Repositório RCAAP

This article analyses the positive reception of Katixa Agirre’s novel Las madres no. In order to contextualise these considerations, we will briefly present the writer’s career up to this point, and we will offer a brief narrative analysis of the novel. Finally, we will trace some possible explanations for the favourable reception of the book Las madres no among Spanish-speaking readers and critics: the originality of the text and the chosen subgenre (the crime thriller); the recent boom of publications on the topic of motherhood in Spanish and Latin-American recent literatures; and also the role played by the publishing house, Tránsito Libros, an independent and fairly young company with a strong presence in social networks which has attracted some enthusiastic followers within the Spanish readership. The combination of these different elements may explain why Las madres no has received more attention than other works by the same author, and by other Basque writers who have been translated into Spanish.

Nos últimos anos, a tuberculose (TB) tornou-se uma emergência de saúde global, principalmente devido ao surgimento de estirpes multirresistentes e extensivamente resistentes do seu agente etiológico, Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Este problema é acentuado pela relativa ineficácia da vacina BCG e dos agentes antimicobacterianos atualmente conhecidos e, pela falta de alternativas terapêuticas para a TB. Com quase dois milhões de mortes por TB anualmente, é urgente encontrar uma vacina eficaz contra a doença, desenvolver ferramentas de diagnóstico rápido e criar melhores esquemas de tratamento. Assim, é fundamental um melhor esclarecimento do mecanismo da patogénese da TB, que é atualmente mal compreendido, devido à estrutura altamente complexa da parede celular micobacteriana. A camada de peptidoglicano (PG) da parede celular micobacteriana é particularmente relevante, uma vez que apresenta modificações únicas, das quais a N-glicolilação do ácido murâmico, catalisada pela atividade da hidroxilase do ácido N-acetil murâmico (NamH), é de especial interesse. Estudos anteriores demonstraram que a N-glicolilação do PG promove a resistência a antibióticos β-lactâmicos e à lisozima. Da mesma forma, outros estudos demonstraram que a N-glicolilação do PG parece estimular a imunogenicidade da parede celular micobacteriana. Apesar de não ser um gene essencial, o namH é altamente conservado em estirpes clínicas de Mtb, o que indica que a N-glicolilação do PG possui uma função importante na resistência a antibióticos e/ou na patogénese da TB. Assim, o objetivo principal desta tese foi modular a expressão do namH de modo a compreender a importância da N-glicolilação do PG micobacteriano na resistência aos antibióticos e no reconhecimento das micobactérias por parte do hospedeiro. Para isso, vários mutantes knockdown do namH (namH-) foram construídos em M. smegmatis e M. tuberculosis H37Ra, usando uma nova e eficaz ferramenta molecular de regulação da transcrição, o CRISPR de interferência (CRISPRi). Esta técnica baseia-se na expressão induzida, com anidrotetraciclina (ATc), de um complexo dCas9-sgRNA para impedir a transcrição da sequência alvo, o que permite a investigação da função do gene de interesse, neste caso do namH. Os mutantes knockdown do namH construídos em M. smegmatis foram caracterizados através da realização de várias experiências: curvas de crescimento e plaqueamento de diluições seriadas de cada cultura numa área circular delimitada designada por spot. Estas experiências mostraram que quer a deleção quer a repressão do gene namH não origina defeitos graves no crescimento de M. smegmatis, confirmando-se assim que este gene não é essencial. Além disso, foi possível observar um nível residual de toxicidade da dCas9Sth1 durante as curvas de crescimento, ao verificar-se que o controlo M. smegmatis:PLJR962 cresce ligeiramente mais devagar na presença de indutor. Embora não tenha sido possível confirmar a repressão do namH em todos os mutantes knockdown, a repressão deste gene no mutante knockdown induzido M. smegmatis C2 ATc foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) e confirmada. Além disso, constatou-se que o CRISPRi provoca polaridade, ou seja, uma diminuição significativa da transcrição do gene a jusante. No entanto, não foi possível investigar de que modo a força da PAM escolhida, a cadeia de DNA alvo e o local alvo afetam a eficiência do CRISPRi. De seguida, o papel da N-glicolilação do PG na suscetibilidade a vários antibióticos foi investigado através da realização de ensaios para determinar a concentração mínima inibitória (CMI) e a concentração mínima bactericida (CMB) de diversos β-lactâmicos (amoxicilina, cefotaxima, meropenem), na presença e ausência do inibidor de β-lactamase clavulanato, e de alguns agentes antimicobacterianos (etambutol e isoniazida) para todos os mutantes knockdown em M. smegmatis, na presença e ausência de indutor. Os resultados obtidos mostraram que o meropenem é mais eficiente ao inibir o crescimento das micobactérias do que a amoxicilina ou a cefotaxima. Este efeito parece ser causado pela resistência inerente do meropenem às β-lactamases micobacterianas