Repositório RCAAP

A Iniciativa sobre Medicamentos Inovadores é uma parceria público-privada entre a Comunidade Europeia, representada pela Comissão Europeia, e a Indústria Farmacêutica, representada pela Federação Europeia da Indústria Farmacêutica. Esta Iniciativa de Tecnologia Conjunta tem como objetivos acelerar o processo de investigação e desenvolvimento de medicamentos inovadores, bem como gerar novos conhecimentos científicos que promovam a integração da medicina personalizada nas doenças prioritárias definidas pela Organização Mundial de Saúde. Atualmente, no âmbito desta iniciativa foram estabelecidos dois programas, sendo que o primeiro (IMI1) decorreu entre 2008 e 2013 e teve um orçamento de 2 mil milhões de euros, enquanto que o segundo programa (IMI2) está em decurso desde 2014 e terminará em 2020 e o orçamento disponibilizado foi de 3.276 mil milhões de euros. A diabetes mellitus é uma das doenças prioritárias indicadas pela Organização Mundial de Saúde alvo de financiamento pelos programas IMI. As principais justificações para este facto prendem-se com os dados epidemiológicos da doença. No decorrer dos anos, verificou-se um aumento exponencial da taxa de prevalência desta doença a nível mundial. Esta evidência é suportada pelo facto de, entre o período de 1980 e 2014, esta taxa ter sofrido um aumento de 4.7% para 8.7%, o quadruplo do valor, em adultos com idade igual ou superior a 18 anos e também por as estimativas a 20 anos, realizadas pela Organização Mundial de Saúde, indicarem que o número total de casos existentes corresponderá a mais de 20% da população universal. Simultaneamente, constatou-se um crescimento progressivo tanto da taxa de mortalidade por diabetes bem como dos custos de saúde acarretados por esta doença. No que diz respeito à taxa de mortalidade, em 2016, a diabetes foi considerada a sétima principal causa de morte no mundo. Em termos de impacto económico, a diabetes e as complicações decorrentes desta doença, como é o caso das doenças cardiovasculares, nefropatia diabética e retinopatia diabética, impõem um grande peso económico para os sistemas de saúde. A nível mundial, os custos anuais provocados pela diabetes, entre o ano de 2007 e 2019, aumentaram de 232 mil milhões de dólares para 760 mil milhões de dólares, o que equivale a incremento de 528 mil milhões de dólares em 12 anos. Na área da Diabetes, o principal objetivo dos programas IMI1 e IMI2 é o de reduzir a tendência crescente observada na taxa de prevalência desta doença. De forma a atingir esta meta, os dois programas supramencionados primaram o financiamento de projetos cujo intuito consistia no desenvolvimento do conhecimento, medicamentos, métodos, ferramentas e modelos que facilitassem a implementação da medicina personalizada, como modelo de prática médica corrente, em doentes com diabetes. Até outubro de 2019, os programas IMI financiaram treze projetos para a área da Diabetes & Doenças Metabólicas, nomeadamente SUMMIT, IMIDIA, DIRECT, StemBANCC, EMIF, EBiSC, INNODIA, RHAPSODY, BEAT-DKD, LITMUS, Hypo-RESOLVE, IM2PACT e CARDIATEAM. Entre estes, o INNODIA tinha como objetivo a diabetes tipo 1, o DIRECT, EMIF e RHAPSODY tinham como foco a diabetes tipo 2, o SUMMIT, BEAT-DKD, LITMUS, Hypo-RESOLVE e CARDIATEAM estavam associados às complicações da diabetes e os restantes projetos, o StemBANCC, EBiSC, IMIDIA e IMI2PACT, estavam orientados para o desenvolvimento da vertente científica. Em geral, um investimento monetário total na ordem dos €447 249 438 foi realizado pelo IMI na área da Diabetes. Todavia, a deteção da lacuna existente na integração dos resultados produzidos pelos diferentes projetos, impulsionou a elaboração da presente dissertação intitulada de “Scientific Advances in Diabetes: The Impact of the Innovative Medicines Initiative”, ou seja, Avanços Científicos na Área da Diabetes: Impacto da Iniciativa sobre Medicamentos Inovadores. Os principais objetivos estabelecidos para esta dissertação foram os de recolher os artigos publicados pelos projetos financiados e sistematizá-los nos eixos de investigação definidos na agenda estratégica do programa IMI2, mais concretamente: 1) identificação de alvos e biomarcadores, 2) novos paradigmas de ensaios clínicos, 3) medicamentos inovadores e 4) programas de adesão terapêutica centrados nos doentes. A metodologia de investigação aplicada nesta dissertação consistiu numa revisão de literatura, tendo-se utilizado como fontes de dados as páginas eletrónicas oficiais de cada projeto, o contacto com os coordenadores e co-coordenadores dos projetos e a base de dados europeia Cordis. No geral, um total de 662 citações foram identificadas, das quais 185 foram incluídas na análise realizada neste trabalho. Através da sistematização e integração dos artigos recolhidos nos projetos financiados pelo IMI, averiguou-se que para o eixo de identificação de alvos e biomarcadores, os outcomes relevantes responderam a cinco das recomendações definidas na agenda estratégica do programa IMI2, nomeadamente: 1) identificar e validar marcadores biológicos, ferramentas e ensaios, 2) identificar as determinantes que justificam a variabilidade interindividual, 3) compreender os mecanismos moleculares subjacentes à doença, 4) desenvolver uma plataforma de ensaios pré-clínicos e 5) estabelecer modelos de sistemas. De um modo geral, um vasto número de biomarcadores, ferramentas, fatores responsáveis pela heterogeneidade da população, incluindo marcadores genéticos, e mecanismos relevantes foram identificados para a diabetes tipo 1 pelo INNODIA, para a diabetes tipo 2 pelo SUMMIT, IMIDIA, DIRECT e EMIF, para as células beta pancreáticas pelo IMIDIA e RHAPSODY, para a nefropatia diabética pelo SUMMIT e BEAT-DKD, e para as doenças cardiovasculares e retinopatia diabética pelo SUMMIT. Suplementarmente, um conjunto de ferramentas e ensaios foram desenvolvidos pelos projetos StemBANCC, EBiSC e IMIDIA com o intuito de impulsionar avanços na área investigacional. Ainda neste eixo foram propostos dois modelos de estratificação dos doentes, um relativo ao controlo glicémico em doentes com diabetes tipo 1 estabelecido pelo INNODIA e outro correspondente à identificação dos subtipos de doentes com diabetes desenvolvido pela parceria BEAT-DKD/RHAPSODY. Relativamente ao eixo de ensaios clínicos, os dados analisados compreendiam propostas de novos parâmetros clínicos e de desenhos de ensaios, sendo que estes resultados visavam espelharem com maior precisão as características da subpopulação com diabetes em teste. Os dados incluídos neste eixo foram obtidos a partir dos projetos SUMMIT, DIRECT e BEAT-DKD. No que concerne ao eixo de medicamentos inovadores, as informações recolhidas dos artigos publicados pelos projetos SUMMIT, IMIDIA, DIRECT, StemBANNC, EMIF, INNODIA e BEAT-DKD consistiam na identificação de novos potenciais alvos terapêuticos bem como no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, ambos com a finalidade de tratar ou prevenir tanto a diabetes como as complicações associadas a esta doença. Foi ainda proposta uma nova abordagem de produção de células estaminais pluripotentes humanas em larga escala pelo StemBANCC. No que tange aos programas de maximização de resultados de saúde benéficos centrados no doente com diabetes, dois novos modelos preditivos foram desenvolvidos e validados pelo projeto DIRECT, permitindo a sua utilização como ferramentas de diagnóstico por médicos especialistas. Adicionalmente, esta dissertação tem como objetivo apresentar uma proposta de visão de complementaridade entre os treze projetos financiados pelo IMI, realçando as possíveis estratégias a adotar para a integração da medicina personalizada na prática clínica. Esta abordagem engloba a criação de indicadores biológicos e genéticos que facilitem a identificação dos indivíduos com risco elevado de desenvolver diabetes, a inclusão de ferramentas que possibilitem o diagnóstico precoce dos doentes e, por último, a seleção do tratamento apropriado às características do indivíduo, ou seja o que evidencie ser mais eficaz e seguro, suportado em modelos de estratificação de doentes, tentando desta forma retardar a progressão da doença, assim como prevenir o desenvolvimento das complicações relacionadas com a progressão da doença.

