi atingido com sucesso, tendo em conta o desenvolvimento de um modelo animal de periodontite, em ratos, adequado para estudar a sua influência na fertilidade feminina. Adicionalmente, os resultados obtidos poderão ter um papel fulcral no futuro, visto que é a primeira vez que são demonstrados os potenciais mecanismos associados à correlação entre periodontite e infertilidade feminina.

Web-based parent interventions designed to promote children’s healthy eating patterns can enhance parents’ engagement and facilitate behavior change. However, it is still unclear how much the existing programs focus on changing parental feeding practices, and if so, which behavioral methodologies are used and how effective these interventions are in changing these parental behaviors. This systematic review and meta-analysis studied randomized controlled trials of web-based interventions targeting parents of 0-12-year-old children, aiming to promote children’s healthy diet or prevent nutrition-related problems and reporting parental feeding behaviors as one of the outcomes. We conducted an electronic search in four databases from the earliest publication date until February 2020. Of the 1271 records found, we retained twelve studies about nine programs, comprising 1766 parents that completed the baseline evaluation. We found recent interventions, mainly directed to parents of young children, with small, non-clinical samples, and mostly theory-based. The programs were heterogeneous regarding the type of intervention delivered and its duration. The most assessed parental feeding practices were Restriction, Pressure to eat, and Food availability/accessibility. The behavior change techniques Instruction on how to perform the behavior, Demonstration of the behavior, and Identification of self as role model were frequently used. Meta-analytic results indicated that most programs’ effects were small for the evaluated parental practices, except for Food availability/accessibility that benefited the intervention group only when all follow-up measurements were considered. The development of high-quality and controlled trials with larger samples is needed to determine with greater certainty the interventions’ impact on parental feeding behaviors. The more frequent inclusion of measures to evaluate parental practices to support children’s autonomy and of self-regulatory strategies as intervention components should be considered when designing programs.

A resistência aos antibióticos tornou-se um problema global com o surgimento de bactérias multirresistentes, que não podem ser tratadas com antibióticos comuns. Todos os anos, ocorrem dezenas de milhares de mortes em consequência da resistência microbiana aos medicamentos e estima-se que em 2050 a resistência bacteriana se tornará uma das principais causas de morte em todo o mundo. Para contornar esta situação, é necessário um rápido desenvolvimento de novos antibióticos bem como um uso mais responsável deste tipo de medicamentos. Os produtos naturais e seus derivados ocupam uma posição importante como potenciais agentes terapêuticos, representando cerca de 55% de todos os antibióticos aprovados entre 01/1981 e 09/2019. Dentro dos produtos naturais, os terpenos apresentam elevado potencial antibacteriano, estando o seu mecanismo de ação associado às suas características lipofílicas. Os diterpenos do tipo abietano são geralmente isolados de oleorresinas de pinheiros e devido a sua atividade biológica são compostos bastante interessantes. Entre os vários membros desta família, o ácido abiético e o ácido dehidroabiético destacam-se por apresentarem propriedades antivirais, antitumorais, cicatrizantes, antiúlceras, gastroprotetores, ansiolíticas e antibacterianas. As β-lactamas são uma das classes de antibióticos mais relevantes no tratamento de patologias infeciosas. Desde a descoberta da penicilina, os fármacos desta classe têm revolucionado a abordagem ao desenvolvimento de novas moléculas para o tratamento de infeções bacterianas. Estes compostos possuem um largo espectro de ação, sendo ativos tanto sobre bactérias Gram-positivas como Gram-negativas. As β-lactamas são compostos bactericidas que atuam inibindo a síntese da camada de peptidoglicano da parede celular através da formação de uma ligação covalente entre o composto e as PBPs (Penicillin Biding Proteins). Essas proteínas são fundamentais por estarem envolvidas nos passos finais da ligação cruzada dos peptidoglicanos que formam a parede celular bacteriana. Uma estratégia interessante para obter o anel de β-lactâmico é através da ativação da ligação C(sp3)–H catalisada por paládio. De modo a obter potenciais antibióticos, neste trabalho foi realizada a síntese de novas β-lactamas a partir do ácido dehidroabiético. Foram inicialmente sintetizadas 13 amidas derivadas do ácido dehidroabiético (P1-P13, com rendimentos de 6% a 99%) para serem usadas como material de partida para a síntese de β-lactamas. Para a preparação das amidas derivadas do ácido dehidroabiético, duas metodologias sintéticas foram utilizadas. Por um lado, o ácido carboxílico foi convertido no cloreto de ácido, seguido pelo ataque nucleofílico da respetiva amina, obtendo-se assim as amidas P1 (a partir da 8-aminoquinolina), P2 (a partir 2-(piridin-2-il)isopropilamina), P3 (a partir da anilina), P4 (a partir da pentafluoroanilina), P5 (a partir da metoxiamina), P6 (a