e, também, devido a uma inibição simultânea de L,D-transpeptidases e, algumas D,D-transpeptidases e D,D-carboxipeptidases. Além disso, constatou-se que a N-glicolilação do PG tem um papel significativo na resistência aos β-lactâmicos, uma vez que tanto o mutante de deleção do namH (ΔnamH) quanto os mutantes knockdown induzidos exibiram um fenótipo de suscetibilidade à maioria dos β-lactâmicos. Da mesma forma, foi observada uma correlação relevante entre a N-glicolilação do PG e o mecanismo de ação da cefotaxima pois os mutantes namH- exibiram uma diminuição particularmente significativa da CMI da cefotaxima ou da cefotaxima-clavulanato na presença de indutor. Verificou-se ainda que a principal β-lactamase de M. smegmatis (BlaS) hidrolisa os antibióticos β-lactâmicos com diferente eficiência, pois a adição de clavulanato aos β-lactâmicos diminuiu consideravelmente a CMI da amoxicilina, o que não aconteceu no caso da cefotaxima e do meropenem. Os ensaios de CMB mostraram que todos os β-lactâmicos possuem atividade bactericida para a maioria das amostras de M. smegmatis testadas, o que indica que a N-glicolilação do PG não afeta consideravelmente a capacidade dos β-lactâmicos matarem as micobactérias. No entanto, verificou-se que a indução do sistema de CRISPRi pareceu aumentar a atividade bactericida dos β-lactâmicos em alguns casos, em que os mutantes knockdown do namH eram mais facilmente mortos na presença de indutor. Os ensaios de difusão em disco permitiram a determinação das zonas de inibição do meropenem para todos os mutantes knockdown construídos em M. smegmatis, com e sem indutor. Tal como tinha sido demonstrado anteriormente, os resultados destes testes sugeriram que a proteína NamH desempenha um papel na resistência ao meropenem, pois tanto o mutante de deleção do namH (ΔnamH) quanto os mutantes de knockdown do namH induzidos exibiram um fenótipo exacerbado de hipersuscetibilidade ao meropenem. Estas experiências demonstraram que os mutantes de deleção/repressão do namH são mais suscetíveis à maioria dos β-lactâmicos. Este “fenótipo de hipersuscetibilidade aos β-lactâmicos” pode, então, ser explicado pela inibição: i) da atividade hidrolítica de β-lactamase da NamH; ii) da atividade de monooxigenase/hidroxilase da NamH, que modifica os açúcares do PG micobacteriano; iii) ambas as atividades, permitindo uma sinergia entre a inibição da atividade de β-lactamase e a inibição da N-glicolilação do PG. De facto, a redução da atividade de hidroxilase da NamH tem como consequências: i) a diminuição da integridade do PG devido a uma menor disponibilidade de grupos N-glicolil para estabelecer ligações de hidrogénio; ii) a alteração da polimerização do PG devido a uma menor disponibilidade de precursores do PG que estejam N-glicolilados. Assim, a deleção/repressão do namH pode ser utilizada em sinergia com o tratamento com β-lactâmicos para diminuir a integridade do PG micobacteriano. A contribuição da N-glicolilação do PG para o reconhecimento pelo sistema imunitário do hospedeiro foi avaliada através da realização de infeções de macrófagos de ratinho RAW 264.7 com um mutante namH- selecionado, M. smegmatis C2. Verificou-se que os macrófagos são mais eficazes a erradicar o mutante de knockdown induzido C2 ATc do que qualquer outra bactéria no t=24h, o que sugere que a presença do PG N-glicolilado promove a sobrevivência intracelular, possivelmente ao aumentar o fitness das micobactérias dentro dos macrófagos. Esta observação parece indicar que a N-glicolilação do PG provoca um menor reconhecimento das micobactérias por parte dos macrófagos, o que não é unânime visto que grande parte dos estudos anteriores verificou que a N-glicolilação do PG potencia o reconhecimento imunológico e a subsequente resposta imune. Em conclusão, o trabalho apresentado nesta tese ajudou a esclarecer o papel da N-glicolilação do PG na suscetibilidade aos antibióticos, ao levantar novas hipóteses sobre a forma como a proteína NamH promove a resistência aos β-lactâmicos. Do mesmo modo, esta tese também levantou questões importantes sobre o papel da N-glicolilação do PG nas interações patogénio-hospedeiro, nomeadamente ao nível do reconhecimento imune. Os resultados apresentados e as conclusões alcançadas poderão ser relevantes para uma melhor compreensão da patogénese da TB e para o desenvolvimento de terapêuticas alternativas para o tratamento da TB, no futuro.

Este artigo explora o livro, a edição e a leitura como focos de explicação que convocam várias ciências sociais e humanas. Pretende-se essencialmente estabelecer um panorama breve – e inevitavelmente parcelar – que se possa constituir como baliza de compreensão de um campo de pesquisa teórica e empírica em construção, campo aqui designado de sociologia histórica do livro, da edição e da leitura. O livro (enquanto objecto físico e simbólico), a edição que o configura e a leitura que dele se apropria constituem eixos indispensáveis à compreensão da cultura escrita e, no interior desta, da cultura impressa, bem como das instituições e dos agentes que se formaram durante o desenvolvimento e as múltiplas transformações que o livro, a edição e a leitura sofreram, de que são exemplo as bibliotecas e as/os bibliotecárias/os.

