Repositório RCAAP

To identify priority areas to improve the design, conduct, and reporting of pediatric clinical trials, the international expert network, Standards for Research (StaR) in Child Health, was assembled and published the first 6 Standards in Pediatrics in 2012. After a recent review summarizing the 247 publications by StaR Child Health authors that highlight research practices that add value and reduce research "waste," the current review assesses the progress in key child health trial methods areas: consent and recruitment, containing risk of bias, roles of data monitoring committees, appropriate sample size calculations, outcome selection and measurement, and age groups for pediatric trials. Although meaningful change has occurred within the child health research ecosystem, measurable progress is still disappointingly slow. In this context, we identify and review emerging trends that will advance the agenda of increased clinical usefulness of pediatric trials, including patient and public engagement, Bayesian statistical approaches, adaptive designs, and platform trials. We explore how implementation science approaches could be applied to effect measurable improvements in the design, conducted, and reporting of child health research.

The contribution of γδ T cells to immune responses is associated with rapid secretion of interferon-γ (IFN-γ). Here, we show a perinatal thymic wave of innate IFN-γ-producing γδ T cells that express CD8αβ heterodimers and expand in preclinical models of infection and cancer. Optimal CD8αβ+ γδ T cell development is directed by low T cell receptor signaling and through provision of interleukin (IL)-4 and IL-7. This population is pathologically relevant as overactive, or constitutive, IL-7R-STAT5B signaling promotes a supraphysiological accumulation of CD8αβ+ γδ T cells in the thymus and peripheral lymphoid organs in two mouse models of T cell neoplasia. Likewise, CD8αβ+ γδ T cells define a distinct subset of human T cell acute lymphoblastic leukemia pediatric patients. This work characterizes the normal and malignant development of CD8αβ+ γδ T cells that are enriched in early life and contribute to innate IFN-γ responses to infection and cancer.

Immune development is profoundly influenced by vertically transferred cues. However, little is known about how maternal innate-like lymphocytes regulate offspring immunity. Here, we show that mice born from γδ T cell-deficient (TCRδ-/-) dams display an increase in first-breath-induced inflammation, with a pulmonary milieu selectively enriched in type 2 cytokines and type 2-polarized immune cells, when compared with the progeny of γδ T cell-sufficient dams. Upon helminth infection, mice born from TCRδ-/- dams sustain an increased type 2 inflammatory response. This is independent of the genotype of the pups. Instead, the offspring of TCRδ-/- dams harbors a distinct intestinal microbiota, acquired during birth and fostering, and decreased levels of intestinal short-chain fatty acids (SCFAs), such as pentanoate and hexanoate. Importantly, exogenous SCFA supplementation inhibits type 2 innate lymphoid cell function and suppresses first-breath- and infection-induced inflammation. Taken together, our findings unravel a maternal γδ T cell-microbiota-SCFA axis regulating neonatal lung immunity.

O presente estudo explora a experiência de jovens com Osteogênese Imperfeita (OI) e com Acondroplasia (ACD) durante a fase de transição para o mundo do adulto, assim como a perspetiva dos seus pais relativamente a esta vivência. Foi realizado um estudo qualitativo com utilização de grupos focais e entrevistas, com a participação de 15 jovens (11 com OI e 4 com ACD), com idades compreendidas entre os 17 e 28 anos; e 12 pais e mães com filhos com diagnóstico de displasia óssea (8 com OI e 4 com ACD), com idades compreendidas entre os 18 e 28 anos. Da análise dos conteúdos das entrevistas emergiram duas categorias, a autonomia física/funcional e a autonomia pessoal que inclui as escolhas pessoais e a gestão da sua vida. Os resultados indicam que os jovens entrevistados relatam, no geral ter autonomia a nível funcional e pessoal e apresentam humor geral positivo, e no entanto, falaram de fatores que influenciam a autonomia incluindo os associados à condição clínica como características anatómica dor a fadiga, em especial na ACD e as fraturas na OI; e os associados ao meio como as atitudes parentais e da sociedade em geral; a rede de amigos; a adequação dos espaços. No geral, os jovens afirmaram ter bem-estar físico e mental. Um número expressivo, com prevalência na ACD, referiu experienciar ansiedade, tristeza e irritação. Neste domínio emergiu como mais um fator de influência a discriminação e verbalizações pejorativas. As principais preocupações dos jovens incluem a evolução da condição clínica e necessidade de perda de autonomia e o emprego. Alguns referiram ainda questões de fertilidade de envolvimento sentimental e sexualidade. A análise do discurso dos pais reforçou os resultados encontrados nos jovens. Foram, no entanto, observadas algumas diferenças no que diz respeito ao bem-estar psicológico e a preocupações. Para a grande maioria dos jovens e dos pais a transição entre os serviços de pediatria e os do adulto foi referida como uma fase vivida com ansiedade classificando-a, na maioria dos casos como pouco preparada, desfragmentada e dolorosa. Estes resultados podem contribuir não só para o melhor conhecimento desta fase de vida nos jovens com ACD e com OI, mas também para a melhoria do apoio aos jovens e às suas famílias, e para o desenho de novas investigações nesta área.

