Repositório RCAAP

MASLD prevalence is growing towards the leading cause of end-stage liver disease. Up to today, the most effective treatment is weight loss. Weight loss interventions are moving from lifestyle changes to bariatric surgery or endoscopy, and, more recently, to a new wave of anti-obesity drugs that can compete with bariatric surgery. Liver-targeted therapy is a necessity for those patients who already present liver fibrosis. The field is moving fast, and in the near future, we will testify to a disruptive change in MASLD treatment, similar to the paradigm-shift that occurred for hepatitis C almost one decade ago with direct antiviral agents.

A temática da Produção e Consumo Sustentáveis (PCS) emerge, ao longo da última década, como preocupação central nas agendas políticas nacionais e internacionais. Apesar de os debates políticos sobre esta matéria estarem patentes em vários relatórios das Nações Unidas, da OCDE e do Conselho Empresarial Mundial para o Desenvolvimento Sustentável, publicados em meados dos anos 90 do século XX, a atenção política e mediática sobre este tema catapultou com a Cimeira Mundial sobre Desenvolvimento Sustentável de 2002, em Joanesburgo. Nesta cimeira, os delegados dos vários países da ONU solicitaram, ao Programa das Nações Unidas para o Ambiente e ao Departamento das Nações Unidas para os Assuntos Económicos e Sociais, que se dedicassem a desenvolver um Plano Decenal de Programas sobre Produção e Consumo Sustentáveis. Esse plano foi posteriormente desenvolvido, no âmbito do Processo de Marraquexe (2003-2011), tendo sido adotado na Conferência das Nações Unidas sobre Desenvolvimento Sustentável (Rio + 20) em 2012 (Geeis et aI., 2015). Foi também nesta conferência que se lançaram as bases para a preparação de um conjunto de metas que vieram a consagrar-se nos 17 Objetivos de Desenvolvimento Sustentável (ODS), adotados em setembro de 2015, no âmbito da apresentação da Agenda 2030 da ONU. Os ODS vieram, assim, substituir os anteriores oito Objetivos de Desenvolvimento do Milénio, em vigor entre 2000 e 2015.

O sulfureto de hidrogénio (H2S) regula diversos processos fisio(pato)lógicos, exercendo o seu papel de sinalização numa estreita gama de concentrações, mantida pelas enzimas de síntese e destoxificação. Várias patologias estão associadas ao metabolismo disfuncional do H2S, nomeadamente à expressão das enzimas do seu metabolismo. Menos informação é conhecida acerca da regulação por modificações pós-traducionais (PTMs). O facto de estas enzimas possuírem um grande número de resíduos de cisteína não envolvidos em pontes dissulfureto sugere um papel regulador destes como interruptores redox. Este projeto visa estudar PTMs oxidativas tendo como alvos resíduos de cisteína, especificamente da dioxigenase de persulfureto (PDO) humana. A PDO wild-type recombinante e variantes com substituições Cys→Ser foram produzidas e caracterizadas por técnicas biofísicas como dicroísmo circular, differential scanning fluorimetry e dynamic light scattering, para analisar perturbações estruturais das substituições e/ou PTMs oxidativas. Observou-se que, embora a estrutura α-helical da PDO pareça inalterada, as substituições levaram à diminuição da estabilidade térmica e aumento da propensão para agregação, dependendo da variante. Medições de atividade por respirometria de alta resolução revelaram que a maioria das variantes estavam cataliticamente afetadas, provavelmente associado à exposição dos resíduos ao solvente e à proximidade ao Fe catalítico e aos locais de ligação do substrato. Utilizando as mesmas metodologias, observou-se que a s-cisteinilação afetou globalmente a estabilidade da PDO e, apesar de diminuir a atividade máxima, eliminou o mecanismo de auto-inibição, proporcionando assim estabilidade cinética. Relativamente à inibição observada na s-nitrosação, permanece incerto se este efeito é consequência da modificação ou do óxido nítrico liberado pela reação com o substrato persulfureto de glutationa. Ensaios de cristalização foram realizados para tentar obter informações estruturais detalhadas. No geral, os resultados relatados nesta dissertação apontam para um papel regulador dos resíduos de cisteína na PDO humana, com diferentes consequências possíveis sob diferentes condições fisiológicas.