This article dwells on the case study of José Rosado, a fake translator of his own books to Portuguese (never written in any other language), and his interaction between 1942 and 1957 with Romano Torres, a twentieth century Portuguese publishing house, within the crime fiction collection Grandes Mistérios, Grandes Aventuras [Great Mysteries, Great Adventures]. Exploring José Rosado’s relationship with his publisher, centered on the process of authorial invention of fake foreign books, draws attention to the manifold processes involved in the creation of the translated texts—or the idea of translated text—as literary agency. It also illustrates the tensions within the heterogeneous framework of print production, circulation and appropriation of the translated text.

As atividades regulamentares são cruciais para a avaliação da eficácia e segurança dos medicamentos biológicos, uma vez que, devido à sua origem e modo de ação, a ocorrência de reações imunogénicas é mais propícia aquando da utilização deste tipo de medicamentos. Assim, de forma a garantir a segurança dos doentes, é extremamente importante desenvolver estudos imunogénicos adequados. A Food and Drug Administration e a Agência Europeia do Medicamento desenvolveram guidelines que visam auxiliar os titulares na realização de estudos de imunogenicidade, sendo em geral, a metodologia utilizada por ambas as agências semelhante. O tipo de proteína terapêutica e o método de administração podem influenciar o aparecimento de anticorpos anti-medicamento (ADAs) e/ou anticorpos neutralizantes (nAbs) responsáveis pela ocorrência de reações imunogénicas. Para os medicamentos biológicos com atividade direcionada (grupo 1), foram detetados níveis mais elevados de ADAs (U(45)=154.000;p<0.05;M=0.08;DP=0.119) e nAbs (U(45) = 189.000; p < 0.05; M = 0.02; DP = 0.045) para os anticorpos monoclonais. Relativamente ao método de administração, os medicamentos com administração intravítrea apresentam uma diferença estatisticamente significativa para ADAs (H(45) = 11.078; p < 0.05); M = 0.21; DP = 0.082, e a administração intravenosa para nAbs (H(45) = 7.073; p < 0.05); M = 0.02; DP = 0.056. Quanto ao grupo com atividade enzimática ou reguladora (grupo 2), as enzimas e hormonas apresentaram diferenças estatisticamente significativas para os ADAs (H(33) = 43.950; p < 0.05); M = 0.20; DP = 0.252, bem como a administração subcutânea (H(33) = 43.950; p < 0.05); M = 0.10; DP = 0.265. Não foram identificadas diferenças significativas para os nAbs neste grupo. Foi notificado um total de 47 reações adversas para medicamentos do grupo 1 e 31 para medicamentos do grupo 2. As reações adversas imunogénicas notificadas com mais frequência para o grupo 1 foram reações no local de injeção, anafilaxia, hipersensibilidade e pirexia. Para medicamentos administrados por via intravenosa e subcutânea, a reação adversa mais frequente foi anafilaxia. Para os medicamentos do grupo 2 a hipersensibilidade e as reações anafiláticas foram as que apresentaram maior frequência. As reações de hipersensibilidade parecem estar mais relacionadas com a administração intravenosa enquanto a administração subcutânea está mais frequentemente associada a reações anafiláticas. Embora os Relatórios Públicos de Avaliação de medicamentos aprovados mais recentemente apresentem um maior número de dados relativos à imunogenicidade, continua a ser necessário harmonizar estes resumos, uma vez que a informação não é apresentada da mesma forma para todos os medicamentos. Deve ser dada mais atenção às hormonas e enzimas, uma vez que não foram detetados tanto ADAs como nAbs durante os estudos de imunogenicidade efetuados durante os ensaios clínicos. Além disso, relativamente às atividades de farmacovigilância pós- comercialização, devem ser feitos mais esforços por profissionais de saúde e pacientes para melhor identificar o medicamento biológico assim como o número de lote.

Neste capítulo analisa-se uma série de dinâmicas do campo actual do livro universitário em Portugal. Apesar do atraso português no domínio da edição universitária, quando comparada com a de outros países (como o Brasil), tem-se verificado, polimorficamente, uma certa vaga de transformação. Um número cada vez maior de editoras universitárias portuguesas exibe uma vontade clara de ligação efectiva aos canais geradores de conhecimento, dentro e fora das instituições a que pertencem. Esta vaga modernizadora, porém, não logrou ainda ultrapassar algumas dificuldades.