Enquadramento: a Doença das Células Falciformes (DCF) é a hemoglobinopatia mais comum em todo o mundo. Embora ainda seja classificada como uma doença rara, a prevalência da DCF vem crescendo na Europa. Adolescentes com DCF experienciam, com frequência, dores agudas e recorrentes, em conjunto com outras complicações físicas. Além disso, apresentam baixa estatura e puberdade tardia. Essas características clínicas tendem a comprometer a qualidade de vida do adolescente e a sua saúde mental. Estudos sobre a qualidade de vida relacionada com a saúde (QVRS) e a saúde mental de adolescentes com DCF ainda são escassos na literatura. Objetivo: identificar e correlacionar os níveis de qualidade de vida e os sintomas psicológicos em adolescentes com DCF. Amostra: 31 adolescentes, entre 13 e 18 anos, e 31 pais/cuidadores. Metodologia: foram utilizados os instrumentos Pediatric Quality of Life Sickle Cell Disease Module (PedsQL-SCD), KIDSCREEN-10 e Pediatric Symptom Checklist-17 (PSC-17). Para a análise estatística, foi utilizado o SPSS, versão 27. Resultados: os adolescentes relataram níveis moderados a baixos de QVRS, com o questionário geral de QVRS (KIDSCREEN-10) apresentando melhores resultados do que o questionário específico (módulo PedsQL-SCD). Os piores resultados foram encontrados nas subescalas Impacto da Dor, Controlo e Gestão da Dor, Preocupação 1, Emoções e Comunicação 2. Ao avaliar a QVRS dos seus filhos, os pais relataram níveis mais elevados do que os sinalizados pelos adolescentes. Comparativamente, não foram encontradas diferenças significativas entre rapazes e raparigas. Os adolescentes com maior número de internamentos tiveram resultados significativamente piores. O screening para problemas psicológicos não mostrou risco para problemas de externalização e de atenção e evidenciou uma proximidade do nível clínico para os problemas de internalização. Os pais relataram melhores resultados do que os adolescentes. Os rapazes apresentaram piores resultados na subescala de externalização. Foram encontradas associações entre os níveis de QVRS e a sintomatologia psicológica, nomeadamente, baixos níveis de QVRS e pontuações mais elevadas de Internalização e entre algumas das subescalas de QVRS e Internalização. A dificuldade em falar sobre a doença com os pares e com os profissionais de saúde foi associada à Internalização. Conclusões: estes resultados são discutidos como uma contribuição para o melhor suporte nas intervenções personalizadas que possam promover a QVRS e a saúde mental desses adolescentes

The Personification of beauty is a matter that falls within the problematics of contemporary beauty. After an investigation that had its roots in classical Greek times and extends to the present time, we intend to argue that nowadays a form of objectification of beauty is in the world of cosmetic surgery. We can consider the embodiment of beauty as continuous process that comes with the humanization of beauty, accompanied by technological evolution and industrialization that have constantly changed the way of being and judging the world. This dissertation is based on the practical project The Dorian Effect (TDE), a reference to Oscar Wilde's Dorian Gray, a character who chose to trade his soul to gain eternal youth and beauty – concepts that justify the growing demand of the individual for cosmetic surgery to achieve its ideal of beauty. TDE does not work with the results of surgery, considering the very diverse personal tastes. Concentrates all its attention on the will and narcissism of a personified subject of a stereotype of beauty in his own body. Assumes beauty as a carnal concept, in other words, incarnated. The personification of beauty justifies the relationship and the two senses that the word beauty represents: the beauty/beautiful interested in an end - useful and objective beauty; beauty without interest in an end - the purely aesthetic beauty. The research is supported by some reflections on the beauty developed over time, including important authors as Plato, Kant, Oscar Wilde, Georg Simmel, Tatarkiewicz, among others

Os padrões alimentares saudáveis desenvolvem-se na infância. Os pais são modelos alimentares que auxiliam a criança a estabelecer hábitos alimentares saudáveis, com recurso a práticas alimentares. O objetivo deste estudo foi explorar o papel que as dimensões parentais cognitivas e afetivas e o comportamento alimentar da criança podem desempenhar no uso das práticas parentais alimentares para promover o consumo de vegetais das crianças em idade pré-escolar e escolar. Foi realizado um estudo quantitativo e transversal onde participaram 263 pais de crianças em idade pré-escolar e escolar. O protocolo de avaliação incluiu nove instrumentos: Questionário Sociodemográfico; Escala de Preocupação com o Peso da Criança; Escala de Autoeficácia Parental na Promoção de uma Alimentação Infantil Saudável; Escala de Práticas Parentais Alimentares; Emoções Antecipadas face à Recusa/Aceitação de Vegetais; Desejo para Promover o Consumo de Vegetais; Escala de Regulação Emocional Parental; Questionário do Comportamento Alimentar da Criança; Consumo de Vegetais das Crianças. Em geral, os pais de crianças pré-escolares e em idade escolar usam práticas mais eficazes, não se mostram preocupados com o peso dos filhos, sentem-se capazes e motivados para promover o consumo de vegetais nas crianças, estão atentos e orientados para reconhecer e compreender as emoções da criança, aceitam as emoções negativas, toleram algum grau de manifestações emocionais negativas da criança, e apresentam um consumo inadequado de vegetais. As diferenças existentes nas duas amostras dizem respeito às emoções antecipadas, algumas das estratégias de regulação emocional parental e alguns tipos de comportamento alimentar da criança. As práticas de controlo ineficazes estão correlacionadas com diversos comportamentos alimentares da criança, com os fatores cognitivos e afetivas dos pais, com o consumo de vegetais da criança e algumas variáveis sociodemográficas. Também, se encontraram algumas correlações relevantes entre o desejo, a autoeficácia e as emoções antecipadas. Para permitir desenvolver programas de intervenção na promoção do consumo de vegetais nas crianças pré-escolares e em idade escolar, as dimensões afetiva e cognitiva devem de ser tidas em consideração.