O estudo que apresentamos partiu de uma vontade pessoal em tentar perceber que concepções têm os futuros professores de 1º ciclo do Ensino Básico acerca da planificação quando estão a concluir a sua formação inicial. O estudante ao terminar a sua formação inicial e com a entrada na carreira docente é confrontado com a realidade da profissão docente e debate-se com dificuldades e expectativas próprias de quem finalizou uma etapa e está prestes a iniciar outra mais aliciante. O problema de investigação que nos propusemos foi o de saber o que têm em mente os futuros professores quando planificam, como elaboram os seus planos, em que pensam quando planificam e que aspectos têm em consideração quando elaboram o plano. Da questão de partida resultaram os seguintes objectivos de investigação: 1) Perceber o que pensam, e o que têm em mente, os futuros professores, quando elaboram a sua planificação; 2) Identificar representações dos futuros professores acerca dos trabalhos de planificação e a sua implicação no processo de ensino-aprendizagem; 3) Inferir opiniões dos futuros professores acerca da formação inicial/preparação para o campo da planificação. Optámos pela abordagem qualitativa socorrendo-nos do uso da técnica da entrevista semi–directiva, para recolha de dados e da análise de conteúdo, para inferirmos uma interpretação de resultados decorrentes dos discursos dos sujeitos. Inferimos que a formação inicial que estes futuros professores receberam no campo da planificação foi nula ou escassa em todos os aspectos. Inferimos que a planificação é considerada muito importante e de grande utilidade, como meio de orientação para o professor, como guia de diferenciação pedagógica e como meio de autonomia. Contudo a planificação apenas é considerada relevante no estágio e para os professores principiantes.

People usually have less accurate memory for cross-race (CR) than for same-race (SR) faces, a robust and consequential phenomenon known as the Cross-Race Effect (CRE). In an influential paper, Hugenberg et al. (2007) showed that the CRE can be eliminated when participants are instructed to individuate CR faces in order to avoid displaying this effect. This finding has received widespread attention, and many studies have attempted to replicate it, with mixed results. In the present research, we attempted to replicate the effect of the individuation instructions in eliminating the CRE (Hugenberg et al., 2007) in two pre-registered experiments in two different cultures – the United States and Portugal. The results of both experiments found no evidence that instructing participants to individuate CR faces eliminates or even attenuates the CRE. Additionally, we also examined and failed to find support for the idea that these individuation instructions are more effective for the participants who report greater contact with CR faces (Young & Hugenberg, 2012). Finally, we also did not find evidence that the cultural setting moderates the effect of the individuation instructions of the CRE. We critically discuss the potential reasons for the lack of impact on the individuation instructions in the CRE and its implications for a prominent motivational account of this effect.

Introdução: A Lesão Renal Aguda (LRA) está descrita como fator de gravidade em diversas doenças, incluindo em doentes com doença de coronavírus 2019 (COVID- 19). O objetivo deste estudo é avaliar a incidência, a letalidade e fatores preditores de LRA em doentes internados por COVID-19 numa unidade hospitalar. Métodos: Foram selecionados doentes adultos, COVID-19 positivos, identificados por teste Polymerase Chain Reaction ou por pesquisa de antigénio através de uma amostra de exsudado nasofaríngeo. O diagnóstico de LRA foi feito através da variação dos valores de Creatinina Sérica (CrS), de acordo com os critérios KDIGO. Resultados: Foram incluídos no estudo 239 doentes, internados no Hospital Beatriz Ângelo, no mês de janeiro de 2021, dos quais 62 (25,94%) com LRA. Foram encontradas correlações entre LRA e a idade, o índice de Barthel, o pH, e o número de leucócitos/mm3 no hemograma da admissão. Observou-se que a LRA tem um elevado valor prognóstico nos doentes, uma vez que a letalidade da doença é maior nos doentes com LRA. Conclusão: A possibilidade de LRA num doente com COVID-19 deverá ser tida sempre em conta, uma vez que uma abordagem precoce, com a identificação de doentes de risco para desenvolver esta patologia, quer pelos fatores demográficos, quer por fatores laboratoriais, são essenciais para diminuir a letalidade associada à COVID-19. Este estudo permite uma melhor abordagem e compreensão dirigida à população Portuguesa para o futuro.

Esta Newsletter (NL) resulta de uma parceria entre o Instituto de Saúde Baseada na Evidência e a Cochrane Portugal, e tem como objectivo disponibilizar informação sobre áreas importantes para a prática clínica, com base na melhor evidência científica disponível. São incluídos estudos relevantes, criticamente avaliados pela sua validade, importância dos resultados e aplicabilidade prática, resumidos numa óptica de suporte à decisão. É dada prioridade a estudos de causalidade incluindo-se ainda, quando justificado, estudos qualitativos e metodológicos, assim como revisões científicas. O conteúdo da NL é da exclusiva responsabilidade do(s) seu(s) autor(es).