As infeções associadas a cuidados de saúde (IACS), especialmente as associadas a cateteres, são consideradas a principal desvantagem do uso de dispositivos médicos. A IACS foi definida pela Organização Mundial e Saúde como uma infeção adquirida por um paciente após 48 horas ou 30 dias da prestação de um cuidado de saúde. O número de episódios de IRAS tem aumentado em todo o mundo apresentando impacto significativo na qualidade de vida dos pacientes. As principais consequências incluírem maior número de mortes e maior permanência em hospitais acompanhada de maiores custos. Uma vez que os cateteres representam ferramentas vitais em aplicações de saúde, as infeções relacionadas a cateteres surgem como uma complicação que deve ser tratada. Muitos dos materiais usados na fabricação de cateteres possuem limitações. Um dos biomateriais mais usados na fabricação de cateteres é o polidimetilsiloxano (PDMS) vulgarmente designado por silicone. É classificado como um material biocompatível, económico e transparente, apresentando como desvantagem a hidrofobicidade. A superfície hidrofóbica do PDMS aumenta a fixação bacteriana e a colonização, conduzindo à formação de biofilme. Neste campo, a modificação de superfície é uma técnica em desenvolvimento amplamente utilizada para prevenir HAIs. Uma ampla variedade de abordagens tem vindo a ser desenvolvida para superar essa limitação do PDMS e também para melhorar a utilização de moléculas antibacterianas. Vária estratégia tem vindo a ser estudadas e.g. revestimento, incorporação e modificação química. A maioria dessas estratégias visa a eluição de moléculas de antibióticos ou antimicrobianos, ou a eliminação de bactérias por contato. Além disso, as abordagens anti-adesivas que envolvem a alteração de superfícies para prevenir a adesão bacteriana também são uma abordagem possível. A pesquisa contínua levou a superfícies modificadas avançadas, algumas delas aprovadas pelo FDA e usadas em clínica, como cateteres impregnados com rifampicina/ minociclina. Uma vez que o problema da resistência bacteriana pode condicionar o uso de antibióticos na modificação de superfícies o uso de outras moléculas como glicolípidos com atividade antibacteriana pode ser uma boa abordagem. Os glicolipídios antimicrobianos são um grupo pioneiro de compostos biossintetizados que tem atraído a atenção de investigadores. Eles não desenvolvem resistência e atuam como biostensioactivos. Ramnolípidos (RLs) e soforolípidos (SLs) são glicolipídios com aplicação em produtos farmacêuticos e cosméticos. Os primeiros podem aparecer como mono e di-ramnolípidios que diferem no número de frações ramnose. Por outro lado, os SLs também se dividem em forma lactónicas ou acidica com diferentes atividades antibacterianas. Ambos os biostensioactivos atuam como agentes anti-aderentes com propriedades antibacterianas, impedindo a fixação bacteriana à superfície. As abordagens de modificação química dependem das propriedades físico-químicas da superfície do biomaterial. Moléculas com características antimicrobianas podem ser ligadas à superfície diretamente ou por meio de um agente ligante. Pode envolver o uso de superfícies energizadas (e.g., UV, plasma de O2), revestimento por ligação covalente (e.g., inserção em polímeros) e adição de monocamadas perpendiculares à superfície (e.g. escovas). A modificação da superfície usando a oxidação química é uma das abordagens químicas que pode v ser utilizada para ativar a superfícies às quais se irá ligar em seguida moléculas antimicrobianas. Por exemplo, a ativação da superfície do PDMS pela reação de oxidação com solução piranha resulta na formação de grupos silanol como prontos para ligação. Outros grupos âncora podem ser adicionados à superfície e exemplo são agentes de silanização como 3-aminopropiltrietoxissilano (APTES). As moléculas APTES oferecem um grupo amino que pode ser ligado a grupos funcionais de a agentes antimicrobianos. Por outro lado, uma abordagem bioinspirada de tratamento de superfície usando um revestimento de dopamina pode também ser uma abordagem. Esse revestimento é vantajoso uma vez que é biocompatível, simples e de baixo custo. É bem conhecida a incorporação de uma ampla variedade de moléculas ou polímeros antimicrobianos no revestimento de polidopamina. A polidopamina polimeriza na superfície formando uma camada que pode oferecer possibilidades extras de ligação. Este estudo tem como objetivo projetar dois revestimentos diferentes de PDMS. A primeira estratégia de revestimento envolveu a oxidação química usando com solução piranha e incorporação de RLs na superfície. Na segunda estratégia recorreu-se de um revestimento bioinspirado com polidopamina (PDA) incorporando mistura de SLs. A otimização dos padrões de oxidação química foi realizada antes da modificação da superfície. Além disso, foram desenvolvidos revestimentos de camada única e dupla com polidopamina-SLs. Os RLs foram isolados por cromatografia flash enquanto SLs foram biossintetizados por Starmerella bombicola. Ambas as misturas de biotensioactivos foram ainda caracterizadas por TLC e HPLC-ESI-MS. Todos os glicolipídios antimicrobianos foram separados, caracterizados e aplicados com sucesso nas duas modificações. A modificação da superfície foi avaliada por medidas do ângulo de contato e espectros FTIR-ATR. A atividade antibiofilme foi determinada para a mistura de RLs contra S. aureus ATCC 25923, S. epidermidis ATCC 28319, S. aureus ATCC 6538 e Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), e para o RL isolado (RhaRhaC10: 0C10: 0) contra S. aureus ATCC 25923. A atividade antibiofilme da PDA-SLs