Enquadramento: Na idade pré-escolar observam-se progressos significativos ao nível do desenvolvimento de competências de autorregulação. Por outro lado, o sono é fulcral para um desenvolvimento saudável das crianças. De acordo com a literatura, a autorregulação e o sono possuem uma relação bidirecional. Os confinamentos por COVID-19 têm, também, apresentado consequências no desenvolvimento das crianças. Objetivos: Pretende-se caracterizar o nível de autorregulação e a quantidade e qualidade do sono em crianças que frequentam a pré-escola, observar a evolução destas dimensões durante o período de confinamento por COVID-19, e estudar a relação entre as mesmas. Metodologia: A amostra é constituída por 294 crianças no primeiro momento (M = 57,17 meses; DP = 10,30; 50,2% do sexo masculino) e 44 no segundo momento (M = 60,93, DP = 7,88, 54,4% do sexo masculino). Foi administrada a tarefa HTSK (Head-Toes-Knees-Shoulders), como medida de autorregulação, e um questionário de heterorrelato, respondido pelos pais autonomamente, para avaliação quantitativa e qualitativa do sono. Os dados foram recolhidos no início do ano de 2020, antes do primeiro confinamento, e um ano depois. Resultados: A maioria das crianças da amostra parece dormir o número de horas recomendadas para a faixa etária, e tem uma boa qualidade de sono segundo os indicadores recolhidos. Foi observada uma evolução positiva nas capacidades de autorregulação do primeiro para o segundo momento de avaliação, mas não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas relativamente ao sono entre os dois momentos de avaliação, exceto no número de horas da sesta. Adicionalmente, não foram observadas relações estatisticamente significativas entre autorregulação e sono. Conclusões: Não são descritas evoluções negativas em nenhuma das dimensões do primeiro momento para o segundo momento de avaliação. Assim, os resultados sugerem que o confinamento não teve um impacto negativo nas dimensões avaliadas em crianças em idade pré-escolar.

As cigarras são insetos pertencentes à ordem Hemiptera e à família Cicadidae. São caracterizadas pelos sons produzidos pelos machos durante o verão. Estes sons são produzidos por um órgão especializado membranoso, o tímbalo. O som é produzido pelo movimento de retração e expansão de uma membrana ligada aos músculos timbálicos. Os sons de chamamento são os mais comuns e específicos da espécie. A especiação em cigarras pode ocorrer de várias formas, dependendo das espécies. Em casos de alopatria pode ocorrer isolamento por distância, devido à baixa capacidade de dispersão destes insetos; Reproductive Character Displacement em situações de simpatria; seleção sexual (apesar de este ser um mecanismo controverso dentro da família Cicadidae); discrepâncias na duração do ciclo de vida de diferentes espécies, alocronia. Hipoteticamente as glaciações, especialmente os ciclos glaciares do Pleistoceno terão tido um papel na especiação de vários géneros de cigarras. Existem evidências da ocorrência durante este período de alterações climáticas e orográficas que causaram alterações nas áreas de distribuição dos vários grupos de cigarras e nos tamanhos das populações, podendo ter causado o surgimento e extinção de espécies. Pouco se sabe sobre a genómica dos diferentes grupos de cigarras em especial do ponto de vista filogenómico. A maioria dos estudos sobre a filogenia de cigarras são feitos com base em alguns genes nucleares e em particular o gene nuclear EF-1α. Isto limita a resolução das relações filogenéticas entre os vários taxa por falta de informação sobre uma quantidade suficiente de genes, uma vez que, diferentes genes poderão teoricamente ter histórias evolutivas diferentes. No entanto, estudos anteriores demonstram que os genomas dos vários grupos de cigarras tendem a ter grandes dimensões o que pode contribuir para a dificuldade em estudá-los globalmente pelo aumento dos custos financeiros e temporais do processo de sequenciação. Apenas três estudos filogenómicos de cigarras foram encontrados na literatura, dois utilizando o método de sequenciação RAD-seq o mais recente recorrendo ao método de sequenciação anchored hybrid enrichment. A presente dissertação debruça-se sobre o estudo do género Tettigettalna. Este género é constituído por dez espécies, oito das quais endémicas da Península Ibérica. Segundo estudos anteriores baseados na sequenciação das regiões 5’ e 3’ do gene mitocondrial citocromo c oxidase I (COI) e do gene mitocondrial ATPase e do gene nuclear 1α-EF, a primeira espécie a formar-se terá sido Tettigettalna josei há cerca de sete milhões de anos, seguida de Tettigettalna afroamissa cerca de dois milhões de anos depois. Os mesmos estudos ainda sugerem uma diversificação rápida (radiação), provavelmente durante o Pleistoceno. Apesar de as diferentes espécies estarem acusticamente bem diferenciadas entre si os estudos filogenéticos realizados com base nas regiões 5’ e 3’ do gene mitocondrial COI e o gene mitocondrial ATPase e no gene nuclear 1α-EF não permitem resolver o complexo de espécies formado por Tettigettalna mariae, Tettigettalna argentata e Tettigettalna aneabi nem a politomia formada pelas duas subespécies Tettigettalna helianthemi helianthemi e Tettigettalna helianthemi galantei e os tipos Tettigettalna helianthemi galantei tipo I e Tettigettalna helianthemi galantei tipo II. É também desconhecida uma justificação para o grau de estruturação populacional encontrado para as espécies Tettigettalna helianthemi e Tettigettalna defauti o qual é maior do que o esperado para a reduzida área de distribuição destas espécies. Além disso, também o impacto das glaciações do Pleistoceno na evolução das espécies endémicas do género é parcamente conhecido. Assim, a presente dissertação tem como objetivos biológicos, (i) a reconstrução das relações filogenómicas entre grupos taxonómicos do género Tettigettalna, (ii) a datação dos eventos de divergência das várias espécies em relação aos ciclos glaciais do Pleistoceno e (iii) finalmente taxonómicos. Para o cumprimento destes objetivos utilizou-se um conjunto de dados de RAD-seq. Deste modo executou-se o controlo de qualidade das sequências multiplexadas e compararam-se os assemblers ipyrad e Stacks para diferentes combinações de parâmetros por forma a identificar qual dos dois softwares e qual a combinação de parâmetros que otimizam o número de SNPs, a quantidade de missing data e o tempo de computação do processo de assembly. O ipyrad identificou menos SNPs do que o Stacks na lane 1. Contudo, após a filtragem de acordo com a quantidade máxima de missing data por locus e a minor allele frequency por locus, o ipyrad manteve mais loci do que o Stacks em ambas as lanes. No que diz respeito à quantidade de missing data identificada por cada um dos dois programas os resultados foram praticamente concordantes, finalmente o tempo de computação do ipyrad foi significativamente menor do que o Stacks. Assim o ipyrad foi selecionado para ser utilizado nas restantes análises. Seguidamente, foi construída uma árvore filogenética, utilizando o programa RaxML-NG, de forma a averiguar as relações de proximidade entre os indivíduos. Verificou-se que os indivíduos se agrupavam não de acordo com os grupos taxonómicos em que estavam classificados, mas sim de acordo com a lane em que tinham sido sequenciados, tornando evidente que as duas lanes são incomparáveis entre si. Daí em diante as duas lanes foram analisadas em separado. As análises filogenéticas feitas com as lanes em separado também não revelaram um agrupamento de acordo com as classificações taxonómicas. Tendo em conta estes resultados e de modo a permitir uma comparação entre a presente dissertação e estudos anteriores que analisaram a diferenciação entre as subespécies de Tettigettalna helianthemi e os tipos em que se subdivide a subespécie Tettigettalna helanthemi galantei, as restantes espécies da lane 1 foram eliminadas das análises seguintes. Para averiguar a existência de estruturação populacional foram efetuadas para cada lane uma PCA e uma análise de admixture, através do programa Structure. Nenhuma destas análises revelou resultados biologicamente conclusivos. Finalmente, foram executadas análises de seleção pairwise analisando pares de espécies em que o som é a única característica que permite a distinção entre as duas espécies de cada par. Estas análises foram executadas recorrendo aos programas BayeScan e SelEstim. Nenhum dos softwares obteve resultados biologicamente conclusivos. A impossibilidade de interpretar biologicamente os resultados obtidos poderá ser devida a um artefacto técnico de falta de representação da maior parte do genoma que impede que as sequências que diferenciam as espécies de serem analisadas, pelo facto de não terem sido sequenciadas, e pela ocorrência de fenómenos de paralogia em que reads pertencentes a diferentes loci com sequências similares alinham como pertencendo a um mesmo loci. Estes artefactos são em parte justificáveis pelo grande tamanho do genoma (9.8Gbp). No entanto, a presente dissertação permitiu observar o impacto de um genoma de grandes dimensões (apesar de não serem consideradas gigantescas) nos resultados de análises de genómica populacional, filogenómica e deteção de seleção tendo várias espécies do género Tettigettalna como modelos. Isto tornará possível que o género Tettigettalna e outros com genomas de dimensões similares sirvam dde termo de comparação intermédio entre genomas considerados pequenos e genomas considerados gigantes contribuindo assim para a resolução de controvérsias sobre as causas e consequências da evolução do tamanho do genoma e o impacto desta característica em fenótipos atuais alguns dos quais podem afetar a vida humana através da agricultura ou das pescas como é o caso da variação da capacidade de invasão de diferentes espécies invasoras. Efetuar a assembly do genoma contra um genoma de referência ou a utilização de tecnologias de sequenciação que permitam a obtenção de reads mais longas e em maior quantidade poderá evitar a falta de representação do genoma. A ocorrência de parálogos pode ser minimizada através da utilização de assemblers com a capacidade de eliminar potenciais parálogos. Concluindo, apesar de não ter sido possível atingir os objetivos biológicos propostos para a realização da dissertação as análises executadas permitem formular hipóteses sobre como lidar com genomas de grande dimensão do ponto de vista técnico, permitindo uma contribuição não só para futuros estudos sobre genómica e em particular da genómica evolutiva do género Tettigettalna mas também sobre problemáticas mais vastas relativas a todos os níveis de organização biológica como as causa e consequências da evolução do tamanho do genoma ao longo da História da vida e o impacto presente desta característica em fenótipos morfológicos, fisiológicos e ecológicos dos grupos taxonómicos atuais.