partir da 8-amino-5-iodoquinolina), P7 (a partir da 8-amino-5-bromoquinolina) e P8 (a partir da 8-amino-5-metoxiquinolina), com rendimentos de 6% a 95%. Por outro lado, a amida P6 (constituída pela 8-amina-5-iodoquinolina) foi sujeita ao acoplamento de SuzukiMiyaura, de modo a obter as amidas P9 (com a inserção de um anel de benzeno), P10 (com a inserção de um anel de furano), P11 (com a inserção de um anel de tiofeno), P12 (com a inserção de um anel de p-trifluorometilbenzeno) e P13 (com a inserção de um butil), com rendimentos de 61% a 99%. Partindo do composto P1 (constituído pela 8-aminoquinolina), foram testadas diversas metodologias existentes na literatura para a ativação da ligação C(sp3)–H catalisada por paládio. Após a otimização da metodologia selecionada, a mesma foi aplicada às amidas previamente obtidas (P1-P13). Como resultado, foi possível obter 8 β-lactamas (P14-P20, com rendimentos de 22% a 85%) correspondentes às amidas que continham a 8-aminoquinolina como grupo diretor. A β-lactama P21 (constituída pela 8-amino-5-bromoquinolina) foi obtida a partir da bromação de P14 (constituída pela 8-aminoquinolina) com um rendimento de 55%. Na tentativa de remover o grupo diretor, fez-se reagir nitrato de amônio cérico com a β-lactama P16 (constituída pela 8-amino-5-metoxiquinolina). Como resultado, foram obtidas outras duas β-lactamas (P22 e P23, com rendimentos de 22% e 49% respetivamente). P22 corresponde ao produto desejado da remoção do grupo diretor, enquanto P23 é um produto secundário constituído por uma dicetona. Quase todos os compostos obtidos são novos na literatura (P2, P4-P23), sendo a primeira vez que metodologias como acoplamento cruzado de Suzuki-Miyaura e síntese de β-lactamas através da ativação da ligação C(sp3)–H catalisada por paládio são aplicadas a derivados de ácido dehidroabiético. Relativamente à caracterização espectral dos compostos obtidos, comparando os espectros de ressonância magnética nuclear de protão e de carbono da amida P1 (constituída pela 8-aminoquinolina) e da sua respetiva β-lactama P14, foi possível observar que a principal diferença está nos sinais dos protões do CH2 (H-19), que pertencem ao anel de β-lactama. Com a formação do heterociclo, esses protões tornamse diastereotópicos devido à proximidade ao centro quiral na posição 4. Como resultado, o acoplamento geminal de cada protão faz com que os seus sinais correspondentes apareçam como um dupleto. Numa tentativa de obter β-lactamas derivadas do ácido abiético, as metodologias otimizadas anteriormente com o ácido dehidroabiético foram aplicadas. Utilizou-se a 8-aminoquinolina para formar a respetiva amida e uma amostra de ácido abiético contendo 25% de ácido dehidroabiético. No entanto, a amida derivada do ácido abiético não foi isolada pura, mas sim numa mistura com a amida formada a partir do ácido dehidroabiético. A mistura de amidas foi utilizada na reação para a formação da β-lactama, porém apenas a β-lactama correspondente ao ácido dehidroabiético foi obtida. Isso demonstra a dificuldade sintética para obter β-lactamas derivadas do ácido abiético. Foi investigada a estabilidade da β-lactama P14 (constituída pela 8- aminoquinolina) durante 33 dias, através da análise dos espetros de ressonância magnética nuclear de protão do composto em dimetilsulfóxido deuterado. Ao longo do tempo, nenhuma modificação espectral foi observada, indicando que a estrutura do composto é estável sob essas condições. De forma a tentar abrir o anel de β-lactama, o composto P14 foi sujeito a diversas metodologias sintéticas, de modo a formar ésteres, amidas e ácidos carboxílicos. Após a análise da reação por cromatografia em camada fina e ressonância magnética nuclear de protão, foi observado que nenhuma reação ocorreu. Isso demonstra mais uma vez a elevada estabilidade deste tipo de β-lactama, podendo isto estar relacionado com o volume do ácido dehidroabiético e da 8-aminoquinolina, que possivelmente protegem a amida de sofrer ataques de outros grupos funcionais. Num ensaio para avaliar a citotoxicidade do ácido dehidroabiético e de seus derivados P1 e P14 contra células HEK293T, nenhum dos compostos demonstrou citotoxicidade, indicando que a investigação destas estruturas para fins biológicos provavelmente não apresentará citotoxicidade. O ácido dehidroabiético e os derivados obtidos (P1-P23) foram testados contra bactérias Gram-positivas (S. aureus (ATCC 6538, ATCC 43866 e CIP 106706) e Enterococcus faecalis (ATCC 11420 e ATCC 51299)) e Gram-negativas (Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) e Escherichia coli (ATCC 8739)). Em comparação com os derivados obtidos (P1-P23), o ácido dehidroabiético apresentou os melhores resultados antibacterianos, demonstrando que as modificações efetuadas não foram capazes de aumentar a atividade antibacteriana do composto. No geral, as β-lactamas apresentaram resultados piores que suas respetivas amidas e todos os compostos apresentaram nenhuma ou pouca atividade contra bactérias Gram-negativas. Além disso, foi observado que compostos ricos em oxigénio e em flúor, como P4 (amida constituída pela pentafluoroanilina), P8 (amida constituída pela 8-amino-5-metoxiquinolina), P10 (amida constituída pela inserção do anel de furano), P18 (β-lactama constituída pela inserção do anel de furano) e P23 (β-lactama constituída pela dicetona no anel de quinolina), apresentaram melhores