revestimento foi testado contra S. aureus ATCC 25923. O ensaio de adesão celular de substratos de PDMS funcionalizados com RLs foi avaliado usando o ensaio de MTT. Além disso, a irritação de vasos e membranas foi testada pelo ensaio HET-CAM. Para amostras revestidas com PDA, a citocompatibilidade também foi avaliada usando o ensaio de redução de MTT e o ensaio de exclusão de iodeto de propídio. Diferente mono e di-RLs foram identificados tendo-se isolado RhaC8:0C8:0, RhaRhaC10:0C12:1/RhaRhaC12:1C10:0 e RhaRhaC10:0C10:0. A mistura e o composto isolado RhaRhaC10:0C10:0 foram selecionados para funcionalizar a superfície do PDMS. Através do ângulo de contacto do PDMS modificado foi possível observar elevada redução da hidrofobicidade dos substratos PDMS funcionalizados com mistura de RLs e RL isolado, (RhaRhaC10: 0C10: 0), atingindo 17˚ um ângulo plano imensurável, respetivamente. Bandas caraterísticas foram detetadas nos espectros ATR-FTIR do substrato PDMS-RLs. Para a mistura de RLs, duas bandas em 1124 cm-1 e 1629 cm-1 atribuídas às vibrações C-O-C e C = O da ramnose e do ácido carboxílico, respetivamente. Por outro lado, duas bandas fracas foram observadas em 844 cm-1 e 940 cm-1 em espectros de dirhamnolipídeos purificados correspondentes a piranil I e α-piranil II, subsequentemente. A mistura de RLs e o RL isolado mostraram inibição biofilme observando-se uma redução de 4-Log contra S. aureus ATCC 25923 após em 24 horas. Além disso, o RL isolado pode prevenir a colonização bacteriana e reduzir o biofilme da mesma bactéria em 1.6-Log. O MTT do PDMS modificado mostrou baixa aderência celular após 5 dias de incubação, indicando uma resistência do PDMS funcionalizado em aderir aos fibroblastos. Além disso, o ensaio de HET-CAM ilustrou a segurança do PDMS modificado, uma vez que nenhuma hemorragia ou lise de vasos foi mostrada na membrana durante o tempo de incubação. A caracterização dos SLs por HPLC-ESI-MS mostrou um conteúdo variado entre SLs acídicos de-, mono- e diacetilados combinados com SLs lactónicos mono- e di-acetilados. A maioria eram SLs diacetilados lactónicos incluem uma cadeia de ácido gordo C18:0, C18:1 e C18:2. Para a funcionalização foi usada a mistura de SLs em uma camada de revestimento ou em camada dupla. O PDMS com um revestimento polidopamina incorporando SLs em monocamada baixou a hidrofobicidade confirmada pela medição do ângulo de contato (cerca de 31˚). O ângulo de contato dos substratos com revestimento duplo foi cerca de 39,5˚. Os espectros de FTIR representavam as bandas características de SLs e polidopamina na superfície do PDMS. Uma banda forte em 1069 cm-1 foi atribuída a C-O na parte do açúcar SL lactónico, e uma banda em 1458 cm-1 associada à amida na polidopamina. A formação de biofilme foi moderadamente inibida em PDMS com revestimento de PDA-SLs. Uma redução de 1,25-Log e 1,5-Log de revestimento de camada única e dupla foi observada, respetivamente. Houve uma ligeira diferença quando as amostras foram testadas em dois períodos de incubação, 3 h e 24 h. Os ensaios de citocompatibilidade de MTT e iodeto de propídio mostraram um bom perfil de segurança de PDMS com revestimento de PDA e SLs. Nenhum efeito citotóxico foi observado para ambos os revestimentos aplicados nos ensaios de citocompatibilidade. Ambas as estratégias mostraram atividade promissora contra a formação de biofilme e podem ser novas abordagens para a prevenção de HAIs.

O desenvolvimento de um método analítico preditivo de estabilidade é um processo trabalhoso e demorado. Deste modo, para melhorar estas limitações recorreu-se à abordagem de Quality-by-Design (QbD). Esta metodologia equaciona diferentes parâmetros numa mesma análise, permitindo o estudo das suas interações, e consequentemente a sua influência nas respostas. Assim, o desenvolvimento de métodos analíticos é realizado de forma mais célere. De modo atingir o objetivo de desenvolver e otimizar o método cromatográfico para quantificação de maleato de fluvoxamina (doravante designado por fluvoxamina) numa formulação semi-sólida, implementou-se um planeamento experimental, o Full Factorial Design (FFD) com 12 experiências e três níveis por fator. Este permitiu estimar a influência dos fatores críticos do método (proporção de acetonitrilo (ACN) na fase móvel e volume de injeção (μL) na variação das respostas. A estabilidade intrínseca da fluvoxamina foi analisada através de ensaios de degradação forçada. As condições hidrolíticas resultam da exposição ao meio ácido e básico, que promoveram a formação de dois produtos de degradação cada. A condição térmica, por exposição a 55ºC, e a fotolítica, por exposição à luz UV, também originaram a formação de dois produtos de degradação cada. A condição oxidativa não promoveu a formação de nenhum produto de degradação. O método de doseamento da fluvoxamina foi validado, de acordo com as normas em vigor. Os parâmetros estudados incluem seletividade, a gama de trabalho, a linearidade, a precisão (repetibilidade e reprodutibilidade), a exatidão e a robustez. Todos os parâmetros obtidos apresentam valores, que estão de acordo com os critérios de aceitação específicos. O método de impurezas foi desenvolvido, contudo apenas as impurezas conhecidas A, B, C, F e G foram analisadas. No entanto, esta análise demonstrou que este método apresentava seletividade entre os picos das impurezas e os picos correspondentes aos conservantes e à substância ativa. O DoE e análise multivariada no desenvolvimento de métodos são vantajosos, uma vez que permitem uma diminuição do tempo e dos meios despendidos comparativamente à abordagem univariada.