Relapsed or refractory acute myeloid leukemia (AML) remains a major therapeutic challenge. We have recently developed a Vδ1+ γδ T cell-based product for adoptive immunotherapy, named Delta One T (DOT) cells, and demonstrated their cytolytic capacity to eliminate AML cell lines and primary blasts in vitro and in vivo. However, the molecular mechanisms responsible for the broad DOT-cell recognition of AML cells remain poorly understood. Here, we dissected the role of natural killer (NK) cell receptor ligands in AML cell recognition by DOT cells. Screening of multiple AML cell lines highlighted a strong upregulation of the DNAM-1 ligands, CD155/pulmonary vascular resistance (PVR), CD112/nectin-2, as well as the NKp30 ligand, B7-H6, in contrast with NKG2D ligands. CRISPR-mediated ablation revealed key nonredundant and synergistic contributions of PVR and B7-H6 but not nectin-2 to DOT-cell targeting of AML cells. We further demonstrate that PVR and B7-H6 are critical for the formation of robust immunological synapses between AML and DOT cells. Importantly, PVR but not B7-H6 expression in primary AML samples predicted their elimination by DOT cells. These data provide new mechanistic insight into tumor targeting by DOT cells and suggest that assessing PVR expression levels may be highly relevant to DOT cell-based clinical trials.

Understanding spatial heterogeneity in reproductive success among at-risk populations facing localised threats is key for conservation. Sea turtle populations often concentrate at one nesting site, diverting conservation efforts from adjacent smaller rookeries. Poilão Island, Bijagós Archipelago, Guinea-Bissau, is a notable rookery for green turtles Chelonia mydas within the João Vieira-Poilão Marine National Park, surrounded by three islands (Cavalos, Meio and João Vieira), with lower nesting activity. Poilão’s nesting suitability may decrease due to turtle population growth and sea level rise, exacerbating already high nest density. As the potential usage of secondary sites may arise, we assessed green turtle clutch survival and related threats in Poilão and its neighbouring islands. High nest density on Poilão leads to high clutch destruction by later turtles, resulting in surplus eggs on the beach surface and consequently low clutch predation (4.0%, n = 69, 2000). Here, the overall mean hatching success estimated was 67.9 ± 36.7% (n = 631, 2015–2022), contrasting with a significantly lower value on Meio in 2019 (11.9 ± 23.6%, n = 21), where clutch predation was high (83.7%, n = 98). Moderate to high clutch predation was also observed on Cavalos (36.0%, n = 64) and João Vieira (76.0%, n = 175). Cavalos and Meio likely face higher clutch flooding compared to Poilão. These findings, alongside observations of turtle exchanges between islands, may suggest a source-sink dynamic, where low reproductive output sink habitats (neighbouring islands) are utilized by migrants from Poilão (source), which currently offers the best conditions for clutch survival.