resultados, sendo as β-lactamas P18 e P23 os derivados com resultados mais interessantes, apresentando valores de concentração mínima inibitória de 12,5 e 25 µg/mL contra bactérias Gram-positivas e de 50 µg/mL contra E. coli. Também, os derivados P1 (amida constituída pela 8-aminoquinolina), P3 (amida constituída pela anilina), P5 (amida constituída pela metoxiamina), P6 (amida constituída pela 8-amino-5-iodoquinolina), P7 (amida constituída pela 8-amino-5-bromoquinolina), P8 (amida constituída pela 8-amino-5-metoxiquinolina), P9 (amida constituída pela inserção do anel de benzeno), P14 (β-lactama constituída pela 8-aminoquinolina), P16 (β-lactama constituída pela 8-amino-5-metoxiquinolina) e P21 (β-lactama constituída pela 8-amino-5-bromoquinolina) tiveram a sua atividade antibacteriana testada contra Helicobacter pylori. Como resultado, nenhum dos compostos apresentou atividade, o que demonstra mais uma vez que esses compostos apresentam muito pouca ou nenhuma atividade contra bactérias Gram-negativas. Mesmo sem uma atividade antibacteriana significativa, os compostos obtidos fornecem informações importantes para uma futura otimização da estrutura do ácido dehidroabietico.

A microglia são células imunológicas altamente especializadas do sistema nervoso central (SNC) e as únicas células imunológicas que residem permanentemente no SNC. Elas representam a principal população de imunidade inata dentro do SNC, compreendendo aproximadamente 10 a 15% de toda a população de células da glia. Durante o desenvolvimento e ao longo da vida, estas células desempenham uma variedade de funções importantes para o bem-estar do cérebro. Elas regulam a plasticidade sináptica, as funções homeostáticas e a atividade imunológica, sendo também capazes de desempenhar rapidamente qualquer uma dessas funções de acordo com as necessidades fisiológicas ou patológicas. Em lesões no SNC, a microglia é responsável pela fagocitose e eliminação de células mortas, microorganismos e agregados proteicos, além de outros antígenos que possam prejudicar o SNC. Em resposta a stresses ambientais ou estímulos, como agregados de proteínas, células apoptóticas e detritos de mielina, a microglia torna-se ativa e pode modular várias respostas celulares, movendo-se em direção ao local da lesão. Esta ativação, comummente designada de microgliose, pode desencadear várias respostas da microglia, incluindo um aumento na capacidade de apresentação de antígenos, a capacidade de se transformar em células altamente fagocíticas, a aptidão de regular atividades neuronais devido ao contato direto com terminações sinápticas ou a indução de mediadores imunológicos. Devido a essas diversas funções, a microglia é altamente flexível e capaz de adotar diferentes fenótipos, tal como fenótipos pró-inflamatórios e anti-inflamatórios. O fenótipo pró-inflamatório, é geralmente induzido por estímulos prejudiciais, leva a microglia a produzir e a libertar citocinas pró-inflamatórias, que estão associadas ao processo de desmielinização e degeneração neuronal. Por outro lado, o fenótipo anti-inflamatório, ocorre após a exposição a citocinas inflamatórias. Neste fenótipo, a microglia liberta vários fatores anti-inflamatórios. Essa microglia também desempenha um papel na fagocitose de detritos celulares, promovendo o processo de cicatrização regenerativa e ajudando a sobrevivência dos neurónios por meio dos fatores neurotróficos. No entanto, vários estudos sugerem que durante a doença pode ocorrer a disfunção da microglia contribuindo para os processos neurodegenerativos e acelerar a progressão de várias doenças do SNC, diminuindo a eliminação de detritos celulares e, portanto, comprometendo a conectividade cerebral. A esclerose múltipla (EM) é uma doença neuroinflamatória crónica, caracterizada pela infiltração do sistema imunológico no SNC devido à disfunção da barreira hematoencefálica (BHE). Esta resposta imunológica danifica a bainha de mielina que envolve os axónios, levando a uma desmielinização progressiva, culminando eventualmente na degeneração axonal e morte neuronal. A neuroinflamação exacerba-se como consequência da degeneração neuronal, desencadeando a produção e libertação de citocinas pró-inflamatórias pelas células gliais do SNC. Por meio da ativação pró-inflamatória, a microglia desempenha um papel crítico em vários processos, incluindo a fagocitose da mielina, apresentação de antígenos às células T e libertação de citocinas pró- e anti-inflamatórias em áreas de lesão ativa, promovendo a remielinização dos axónios. A doença neurodegenerativa mais comum é a doença de Alzheimer (DA), onde a sua patologia envolve o desenvolvimento de placas compostas pelo péotido amiloide-β (Aβ) extracelular. A presença de Aβ ativa a microglia de forma pró-inflamatória, sendo esta responsável por eliminar tanto depósitos solúveis quanto insolúveis de Aβ e prevenir a acumulação de placas existentes, minimizando assim a sua potencial neurotoxicidade. Contudo, a desregulação das vias de sinalização da microglia ao nível das sinapses leva a uma resposta neuroinflamatória inadequada e à inadequada fagocitose das placas de Aβ. Adicionalmente, a acumulação de Aβ interrompe as interações entre os neurónios e as células gliais, o que leva a uma redução das transmissões sinápticas. Para investigar o papel da microglia na patogénese das doenças neurodegenerativas, o modelo de microglia deve refletir