A argumentação que se segue é uma revisão bibliográfica que tem por objetivo identificar abordagens que contribuam para a efetivação de práticas pedagógicas humanizadas para o ensino de História. São sugeridas três abordagens nesse sentido: o local, o quotidiano e a verdade. A história local como uma forma de compreender a consciência histórica das experiências individuais e/ou coletivas. A inserção do quotidiano demonstrando que a história é uma estrutura em progresso e construída pelos homens no tempo. E a reflexão sobre o conceito de verdade que permite perceber a dinâmica inerente à interpretação dos factos históricos.

De entre as diferentes formas farmacêuticas tópicas disponíveis no mercado, os cremes continuam a ser os sistemas preferenciais para a veiculação de substâncias ativas para a aplicação tópica. A aplicação tópica de fármacos é uma via de administração promissora no tratamento de doenças dermatológicas, uma vez que permite a aplicação da substância ativa diretamente na pele, no local pretendido e nas concentrações terapêuticas necessárias. Esta dissertação teve como objetivo o desenvolvimento e caracterização farmacotécnica de um medicamento genérico semi-sólido para aplicação tópica. O desenvolvimento de produtos genéricos deve ser eficiente em termos de custo e tempo, uma vez que o processo está geralmente associado a margens de lucro baixas devido à competição com outros fabricantes. A qualidade dos produtos genéricos é determinada com base em dois requisitos: equivalência farmacêutica e bioequivalência relativamente ao medicamento de referência. Um medicamento é classificado como terapeuticamente equivalente se for seguro e eficaz, bioequivalente, equivalente farmacêutico, se estiver adequadamente rotulado e se for fabricado em conformidade com as boas práticas de fabrico. Para alcançar estes requisitos são solicitados vários testes físico-químicos e de desempenho do produto a ser desenvolvido como genérico. A fim de desenvolver um produto com qualidade e de modo a avaliar de forma consistente o desempenho pretendido, foi adotada uma abordagem de Quality by Design. Esta abordagem tem como objetivo melhorar a eficiência do processo e reduzir custos, melhorando a velocidade com que o produto chega ao mercado e aprimorando a qualidade do processo. A qualidade do produto pode ser garantida através do conhecimento completo das variáveis e de saber como controlá-las dentro da faixa operacional desejada. Com o objetivo de criar relações entre as variáveis do processo de formulação e fabrico, foram estabelecidas as características desejáveis do produto e foram identificadas as fontes de variabilidade. Na primeira fase do projeto definiu-se o perfil de qualidade do produto alvo e os atributos críticos de qualidade, incluindo a identificação de parâmetros críticos do processo a fim de atingir uma formulação final o mais semelhante possível com a formulação de referência. De seguida, foi construído um diagrama de Ishikawa para identificar as possíveis causas. Foram também definidas e posteriormente delineadas análises de estrutura, incluindo, microscopia e reologia e estudos de libertação e permeação in vitro da substância ativa para identificar potenciais riscos. Após se obter propriedades físico-químicas e farmacotécnicas semelhantes entre o medicamento de referência e o genérico, foi usada a abordagem “Quality by Design” para identificar o efeito da variabilidade do processo na semelhança estrutural e funcional (Q3) do produto genérico qualitativamente (Q1) e quantitativamente (Q2) em comparação com o medicamento de referência. Recorreu-se a um desenho composto centrado ortogonal com 11 experiências e com triplicados do ponto central, variando a concentração de dois excipientes (fatores críticos). A concentração de tensioativo secundário e a concentração de emoliente na formulação foram considerados os dois excipientes com mais significância que afetam a qualidade final do produto. Foram produzidas 11 formulações de acordo com a matriz experimental fornecida pelo software MODDE®. Estas formulações foram submetidas posteriormente à caracterização físico-química e farmacotécnica, onde se estudou a aparência macroscópica e microscópica, determinou-se o pH, o tamanho da gotícula, a caracterização reológica e os perfis de libertação e permeação in vitro. Foi realizada uma análise estrutural detalhada, recorrendo a estudos de viscosidade e testes de oscilatório. Aos resultados da reologia foram aplicados modelos matemáticos com a finalidade de escolher aquele que melhor descreve o comportamento das diferentes formulações. Além da caracterização estrutural, foram realizados estudos de desempenho do creme. Estes estudos incluíram a libertação in vitro da substância ativa conduzidos durante 12 horas, onde foram aplicados modelos cinéticos. Dentro dos estudos de desempenho