No summary/description provided

A esclerose lateral amiotrófica (ELA) é uma doença neurodegenerativa progressiva caracterizada pela perda gradual dos neurónios motores (NMs) superiores e inferiores do córtex, tronco encefálico e da medula espinhal. Esta perda resulta numa paralisia muscular e, eventualmente, na morte dos pacientes devido a insuficiência respiratória. Hoje em dia sabe-se que não são os NMs, mas também as células gliais, nomeadamente a microglia, desempenha um papel importante na patofisiologia da ELA. A maioria dos casos desta doença são esporádicos, no entanto, aproximadamente 5 a 10% dos casos têm origem genética. Embora a principal causa da ELA esporádica ainda não ser conhecida, fatores como deficiências no sistema imunitário, exposição tóxica, disfunção mitocondrial ou toxicidade de glutamato podem contribuir tanto para o início como para a progressão da doença. Atualmente, existem apenas alguns fármacos para tratamento da ELA, sendo que na Europa o Riluzole é a única terapêutica aprovada e os fármacos disponíveis apenas melhoram a esperança de vida dos doentes em apenas alguns meses. Existe assim uma urgência na necessidade de desenvolver novas estratégias terapêuticas eficazes, bem como estratégias dirigidas a alterações que sejam específicas de cada paciente em diferentes estádios de progressão da doença. Nesse sentido, os microRNAs (miRNAs) surgem como uma aposta promissora, uma vez que podem ser alvo de modulação específica. Os miRNAs são pequenos RNAs não codificantes que interferem com processos transcricionais, translacionais ou epigenéticos através do reconhecimento de regiões cognatas e controlo da expressão de genes. Os miRNAs podem ter um efeito local na célula onde são produzidos, mas também a nível parácrino, uma vez que as células libertam miRNAs para o seu secretoma, onde circulam como moléculas solúveis ou como carga nas suas vesiculas extracelulares, como é o caso das pequenas vesículas extracelulares (de 100-200 nm de diâmetro), aqui referidos como exossomas. Estes exossomas, após absorvidos pelas células alvo, são capazes de assumir o controlo da disponibilidade de RNA e da tradução de proteínas, transformando os miRNAs em alvos promissores para abordagens terapêuticas, uma vez que a sua modulação pode potencialmente beneficiar tanto as células de origem, como as células vizinhas. O nosso grupo de investigação demonstrou que alguns dos miRNAs associados à inflamação (inflamma-miRNAs), nomeadamente o miR-155, miR-21, miR-146a, miR-125b e miR-124 estão alterados em modelos celulares (NMs, microglia e astrócitos) que mimetizam a ELA, bem como no modelo de murganho com sobre-expressão da superóxido dismutase-1 com a mutação G93A. A diferente expressão destes miRNAs poderá estar associada a diversos fenótipos e funções da microglia, contribuindo para o desenvolvimento de neuroinflamação característica da ELA. Em particular, foi demonstrado que o miR-124 está aumentado em NMs com a mutação SOD1 (mSOD1), bem como nos seus exossomas. Foi também observado que restauração dos níveis normais de miR-124 contribui para o restabelecimento da função mitocondrial, axonal e sináptica no NMs, bem como para a produção de um secretoma com efeitos benéficos na microglia, em culturas organotípicas de medula espinhal do ratinho mSOD1 e no próprio animal em estadio inicial da doença. Estes dados apontam o potencial da modulação deste miRNA como estratégia terapêutica. Mais recentemente, foi também observado que a restauração dos níveis normais de miR-125b na microglia mSOD1 promove a recuperação de funções celulares, incluindo a capacidade fagocítica e um equilíbrio homeostático inflamatório. Para além disso, o nosso grupo evidenciou que a microglia envelhecida é menos responsiva ao péptido beta-amilóide em comparação com a microglia jovem, apresentando uma menor capacidade fagocítica, migração microglial e propriedades