um inicio de estado de repouso, permitindo a caracterização das reações da microglia a estímulos associados à patologia, como o Aβ e detritos de mielina. Estão descritos na literatura inúmeros estudos onde foram utilizados modelos in vivo de roedores para investigar fenótipos e funções da microglia, contudo a maioria dos ensaios clínicos baseados em animais acaba por falhar, uma vez que as assinaturas transcriptomicas da microglia são diferentes entre roedores e humanos. No entanto, estudar a microglia humana é difícil devido à raridade e à dificuldade de obtenção de células primárias a partir de tecido do SNC humano fetal ou adulto. Modelos de microglia derivadas de células estaminais de doentes surgiram como uma ferramenta aprimorada para uma tradução clínica eficaz, evitando as desvantagens das técnicas de isolamento e imortalização. No entanto, a diferenciação in vitro de células estaminais pluripotentes induzidas (iPSC) em microglias é difícil devido ao processo de reprogramação demorado e caro. A geração de microglia a partir de outras células, tais como as células mononucleares do sangue periférico (CMSP), pode ser uma possibilidade para superar as limitações existentes em outros modelos in vitro e in vivo. O objetivo do presente trabalho foi criar um modelo inovador de microglia in vitro que preservasse as características e respostas da microglia humanas, permitindo um estudo mais profundo do seu papel em doenças neurodegenerativas. As CMSP foram isoladas a partir de sangue periférico de adultos voluntários saudáveis, através de centrifugação por gradiente de densidade utilizando Ficoll. A microglia induzida (iMG) foi diferenciada a partir da cultura de CMSPs com recurso aos fatores de crescimento IL-34 e GM-CSF, durante 14 dias. Esta diferenciação foi validada pela caracterização celular onde exibiram morfologia ramificada típica de microglia em repouso e onde expressaram marcadores específicos de microglia TMEM119 e P2RY12. Esses resultados demonstram que as iMGs compartilham algumas características comuns das microglias humanas, sendo um método mais rápido do que aquele derivado das iPSCs, e adicionalmente, são obtidas recorrendo a uma amostra de sangue, que é considerado um método não invasivo amplamente aceite na investigação clínica. Seguidamente, avaliámos também se estas células poderiam ser usadas para investigar a fisiopatologia microglial associada a doenças cerebrais como a DA e a EM. O nosso estudo explorou as respostas das iMGs a estímulos associados a doenças, como Aβ e detritos de mielina (DM), para mimetizar as patologias da DA e da EM, respetivamente. Notavelmente, a iMG fagocitou eficazmente tanto o Aβ como os DM, fazendo a transição para um estado pró-inflamatório com morfologia alterada e expressão de marcadores pró-inflamatórios. Este modelo celular tem assim o potencial de elucidar vias relevantes da microglia, aprofundando a compreensão dos processos neurodegenerativos. O modelo de iMG oferece uma plataforma valiosa para investigar o impacto destas células nas condições neurodegenerativas e comparar as respostas microgliais entre condições saudáveis e patológicas, bem como o potencial para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Compreender as complexidades do comportamento da microglia e as suas interações com outras células cerebrais poderá melhorar a compreensão das doenças neurodegenerativas e abrir caminhos para tratamentos inovadores.

O relatório de estágio do Mestrado de Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa está organizado em duas partes: relatório de estágio e monografia. O estágio decorreu no Laboratório Joaquim Chaves Saúde, entre o dia 22 de abril e 11 de novembro de 2022, nos módulos Colheitas, Triagem, Hematologia Clínica, Bioquímica Clínica, Química Analítica e Radioimunoensaio e Genética. A monografia é uma revisão da literatura com o tema “Infeção por Citomegalovírus: patogénese e diagnóstico da infeção congénita”. O citomegalovírus, é a principal causa de infeções congénitas, e concomitantemente é o fator mais comum, não genético, da perda auditiva nos infantes, contribuindo, significativamente, para um atraso do neuro desenvolvimento. Representa, assim, um grave problema de saúde pública. A transmissão do referido vírus pode ocorrer por várias vias, incluindo contacto direto com fluidos corporais. A infeção congénita só ocorre após a infeção materna. O risco de aparecimento de manifestações clínicas aumenta com a idade gestacional. Na maioria dos casos é assintomática ou com sintomas inespecíficos. Mesmo a exposição prévia da mãe ao vírus (imunizada), não exclui a infeção congénita. Apesar da sua importância clínica, a infeção congénita não é, frequentemente, detetada, pois apenas 10% dos infetados apresentam manifestações clínicas ao nascimento. Para além que ainda não há nenhuma forma farmacológica disponível, a nível clínico, para a prevenção da transmissão viral. O diagnóstico pré-natal do citomegalovírus tem um papel significativo na identificação de fetos com elevado risco de desenvolvimento de sequelas. Este baseia-se na seroconversão de imunoglobulinas G, na reatividade das imunoglobulinas M e na possível avidez das imunoglobulinas G. Consoante os resultados dos testes serológicos, segue-se o algoritmo por meio de amniocenteses à 21ª semana ou por um seguimento pós-natal do feto, em particular, na deteção de DNA viral.