realizaram-se também estudos de permeação e retenção in vitro da substância ativa, utilizando pele de leitão. Todos estes testes foram realizados contra o medicamento de referência, a fim de obter resultados para comparação. Após a análise e tratamento de todos os resultados obtidos, o software MODDE® determinou o ponto de ajuste que serviu para definir o valor aceitável de todos os fatores individuais em estudo, de modo a garantir que todos os atributos críticos de qualidade fossem cumpridos e de modo a atingir o perfil de qualidade do produto alvo. Foi produzida uma formulação com o ponto de ajuste ideal fornecido pelo software MODDE®. Esta formulação otimizada foi analisada em paralelo com o medicamento de referência. Foram realizados testes de caracterização estrutural e de performance tal como referido anteriormente. Além desses testes, incluiu-se também um ensaio para avaliar o comportamento tixotrópico da formulação otimizada e de referência. O comportamento tixotrópico trata-se de um fenómeno exibido por materiais não-newtonianos, caraterizado pela redução da viscosidade aparente quando o material é submetido a uma taxa de cisalhamento constante. Este estudo forneceu informações qualitativas sobre o comportamento da formulação durante um ciclo de deformação e recuperação. Os resultados obtidos da caraterização reológica foram também caracterizados através do ajuste de modelos matemáticos para que os dados numéricos pudessem ser produzidos e comparados com o medicamento de referência. Os resultados obtidos através dos testes realizados à formulação final revelaram semelhanças em todos os parâmetros analisados, tendo sido concordantes com a previsão da análise quimiométrica, o que valida a fiabilidade dos modelos multivariados desenvolvidos. A eficácia de um medicamento aplicado topicamente é dependente da libertação/permeação da substância ativa, portanto, o perfil de libertação e permeação in vitro constitui um parâmetro de qualidade do produto importante e valioso. Os testes in vitro realizados demonstraram que o medicamento genérico é promissor uma vez que apresenta um perfil estrutural e de performance in vitro semelhante ao medicamento de referência, sugerindo que esta formulação é adequada e que pode prosseguir para os próximos passos até chegar à sua comercialização.

As aquaporinas (AQPs) são proteínas transmembranares que em mamíferos constituem uma família de 13 membros (AQP0-12). Atuam como canais bidirecionais seletivos para a água, sendo que em alguns casos transportam também glicerol através das membranas celulares (aquagliceroporinas AQP3, AQP7, AQP9, AQP10). A regulação do transporte do glicerol no trato gastrointestinal é crucial para controlar a deposição de gordura, a lipólise e a gluconeogénese, em que as AQPs podem atuar como mediadores do fornecimento de glicerol, subjacente à função da barreira intestinal. Assim, a investigação do papel das AQPs no intestino delgado pode constituir uma nova abordagem no controlo de doenças metabólicas, tais como obesidade, resistência à insulina ou diabetes. Tendo por base a premissa de que o aminoácido glutamina é um regulador fisiológico da gluconeogénese e que a cistina promove a adiposidade, testámos o perfil transcricional e a funcionalidade das AQPs na porção do íleo do intestino delgado de leitões cujas dietas foram enriquecidas nestes aminoácidos. 20 leitões machos com um peso corporal inicial de 8,8 ± 0,89 kg foram distribuídos aleatoriamente por 4 tratamentos (n = 5) e receberam durante um período de 4 semanas uma dieta basal sem suplemento (dieta controlo) ou suplementada com 8 kg/tonelada de glutamina (Gln), cistina (Cys)2 ou a combinação dos dois em proporções iguais [Gln + (Cys)2]. A maioria dos parâmetros bioquímicos apresentou um aumento ligeiro nos leitões alimentados com a combinação dos aminoácidos. Em termos de perfil transcripcional, os níveis de mRNA da AQP3 foram predominantes quando comparados aos demais (AQP3a > AQP1b > AQP7c > AQP10c > AQP9c). Ambos os aminoácidos, individualmente ou combinados, foram responsáveis por uma desregulação consistente da AQP1, AQP7 e AQP10 sem impacto no coeficiente de permeabilidade à água (Pf) e ao glicerol (Pgly), respetivamente. A expressão do gene da AQP9 apresentou a mesma tendência, embora sem significância estatística. Inversamente, a dieta enriquecida com (Cys)2 aumentou os níveis do gene AQP3 e diminuiu os níveis do gene glicerol quinase (GK), o que não se refletiu na Pgly. Em resumo, as dietas enriquecidas com glutamina ou cistina promovem a desregulação da expressão dos genes das AQPs no intestino delgado dos leitões, apesar de não ter sido detetável o impacto na permeabilidade global da membrana, provavelmente devido a mecanismos compensatórios entre as várias isoformas de AQPs que asseguram a manutenção da homeostase da permeação celular.