O projeto onde esta tese se incluí, tem por objetivo produzir os pepinos-do-mar em aquacultura: Projeto Mar2020 nº MAR-02.01.01-FEAMP-0052, Newcumber – “Avanços para o cultivo sustentável de pepinos-do-mar”. Este trabalho descreve a avaliação metrológica de diferenças na composição elementar de tecidos de pepinos-do-mar de três espécies comerciais, colhidos em diferentes locais e habitats. Foram estudados quatro tecidos dos pepinos-do-mar (derme, músculo, gónadas e intestino) colhidos na costa da Arrábida, três espécies (Holothuria mammata Grube, 1840, Holothuria forskali Delle Chiaje, 1823 e Holothuria arguinensis Koehler & Vaney, 1906), dois habitats (areia e rocha) e três locais de colheita num gradiente de distância ao estuário do Sado. A avaliação e comparação dos teores de cádmio, cobre, níquel e chumbo (determinados por espetroscopia de absorção atómica) em diferentes tecidos dos pepinos-do-mar foi baseada na quantificação de incerteza utilizando a abordagem bottom-up e combinações de componentes de incerteza utilizando o método das Simulações de Monte Carlo. A comparação de médias de valores medidos de vários grupos de amostras permitiu concluir que a espécie que apresenta maior concentração de todos os metais estudados é a H. forskali. Os animais que habitam na rocha, das 3 espécies estudadas, também apresentam maiores teores de metais comparando com os animais que habitam na areia. O intestino é o tecido que apresenta maiores concentrações de metais e a derme corresponde ao tecido com menor quantidade de metais. Em termos de local de colheita, considerando o estuário do Sado como fonte potencial de contaminação, não foi observada uma tendência única nos níveis de metais bioacumulados. Embora os pepinos-do-mar colhidos no local mais próximo do estuário apresentassem concentrações mais elevadas de cobre e níquel, o chumbo foi determinado em maior quantidade no local de colheita mais afastado do estuário e no local intermédio foi encontrado o cádmio em maior quantidade.

A Perturbação de Hiperatividade e Défice de Atenção é uma das perturbações psiquiátricas com maior prevalência a nível mundial em idade pediátrica, manifestando-se por hiperatividade, impulsividade e/ou desatenção. O seu tratamento é apenas a nível sintomatológico, estando disponíveis várias opções terapêuticas não-farmacológicas e/ou farmacológicas, como psicostimulantes. O metilfenidato é um inibidor da recaptação da dopamina e da noradrenalina, indicado para o tratamento da PHDA em crianças com mais de 6 anos e em adultos. Existem poucos estudos sobre a segurança do uso do metilfenidato em crianças em idade pré-escolar, embora o fármaco seja frequentemente utilizado em regime off-label. Com o objetivo de identificar problemas de segurança relativos ao uso do metilfenidato nesta população, foi realizada uma revisão bibliográfica e uma análise das notificações de reações adversas ao metilfenidato com doentes de idade inferior a seis anos reportadas na base de dados europeia. Adicionalmente, foi realizada uma pesquisa mais simplista sem restrição de idade para melhor entendimento do universo total de reações adversas associadas ao metilfenidato. O número total de notificações foi inferior ao esperado. Não se verificaram diferenças significativas no padrão de distribuição das reações em nenhuma faixa etária, relativamente a grupos de reações da mesma tipologia, género do doente ou gravidade das reações. Observou-se a existência de dois casos de morte, sete de risco de vida, dezoito de falta de eficácia do metilfenidato e cinco casos de sobredose. As reações adversas são maioritariamente alterações do foro psiquiátrico e sistema nervoso. Destacaram-se alucinações, agressividade e perda de apetite como reações mais frequentes em idade pré-escolar. Verificou-se ainda uma frequência elevada de casos de ideação suicida, trombocitopenia, midríase, hipersecreção salivar e coma, que não é compatível com os casos reportados para as restantes idades. Foram encontrados doze casos de reações graves não descritas, que merecem ser estudadas mais aprofundadamente, como hepatite tóxica, hematoma ocular e paralisia facial. Esta análise apresenta algumas limitações, nomeadamente o número total reduzido de notificações, suas lacunas de informação, viés pela metodologia elegida, desconhecimento do universo exposto ao fármaco e dificuldade de dissociação entre reação adversa e manifestações clínicas e/ou comorbilidades.

As várias espécies pertencentes ao género Vaccinium L., nomeadamente o mirtilo têm revelado um grande potencial nas indústrias alimentares e farmacêuticas. O presente trabalho teve por objetivo estudar uma amostra de mirtilo produzido em modo biológico em Portugal relativamente ao cumprimento dos requisitos definidos nas farmacopeias Europeia e Portuguesa (Ph.Eur.10/FP 9) nas monografias de Vaccinium myrtillus L. fruto fresco recente e seco, assim como, caracterizar o seu perfil nutricional. Para o efeito utilizaram-se amostras de mirtilo fresco recente e seco (liofilizado), os métodos descritos nas Farmacopeias Europeia e Portuguesa, Ph.Eur.10/FP 9 (análise de fármacos vegetais) e métodos de análise de alimentos descritos pela Associação dos Químicos Analíticos Oficiais (AOAC). Enquanto fármaco vegetal, foi possível confirmar a conformidade do fruto fresco quanto à sua identificação química, e quanto aos seus teores de humidade e de cinzas totais, integrantes dos ensaios relativos à avaliação da sua pureza. De facto, verificou-se uma semelhança no perfil cromatográfico quando comparado ao descrito pelas Ph.Eur.10 e FP 9, bem como uma perda por secagem entre 83,8% e 84,1%, o que está dentro do intervalo de 80-90% definido nas Ph.Eur.10/FP 9 e um teor em cinzas totais entre 0,25% e 0,31%, inferiores à percentagem máxima definida pelas Ph.Eur.10 e FP 9 (0,6%). Os resultados do doseamento dos principais constituintes marcadores mostraram para esta amostra um teor em antocianinas de 0,12%, aproximadamente 1/3 do valor mínimo de 0,30% estabelecido pelas Ph.Eur.10 e FP 9. Relativamente à amostra de fruto seco, verificou-se também a sua conformidade quanto à identificação botânica macro e microscópica, tendo sido nesta, identificadas estruturas típicas tais como esclereídos e maclas de oxalato de cálcio e identificação química, apresentando esta amostra igualmente um perfil cromatográfico muito semelhante ao descrito nas Ph.Eur.10 e FP 9. Nesta amostra, verificou-se também a conformidade quanto à presença de elementos estranhos (0,038%), percentagem inferior ao máximo permitido (2%), teor em humidade (6-9%), inferior ao máximo permitido (12%) e teor em as cinzas totais (1,2-1,3%), inferior ao máximo permitido (5%). Os resultados do doseamento de constituintes marcadores mostraram para esta um teor em taninos de 0,34%, inferior ao mínimo de 1% definido pelas Ph.Eur.10 e FP 9. Em complemento, foi também determinado o teor em fenóis totais, tendo-se verificado ser este teor (60,6 mg Eq. de pirogalhol/100 g fruto seco) inferior ao valor relatado na literatura para o fruto fresco. Apesar da não conformidade das amostras em apreço quanto ao teor em constituintes marcadores verificou-se serem os valores obtidos para o fruto fresco concordantes com os descritos para fruto fresco na literatura, por outros autores. Relativamente ao perfil nutricional os resultados obtidos mostraram que o fruto fresco possui um conteúdo proteico de 0,5%, um teor de matéria gorda total de 0,36%, um teor em hidratos de carbono de 14,91% e um teor em fibras alimentares de 1,9%. As amostras de fruto fresco e seco possuem um pH ácido (2,9) e fornecem em termos energéticos 83 Kcal/100 g de fruto fresco e 334 Kcal/100 g de fruto seco, o que corresponde a 4% e 17% do valor energético diário de referência para um adulto. Em particular, a amostra de fruto seco de mirtilo analisada mostrou ser rica em açucares e em fibras alimentares, fornecendo, 100 g desta respetivamente 23,2% da dose diária de referência de açucares e 89,6% da dose mínima diária de referência em fibras alimentares. Além disso, o seu teor em vitamina C foi de 14 mg/100 g, correspondente a 17,5% da dose diária de referência para um adulto. Nesta amostra (fruto seco) foram ainda quantificados macrominerais - cálcio (51,8 mg/100 g), magnésio (40,4 mg/100 g) e fósforo (63,2 mg/100 g) e microminerais essenciais como o ferro (1,6 mg/100 g) e o zinco (10,5 μg/100 g). Os teores de chumbo (10,4 μg/100 g) e cádmio (<1 μg/100 g), desta amostra (fruto seco) mostraram ser inferiores aos teores máximos permitidos neste tipo de alimento. O estudo efetuado, sustentado pelos resultados laboratoriais obtidos, permitiu determinar a qualidade das amostras de mirtilo nacional em apreço enquanto possíveis fármacos vegetais e o seu perfil nutricional, servindo assim de base para a realização de trabalhos futuros.