autofágicas, bem como um aumento de marcadores associados à senescência e aumento da expressão de miR-146. O nosso grupo demonstrou que exosomas derivados de NMs NSC-34, ricos em miR-124, têm a capacidade de desencadear alterações nas características fenotípicas da microglia, podendo oferecer vantagens na inibição da ativação microglial e dos seus efeitos associados a degeneração dos NMs associados a esta doença. Neste sentido, será importante perceber de que forma as funções da microglia mSOD1 poderão ser recuperadas na presença de modulação de miRNAs específicos. Outra potencial estratégia terapêutica para ELA poderá ser a utilização de inibidores de proteínas cinases, mais especificamente a proteína caseína quinase 1 (CQ1). A CQ1 foi a primeira cinase reconhecida a fosforilar a proteína de ligação ao DNA TAR43 (TDP-43). De facto, estudos recentes demonstram que inibidores, nomeadamente o IGS-2.7 e o IGS-2.37, são capazes de reduzir a fosforilação de TDP-43, e que o IGS-2.7 teve a capacidade de diminuir a reatividade das células astrogliais e microgliais bem como a fosforilação do TPD-43, além de preservar os NMs. Curiosamente, dados preliminares do nosso grupo indicam que o composto IGS-2.7 é capaz de modular a expressão de miR-124 e miR-125b na microglia espinhal isolada de murganhos (dados não publicados), o que também pode constituir uma abordagem promissora a ser considerada para o direcionamento de miRNA na ELA. Desta maneira, este presente estudo visa demonstrar os efeitos da modulação dos níveis da expressão de miR-124 e miR-125b na recuperação da função da microglia, bem como uma comparação entre diferentes estratégias de modulação de miRNA na microglia mSOD1. Para tal, utilizámos culturas primárias de microglia obtida da medula espinhal de murganhos que sobre-expressam mSOD1. Estas culturas foram incubadas com o inibidor IGS-2.7 numa primeira fase, e com exossomas derivados de NMs da linha celular NSC-34, quer WT ou mSOD1, numa segunda fase do trabalho. Em paralelo, os NMs WT foram sujeitos a uma transfeção de forma a conterem no seu cargo anti-miR-124. As incubações na microglia foram realizadas aos 2 dias in vitro (DIV), representando a microglia jovem, ou aos 16 DIV, representando a microglia envelhecida. Relativamente ao efeito do inibidor IGS 2.7, a incubação com o composto reduziu a expressão de miR-124/miR-125b na microglia mSOD1 com 2 e 16 DIV. O IGS-2.7 também foi capaz de reverter os níveis de apoptose tardia, bem como a perda da capacidade fagocítica e o aumento da expressão de TIMP2 e TNF-α na microglia mSOD1 jovem (2 DIV). Por outro lado, o composto IGS 2.7 foi capaz de recuperar o aumento da expressão de Arginase-1 observada nas células mSOD1 envelhecidas (16 DIV). Em seguida, avaliámos os efeitos dos exossomas proveniente de NMs WT/mSOD1 na microglia WT. A incubação com exossomas de NMs de mSOD1 diminuiu a expressão de miR-125b e aumentou os níveis de miR-124 em microglia WT jovem, enquanto apenas aumentou a expressão miR-125b em microglia envelhecida. Quanto aos exossomas de NMs-WT carregados com anti-miR-124, a sua incubação diminuiu a expressão de miR-124 e elevou o miR-125b na microglia mSOD1 jovem, enquanto a sobre-expressão de miR-125b em microglia mSOD1 envelhecida foi restaurada para níveis semelhante aos encontrados nas células WT. Os exossomas carregados com anti-miR-124 também parecem ter um papel imunorregulador, como sugerido pela diminuição da expressão de Arginase-1/iNOS e aumento de TREM2/ TMEM119 em microglia mSOD1 jovem, e ligeira diminuição de TNF-α e aumento de TMEM119 em microglia mSOD1 envelhecida quando as células são incubadas com estes exossomas. Em conclusão, propomos que a sobreativação da microglia mSOD1 pode ser revertida, pelo menos em parte, pela modulação do miR-124 e que os benefícios do inibidor da CK1 podem ser parcialmente devidos à modulação do miR-124 e do miR-125b.