Background: Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells have emerged as a breakthrough treatment for relapse/refractory hematological tumors, showing impressive complete remission rates. However, around 50% of the patients relapse before 1-year post-treatment. T-cell 'fitness' is critical to prolong CAR-T persistence and activity. Allogeneic T cells from healthy donors are less dysfunctional or exhausted than autologous patient-derived T cells; in this context, Delta One T cells (DOTs), a recently described cellular product based on MHC/HLA-independent Vδ1+γδ T cells, represent a promising allogeneic platform. Methods: Here we generated and preclinically validated, for the first time, 4-1BB-based CAR-DOTs directed against the interleukin-3α chain receptor (CD123), a target antigen widely expressed on acute myeloid leukemia (AML) blasts. Results: CD123CAR-DOTs showed vigorous, superior to control DOTs, cytotoxicity against AML cell lines and primary samples both in vitro and in vivo, even on tumor rechallenge. Conclusions: Our results provide the proof-of-concept for a DOT-based next-generation allogeneic CAR-T therapy for AML.

In Mediterranean climate regions, climate change is increasing aridity and contributing to the mortality rate of Quercus suber, reducing the success of reforestation efforts. Using and creating microclimates is a recommended climate adaptation strategy that needs research. Our hypothesis is that planting Q. suber in north-facing slopes and water lines results in a higher survival rate than those that are planted in ridges and south-facing slopes. Secondly, our hypothesis is that existing shrubs (in this case, Cistus ladanifer) can be used to create microclimatic sheltering and increase the survival of Q. suber plantations. In experiment 1, we tested the survival of Q. suber plantations in four different topographic conditions. For that, 80 Q. suber plants were planted over four different topographic conditions, where soil probes were installed to monitor soil moisture and temperature. Two years after, the results show an increased survival rate in the north-facing slope and water line when compared to the ridge area (p = 0.032). In experiment 2, we tested if planting in the shade of rows of C. ladanifer increases the survival rate of Q. suber plantations. For that, 1200 Q. suber plants were planted; 600 in a Montado open area with no shade and 600 under the shade of rows of C. ladanifer shrubs. A total of 17 months after plantation, there was a significantly higher survival rate of the shaded plants (p = 0.027). We conclude that microclimates created by topography and shrubs can have a significant impact on the survival of Q. suber plantations and discuss the situations in which these can apply.

γδ T cells are a second T cell lineage conserved throughout evolution and across animal species that express a γδ T-cell receptor (TCR) consisting of a TCRγ and a TCRδ chain. γδ T cells develop in the murine thymus into various subsets with distinct functional potential that preferentially home to specific peripheral tissues, rather than lymphoid organs. The last decade has highlighted the biological importance of effector γδ T cell subsets producing either interferon (IFN)-γ (γδT1 cells) or interleukin (IL)-17 (γδT17 cells) in multiple (patho)physiological settings. These include key contributions of γδT1 and γδT17 cells to homeostasis and repair of the skin epithelium, and of γδT17cells to gingival mucosa homeostasis and repair, bone formation and fracture healing, regulation of adipose lipolysis, thermogenesis, and neurophysiology, by modulating neuronal synaptic plasticity. Additionally, γδ T cells also contribute to tissue physiology in infection and cancer settings. In infection, both γδT1 and γδT17 cells have been shown to play a non-redundant role in the host defense against skin infection (Staphylococcus aureus), and γδT17 cells have also been implied in the response to intestinal (Listeria monocytogenes) and lung (Clostridioides difficile) infections. On a more systemic level, γδT1 cells play a critical role in the control of viral load during cytomegalovirus (CMV) infection, and have been implicated in the immune response against malaria infection, with both benefic and pathogenic components described in different stages of Plasmodium infection.

The differentiation of effector T cells is a tightly regulated process that relies on the selective expression of lineage-defining master regulators that orchestrate unique transcriptional programs, including the production of distinct sets of effector cytokines. miRNAs are post-transcriptional regulators that are now viewed as critical players in these gene expression networks and help defining cell identity and function. This review summarises the role of individual miRNAs in the regulation of the differentiation of effector T cell subsets, including CD4+ T helper cells, cytotoxic CD8+ T cells and innate-like NKT cells. Moreover, we refer to miRNAs that have been identified to affect simultaneously two or more effector T cell populations, impacting on the balance between effector T cells in vivo, thus constituting potential biomarkers or targets for therapies aiming at boosting immunity or controlling autoimmunity.