Com benefícios para as empresas, supply chain e sociedade, a rastreabilidade constitui-se como um dos elementos centrais da resposta da União Europeia às crises alimentares e às preocupações dos consumidores com a segurança e qualidade alimentar. Apresentando um crescimento significativo, as empresas de gelado artesanal têm realizado investimentos em sistemas de rastreabilidade para assegurar a qualidade de um produto que se pretende diferenciado e com um processo de produção singular. Sendo realizada num contexto de acreditação para a ISO 22000, esta dissertação realiza uma análise ao processo de rastreabilidade sendo abordado posteriormente um conjunto de melhorias através de medidas implementadas e sugestões para o futuro. As medidas implementas e sugestões de melhoria são transversais englobando desde a receção das matérias-primas até a saída do produto final, sendo de referir a modificação do lote interno, a maior proximidade com o fornecedor, a alteração na organização do armazém e controlo de inventário, o controlo da sequência de produção, o controlo da transformação de fruta em sumo ou polpa, a gestão de incidentes e rotulagem secundária para produtos take-away. Constata-se que as melhorias no domínio da rastreabilidade contribuíram para assegurar a qualidade e segurança alimentar apresentando ainda contributos significativos na política de gestão de inventários, redução desperdícios e, consequentemente, para a eficiência e eficácia geral da empresa.

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Num mundo global e interconectado, as doenças infeciosas de âmbito internacional são inevitáveis e imprevisíveis, atingindo as comunidades de forma devastadora. Quando ameaças de saúde pública (re)emergem, o sistema de saúde pública trabalha para mitigar seu impacto, reduzir o número de mortes e a morbilidade associada. Dentro dos sistemas de saúde pública, o sistema regulamentar tem um papel crítico na resposta a estas ameaças, com pressão para o desenvolvimento e acesso a medicamentos, vacinas e testes de diagnóstico o mais rapidamente possível. Neste contexto, é importante compreender a forma como o sistema regulamentar está preparado, como pode acelerar a avaliação e a disponibilização de soluções terapêuticas, e identificar oportunidades de melhoria. Este trabalho apresenta uma análise minuciosa do desempenho do sistema regulamentar nas recentes crises da saúde do Ébola, seguida pela identificação dos mecanismos atuais implementados pelas principais Autoridades Regulamentares e possíveis oportunidades de melhoria. O surto de 2014-2016 na África Ocidental, o maior e mais mortífero surto de Ébola até ao presente, marcou um ponto de viragem na capacidade de preparação e resposta global e regulamentar. Os esforços conjugados de vários stakeholders levaram ao desenvolvimento acelerado de vacinas e medicamentos para o Ébola, num contexto catastrófico. No entanto, este surto expôs também fraquezas na capacidade de resposta rápida e efetiva dos sistemas regulamentares às ameaças de saúde pública. Durante o surto, apenas um ensaio clínico foi capaz de reunir dados suficientes para avaliar a eficácia de uma vacina, e várias dúvidas sobre segurança, tolerabilidade ou imunogenicidade ficaram sem resposta. Como consequência, muitas lições foram discutidas e tidas em conta posteriormente, com destaque para a inclusão da investigação clínica nos planos para futuras crises de saúde e maior integração nas respostas às epidemias. Com base nessas lições, a resposta ao segundo maior surto de Ébola, dois anos depois, foi rápida, mais organizada e melhor coordenada, culminando na aprovação da primeira vacina contra o Ébola (um marco na capacidade de preparação em saúde pública). A análise da resposta aos surtos de Ébola demonstrou a implementação bem-sucedida de mecanismos regulamentares diversificados, que promoveram o desenvolvimento, o acesso antecipado e a avaliação rápida de medicamentos, vacinas e testes de diagnóstico, incluindo revisão prioritária, autorização condicional de introdução no mercado e revisões contínuas. Esta análise também mostrou a flexibilidade do sistema regulamentar, a sua capacidade de resposta e capacidade de adotar soluções inovadoras, mantendo os padrões de qualidade, segurança e eficácia. Existem algumas oportunidades de melhoria no atual quadro regulamentar, incluindo uma coordenação mais centralizada, melhor capacidade regulamentar e harmonização nos países em desenvolvimento, maior transparência e comunicação mais clara. Apesar disso, o sistema regulamentar parece capaz e adequado para lidar positivamente com atuais e futuras crises de saúde pública. Não obstante não poder impedir a sua ocorrência, pode minimizar os seus impactos e proteger a saúde global.

O melanoma metastático é o tipo de cancro de pele que apresenta uma maior mortalidade, este desenvolve-se nos melanócitos e quando diagnosticado em estádios mais avançados apresenta um prognóstico pouco favorável. Infelizmente, todas as terapêuticas disponíveis para o tratamento do melanoma metastático apresentam taxas de resposta baixas e efeitos adversos severos (com uma taxa de sobrevivência inferior a 10% em 10 anos). O tratamento convencional para o melanoma em estádios avançados é a quimioterapia, no entanto esta demonstra falta de seletividade e uma elevada toxicidade associada, tornando-se pouco eficaz. O desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para o tratamento desta doença letal é de extrema importância, tanto para melhorar a taxa de cura como também para aumentar os benefícios clínicos para os pacientes. Nesta dissertação, são reportados o design e a síntese de novos compostos híbridos de triazenos potencialmente promissores para o tratamento do melanoma metastático. Os compostos híbridos incorporam na sua estrutura dois farmacóforos (o grupo triazeno e um derivado do tiofenol o 4-hidroximetiltiofenol ou o ácido 3-(4-hidroxifenilsulfanil propiónico) numa única molécula. A vantagem de juntar covalentemente dois farmacóforos deve-se ao fato de poderem atuar através de diferentes mecanismos de ação: o triazeno é um agente alquilante do DNA e os tiofenóis são substratos da tirosinase e agentes melanocitotóxicos específicos (induzem a apoptose das células cancerígenas do melanoma). A tirosinase é uma enzima que se encontra sobreexpressa nas células do melanoma, constituindo um alvo promissor para o desenvolvimento de novas terapias dirigidas para o melanoma. Os compostos híbridos sintetizados foram avaliados quanto à sua estabilidade química em PBS (0.01 M, pH 7.4), em plasma humano, e na presença de tirosinase. Todos os compostos avaliados demonstraram ser quimicamente estáveis em PBS com valores de t1/2 superior a 86 horas. Quanto à estabilidade em plasma humano, os compostos híbridos, apresentaram uma estabilidade adequada com valores de t1/2 entre 3 e as 148 horas. Relativamente ao estudo preliminar na presença de tirosinase o composto 1d demonstrou ser um bom substrato da tirosinase com t1/2 de ativação de 2,5 minutos na presença da enzima. Os compostos híbridos foram também avaliados quanto à sua citotoxicidade in vitro em diferentes linhas celulares do melanoma: A375, MNT-1, B16F10. Dos compostos avaliados os que apresentaram uma maior citotoxicidade foram os compostos 1d e 1a contra a linha celular do melanoma A375, com valores de IC50 de 55 ± 5 µM e de 61 ± 4 µM, respetivamente.