O presente estudo enquadra-se na Área da Supervisão Clínica do ensino de Medicina Geral e Familiar de alunos do Estágio Clínico Profissionalizante do 6.º Ano da Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa e o objecto de investigação são as representações dos Médicos de Família sobre a supervisão em ensino clínico. Por considerarmos que a inserção na actividade supervisiva exige o desenvolvimento de saberes e competências adquiridos por via da formação, este trabalho teve como finalidade identificar necessidades de formação, operacionalizadas como expressão de preocupações, dificuldades, expectativas e desejos manifestados pelos supervisores em exercício. O quadro conceptual engloba uma revisão da literatura sobre conceitos como, supervisão clínica, modelos, cenários e estilos de supervisão, ciclo de supervisão, perfil de supervisor clínico, necessidade de formação, análise de necessidades e formação contínua. Desenvolvemos um estudo exploratório descritivo de natureza qualitativa com um grupo de cinco sujeitos, Médicos de Família que participam na orientação de alunos nos Centros de Saúde a que estão afectos. Para a recolha de dados recorremos à entrevista semi-directiva como base para a construção de um questionário passível de ser aplicado à população de orientadores que colaboram no ensino clínico. Partindo do princípio que os Médicos de Família têm como principal função exercer clínica e não ensinar, o intuito do presente estudo é dotar a Faculdade de um instrumento capaz de fazer o levantamento das necessidades e preocupações / obstáculos percebidos pelos Orientadores Clínicos no desenvolvimento das suas actividades supervisivas, no sentido de poder contribuir de uma forma eficaz para a Formação de Futuros Médicos.

O uso recorrente de antibióticos, seja em ambiente hospitalar, na alimentação animal, ou mesmo na agricultura, tem desencadeado resistência bacteriana e levado a dificuldades na prevenção e tratamento de infeções bacterianas (1,2). Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), mais de 50% das infeções bacterianas, que podem levar à morte, estão associadas ao desenvolvimento de resistências, colocando assim a população em perigo (3). As infeções associadas aos cuidados de saúde (IACs) são a principal causa de morte evitável em doentes hospitalizados, sendo um problema alarmante nos dias de hoje. Dentro destas é possível destacar as infeções relacionadas com o uso de dispositivos médicos que embora salvem muitas vidas possuem superfícies propicias à colonização por microrganismos. Considerando os dados relatados, os estudos atuais devem focar-se em estratégias eficazes para prevenir a colonização das superfícies dos dispositivos médicos, a fim de evitar infeções por bactérias altamente resistentes ou mesmo multirresistentes. Diferentes estratégias têm vindo a ser desenvolvidas para melhorar as propriedades antimicrobianas dos dispositivos médicos, evitando a adesão de microrganismos e novas infeções. Estas estratégias podem ser passivas, repelindo bactérias através de modificações físicas ou químicas, por exemplo, modificando a hidrofilia das superfícies, ou abordagens ativas, que revestem superfícies com agentes antimicrobianos capazes de interferir com as células microbianas. Têm sido sugeridos revestimentos que e incluem a libertação de agentes antibacterianos (e.g., antibióticos, antissépticos, óxido nítrico e prata), estratégias de morte por contacto (e.g., compostos amónio quaternário, quitosano, peptídos antimicrobianos e enzimas) ou estratégias anti adesivas (4,5). Os biotensioativos (BT) podem ser uma alternativa interessante nesta temática uma vez que são biocompatíveis, biodegradáveis e pouco tóxicos, apresentam diferentes aplicações ambientais e atividade antimicrobianas (6,7). O principal objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de um novo biomaterial revestido com BT, indicado para a utilização como cateteres médicos que seja eficaz contra a formação de biofilmes. Neste trabalho é apresentado o uso de BT como potenciais agentes antimicrobianos contra a Staphylococcus aureus. O primeiro passo foi realizar a produção de soforolípidos (SLs) pela levedura Starmerella bombicola e da surfactina (SF) pela pela bactéria Bacillus subtilis. Os SLs foram produzidos em meio GPY suplementado com ácido oleico, obtendo-se um rendimento médio de 11,07  0,59 g/L. Para a produção de SF foram testados três meios de cultura diferentes, suplementados ou não com Mn2+, tendo as produções terminado ao fim de 72h ou 144h. Verificou-se que o rendimento foi superior (0,69 ± 0,09 g/L) quando se usou o meio MSM não suplementado com Mn2+ ao fim de 72 h. A caracterização dos BT produzidos foi realizada por cromatografia em camada fina (TLC) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa (HPLC-MS). A mistura de SLs obtida apresentou na sua composição SLs acídicos (C18:1 de, mono e di-acetilados) e lactónicos (C16:0 diacetilado, C18:0 diacetilado, C18:1 mono