A sobrequalificação percebida é alvo de debate ao longo dos anos. Apesar de relevante no contexto das migrações, devido aos riscos da experiência migratória, os estudos que a focam são escassos. O estudo 1 valida para o contexto português o Questionário de Sobrequalificação Cognitiva Percebida (QSCP) através de uma amostra de conveniência (N=142). O estudo 2 com abordagem qualitativa explora as relações entre sobrequalificação percebida, satisfação no trabalho e justiça organizacional entre imigrantes e não-migrantes, através de entrevistas semiestruturadas (amostra de conveniência, N=27). Os resultados sugerem uma estrutura unifatorial adequada do QSCP, com boa consistência interna e validade convergente e discriminante. No estudo 2, os imigrantes apresentam mais satisfação profissional quando existe sobrequalificação percebida voluntária, se identificam com o país de acolhimento e residem nele há mais de 10 anos. Estudos futuros devem explorar o modelo teórico proposto para o contexto das migrações, e respetivos moderadores.

No summary/description provided

A alface é um vegetal amplamente consumido, disponível ao longo do ano, possui uma validade curta resultando num desperdício significativo de alimentos. No entanto, contém um alto teor de compostos bioativos com benefícios para a saúde, com vasta aplicabilidade farmacêutica quando extraídos. A radiação ionizante, especialmente o tratamento com feixe de eletrões, é uma tecnologia ecológica com capacidade de aumentar a extração de compostos bioativos de frutas, plantas e vegetais. Neste estudo, explorámos a viabilidade do feixe de eletrões de baixa energia (FEBE) e feixe de eletrões de alta energia (FEAE) como um tratamento de melhoria de estabilidade e extração de conteúdo bioativo em alface extraída com etanol 80% e água num intervalo de tempo pós-extração. Além disso, otimizámos métodos de extração para recuperar os principais compostos na alface. Analisámos amostras de alface colhidas em três estações distintas (verão, outono e inverno) irradiadas com FEBE e FEAE com diferentes doses de irradiação (1 a 4 kGy) para obter melhores condições de extração de compostos bioativos naturais. Os métodos de avaliação realizados consistiram na medição do conteúdo total fenólico e de flavonoides e na avaliação da atividade antioxidante, anti proliferativa, antidiabética e antimicrobiana. O outono foi a melhor estação de colheita de alface conforme o conteúdo bioativo. Quanto ao efeito do tratamento com feixe de eletrões, os extratos de etanol da alface tratada com 4_kGy usando FEBE indicaram o maior aumento na extração de polifenóis (18,9 ± 0,6_mg_GAE/g_matéria seca) e de flavonoides (31 ± 2 mg_CAE/g_matéria seca), proporcionaram também aumento na atividade antioxidante através do ensaio FRAP (0,2323 ±_0,0005_mmol FSE/g matéria seca). Verificou-se também nos extratos aquosos um efeito anti-proliferativo e um alto potencial antidiabético. Por fim, nenhuma atividade antimicrobiana foi detetada nos extratos de alface para os microrganismos estudados. O FEBE foi destacado como uma potencial tecnologia, aumentando a disponibilidade de ingredientes bioativos para indústrias farmacêuticas e alimentares.

Endoftalmite é uma doença potencialmente devastadora que envolve as estruturas internas do olho. É classificada em exógena, o subtipo mais comum, e em endógena, com base na origem da infeção. A endoftalmite exógena é causada por inoculação direta do olho por microorganismos do meio externo, e surge mais frequentemente como uma complicação de uma cirurgia oftalmológica, injeções intravítreas ou de trauma penetrante, enquanto a endoftalmite endogena é causada pela propagação hematogénica de microorganismos de outras localizações no organismo. Tem um diagnóstico clínico e quando suspeitada, amostras devem ser obtidas de forma a isolar o microorganismo causador em coloração gram, culturas e por polymerase chain reaction (PCR). O passo mais importante do tratamento é a administração direta intraocular de antibióticos. Antibióticos de largo espectro com cobertura de microorganismos gram-positivos e gram-negativos devem ser iniciados após a obtenção das amostras, e subsequentemente ajustados de acordo com o antibiograma. Apesar do tratamento adequado, o prognóstico a nível da acuidade visual é reservado e por isso medidas asséticas de prevenção são importantes. A iodopovidona é a única intervenção pré-operatória que permite a redução do risco da taxa de endoftalmites. No que diz respeito à cirurgia de catarata, a profilaxia com administração de 1mg de cefuroxime no final do procedimento parece ter benefício na redução da incidência de endoftalmites.