A Perturbação do Espetro do Autismo (PEA) abrange um grupo clinicamente diverso de distúrbios do neurodesenvolvimento, caracterizados por traços comportamentais que afetam a comunicação e a interação social, bem como comportamentos e interesses restritivos e repetitivos. O termo "espetro" reflete a ampla gama de severidade nas dimensões cognitivas e comportamentais entre os indivíduos diagnosticados. As causas e mecanismos exatos da PEA permanecem pouco claros, sendo considerada um distúrbio complexo influenciado por fatores genéticos e ambientais e as suas interações. As estimativas de prevalência da PEA situam-se entre 1% e 1,5% da população em geral. Considerando a falta de biomarcadores clinicamente relevantes, o diagnóstico da PEA ainda se baseia na apresentação comportamental, o que faz com que a taxa de deteção atual seja inferior à sua prevalência real. Esta lacuna destaca a necessidade de investigar os mecanismos neuronais subjacentes à PEA e desenvolver métodos de diagnóstico mais objetivos. A PEA é altamente heterogénea em termos de etiologia, fenótipo e desenvolvimento, dificultando que modelos de aprendizagem profunda desenvolvidos obtenham bons resultados na tarefa de diagnóstico, pois estes recorrem apenas a informação individual sobre cada sujeito, sem considerar a informação relacional entre os sujeitos. Recentemente, as Redes Neurais de Grafos (RNGs) surgiram como uma abordagem promissora para enfrentar essa heterogeneidade. As RNGs podem operar em grafos onde cada nó representa um sujeito e cada aresta representa a relação entre dois sujeitos com base em informações complementares, como a idade ou o sexo. Esta abordagem tem potencial para contribuir para uma melhor compreensão e diagnóstico da PEA. Alguns estudos têm proposto RNGs para o diagnóstico da PEA com este tipo de abordagem. Contudo, a maioria utiliza um tipo de contexto de aprendizagem chamado de aprendizagem transdutiva, no qual a RNG é treinada e testada no mesmo grafo, não apresentando capacidade de generalização para novos dados. Por outro lado, num contexto médico é preponderante que as classificações realizadas pelo modelo sejam interpretáveis. Por conseguinte, métodos de inteligência artificial explicável (IAE) têm sido desenvolvidos especificamente para aumentar a transparência das decisões feitas por redes neurais de grafos. Deste modo, nesta dissertação, o objetivo centrou-se em explorar o potencial das RNGs para diagnosticar PEA, ao desenvolver uma RNG num contexto de aprendizagem indutiva em que o modelo é capaz de generalizar para dados independentes do grafo de treino, enquanto se investigam as alterações de conectividade funcional (CF) associadas à doença através de um método de IAE. Para atingir estes objetivos, foram usados dados de ressonância magnética funcional (RMf) em estado de repouso de 871 sujeitos (403 com PEA e 468 com desenvolvimento típico). Estas imagens são provenientes da base de dados ABIDE e já tinham sido previamente processadas no âmbito do Preprocessed Connectomes Project (PCP). A abordagem de pré-processamento incluiu: correção temporal, correção de movimento, normalização da intensidade do voxel e remoção de ruído dos dados, através da regressão de potenciais efeitos perturbadores (como movimento da cabeça, respiração e pulsação cardíaca). Incluiu também filtragem com um filtro passa-banda (0,01 - 0,1 Hz) e os dados foram alinhados com o cérebro padrão Montreal Neurological Institute 152 (MNI152). Cada cérebro foi segmentado em regiões corticais e subcorticais utilizando o atlas anatómico Harvard-Oxford de 111 regiões. Foi gerada a matriz de CF para cada indivíduo recorrendo ao cálculo do coeficiente de correlação de Pearson entre as séries temporais extraídas de cada região. O conjunto das matrizes de CF foi dividido em conjuntos de desenvolvimento (80%) e teste (20%) para que, após o desenvolvimento do modelo de diagnóstico, a sua capacidade de generalização pudesse ser avaliada. Em seguida, os dados foram estruturados em formato de grafo. Os nós representaram individuos e foram representados pelas matrizes de CF vetorizadas. As arestas entre os sujeitos representavam as relações entre eles e foram baseadas na similariedade de idade, sexo, local de aquisição das imagens de RMf e na correlação entre as respetivas matrizes de CF. As arestas que ligavam sujeitos com pouca similaridade foram removidas. Após a preparação dos dados, a RNG foi desenvolvida e otimizada. A rede neural de grafos construída é composta por quatro camadas de graph attention network (GAT) seguidas por um classificador com duas camadas totalmente conectadas. Nas camadas GAT foram incorporadas skip connections para evitar o problema frequente em RNGs de oversmoothing. Como hiperparâmetros a otimizar foram escolhidos: a função de ativação, o número de filtros de cada camada GAT, a taxa de aprendizagem, a taxa de dropout, o número de épocas de treino, e o parâmetro L2 de regularização. A otimização foi efetuada através da validação cruzada com 10 folds no conjunto de dados de desenvolvimento. Da otimização de hiperparâmetros, foi selecionado o modelo que apresentou os melhores valores de média de cada métrica. O modelo com melhor desempenho incluiu a função de ativação PReLU, 64 filtros em cada camada GAT, uma taxa de aprendizadem de 0,0001, uma taxa de dropout de 0,4 e o parâmetro L2 igual a 5,0×10−2 . Foi necessário desenvolver um critério de early stopping para regularizar mais o modelo e, particularmente, diminuir os efeitos de flutuações significativas no valor de accuracy de validação do modelo, que foram encontradas durante o treino. Para verificar como o modelo desenvolvido se comparava a outros modelos atuais da literatura que usam RNGs para a classificação de PEA, o modelo foi comparado com dois modelos conhecidos, comparação essa que ocorreu recorrendo à aprendizagem transdutiva para uma comparação justa. Desta comparação, notou-se que as flutuações encontradas nos valores da accuracy de validação durante o treino também ocorriam em ambos os modelos de comparação. Em geral, o modelo desenvolvido apresentou resultados mais estáveis e melhor desempenho. Em seguida, o modelo com o conjunto de hiperparâmetros que obteve a melhor performance foi treinado no conjunto de desenvolvimento e avaliado no conjunto de teste independente num contexto de aprendizagem indutiva. O modelo provou ser menos generalizável do que o ideal, notando-se principalmente uma dificuldade em classificar indivíduos com autismo. Este é, de facto, um problema comum a vários modelos de classificação de PEA na literatura que usam o ABIDE, e está associado à heterogeneidade inerente à doença e ao conjunto de dados do ABIDE, que inclui dados de vários locais com diferentes protocolos de aquisição, o que dificulta que o modelo capte toda a variablidade dos dados. Para além disso, considerando que a dimensionalidade das características dos nós é demasiado elevada relativamente ao número de dados, hipotetizou-se que o modelo está a sofrer do fenómeno de curse of dimensionality. Este fenómeno explica as flutuações presentes no valor da accuracy de validação e a menor capacidade de generalização. Para tentar interpretar as classificações efetuadas pelo modelo no conjunto de dados independente, recorreu-se ao GNNExplainer, um método de IAE criado especificamente para atuar em RNGs, baseado na perturbação das características dos dados para identificar as características mais relevantes para a classificação feita pela RNG. Com o GNNExplainer, foram identificadas as conexões funcionais entre regiões cerebrais com maior relevância para o diagnóstico da PEA. De forma a verificar o impacto destas para os diagnósticos feitos pelo modelo, foram efetuados estudos de ablação, nos quais se removeram as conexões funcionais mais importantes. Estes estudos, para além de mostrarem a relevância das conexões identificadas, permitiram verificar a existência de características redundantes, o que não é surpresa num caso de elevada dimensionalidade das características dos dados. As regiões cerebrais identificadas e as suas conexões funcionais enfatizam os papéis do processamento visual, particularmente do reconhecimento facial, e do processamento linguístico e autorreferencial na PEA. As disrupções encontradas são frequentemente relatadas na literatura e contribuem para os sintomas principais da PEA, estando especificamente associadas com as dificuldades na comunicação social. No entanto, apenas uma das dez conexões identificadas resistiu à análise estatística entre a amostra de indivíduos com PEA e os controlos e se mostrou significativa - a subconectividade entre o córtex fusiforme occipital temporal esquerdo e o planum polare esquerdo na PEA, que poderá estar associada ao reconhecimento e nomeação de objetos e faces de pessoas. Os resultados desta dissertação revelam o potencial das RNGs para o diagnóstico da PEA. Apesar do modelo não ter superado a performance reportada por outros estudos que utilizam modelos de aprendizagem profunda na literatura, conseguiu superar dois dos modelos de classificação que usam RNGs para a classificação de PEA com o ABIDE, que foram treinados nas mesmas condições que o modelo desenvolvido. Inclusive, permitiu identificar outra causa possível para a dificuldade em criar modelos ótimos de diagnóstico para PEA usando este tipo de abordagem, para além da heterogeneidade da doença e da base de dados - a elevada dimensionalidade das características dos dados. Por outro lado, explorou um método de IAE na RNG desenvolvida, com resultados concordantes com a literatura relativa às disfunções de conexões funcionais encontradas associadas à PEA. Assim, os objetivos delineados para esta dissertação foram cumpridos, e este trabalho poderá contribuir para a superação dos problemas patentes no desenvolvimento de modelos de inteligência artificial de diagnóstico da PEA.