1.1. Introdução A saúde ocupa atualmente um lugar de destaque no que diz respeito à afetação de recursos e verbas financeiras, principalmente nos países desenvolvidos. É essencial conhecer esta realidade, não apenas para mera consciência de quais os sectores onde se aloca a maior parte da despesa em termos de saúde, mas também para se perceber o impacto que as políticas de promoção e implementação de medicamentos genéricos (MG) podem ter, a curto e longo prazo, em termos económicos, políticos e sociais, e em termos de acessibilidade aos tratamentos, gerando, consequentemente, ganhos em saúde. Neste contexto, as políticas de saúde são cruciais para mitigar o aumento continuado da despesa e as pressões demográficas face a um crescimento económico insuficiente. Para além disso, da inovação tecnológica e terapêutica resulta um conjunto de desafios que implicam uma adaptação permanente das políticas de saúde com vista a um aumento da eficácia e eficiência do sistema. A implementação das políticas de uso de MG permitiu o início do tratamento adequado de muitos doentes, não somente de países em desenvolvimento como dos países desenvolvidos, bem como a garantia da continuidade do tratamento de muitos doentes que frequentemente abandonavam a sua terapêutica crónica devido às incomportáveis despesas suportadas a longo prazo. As estratégias assentes no desenvolvimento das políticas do medicamento permitem assim conciliar o rigor orçamental exigido pelos governos, com o acesso à saúde enquanto direito fundamental dos doentes. A existência de medicamentos originais e inovadores é também vital para o desenvolvimento de novos tratamentos contra doenças emergentes ou já estabelecidas. Não obstante, são os seus substitutos genéricos que permitem aumentar a concorrência no mercado por forma a permitir a sua venda a baixo preço, o que contribui para a redução das despesas alocadas à saúde pública. Os governos, como grandes responsáveis pela promoção da saúde pública, têm aqui um importante papel na promoção de estratégias para o uso de MG, estimulando indiretamente a concorrência no mercado. Têm também uma responsabilidade acrescida no que que à projeção dos orçamentos em saúde diz respeito, sendo imprescindível estabelecer objetivos a longo prazo (adicionalmente aos de curto prazo, habitualmente estabelecidos por mandato de governo), e que permitam promover a sustentabilidade de todo o sistema de saúde. É também importante não esquecer o papel das autoridades reguladoras na revisão da legislação em vigor e nas políticas aplicadas ao sector do medicamento, por forma a que as mesmas não constituam barreias ao incentivo de desenvolvimento de novos MG. 1.2. Objetivos O presente trabalho tem como objetivo principal destacar o papel vital dos MG nos sistemas de saúde e pretende retratar a necessidade de estabelecer e implementar políticas de MG. Pretende-se assim fazer uma análise ao estado da arte da evolução das políticas relacionadas com os MG, não apenas em território nacional, mas enquadradas também no contexto europeu, e sempre que a literatura o permite, de âmbito internacional, fazendo o respetivo enquadramento à definição de MG. Pretende-se adicionalmente estudar o impacto que as políticas adotadas tiveram em termos de promoção do uso de MG e no aumento da quota de mercado, bem como identificar as necessidades de reforço para a continuidade de implementação das mesmas. 1.3. Métodos Para a prossecução dos objetivos propostos, procedeu-se a uma revisão crítica da literatura nacional e internacional, através de uma pesquisa de artigos científicos na base de dados PubMed, sob os termos de pesquisa “medicamentos genéricos”, “políticas medicamentos genéricos” e “quota de mercado medicamentos genéricos”. Esta pesquisa foi efetuada na língua portuguesa e inglesa, tendo sido excluídos os artigos publicados não publicados nas referidas línguas. Após análise ao ‘sumário’ dos artigos, foi feita uma seleção dos que apresentavam informação mais relevante (tendo em consideração os objetivos do presente estudo), bem como os que continham informação mais atual. A pesquisa bibliográfica foi realizada entre janeiro de 2018 e setembro de 2020. Não foi considerada uma data limite de publicação, tendo sido considerada toda a informação de artigos publicados até 2020. Após a aplicação dos critérios de inclusão e exclusão da estratégia de pesquisa, procedeu-se à análise detalhada da informação disponibilizada nos artigos. Adicionalmente à pesquisa de literatura em bases de dados internacionais, foi também realizada uma pesquisa eletrónica complementar a vários websites de entidades e/ou autoridades reguladoras competentes nacionais e internacionais, bem como de associações sectoriais e profissionais nacionais e estrangeiras, por forma a extrair informação de relatórios, infografias, dados estatísticos e comunicados efetuados, que se refletem no presente trabalho. Por fim, e no que à legislação nacional diz respeito, foi feita uma revisão, em Diário da República eletrónico, de toda a legislação nacional publicada sob os termos de pesquisa “medicamento genérico” ou “quota de medicamentos genéricos”. Do total das medidas legislativas publicadas, que continham os referidos termos de pesquisa, apenas algumas foram selecionadas face à sua relevância na regulação dos MG, com base numa análise ao conteúdo do ‘sumário’ e do corpo do ‘texto’ das referidas medidas legislativas. A pesquisa decorreu entre janeiro de 2018 e agosto de 2020, não tendo sido aplicado nenhum critério de inclusão ou exclusão relativamente ao horizonte temporal da pesquisa. 1.4. Resultados Na pesquisa de literatura nacional e internacional, por forma a fazer uma análise ao estado da arte das políticas relacionadas com os MG, foram identificados 2064 artigos científicos de potencial interesse, dos quais, dada a sua relevância para os objetivos do presente estudo e face à sua atualidade em comparação com os demais, 15 foram utilizados como referências bibliográficas. No que à revisão da legislação nacional diz respeito, publicada em Diário da República eletrónica sob os termos de pesquisa considerados, do total de 863 medidas legislativas publicadas, apenas foram consideradas como relevantes para o presente estudo 76. Pela análise à informação recolhida, foi possível aferir que a definição de MG não tem sofrido alterações, existindo, no entanto, diferentes políticas aplicadas à implementação dos MG e promoção do seu uso - do lado das políticas de oferta estão as medidas relacionadas com o acesso ao mercado, o preço e a comparticipação; e do lado das políticas de procura estão os incentivos aos médicos (para prescreverem), aos farmacêuticos (para dispensarem) e aos doentes (para os exigirem). Identificaram-se marcadas diferenças na implementação destas políticas entre os diferentes países analisados, e, em alguns casos, dentro do próprio país. Em termos de quota de mercado deste tipo de medicamentos, atualmente, e apesar de existir uma definição de MG a nível comunitário, as autoridades de cada Estado-Membro têm um grau de liberdade suficiente que lhes permite adotar uma aceção muito própria daquilo que consideram ser um MG. Esta dissemelhança condiciona a fórmula de cálculo das respetivas quotas (quem em valor, quer em volume), o que se repercute numa mensuração desigual desta quota entre os diferentes países, condicionando desta forma as ilações retiradas da análise comparativa a nível internacional e que se revestem da maior importância económica e política no que à assunção de medidas custo-efetivas no âmbito da política do medicamento dizem respeito. 1.5. Conclusão A par com o envelhecimento da população e o aumento da incidência das doenças crónicas - considerando que se prevê o aumento da população idosa europeia (> 65 anos) de 129 para 191 milhões, um crescimento de 50% - , é premente que se tente minimizar o correspondente impacto na despesa com a saúde. O crescente mercado dos MG veio mudar o panorama internacional de acessibilidade ao medicamento (e consequentemente, aos cuidados de saúde), tendo um papel de destaque no decorrer das épocas de crise e subsequente recessão económica, onde a população é obrigada a fazer escolhas mais económicas. Um dos fatores de crescimento deste mercado (em volume e/ou em valor) deve-se a um investimento na disponibilização de mais informação sobre a segurança e qualidade destes medicamentos, não só junto dos profissionais de saúde, como dos próprios doentes, que se traduz num crescente grau de confiança face a esta alternativa terapêutica, que em muitos países se apresentam como a única solução face ao fraco poder económico das famílias. Prevê-se assim uma crescente revolução no mercado dos medicamentos, com um investimento exponencial em MG por parte da indústria farmacêutica e das autoridades de saúde, principalmente notório nos Medicamentos Não Sujeitos a Receita Médica (MNSRM), que podem assumir um papel importante na dinamização do mercado, permitindo que mais doentes sejam tratados sem aumentar a despesa pública (considerando a sua não comparticipação por intermédio do erário público). Evidencia-se também o investimento global de muitos países em promover o uso generalizado de MG, independentemente das características específicas de cada país. O panorama da indústria farmacêutica encontra-se em mudança e a adaptar-se a esta nova realidade, em que a tendência apontada será de as empresas comercializarem não somente o medicamento original, como a sua versão genérica, sendo importante não descurar do investimento na investigação e desenvolvimento de novos fármacos e na procura de novas alternativas terapêuticas. É indiscutível que os MG podem gerar uma poupança substancial aos sistemas de saúde. Existem ainda, no entanto, muitos desafios na efetiva implementação de políticas de MG para obter o máximo de benefícios. Os desafios são diferentes de entre um sistema de saúde para outro, pelo que um programa bem elaborado para promover o uso de MG deve considerar primeiramente os desafios com base nas configurações nacionais, e dentro destas, as configurações regionais. Além disso, qualquer iniciativa de implementação política de promoção de MG carece de apoio de outras políticas complementares, por forma a facilitar a sua implementação ou a superar as barreiras que surgem no decorrer deste processo. Todas as políticas, programas e projetos implementados afetam a saúde global da população e devem ter em consideração o seu impacto, principalmente no que diz respeito à possibilidade de criar desigualdades na saúde. Os MG oferecem uma excelente oportunidade para aumentar o acesso a medicamentos essenciais, seguros e eficazes, garantindo a sustentabilidade dos sistemas de saúde. É assim imperativo incentivar as autoridades de saúde e o governo a concentrarem-se em medidas promoção do uso de MG, por intermédio da implementação de políticas sustentáveis a longo prazo que possibilitem a geração de benefícios sustentados para todas as partes interessadas (doentes, indústria farmacêutica e governo). A consciencialização da relação existente entre a saúde e os fatores socioeconómicos da população terá sempre em vista a melhoria de acesso à saúde e a maximização de oportunidades de gerar ganhos em saúde e minimização das probabilidades de gerar despesa e desigualdades. É também importante, em todo este percurso, responsabilizar os doentes pela sua saúde, envolvendo-o nas respetivas tomada de decisão e na avaliação do impacto das suas escolhas.