No summary/description provided

A formação contínua de professores é uma área sobre a qual a investigação se debruçou por inúmeras vezes, produzindo diversificados resultados. As estratégias e recursos formativos não marcam pela diversidade e nelas as T.I.C. têm sido muito pouco exploradas. A formação contínua revela dificuldades em conseguir preparar os professores para utilizarem as T.I.C., quer em sala de aula quer em momentos de formação. O nosso projeto pretende contribuir para uma mudança na forma como as T.I.C. são entendidas na formação contínua de professores. Para tal desenvolvemos um projeto centrado na criação e animação de um fórum, aberto à participação de um grupo de professores em exercício. Procedemos à análise das participações e, no sentido de conhecermos a opinião dos sujeitos envolvidos, nomeadamente o seu grau de satisfação em participar no fórum e a sua perspetiva quanto ao contributo que as T.I.C. podem dar nas formações contínuas de professores. Optou‐se por seguir uma investigação inscrita no paradigma interpretativo, seguindo numa metodologia mista: recorremos à análise de conteúdo e os dados obtidos por questionário foram auferidos por análise estatística simples. Os resultados que daqui advieram, mostram que as novas tecnologias são uma estratégia e um recurso válido na dinamização de ações formativas; e que os professores estão motivados e preparados para realizar formação contínua onde as T.I.C. são a estratégia formativa e o fórum o recurso formativo. Também demonstrámos que os professores têm ao seu dispor um dispositivo formativo que vai ao encontro das exigências e das inovações que a sociedade da informação introduz. Embora este projeto apresente algumas limitações, concluímos que conseguimos providenciar um conjunto de pistas e desafios que esperamos que sejam aceites e posteriormente utilizados em estudos futuros, sempre com o intuito de melhorar e atualizar a formação contínua de professores por via da valorização das tecnologias da informação e comunicação.

A descoberta de novos medicamentos tem-se centrado predominantemente num subconjunto limitado de alvos do proteoma humano, representando apenas 15% do total de proteínas. Isto acontece porque os cientistas apenas se focam num pequeno conjunto de proteínas, de forma a evitar alvos e vias de sinalização para as quais ainda pouco se conhece. Consequentemente, existem profundas lacunas de identificação e validação de novos alvos farmacêuticos, o que leva a que cerca de 85% dos alvos associados a doenças permaneçam inexplorados. De forma a contribuir para melhorar o conhecimento nesta área, esta tese realiza uma série de estudos computacionais com o principal objetivo de identificar e analisar sítios de ligação de proteínas de forma a facilitar a descoberta de novos alvos cuja função possa ser modulada. Para atingir estes objetivos, este projeto categoriza as proteínas em três grupos distintos, com base no trabalho de Oprea e colaboradores, bem como em dados dos bancos de dados UniProt, ChEMBL e Protein Data Bank (PDB). O primeiro grupo contém proteínas para as quais existem medicamentos já aprovados ou que se encontram em ensaios clínicos, classificando-os como “Alvos Bem Conhecidos” (WKT). O segundo grupo contém proteínas para as quais ainda não foram identificados compostos ativos, designados como “Alvos Yet NOT druggable” (YNOTs). Por fim, o último grupo contém alvos que apresentam desafios para modelação, que classificamos como de “Difícil Obtenção de Efeito Farmacológico” (DOPE). A abordagem analítica utilizada envolve a identificação de cavidades para cada um dos PDB’s associados aos três grupos. Para isso, utilizámos o software CAVIAR, que possibilita a identificação de cavidades nas proteínas, incluindo os seus sítios de ligação. Posteriormente, realizámos uma procura por semelhança de cavidades com o grupo WKT. Os alvos mais promissores encontrados no grupo dos YNOTs foram, a estrutura cristalina da isobutiril-CoA desidrogenase complexada com o seu substrato e a estrutura cristalina da decarboxilase do ácido UDP-glucurónico humano. Para o grupo DOPE, o alvo mais promissor encontrado foi a subunidade delta da fosfodiesterase 6 (PDE6δ). Além disso, obtivemos um conjunto de 178 proteínas que consideramos como promissores alvos farmacológicos.

As alterações no uso do solo têm como consequência a substituição de áreas permeáveis para impermeáveis, aumentando o escoamento superficial na bacia hidrográfica. Estes episódios podem ter influência natural e humana, sendo esta última o ponto central deste trabalho, o qual tem como principal objetivo estudar as dinâmicas de alteração do uso e ocupação do solo ocorridas nos últimos 30 anos e a sua influência na ocorrência de cheias, na bacia hidrográfica do rio de Loures. Durante o desenvolvimento do projeto foi essencial a modelação hidrológica com o programa HEC-HMS onde, a partir de cenários de precipitação intensa, e por meio de métodos cinemáticos, estimaram-se os caudais de ponta de cheia, considerando o impacto das dinâmicas territoriais na impermeabilização do solo, conseguindo assim aferir-se a sua influência no que toca à infiltração da água e escoamento superficial, com reflexo nos picos de cheia e nos caudais específicos. Pela análise dos resultados obtidos através da modelação hidrológica, verificamos através dos hietogramas e hidrogramas de cheia, as perdas iniciais por infiltração, bem como os caudais de ponta de cheia e os caudais específicos de cada sub-bacia. Entre 1995 e 2018, a região que engloba a bacia do rio de Loures sofreu alterações significativas, no que toca ao uso e ocupação do solo, tendo-se verificado um aumento de 9,6 % de áreas artificializadas. Registou-se também o aumento de caudal específico na secção crítica meridional da bacia hidrográfica, na ordem dos 0,28 m3/s. Tendo a situação deste local piorado, com o aumento significativo da artificialização, sobretudo em tecido urbano, durante o período de 1995 até 2018, conclui-se pela ocorrência do agravamento das condições de escoamento e, consequentemente pelo aumento da propensão para ocorrência de cheias na bacia hidrográfica do rio de Loures.