Cell polarity reflects the combined action of complex mechanisms that establish and maintain functionally specialized domains in the plasma membrane and cytoplasm. Pollen tubes are one of the best models to study polarization events in plants, since the apical growth is accompanied by structural features, namely the cytoplasmic zonation and the polarized pattern of extracellular proton fluxes. The main goal of this project aimed at unravelling the cellular mechanisms involved in the regulation of extracellular proton (H+) fluxes in pollen tubes. The cytoskeleton plays an essential role in pollen tube polarized growth, in addition to represent a structural component of these cells. The hypothesis tested here was that this structure could participate in the regulation of the proton fluxes, as a consequence of its involvement in the control of the localization of protein that conveys proton extrusion from the cell, the H+ATPases. This choice was based on the recently characterized specific proton ATPase NHA from Nicotiana tabacum pollen tubes, by the group were this project was developed. The first approach consisted in the evaluation of alterations in the extracellular proton fluxes in response to actin cytoskeleton and microtubule disturbance, using a ion selective micro-vibrating probe. Nicotiana tabacum pollen tubes reveal three membrane domains: the apical domain, that present proton influxes; the posterior regions of the tube (beginning 30 m from the tip towards the grain) and the grain, that presents proton effluxes; and an area between the previous two (~20 m from the tip), that shows no net flux of protons. The proton ATPase NHA was visualized in pollen tubes transiently transformed with the Lat52::NHA::GFP construct. These proteins assume an uneven distribution in pollen tubes plasma membrane, revealing the tight connection with the proton fluxes measured. This protein is not detected at the tip. A gradient of accumulation is detected originated in the lateral apex until 20 µm behind the tip, were the accumulation is maximal, and plateaus until the basis of the tube. Actin cytoskeleton disturbance promoted the alteration of the proton flux pattern, as a consequent of the misplacement of the proton ATPases. Microtubule disturbance alone reveals no effect in the regulation of the extracellular proton fluxes. However the disturbance of microtubules together with the mild disturbance of actin, bellow the effective concentrations alone, affects proton flux pattern in pollen tubes. This brings new insights on the role played by microtubules in pollen tubes. Two possible mechanisms might act in a concerted manner. The actin cytoskeleton is known to be involved in membrane retrieval that maintains membrane identity and membrane protein composition. On the other hand, a previous study reveled that the movement of NHA in the plasma membrane is in accordance to the involvement of a tethering mechanism that prevents the free diffusion in the membrane. Furthermore we have characterized in detail the dynamic behavior of actin filaments and microtubules using transiently transformed pollen tubes with Lat52::GFP::NtADF1 and Lat52::GFP::EB1, respectively. This is the first study in which microtubule dynamics is described in pollen tubes. A second approach was developed in order to determine which components of the cytoskeleton are involved in the maintenance of the H+ATPase, NHA, in a polarized localization in the plasma membrane. A yeast two-hybrid screen was started, using the cytoplasmic regions of the NHA as baits, and a cDNA library from Nicotiana tabacum pollen grains, as the prey.A polaridade celular reflecte a acçao combinatória de mecanismos complexos que estabalecem e mantem domínios funcionais especializados na membrana plasmática e no citoplasma. Os tubos polínicos são um dos molelos mais estimulantes para o estudo dos processos de polaridade em plantas, uma vez que o crescimento apical e acompanhado por características estruturais, nomeadamente o citoesqueleto, a zonação citoplasmática e um padrão polarizado de fluxos de protões (H+) extracelulares. O principal objectivo deste projecto concentrou-se na determinação dos mecanismos envolvidos na regulação do padrão extracellular de protões, em tubos polínicos. O citoesqueleto desempenha um papel essencial no crescimento polarizado, sendo também um elemento estrutural essencial.