O glioblastoma multiforme (GBM) é o tipo de tumor cerebral mais comum e maligno. O tratamento padrão consiste na remoção cirúrgica do tumor, seguida de radioterapia e quimioterapia. No entanto, na maioria dos pacientes, a recorrência do tumor geralmente aparece alguns meses após o tratamento. Vários fatores estão relacionados com a falha no tratamento do GBM, como a localização do tumor no cérebro que torna a remoção total da massa tumoral um procedimento crucial, a presença da barreira hematoencefálica (BHE) que impede a penetração da maioria dos fármacos no sistema nervoso central sistema (SNC), a natureza heterogénea das células GBM e os múltiplos mecanismos de resistência desenvolvidos por essas células. Por esse motivo, existe uma necessidade significativa de desenvolver um sistema de veiculação de fármacos que possa melhorar a liberação no cérebro e, consequentemente, os resultados do tratamento. As nanopartículas de lipídios sólidos (SLN) e os transportadores lipídicos nanoestruturados (NLC) são atualmente considerados dos sistemas mais promissores para a veiculação de fármacos para o SNC. A estrutura e/ou a superfície destas nanopartículas podem ser modificadas usando diferentes estratégias com o objetivo de melhorar o cruzamento da BHE, o direcionamento seletivo para as células tumorais, a superação da resistência das células GBM, entre outros. O conceito de “reaproveitamento de fármacos” foi introduzido nos últimos anos como uma forma de utilizar substâncias activas pré-existentes e seguras no tratamento de pacientes com cancro cerebral primário e recorrente com base no perfil molecular do tumor. As Estatinas são uma família de fátmacos amplamente utilizada no tratamento da hipercolesterolémia através da inibição da 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A (HMGCoA) redutase, impedindo assim a biossíntese do colesterol. Vários estudos in vitro e in vivo demonstraram propriedades antineoplásicas da Atorvastatina (ATR) contra células de GBM. Estas propriedades antitumorais incluem indução de apoptose, invasão tumoral e redução da metastização e inibição de vias inflamatórias. No entanto, este fármaco hidrofóbico não pode ser administrado facilmente por via intravenosa, e a baixa biodisponibilidade observada após administração oral dificulta a obtenção de concentrações terapêuticas eficazes contra o GBM. Neste estudo, desenvolvemos uma nova formulação de ATR obtida por encapsulação em NLC (ATR-NLCs)e subseqientemente modificada para incluir: (1) succinato de D-ɑtocoferil polietilenoglicol (TPGS) para aumentar a absorção celular pela inibição da atividade de efluxo de P-glicoprotien (P-gp); (2) O quitosano para obter NLCs catiónicas de modo a aumentar apermeabilidade da BHE; e (3) O ácido hialurónico (HA) para vectorização para as células de GBM. Como o tamanho de partícula das NLC desempenha um papel crucial na vectorização para o cérebro, e também na clearance das nanopartículas, nosso objetivo primeiro foi desenvolver um sistema de veiculação com um tamanho de partícula <200 nm. As SLN e NLC, particularmente aqueles no intervalo de 120–200 nm, são menos aprisionados pelas células do MPS (Sistema Mononuclear Fagocitário) e, portanto, escapam parcialmente à retenção no fígado e do baço. Consequentemente, apresentam tempos de circulação mais longos, o que favorece o contacto com a BHE. A otimização da formulação foi realizada por meio de estudo de triagem para as variáveis de composição das NLC, incluindo tipo de lípido sólido, tipo de lípido líquido, e respectiva proporção, e tipo e concentração de agente tensioactivo. A técnica de homogeneização a quente foi escolhida como método de preparação por ser um método simples e económico que não inclui o uso de solventes orgânicos. Além disso, para uma perspetiva futura, este método é facilmente transponível para a escala industrial. Os agentes tensioactivos da família dos ploxâmeros (Pluronic®) são conhecidos por produzir nanopartículas estáveis, apresentando baixa toxicidade e alta biocompatibilidade. Para além disso modificam a atividade das proteínas transportadoras de efluxo, aumentando permeabilidade através da BHE. No presente trabalho foram investigados dois agentes tensioactivos desta família: Pluronic® F68 e Pluronic® F127. Tendo as NLC produzidas com Compritol®888 ATO e Pluronic® F86 apresentado tendência para agregação, o Precirol® foi selecionado como o lípido sólido e testado com Pluronic® F127 (0.5% w/v). As SLN resultantes apresentaram um tamanho de partícula de 124.1 nm e um índice de polidispersão (PI) de 0,363. De entre os quatro lípidos líquidos selecionados, a introdução de Transcutol® HP na formulação anterior, na proporção de 1:3 (lipido líquido/sólido), originou um tamanho de partícula de 114,8 nm, um valor de (PI) de 0,724 e valor de potencial zeta de -35,3 mV. Esta formulação de NLC otimizada foi então usada para incorporar ATR (ATR-NLC). Subsequentemente, a formulação ATR-NLC não modificada e as três formulações modificadas: TPGS-ATR-NLC, quitosano-ATR-NLC e ácido hialurónico-ATR-NLC foram então caracterizadas e testadas in vitro em cultura celulares relevantes U87 e U373. Todas as formulações de NLC contendo ATR formaram nanopartículas distribuídas monomodalmente com um tamanho de partícula entre 102,4 ± 5,8 nm e 131,4 ± 4,9 nm. A introdução de TPGS resultou na diminuição do tamanho de partícula, pois esta molécula atuou como co-tensioactivo e reduziu a tensão interfacial entre a matriz lipídica e o meio de dispersão (fase aquosa). Os valores de ZP variaram entre -23,2 mV e -27,9 mV. A adição de quitosano originou partículas com uma ligeira carga positiva (+1,4±5,2 mV) que permitiu posteriormente a adsorção eletrostática de HA. A última formulação, que incluiu o revestimento da formulação de quitosano com há, apresentou uma mudança no ZP de valor positivo para negativo (-27,9±2,2 mV) devido à natureza polianiónica das moléculas de HA, fornecendo evidência para o revestimento das nanopartículas por cadeias de HÁ. A análise morfológica por microscopia eletrónica de transmissão (TEM) revelou partículas esféricas nas quatro formulações de NLC desenvolvidas. A formulação de quitosano-ATR-NLCs apresentou partículas de formato irregular, enquando a formulação HA-CS-NLC mostrou a existência de um núcleo denso regular com uma coroa uniforme que confirma o revestimento de HA. A análise por espectroscopia de infravermelho com transformadas de Fourier (FT-IR) provou que não existem possíveis interações fármacoexcipiente em qualquer das formulações. As nanopartículas apresentaram valores de de eficiência de encapsulação (EE) superiores a 70%, o que sugere que os sistemas desenvolvidos são transportadores adequados para a incorporação de ATR, confirmado pelo facto de este fármaco ser de natureza hidrofóbica (logP = 5,39). Os perfis de libertação do fármaco in vitro mostraram, em todas as formulações, uma libertação inicial de cerca de 50% nas primeiras duas horas, seguida por uma fase de libertação sustentada. O estudo de estabilidade durante 3 meses de armazenamento a 4±1°C não revelou diferenças significativas no tamanho das partículas e PI, sugerindo claramente que uma concentração ótima de Pluronic F127 de 0,5% foi suficiente para cobrir a superfície das nanopartículas de forma eficaz e evitar a aglomeração durante o processo de homogeneização. A captação celular de ATR-NLC marcados com cumarina, pelas células U87 e U373, depende da concentração, e quantidade de nanopartículas captadas aumentou com o aumento da concentração aplicada. Os exames por microscopia de fluorescência forneceram uma evidência profunda de que as partículas estavam com alto grau de fixação celular no citoplasma das células de glioma, tendo sido observada um aumento da captação nas formulações com TPGS-ATR-NLCs e HA-ATR-NLCs. O efeito citotóxico in vitro das nanopartículas de ATR e fármaco livre em células U87 e U373 foi estudado pelo método do iodeto de propídio (PI) e pelo ensaio Alamar Blue. Os resultados obtidos revelaram valores de captação de PI aproximadamente iguais ao valor do controlo negativo (≈1), o que indica a presença de células viáveis com membranas celulares intactas, enquanto o controlo positivo revelou o valor de PI ≈1,5 que indica a presença de células não viáveis. Esses resultados significam que as formulações não têm efeito sobre a integridade da membrana nas células-alvo. Os resultados obtidos no ensaio Alamar Blue realizado em células U373 (após 72h de incubação com as formulações) mostraram que a solução livre do fármaco apresentou 61,6% de viabilidade celular. Considerando que, ATR-NLCs, TPGS-ATR-NLCs, quitosano-ATR-NLCs e HA-ATRNLCs mostraram 22,9%, 9,08%, 22,4% e 35,7%, respetivamente. Da mesma forma, na mesma condição de tempo de incubação e concentração nas células U87, a solução livre do fármaco apresentou viabilidade celular de 67,3%. Enquanto ATR-NLCs, TPGS-ATRNLCs, chitosano-ATR-NLCs e HA-ATR-NLCs exibiram valores de viabilidade celular de 35,5%, 21,4%, 29% e 54,7%, respetivamente, embora a modificação com quitosano e ácido hialurónico não originou uma diferença significativa em termos de citotoxicidade quando comparada com a formulação de ATR-NLCs não modificada, os nossos resultados forneceram uma evidência profunda da captação celular aumentada e efeito citotóxico quando a formulação foi modificada com TPGS. Neste estudo, estabelecemos uma forte evidência do uso de NLCs como um sistema de nanopartículas promissor para a entrega de ATR e mostrámos que o TPGS-ATR-NLC é uma nova formulação com enorme potencial para a veiculação de fármacos para o tratamento do GBM. Esta hipótese será posteriormente validada através da realização de futuros estudos in vivo.