e diacetilado e C18:2 diacetilado). A análise das amostras da produção de SF revelou a existência de cinco congéneres de surfactina e também iturina (um BT da mesma família). Os congéneres de iturina apresentaram um tempo de retenção entre os 14,86 min e 16,42 min, com m/z [M+H]+ 1030, 1044, 1058, 1072 e 1086. Os congéneres de surfactina apresentaram um tempo de retenção entre 34,24 min e 47,80 min, sendo possível identificar o congénere C12 com m/z 995 [M+H]+ e 1017 [M+Na]+, o congénere C13 com m/z 1009 [M+H]+ e 1031 [M+Na]+, o congénere C14 com m/z 1023 [M+H]+ e 1045 [M+Na]+, o congénere C15 com m/z 1037 [M+H]+ e 1059 [M+Na]+ e por fim, o congénere C16 com m/z 1051 [M+H]+ e 1073 [M+Na]+. Através do cromatograma do ião extraído foi possível concluir que o congénere C15 é o mais característico nas amostras de SF. Para além disso, também foi possível verificar que a surfactina é produzida em maior quantidade que a iturina. Foi possível identificar um padrão de fragmentação para surfactina e iturina identificando fragmentos alifáticos e peptídicos. Pela análise HPLC-MS dos produtos eluídos na análise por cromatografia em camada fina foi possível observar que quer a SF quer a iturina estão presentes nas três manchas obtidas na TLC. Foi ainda utilizado um método de extração em fase sólida com o objetivo de separar os dois BS lipopeptídos presentes nas amostras, onde se verificou a possibilidade de separar as impurezas iniciais da amostra e obter a surfactina pura. Com o objetivo de melhorar as propriedades antimicrobianas de silicone de grau médico realizou-se a funcionalização da superfície por ligação covalente às moléculas de SF produzidas. Esta ligação covalente foi conseguida através de uma série de etapas. Primeiramente, a superfície do silicone é oxidada com uma “solução piranha” (H2SO4/H2O2) e ligada ao (3-Aminopropil)trietoxissilano (APTES). A SF ativada (com EDC e NHS) é por fim ligada através do grupo COOH ao grupo NH2 da superfície (conferido pelo APTES). Espera-se que a SF seja ligada covalentemente à superfície do silicone utilizando apenas um dos ácidos carboxílicos livres; deixando o outro grupo COOH livre para uma nova ligação amida. Desta forma, foi realizada uma tentativa para adicionar uma carga positiva à SF, a fim de aumentar a sua interação com as membranas celulares dos microrganismos. Para este efeito, o grupo COOH foi ativado com uma solução de EDC e NHS para poder reagir com o composto 4-dimetilaminobutilamina, apresentando uma amina terciária terminal, podendo assim sofrer uma reação de metilação. Esta estratégia teve como objetivo a repulsão e/ou morte de agentes patogénicos, através de interações físico-químicas ou por contato, respetivamente. Por fim, foi abordada uma outra estratégia realizando um revestimento adicional de SLs ao silicone funcionalizado com SF através de adsorção. Esta última estratégia adiciona à primeira uma abordagem de libertação de compostos antimicrobianos. Assim, foram efetuados três tipos de funcionalização: silicone funcionalizado com SF (SSF), silicone funcionalizado com derivado de surfactina carregado positivamente (SSF+) e silicone funcionalizado com SF e SLs adsorvidos (SSF+SLs). A caracterização das superfícies funcionalizadas foi efetuada através da avaliação do ângulo de contacto (i.e., molhabilidade da superfície) e por espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) com reflexão total atenuada (ATR). Os resultados demostraram uma diminuição significativa do ângulo de contato nas amostras funcionalizadas comparativamente ao controlo, indicando alterações na superfície do silicone. Obteve-se um ângulo de contacto de 72,72  1,03º para o controlo, 39,53  5,59º para a amostra SSF, 52,41  5,60º para a amostra SSF+ e por fim, 10,87  1,35º para a amostra SSF+SLs ao fim de 5 min. O revestimento do silicone com SLs foi comprovado por FTIR-ATR, exibindo bandas características dos grupos funcionais do biotensioativo e do silicone. Para atingir o objetivo final do trabalho, foi avaliada a atividade antibiofilme das amostras funcionalizadas contra S. aureus. Através da contagem de unidades formadoras de colónias (UFC), os resultados demonstraram uma redução de 1 log para as amostras SSF+, 0,5 log para SSF e 0,2 para SSF+SLs. Para além disso, quantidade de células bacterianas aderidas às amostras funcionalizadas comparativamente ao silicone não tratado foi avaliada por microscopia eletrónica de varrimento (MEV). Em resumo, neste trabalho realizou-se a produção, caracterização e funcionalização de biotensioativos, especificamente surfactina e soforolípidos, em superfícies de silicone de grau médico para prevenir a formação de biofilmes de S. aureus, sendo a amostra SFF+ a que demonstrou maior sucesso na redução do biofilme. Este trabalho demonstra mais uma vez que os biotensioativos podem representar uma abordagem muito importante na prevenção da formação de biofilme em superfícies de dispositivos médicos e infeções relacionadas com estes.