Esta investigação visa conhecer as perspectivas de uma professora de Matemática de uma turma do 8.º ano sobre o manual escolar adoptado, papel deste na planificação das aulas e respectivo uso nas actividades escolares (englobando professores e alunos). Pretende, ainda, identificar as formas como a professora e os seus alunos utilizam o manual escolar, em particular no capítulo das Funções, e compreender como o uso do manual pelos alunos é influenciado pela forma como a professora o media nas suas aulas. O estudo usa uma metodologia mista, no entanto, a principal abordagem é qualitativa. Os dados foram recolhidos a partir de entrevistas semi-estruturadas dirigidas à professora e a três alunos e da observação de aulas e de um questionário aplicado a todos os alunos da turma. No estudo realça-se que a professora considera o manual adoptado como um bom auxiliar utilizando-o, essencialmente, na preparação das aulas para seleccionar as tarefas a propor aos alunos. Na fase de planificação das aulas constrói o seu próprio material com a ajuda de outros recursos para introduzir os conteúdos a leccionar. No capítulo das Funções, o manual escolar foi integrado na sua prática lectiva apenas para resolver exercícios e problemas e corrigir os trabalhos de casa. Este recurso curricular é visto como um facilitador do seu trabalho. Os alunos usam o manual escolar, principalmente, para resolverem as tarefas ali propostas, quer nas aulas quer em casa, a pedido da professora. Verifica-se, no entanto, que também o fazem por iniciativa própria e que o valorizam bastante. Os resultados sugerem que estes são influenciados pela forma como a professora promove o uso do manual mas também que desenvolveram outras formas de uso substancialmente diferentes: para ler a explicação dos conteúdos, observar exemplos resolvidos para resolver exercícios, resolver outros exercícios e problemas, estudar previamente os conceitos, ler o resumo da secção essencial, consultar quadros resumos e verificar as soluções. Para além do manual escolar, a maioria dos alunos integra no seu estudo outros materiais para ter acesso a outras tarefas. Outro resultado a realçar, é que em situações em que o aluno sente mais dificuldade na disciplina, tende a apoiar-se mais no manual.

Pretende-se com esta dissertação verificar se o desenho criativo é para o autor uma procura de sentido e de uma consciência mais alargada de si . Para esse efeito procedeu-se a uma abordagem do desenho sob o ponto de vista do fenómeno da produção criativa. Parte-se do pressuposto de que na produção existe uma tendência deliberada e de uma tendência intuitiva; sendo que esta última se associa a uma certa liberdade interior. Esta liberdade resulta de uma relação eu não-eu e de uma relação eu eu, das quais se presume haver um alargamento da consciência de si (autor) e das coisas que estão para fora de si. O desenho será, no contexto desta abordagem, um meio de reforço da relação dialéctica eu não-eu. Pretendeu-se saber se seria a satisfação de uma certa inquietação e uma consciência mais alargada o sentido que se procura na criação através do desenho. Neste sentido, em função do problema de partida, formulou-se uma hipótese geral e, para sua operacionalização, várias hipóteses específicas. Estas determinaram a formulação de um guião de entrevistas semi-estruturadas que foram aplicadas a onze artistas plásticos e a dois arquitectos. Estes autores foram escolhidos atendendo à importância que atribuem ao desenho como instrumento de criação. Com o propósito de validar os aspectos presentes nas hipóteses específicas, optou-se por traçar um desenho metodológico qualitativo, usando como procedimento afim uma análise de conteúdo categorial temática. Na discussão dos resultados, a partir da apresentação destes, procurou-se verificar de que modo os resultados obtidos se aproximam ou não das asserções dos autores abordados no enquadramento teórico, e se confirmavam ou infirmavam as hipóteses específicas e a hipótese geral formuladas a priori. Concluiu-se que o desenho de facto contribui para reforçar a relação eu não-eu e eu eu. O que pode acontecer quer seja através do desenho com base na p

A especialização e a tecnicidade dos críticos literários podem ser prejudiciais à interpretação. É falacioso acreditar que há uma essência particular subjacente ao intérprete que lhe confere poderes interpretativos. De igual modo, é um equívoco crer que a interpretação depende de um conjunto de técnicas instituídas a priori, que existe uma rede de instrumentos e de métodos entendidos como a única forma de ler. Pensar que se é um scholar e que, por isso, se está apto a traduzir o texto literário pode ser um erro; pensar que existe uma posição teórica que suporta as ideias do crítico é também um engano. Neste trabalho, serão tomados como objectos de análise casos de tradução, análise textual, e metacrítica. Três exemplos de especialização excessiva: 1) a fundamentação e o enquadramento teóricos são dispensáveis, nos casos em que se ancoram em argumentações de âmbito nacional, cultural, e linguístico; 2) a literatura é um universo avariado e contaminado: a sua maquinaria depende de estruturas frágeis e de inconformidades que dificilmente a teoria e a metodologia excessiva podem notar e solucionar; 3) alguns tipos de análise empregam ferramentas que exercem violência sobre o texto e o lêem às avessas.Specialization and technicality can undermine literary interpretation. It is likewise fallacious to believe that the interpreter must, in essence, carry a distinctive character, taste, and sensibility for aesthetic features that empower him with interpretive authority. Accordingly, it is equivocal to defend that interpretation depends on a set of techniques devised a priori, and that there is a net of instruments and tools that can be adopted and allow for the definitive reading. To think oneself as a scholar and to imagine that the academic status bestows a theoretical armor in support of the critic’s ideas is also a mistake. Specific cases of translation, criticism, and metacriticism shall be taken into account. Three specific moments featuring specialization and abuse of methodology: 1) theoretical grounds should be disposed of when they can only be supported by national, cultural, and linguistic justifications; 2) literature is broken, in the sense that its machinery depends upon fragile structures and inconformities difficult to pinpoint by means of theory and strict methodology; 3) some types of analysis employ tools that exert violence upon the literary text and turn it sideways.