This article presents the results of the Digital Map of Iberian Literary Relations (1870-1930) project, which applies a cartographic approach to interactions between Iberian literary systems in the late nineteenth century and early twentieth century. Firstly, it provides an overview of the theoretical foundations underpinning the project, examining both the field of Iberian Studies, which forms the basis for the study, and the development of digital cartographies in recent years. Secondly, it explains the specific methodology used in the project, from the selection of data and their codification into a database to possible issues and options for visualization through interactive digital maps. Finally, the article presents a preliminary analysis of the results of the project and the conclusions emerging from the ‘digital map’. It seeks to demonstrate the way in which this innovative cartographic and visual approach to transnational literary history can serve as a tool to reflect on the centres, nodes and peripheries of the dissemination of Iberian cultures. In addition, the article highlights several limitations of the model, providing a stepping-stone from which to propose further developments

A coqueluche ou pertússis, é uma doença respiratória infeciosa de alto contágio, sendo mais comumente conhecida como “tosse convulsa” por causa da tosse característica a ela associada. O agente etiológico principal é a bactéria Gram-negativa Bordetella pertussis, no entanto alguns casos estão associados ao microrganismo relacionado B. parapertussis. O agente pode ser transmitido por gotículas aerossolizadas sendo que, após a inalação, as bactérias colonizam os epitélios respiratórios ciliados das vias aéreas inferiores em humanos, onde exercem um papel na supressão da imunidade do hospedeiro durante as fases iniciais da infeção. Apesar da disponibilidade e do uso mundial de vacinas contra a tosse convulsa, esta continua a ser a doença menos controlada entre as que dispõem de vacinação, mesmo em países com altas taxas de imunização, os quais têm experimentado um aumento nos casos de coqueluche nos últimos anos. Como esta doença pode ser fatal para os recém-nascidos não vacinados, a redução da disseminação da bactéria Bordetella pertussis por meio da compreensão dos seus mecanismos de ação biológica, associado ao desenvolvimento de vacinas mais eficazes contra a coqueluche, poderia ajudar a interromper o ciclo vicioso de colonização e transmissão. As vacinas acelulares (“acellular Pertussis”, aP) atuais contra a tosse convulsa têm na sua composição apenas alguns antigénios selecionados de B. pertussis (toxina pertussis, hemaglutinina filamentosa, pertactina e/ou fímbrias). A ausência da toxina adenilato ciclase (CyaA) na atual formulação das vacinas aP é considerada uma das possíveis causas para a falha cada vez mais aparente no desenvolvimento de uma proteção de longo prazo contra a tosse convulsa em populações altamente vacinadas, em oposição à eficácia das vacinas celulares (“whole-cell Pertussis”, wP) que têm sido usadas há décadas, mas que podem causar distúrbios neurológicos graves, entre outros efeitos colaterais. Isso ocorre porque CyaA aniquila as funções bactericidas das células sentinelas da imunidade inata, paralisando as atividades bactericidas opsonofagocíticas dos fagócitos, tais como neutrófilos e macrófagos. Devido ao seu papel protetor e imunossupressor desempenhado nas infeções por Bordetella, o toxóide CyaA é atualmente considerado um candidato ideal para a inclusão na próxima geração de vacinas aP. B. pertussis produz uma série de fatores de virulência que a permitem superar as funções de defesa imune inatas e adaptativas da mucosa aérea do hospedeiro, tais como as toxinas pertussis e CyaA. CyaA é uma proteína (1706 resíduos aminoacídicos) formada por vários domínios, desempenhando um papel particular nas fases iniciais da infeção por B. pertussis. Possui um domínio catalítico adenilato ciclase (AC) localizado nos ~400 resíduos N-terminais, o qual depende de calmodulina eucariótica (CaM) para a sua atividade enzimática, e uma porção C-terminal (~1300 resíduos) responsável pela translocação deste domínio AC, bem como para o fenótipo hemolítico de B. pertussis. A presença de um segmento de ~100 resíduos ligando os domínios enzimáticos e hidrofóbicos de CyaA (resíduos 400-500) é crucial para a translocação do domínio AC através da membrana plasmática e para a regulação da atividade de formação de poros da toxina. O domínio hidrofóbico, que abrange os resíduos 500 a 700, contém pares de resíduos de glutamato carregados negativamente localizados nos segmentos hidrofóbicos que estão envolvidos no controle da taxa de formação, seletividade catiónica e tamanho dos poros formados por CyaA. Após a acilação específica de resíduos de lisina internos (K860 e K983) por uma aciltransferase (CyaC), a toxina é convertida a partir de um precursor inativo, proCyaA, na sua forma ativa. Estes resíduos de lisina estão localizados na região acilada compreendida entre os resíduos 800 a 1000, e a sua modificação pós-traducional é necessária para as atividades citotóxicas (translocação do domínio AC) e hemolíticas (formação de poros) de CyaA, bem como para a conversão da toxina numa holo-proteína monomérica. A metade C-terminal de CyaA (resíduos 1006 a 1706) compõe o domínio de ligação ao recetor celular e exibe várias características comuns a todas as proteínas pertencentes à família RTX (repeats in toxin), tal como as repetições nonapeptídicas de glicina e aspartato do protótipo GGxGxD (onde x representa qualquer aminoácido). Estas repetições formam os numerosos (∼45) locais de ligação a cálcio de CyaA. Os motivos RTX são intrinsecamente desordenados e são caracterizados por uma carga global média negativa na ausência de cálcio, que é parcialmente neutralizada com a ligação do mesmo, favorecendo uma transição de estrutura desordenada para ordenada. Assim, CyaA é uma proteína de ligação a cálcio que sofre alterações conformacionais após se ligar a este catião. A secreção de CyaA através do invólucro bacteriano envolve um sistema de secreção do tipo I (T1SS), constituído pelas proteínas CyaB, CyaD e CyaE, o qual exibe o mesmo mecanismo de translocação de HlyA, a α-hemolisina da família RTX de E. coli, que usa o aparelho HlyBD/TolC. Após a secreção, a ligação a cálcio presente no meio extracelular leva a alterações conformacionais do domínio de ligação ao recetor celular de CyaA, tornando-se numa estrutura estável. Esta conversão induzida pelo cálcio no domínio de ligação ao recetor é necessária para a atividade biológica de CyaA. Uma vez secretado, este domínio liga-se à subunidade CD11b do recetor CD11b/CD18, que é expresso em células mieloides como macrófagos, células dendríticas, neutrófilos e células NK (“natural killer cells”), e que são os alvos primários de CyaA in vivo. No entanto, CyaA pode-se ligar com eficácia reduzida a uma variedade de outros tipos celulares que não expressam a integrina CD11b/CD18, como eritrócitos ou células epiteliais. Após penetração da membrana da célula eucariótica (contendo ou não o recetor CD11b/CD18), a proteína CyaA liberta o seu domínio AC no citosol da célula alvo. Neste compartimento, a enzima adenilato ciclase é ativada pela ligação da calmodulina citosólica e catalisa uma conversão extremamente rápida (kcat∼2000 s-1) e descontrolada de ATP em cAMP. A acumulação desta molécula de sinalização subverte a fisiologia celular e suprime rapidamente as funções bactericidas dos fagócitos. Paralelamente, a porção hemolisina