In social psychology research, there are several kinds of stereotypical materials that can be used – faces, videos, lists of words, attributes. However, when it comes to behavioral sentences, there is a lack of pre-tested racial stimuli available in the literature. To fill the gap, this paper provides two lists of 154 short behavioral sentences, with stereotypicality (white to black) and valence (negative to positive) ratings. The first list was pre-tested with an American sample (Study 1), while the second list was pre-tested with a European Portuguese sample (Study 2). Importantly, this paper focuses on the broader meaning of black stereotypes’ and not just the narrower definition of the African American stereotype, whose differences are discussed. T-tests identified 73 and 118 stereotypical behavioral descriptions, for future use, respectively for the American and European Portuguese samples. Additional comparisons within and between samples are also provided. Full behavioral descriptions, along with pertinent statistical data, are available to the reader, as a useful working instrument for future research.

A colangite esclerosante primária (do inglês Primary Sclerosing Cholangitis ou PSC) é uma doença crónica do fígado caracterizada por inflamação, esclerose e, por fim, destruição dos canais biliares dentro e fora do fígado. A doença inflamatória intestinal (do inglês Inflammatory Bowel Disease ou IBD) é também uma doença crónica caracterizada por uma inflamação recorrente do trato gastrointestinal. A PSC-IBD é uma forma única de IBD que está frequentemente associada a uma interação complexa de fatores genéticos, imunológicos e ambientais, que contribuem para a patogénese da IBD. Descobertas científicas recentes apontaram os microRNAs, particularmente o miR-21, como fundamentais no controlo da expressão genética ligada à progressão da IBD. Este miRNA oncogénico parece ser central no ajuste da reação inflamatória e na adaptação dos tecidos. Estudos preliminares indicaram níveis elevados de miR-21 em amostras de soro e de fezes de doentes com PSC-IBD, em contraste com doentes apenas com IBD. Além disso, verificou-se um aumento notável de marcadores como TWIST1, COX2 e CCL2, todos indicativos de atração de macrófagos nos tecidos do cólon de doentes com PSC-IBD. O nosso estudo investigou a forma como o miR-21 circulante pode moldar o microambiente tumoral no intestino, principalmente através da sua influência no movimento e recrutamento de macrófagos. Inicialmente, examinámos o impacto do miR- 21 nas características das células dos colonócitos (HCT116, HT29) e dos macrófagos (J774A.1, MDDC). Os nossos resultados revelaram que o miR-21, por si só ou em conjunto com fatores inflamatórios, pode influenciar genes cruciais para a divisão celular, crescimento, tumorigénese e inflamação, tais como BMP4, KRT20, IL-8 e CCL2. Os efeitos do miR-21 nos níveis proteicos em colonócitos e macrófagos, particularmente de PTEN, STAT3 e NLRP3, foram validados através de Western blotting. Adicionalmente, utilizando organóides intestinais de ratinho, observámos que agentes inflamatórios, incluindo IL-8, LPS e TNF-, modificavam genes ligados às características das células estaminais, à inflamação e à comunicação intercelular. Em conclusão, os nossos resultados sugerem que o miR-21 circulante pode perturbar a diferenciação dos macrófagos, recapitulando a reação imunitária observada na inflamação do cólon relacionada com a PSC-IBD. O nosso estudo lança luz sobre o papel fundamental do miR-21 no recrutamento e atividade dos macrófagos, influenciando assim potencialmente o desenvolvimento do cancro.

O melanoma é um tumor maligno que resulta da multiplicação incontrolável de melanócitos. Apesar de representar a minoria dos cancros cutâneos, é responsável pela maioria das suas mortes (1). O método gold-standard para o diagnóstico definitivo do melanoma é a biópsia com posterior relatório anatomopatológico (2). De forma a estadiar o melanoma, neste relatório devem ser incluídas informações a respeito da espessura do tumor primário, presença ou não de ulceração, presença ou não de metástases microssatélite e o estado das margens (livres ou não). Existem também variáveis prognósticas que auxiliam na tomada de decisão entre as quais o subtipo histológico, o número de mitoses por milímetro quadrado (mm²), a presença ou não de invasão linfovascular, de neutropismo e de regressão (3). No Instituto Português de Oncologia Francisco Gentil (IPOFG) é feita uma reavaliação de lâminas a todos os doentes que sejam referenciados com um diagnóstico de melanoma. Assim, o objetivo deste trabalho final de mestrado foi o de aferir a importância terapêutica e prognóstica da revisão de lâminas em doentes com melanoma. Para tal foi feito um estudo retrospetivo através da análise dos processos clínicos e posterior comparação dos relatórios anatomopatológicos exteriores a esta instituição e da respetiva revisão de lâminas. Foi feita também uma revisão bibliográfica da literatura referente à epidemiologia, fatores de risco, diagnóstico, estadiamento, tratamento, prognóstico e mortalidade nos doentes com melanoma.