O fígado gordo não-alcoólico (FGNA) tornou-se uma condição hepática crónica prevalente devido à epidemia global de obesidade, carecendo de opções farmacológicas. Este estudo foca-se na intricada patogénese do FGNA, enfatizando o papel do TGR5, um recetor com implicações no metabolismo glicolipídico, processos pró-inflamatórios e termogénese. A nossa hipótese explora se a ativação do TGR5 em adipócitos modula a libertação de vesículas extracelulares (VEs), com efeitos funcionais no fígado para atenuar o FGNA. Iniciámos caracterizando estruturalmente o TGR5 e realizando uma campanha de screening virtual para identificar novos agonistas usando estruturas disponíveis no PDB (7CFM, 7CFN, 7XTQ). Este screening identificou cinco compostos promissores com propriedades favoráveis para ensaios in vitro subsequentes. Entre estes, T1 e T5 destacaram-se como agonistas potentes, embora os valores de EC50 fossem mais baixos em comparação com o composto de referência – INT-777. T1 e T5 correspondiam a compostos derivado ou não esteróides, respetivamente. Os nossos ensaios in vitro avaliaram a eficácia destes compostos na ativação da sinalização do TGR5 e na promoção da browning em adipócitos, focando-se na via cAMP/PKA. Enquanto a ativação da PKA foi observada apenas com o INT-777, a ativação do UCP1 variou entre os compostos. Os nossos estudos sugeriram ainda que os agonistas selecionados do TGR5 modulam as vias de sinalização das VEs, oferecendo perspetivas sobre a comunicação tecido adiposo-fígado. Ao avaliar os potenciais efeitos citoprotetores das VEs derivadas de adipócitos em hepatócitos expostos a estímulos da doença, constatámos que as ad-pVEs ativadas pelo INT-777 exibiam potencial na modulação de genes associados à inflamação, enquanto as ad-pVEs tratadas com os compostos T1 e T5 exibiam potencial na modulação de genes associados ao metabolismo lipídico, enfatizando a influência na inflamação hepática e no metabolismo lipídico através da mediação de diferentes agonistas do TGR5. Este estudo sublinha a promessa dos agonistas do TGR5 como potenciais terapêuticas para o FGNA. Embora os resultados preliminares sejam encorajadores, estudos adicionais são imperativos para compreender os mecanismos intrincados induzidos por estes agonistas, representando um ponto de partida para atenuar a FGNA.