oligomeriza em poros seletivos para catiões e permeabiliza as células para o efluxo de iões potássio citosólicos. A toxina CyaA é capaz de penetrar as células eucarióticas e realizar atividades citotóxicas e hemolíticas, ambas dependentes de cálcio. CyaA possui duas classes diferentes de locais de ligação ao cálcio, locais de ligação ao cálcio de baixa afinidade, importantes para a atividade citotóxica da toxina, e locais de ligação ao cálcio de alta afinidade, importantes para a capacidade de ligação à membrana e a atividade hemolítica de CyaA. Embora os locais de baixa afinidade estejam localizados no domínio RTX da toxina, a localização dos locais de alta afinidade é ainda desconhecida. Uma análise da região C-terminal do segmento acilado de CyaA (resíduos 908 a 1008) revelou que existem dois blocos de resíduos de aminoácidos com um padrão semelhante ao dos locais de ligação ao cálcio altamente conservados do domínio RTX, exibindo uma sequência consenso GGxGxD. Deste modo, usando mutagénese dirigida, testou-se a hipótese de estes dois blocos de resíduos de aminoácidos no segmento acilado de CyaA formarem os locais de ligação ao cálcio de alta afinidade, os quais desempenhariam um papel fundamental na ligação à membrana e atividade hemolítica de CyaA. Portanto, o presente trabalho teve dois objetivos principais: (1) construção, isolamento e purificação de variantes de CyaA com substituições nos locais previstos de ligação ao cálcio, seguido da sua caracterização funcional em ensaios de atividade e por medições eletrofisiológicas em preparações membranares de bicamadas lipídicas, e ainda (2) construção, isolamento e purificação da parte C-terminal do segmento acilado de CyaA (CyaA908-1008) e suas variantes, bem como a sua caracterização por cromatografia líquida acoplada a análises de espectrometria de massa e de espectroscopia de dicroísmo circular. Neste estudo, conseguiu-se expressar e purificar variantes de CyaA que continham mutações não conservativas em ambos os blocos I e II do segmento acilado da toxina, e comparar as suas atividades (ligação à membrana, translocação do domínio AC e atividade hemolítica) com a proteína nativa. Observámos que algumas das substituições introduzidas aboliram as atividades de ligação e as atividades invasivas da enzima AC, bem como a capacidade de formação de poros de CyaA, tanto em membranas de células de mamíferos, como em membranas artificiais. Além disso, conseguimos expressar e purificar com sucesso o polipeptídeo CyaA908-1008, bem como as suas variantes mutantes que continham mutações nos locais previstos de ligação ao cálcio. Os resultados de espectroscopia de dicroísmo circular nas variantes de CyaA908-1008 indicaram a existência de dois sítios de ligação ao cálcio na toxina CyaA, um localizado no bloco I e outro localizado no bloco II da sua região acilada. Os resultados obtidos são a base para investigações futuras, especialmente para uma caracterização estrutural mais aprofundada da parte C-terminal da região acilada de CyaA, nomeadamente estudos de cristalografia de raios-X e ressonância magnética nuclear.

A regulamentação do setor dos dispositivos médicos procura colocar no mercado dispositivos médicos (DMs) mais seguros, eficazes e de elevada qualidade que tenham impacto na saúde pública, melhorando a qualidade de vida dos doentes reduzindo tanto quanto possível os riscos para a saúde inerentes aos DMs. A revisão do quadro regulamentar vigente desde o início da década de 90, iniciou-se em 2008 e culminou com a publicação do Regulamento (UE) 2017/745 do Parlamento Europeu e do Conselho de 5 de abril de 2017 relativo aos DMs e do Regulamento (UE) 2017/746 do Parlamento Europeu e do Conselho de 5 de abril de 2017 relativo aos DMs para diagnóstico in vitro. O Regulamento (UE) 2017/745 reforça várias áreas como a avaliação de conformidade, a rastreabilidade e transparência, os requisitos clínicos, a monitorização pós-comercialização, os requisitos que os Organismos Notificados devem satisfazer, e a classificação de DMs. Entre as cinco novas regras de classificação apresentadas pelo Regulamento (EU) 2017/745, encontra-se a regra de classificação nº 21 que introduz uma classificação específica e adequada a dispositivos médicos constituídos por substâncias ou combinações de substâncias destinadas a serem introduzidas no corpo humano por um orifício corporal ou aplicadas na pele e que sejam absorvidas ou dispersas localmente no corpo humano, através de critérios de classificação específicos garantindo assim produtos seguros, com qualidade e desempenho adequados. Esta nova regra de classificação permite uma abordagem baseada no risco associado à ocorrência ou não de absorção sistémica das substâncias que compõem o DM no corpo humano, e ao local anatómico, podendo ser enquadrado nas classes de risco IIa (aplicação tópica), IIb ou III, consoante a circunstância. Esta regra vem reclassificar muitos produtos que se encontravam já no mercado, impondo maior escrutínio no acesso ao mercado para DMs à base de substâncias. O novo sistema regulamentar orienta o setor para uma avaliação pré-comercialização adequada, um sistema de classificação mais coerente e baseado no risco e uma melhor fiscalização do mercado, garantindo que os consumidores europeus dispõem de um acesso atempado a tratamentos inovadores sem comprometer a segurança.

Em 2011 teve lugar em Lisboa o encontro Looking at Iberia from a Comparative European Perspective, financiado pela European Science Foundation, no qual foi apresentada uma palestra intitulada “Iberian Studies: a state of the art and future perspectives”. Dez anos depois da apresentação original daquele texto, é provavelmente um bom momento para analisar em que sentido e até que ponto os Estudos Ibéricos avançaram nas linhas previstas em 2011. Trata-se, em definitivo, de realizar uma reavaliação crítica da evolução dos Estudos Ibéricos, depois de uma década de trabalho e desenvolvimento, de forma a identificar as suas forças e fragilidades, focar naquelas áreas nas quais existiu, até agora, um claro défice de investigação, e tentar contrariar as rotinas ou inércias estabelecidas ao longo destes dez últimos anos, para evitar que o campo dos Estudos Ibéricos se transforme, paradoxalmente, num novo mecanismo de consolidação dos cânones, narrativas e discursos dominantes.

Palatability and swallowability in the pediatric population are perceived as true challenges in the oral administration of medication. Pediatric patients have high sensitivity to taste and reduced ability to take solid dosage forms, which can often lead to a poor therapeutic compliance. It is crucial to find new strategies to simplify the oral administration of drugs to children. The present paper reports the development of a new hydrogel vehicle adapted to the pediatric population. Several polymers with similar properties were selected and adjustments were made to obtain the desired characteristics of the final product. The developed formulations were studied for organoleptic properties, rheology, mucoadhesion properties, preservative efficacy, and stability. Physical and chemical compatibilities between the vehicle and several drugs/medicines, at the time of administration, were also studied. Six final formulations with different polymers, odor, and color were chosen, and no known interactions with medications were observed. The proposed new oral vehicles are the first sugar-free vehicle hydrogels designed to make the intake of oral solid forms a more pleasant and safer experience for pediatric patients.