O sarcoma de Kaposi (SK) é uma neoplasia multifocal originada de células endoteliais infetadas por Vírus Herpes Humano 8 (VHH8). A incidência e a gravidade do SK associado à infeção por VIH têm vindo a diminuir desde a introdução da terapêutica antirretroviral combinada (TARVc). Os doentes com SK geralmente apresentam uma baixa contagem de células CD4 (<150 células/mm3) e uma carga viral elevada (>10.000 cópias/mL), tendo esta entidade sido reconhecida desde há muito tempo como uma doença definidora de SIDA, tal como o linfoma não-Hodgkin e o carcinoma cervical. Contudo, estão descritos casos de doentes com SK cuja contagem de células CD4 é elevada. Este trabalho tem como principal objetivo a realização de uma revisão sobre SK e as suas variantes epidemiológicas, com especial destaque para o SK no contexto da infeção por VIH, abordando as características associadas ao perfil típico dos doentes e confrontando-as com um caso atípico de SK disseminado num doente naïve para TARVc com diagnóstico inaugural de VIH1 com contagem de linfócitos T CD4 elevada. A apresentação desta neoplasia neste cenário permite concluir que uma contagem elevada de CD4 não exclui o SK dos diagnósticos diferenciais das doenças associadas à infeção por VIH.

Liver cancer is globally the third leading cause of death from cancer. Hepatocellular carcinoma (HCC) develops in patients with underlying liver disease. The fraction of HCC attributed to nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) shows an accelerated increase in the last decades, being already responsible for 15% of all HCC cases. Similar to other causes of liver cirrhosis, patients with NAFLD-associated cirrhosis should be enrolled in HCC-screening programs, yet these patients are under-screened, and currently are less than half likely to be proposed for HCC screening as compared to patients with HCV-associated cirrhosis. NAFLD-associated HCC has the peculiarity of occurring in precirrhotic phases in 20-50% of the cases. Currently, HCC screening in precirrhotic NAFLD patients is not routinely recommended, since the risk of developing HCC is very low. However, because NAFLD affects one-third of the worldwide population, noncirrhotic NAFLD already accounts for 6% of HCC cases. As such, it is pressing to develop stratification tools, in order to personalize the individual risk of HCC development in a patient with NAFLD, allowing precision HCC-screening programs. This review summarizes the epidemiology of NAFLD-associated HCC with a critical analysis of current HCC-screening recommendations.

O cancro da mama (BC) é uma doença multifacetada com vários subtipos sendo um desafio significativo para a saúde global. Entre estes, o BC luminal B destaca-se pela sua natureza agressiva. A proteína quinase de adesão focal (FAK) encontra-se aumentada no BC desempenhando um papel crucial na tumorigénese, influenciando o microambiente tumoral (TME). A proteína quinase prolina rica em tirosina 2 (PYK2) pode compensar o papel da FAK nas metástases e na migração celular através de várias vias de sinalização. A imunoterapia, com foco nas vacinas contra o cancro, surgiu como uma abordagem terapêutica valiosa capaz de mobilizar o sistema imunológico para eliminar seletivamente as células tumorais. No entanto, a eficácia da imunoterapia é prejudicada pela presença de células supressoras derivadas da linhagem mielóide (MDSC), que contribuem para um TME. O objetivo deste projeto é explorar o potencial sinérgico dos inibidores das MDSC e FAK/PYK2 em combinação com nanovacinas direcionadas às células dendríticas (DC), contra o BC luminal B. As nossas análises revelam expressões elevadas da FAK e da sua forma fosforilada (pFAK) em células E0771 luminal B. Usando um modelo de esferóides 3D heterotípico que reproduz a complexidade do TME, observámos que os fibroblastos NIH/3T3 e as células endoteliais 2H-11 localizam-se no centro do esferóide, sendo as células tumorais responsáveis pela disseminação. Para o desenvolvimento de esferóides a partir do TME E0771, selecionámos um tumor com tamanho médio devido à considerável infiltração de células imunológicas, menor vascularização e presença de MDSC. No ensaio de co-cultura, a inibição combinada do ibrutinib e do PF-562271 juntamente com os esplenócitos de um rato vacinado, levou a restrições significativas no crescimento do núcleo do esferóide e na capacidade de disseminação das células tumorais. Assim sendo, a combinação do ibrutinib e do PF-562271 com nanovacinas direcionadas a células dendríticas revela-se uma estratégia robusta e promissora para o cancro da mama ao modular o ambiente tumoral e impulsionar as respostas imunitárias contra o tumor. Nós planeamos validar o efeito sinérgico in vivo obtido desta dupla combinação ex vivo utilizando células imunitárias recolhidas de ratos vacinados, com o objetivo de obter um controlo mais eficaz da proliferação das células do BC, modulando a infiltração das células imunes efetoras.