O cancro da mama é um dos tipos de cancro mais frequentemente detetados em mulheres. Os cancros luminais são os cancros de mama mais comuns, onde o luminal B apresenta alta agressividade e genes relacionados à proliferação tumoral. O desenvolvimento do cancro da mama está associado aos fatores celulares e solúveis da matriz extracelular (ECM). A ECM promove a migração celular conectando o citoesqueleto das células com aderências focais (FA). A presença de FA está relacionada com a fosforilação da tirosina, sendo a quinase de adesão focal (FAK) uma das mais prontamente fosforiladas no cancro. A superexpressão de FAK está associada à proliferação de células tumorais, contribuindo também para a ativação das células endoteliais, que expressam a P-selectina na sua superfície. A ação da P-selectina é desencadeada pela sua interação com o ligando-1 da glicoproteína P-selectina (PSGL-1) expresso nas células tumorais, promovendo a circulação de células cancerígenas e metástase. Como a interação entre FAK e P-selectina é pouco compreendida, este projeto tem como objetivo avaliar o efeito antitumoral sinérgico da interação entre os inibidores da FAK e da P-selectina e a nanovacina direcionadas a DC que entregam antígenos associados a tumores e adjuvantes, em modelos esferóides 3D. A expressão de FAK, FAK fosforilada (pFAK), P-selectina e PSGL-1 foram avaliadas em células EO771 e do microambiente tumoral (TME) recolhidas de ratinhos inoculados com EO771. Verificou-se que FAK, pFAK e P-selectina estavam superexpressas em células EO771 TME (> 97%). Para modular o TME em direção a um microambiente efetor imunológico, antes de avaliar o papel do defactinib (inibidor da FAK) e do KF-38789 (inibidor da P-selectina) na função e frequência das células imunes dentro do TME, avaliámos o impacto do defactinib e do KF-38789 na viabilidade das células EO771 e TME EO771. Consequentemente, o defactinib e o KF-38789 induziram um efeito citotóxico significativo nas células EO771 para concentrações acima de 1 e 0,1 μM, respetivamente. Além disso, foi obtida uma diminuição significativa na viabilidade das células EO771 TME para concentrações de defactinib e KF-38789 acima de 0,5 e 0,05 µM, respetivamente. Finalmente, para avaliar o impacto do efeito sinérgico entre a inibição da FAK e da P-selectina combinada com a nanovacina, foi realizada a co-cultura dos esferóides 3D de tumores EO771 (EO771 TME) e esplenócitos. De acordo com as diferentes condições, o tratamento de esferóides 3D do cancro da mama com KF-38789 e a nanovacina isoladamente ou em combinação com o tratamento com defactinib mostrou-se promissor na modulação da invasão tumoral. Finalmente, uma inibição completa do sprouting resultando na morte de células esferóides 3D foi alcançada com a combinação de defactinib e esplenócitos estimulados seguido de KF-38789, representando o efeito sinérgico mais promissor entre os tratamentos testados. Considerando a estratégia terapêutica mais promissora e eficaz, levanta-se a hipótese de que o defactinib primeiro modula o TME para permitir uma melhor infiltração imunológica desencadeada pela vacinação, enquanto a P-selectina previne a proliferação de células cancerígenas.

No âmbito do Mestrado de Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa, foi realizado o Estágio Curricular no Laboratório Omnialab, localizado em Alverca, sob orientação da Dra. Felisbela Abreu, no período de Novembro de 2022 a Junho de 2023. Neste período, o estágio incidiu nas áreas de Bioquímica, Imunologia, Hematologia, Microbiologia e Genética. O mesmo, resultou na elaboração do presente relatório, onde é realizada uma descrição das valências frequentadas, bem como de alguns dos equipamentos contactados e os analitos mais frequentemente solicitados na prática clínica (parte I). Na parte II, encontra-se a monografia desenvolvida no âmbito da área científica Hematologia, focando o tema “Mieloma Múltiplo: do Diagnóstico à Terapêutica”. O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica com proliferação de plasmócitos monoclonais que infiltram a medula óssea e secretam paraproteínas, presentes no soro e/ou urina, originando uma insuficiência medular, destruição óssea, hipercalcemia, insuficiência renal (IR) e infeções recorrentes. O mieloma é uma patologia grave que surge tardiamente, após os 65 anos e na maioria dos casos cursa com ausência de sintomas. O diagnóstico é, em muitas ocasiões, feito de forma acidental, aquando da realização de análises de rotina. O objetivo do trabalho desenvolvido consiste em abordar as diferentes etapas do diagnóstico e da terapêutica do mieloma múltiplo. O diagnóstico laboratorial integra o primeiro passo na abordagem do doente, sendo a eletroforese e a imunofixação de proteínas os exames de eleição. Para complementar estes dados devem ser realizados testes específicos para estratificar o risco da doença e determinar a elegibilidade do doente para o transplante de progenitores hematopoiéticos, recorrendo a parâmetros hematológicos, bioquímicos, imunológicos, citogenéticos e imagiológicos. Os biomarcadores preditivos de diagnóstico e prognóstico apresentam um impacto relevante na evolução da doença. Ao longo dos últimos anos, o tratamento do mieloma múltiplo sofreu grandes avanços com a disponibilidade de várias opções terapêuticas o que veio aumentar, de forma considerável, a sobrevivência livre de progressão (SLP) e a sobrevivência global (SG) dos doentes. O tratamento do mieloma múltiplo está em constante mudança permitindo aumentar a sobrevivência global e a qualidade de vida dos doentes, mas até à data, permanece incurável, apesar dos avanços nas estratégias de tratamento, incluindo a utilização de novas substâncias, tais como inibidores do proteossoma, medicamentos imunomoduladores e anticorpos monoclonais. Palavras chave: Análises Clínicas, Imunologia, Hematologia, Bioquímica, Microbiologia, Controlo de qualidade, mieloma múltiplo, diagnóstico, abordagem terapêutica.