One of the biggest challenges in neuro-oncology is understanding the complexity of central nervous system tumors, such as gliomas, in order to develop suitable therapeutics. Conventional therapies in malignant gliomas reconcile surgery and radiotherapy with the use of chemotherapeutic options such as temozolomide, chloroethyl nitrosoureas and the combination therapy of procarbazine, lomustine and vincristine. With the unraveling of deregulated cancer cell signaling pathways, targeted therapies have been developed. The most affected signaling pathways in glioma cells involve tyrosine kinase receptors and their downstream pathways, such as the phosphatidylinositol 3-kinases (PI3K/AKT/mTOR) and mitogen-activated protein kinase pathways (MAPK). MAPK pathway inhibitors include farnesyl transferase inhibitors, Ras kinase inhibitors and mitogen-activated protein extracellular regulated kinase (MEK) inhibitors, while PI3K/AKT/mTOR pathway inhibitors are divided into pan-inhibitors, PI3K/mTOR dual inhibitors and AKT inhibitors. The relevance of the immune system in carcinogenesis has led to the development of immunotherapy, through vaccination, blocking of immune checkpoints, oncolytic viruses, and adoptive immunotherapy using chimeric antigen receptor T cells. In this article we provide a comprehensive review of the signaling pathways underlying malignant transformation, the therapies currently used in the treatment of malignant gliomas and further explore therapies under development, including several ongoing clinical trials.

As análises clínicas são um meio fundamental no diagnóstico, no prognóstico e na monitorização de doentes, quer a nível hospitalar quer a nível de medicina de ambulatório. O presente relatório refere-se ao estágio no âmbito do Mestrado em Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa, que decorreu no Serviço de Patologia Clínica do Hospital Dr. Nélio Mendonça, nas valências de Bioquímica, Hematologia e Microbiologia. O relatório descreve todo o processo analítico, considerando a importância da fase pré-analítica, analítica e pós-analítica e do controlo de qualidade. Tem como objetivo apresentar e caracterizar o local de estágio e as atividades desenvolvidas nas diferentes secções. Para cada uma das valências, é feita uma descrição dos principais equipamentos e metodologias utilizados e dos parâmetros analíticos determinados, realçando o seu interesse e significado clínico.

O presente relatório de estágio descreve as atividades com que contactei no estágio curricular no âmbito do Mestrado em Análises Clínicas, que realizadas em dois laboratórios do grupo SynlabHealth II. O relatório incide sobre as valências de Bioquímica e Hematologia e inclui a descrição dos equipamentos e métodos mais utilizados, fundamentos teóricos dos ensaios, tipo e conservação das amostras utilizadas, valores de referência, interpretação dos resultados e controlo interno e externo da qualidade.

Resumo parte 1: O estágio foi realizado entre julho de 2019 e dezembro de 2019, no âmbito do Mestrado em Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa, e decorreu no Laboratório de Análises Clínicas - Villalab - Análises Clínicas, Lda, um laboratório dirigido para a comunidade, em Cascais. Este laboratório desenvolve todas as valências, e essas valências são as de Bioquímica Clínica, Microbiologia, Hematologia e Imunologia. Este relatório de estágio vai subdividir-se nas valências de Bioquímica Clínica e de Microbiologia, por serem as áreas que foram desenvolvidas no estágio. Na valência de Bioquímica Clínica iremos descrever a fase pré-analítica, fase analítica em que são mencionados os equipamentos e os parâmetros bioquímicos (perfis lipídico, hepático, pancreático, renal e cardíaco), e posteriormente a fase pós-analítica, que corresponde à validação dos resultados por um farmacêutico especialista, assim como a emissão do boletim dos resultados e a entrega desses resultados ao doente ou ao médico. Na valência de Microbiologia, será descrita a fase pré-analítica, os equipamentos, os métodos de diagnóstico na fase analítica, os produtos biológicos e a fase pós-analítica. Será também descrito o controlo de qualidade interno e externo. No controlo interno da qualidade, amostras com valores conhecidos de matriz idêntica à biológica são analisadas como sendo amostras biológicas com a finalidade de monitorizar a precisão dos métodos analíticos. Para o efeito de controlo de qualidade externo, amostras com valores desconhecidos de matriz idêntica à biológica, fornecidas pelo Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, são analisadas como sendo amostras biológicas. Na data prevista, com a finalidade de se aferir a exatidão dos métodos analíticos do laboratório Villalab, serão realizadas uma avaliação retrospetiva, validação de metodologias e de procedimentos, cálculo do erro total, qualificação dos colaboradores e avaliação das necessidades de formação, com o objetivo final de promover a confiança dos clientes no laboratório. Resumo parte 2: A Organização Mundial de Saúde define anemia como uma diminuição da concentração de Hemoglobina (Hb) no sangue (abaixo de 13,0 g/dL nos homens e abaixo de 12,0 g/dL nas mulheres não grávidas) ou da quantidade de glóbulos vermelhos (GV), abaixo dos valores de referência para a idade, género e altitude relativamente ao nível do mar, do local onde se vive. As causas de anemia podem ser múltiplas, nomeadamente deficiências nutricionais (vitamina B12, ácido fólico, ferro), anomalias genéticas (talassemias) e diversas outras condições como doenças infeciosas/inflamatórias, neoplasias, doenças crónicas e/ou autoimunes. Após os 65 anos a prevalência de anemia é maior nos homens e, nestes, ainda é maior nos que têm mais de 85 anos, uma vez que a Hb diminui com a idade. A anemia mais comum é por deficiência em ferro e segundo a Associação Portuguesa para o Estudo da Anemia (Anemia Working Group Portugal - AWGP), estima-se que afete entre 4 a 5 mil milhões de pessoas em todo o mundo, ou seja, 15% da população mundial. Segundo a AWGP, a prevalência de anemia em Portugal é de cerca de 20% (20,6%), ou seja, 1 em cada 5 portugueses sofre de anemia, sendo que destes, a grande maioria (84%) desconhece ter esta condição, pelo que apenas 2% da população recebe tratamento de forma adequada, pelo que este é considerado um importante problema de saúde pública nacional, o índice de prevalência da anemia é superior à média dos países desenvolvidos, pois enquanto nestes países a taxa é de 9%, a taxa nacional é mais do dobro, atingindo os 20%. No Norte do país a anemia é mais prevalente em adultos até aos 65 anos e no Centro do país mais prevalente nos adultos com mais de 65 anos, acompanhando a prevalência da deficiência em ferro nestas regiões. Nos idosos a etiologia da anemia é classificada em três categorias principais: uma categoria é a deficiência nutricional em ferro, folato ou vitamina B12 que pode estar associada à desnutrição frequente nos idosos, outra categoria são as doenças crónicas como a inflamação e doença renal crónica e, por último, temos a anemia, para a qual não é conhecida uma causa evidente. No Laboratório de Análises Clínicas – Villalab, foram estudados 26 casos de anemia com Hb entre o intervalo de 7,3-10,9 g/dL e os pacientes foram agrupados em 3 grupos 59 (A, B e C), de acordo com os seus parâmetros analíticos. No grupo A foram incluídos 10 casos, os quais apresentavam os índices hematimétricos (VGM, HGM, CHGM e RDW) dentro dos valores normais, mas uma produção de GV reduzida. No grupo B foram incluídos 11 casos, os quais apresentavam 3 dos quais apresentavam o VGM diminuído. Em 3 casos suspeitou-se de anemia ferropénica, num dos casos de beta-talassemia e nos restantes 7 casos suspeitou-se de uma anemia causada por doenças crónicas. No grupo C foram incluídos 5 casos, os quais apresentavam GV, Hb e Ht baixos e VGM elevado. Em 4 casos, com VGM inferior a 110 fL, suspeitou-se de anemia causada por hipoplasia medular, ou decorrente de uma doença hepática, já que os doentes tinham mais de 90 anos. Num caso, com VGM superior a 110 fL, colocou-se a hipótese de ser uma anemia megaloblástica, mas seria necessário proceder ao doseamento do ácido fólico e da vitamina B12, análises que não foram requisitadas pelo médico.