A doença de Fabry (DF) é uma doença de sobrecarga lisossomal (DAL) ligada ao cromossoma X causada por mutações no gene GLA que codifica a α-galactosidase A. Isto, leva a um acúmulo progressivo de globotriaosilceramida (GL-3, Gb3) em todos os tecidos do corpo. As manifestações cardíacas, renais e neurológicas são comuns e a esperança de vida é significativamente reduzida em relação à população em geral. O controle da DF envolve a administração de terapia de reposição enzimática intravenosa (TRE). Duas formas, agalsidase alfa e agalsidase beta, foram aprovadas em vários países e são geralmente bem toleradas. Embora a TRE tenha demonstrado melhorar a evolução do doente e o curso da doença, especialmente quando iniciada no início da doença, a infusão intravenosa das proteínas recombinantes pode desencadear uma resposta humoral imune, resultando em reações associadas à infusão (RAIs), e/ou o desenvolvimento de anticorpos antifármaco neutralizantes (ADAs), que parecem atenuar a eficácia da terapia em doentes, mediando a progressão da doença apesar da TRE 1-3. Anticorpos imunoglobulina (Ig) G têm sido frequentemente descritos em doentes com DF recebendo TRE. As respostas de IgG são relatadas numa proporção maior de doentes que recebem agalsidase beta do que em doentes que recebem agalsidase alfa. Os anticorpos IgE são menos comuns do que os anticorpos IgG e não foram observados em doentes recebendo agalsidase alfa. O impacto clínico do desenvolvimento de anticorpos IgG para TRE em doentes com DF permanece obscuro, devido à falta de dados e à acentuada heterogeneidade dos pacientes em termos de manifestações da doença e resposta à terapia 4. Outros estudos que examinam o desenvolvimento de anticorpos em doentes com DF e o potencial impacto de tais anticorpos na eficácia da TRE são necessários. O objetivo principal deste projeto é estudar a imunogenicidade de um conjunto de doentes com DF e verificar o impacto da imunogenicidade na eficácia e no perfil de segurança da TRE. Para isso, fizemos o screning de anticorpos IgG1, IgG4 e IgE contra as terapias agalsidase alfa e beta, pré e pós infusão da TRE, através ELISA; e dissociamos os IC associados da TRE e fizemos o screning de IgG libertados dos IC, através ELISA, para identificarmos os falsos negativos. Relacionamos os resultados obtidos com os dados de segurança, dados clínicos e funcionais cardíacos e renais do doentes, para verificarmos o impacto da presença de ADA contra agalsidase alfa e beta, na eficácia e segurança da TRE, o que nos permitirá, ainda, fazem uma correlação direta entre as duas terapias TRE, agalsidase alfa e beta. No nosso estudo verificamos que os anticorpos IgG1 foram os mais frequentemente observados contra ambas as terapias, agalsidase alfa e beta, seguidos pelos anticorpos IgG4 e por último os anticorpos IgE menos frequentes, mas também presentes em doentes tratados com terapia com agalsidase alfa e em mulheres, ao contrário de o que alguns estudos demonstram. À semelhança de outros estudos, um maior desenvolvimento de ADA foi observado em doentes tratados com terapia com agalsidase beta versus terapia com agalsidase alfa. E também maior desenvolvimento, e em maiores quantidades de ADA em homens versus mulheres. Ao comparar os níveis de anticorpos IgG e IgE contra ambas as terapias, observamos apenas diferenças estatisticamente significativas para a terapia com agalsidase beta. Em relação aos IC, foi observada a presença de IC no pré e pós-infusão, porém não houve diferenças estatisticamente significativas, possivelmente porque os 30 minutos após a infusão da TRE não foram suficientes para que ocorresse a produção de IC. No entanto, ao analisar as diferenças de sinal entre as amostras tratadas e não tratadas com ácido, verificamos que o tratamento com ácido permite a dissociação de AAA dos IC. Isso é de suma importância para a medição e caracterização da imunogenicidade e mostra a presença de IC estáveis entre a droga e os anticorpos com diferentes perfis de afinidade circulando no sangue. Devido ao fato de não nos ter sido possível aceder os dados de segurança e dados clínicos e funcionais cardíacos e renais dos doentes, não fomos capazes de aferir e correlacionar a presença de ADA contra agalsidase alfa e beta, na eficácia e segurança da TRE e com o aparecimento de RAIs.

A investigação clínica está presente desde os primórdios da humanidade onde os nossos antecessores procuravam descobrir plantas ou outras formas que curassem os seus males. No entanto, a investigação atualmente não se processa da mesma forma que se processava inicialmente. Esta não é uma área estanque e encontra-se em constante evolução, sofrendo alterações significativas após a segunda guerra mundial e o conhecimento das experiências desumanas levadas a cabo pelos Nazis. Passaram a existir normas éticas, código de Nuremberga, para guiar a experimentação em seres humanos, bem como outras normas publicadas posteriormente seguindo os mesmos ideais. No entanto, estas verificaram-se insuficientes quando se revelou a ocorrência de casos como o caso do Jewish Chronic Disease Hospital, estudo em Willowbrook ou o estudo de Tuskegee. Para evitar que se continuasse a verificar casos semelhantes, houve novas alterações nas normas éticas e iniciou-se a regulamentação mais forte da investigação clínica, passando a existir autoridades regulamentares de cada país (FDA, INFARMED, etc) bem como a nível europeu (EMA) e mundial (ICH) para se certificar do cumprimento das normas éticas e regulamentares. Com o evoluir da investigação clínica também se verificou a distinção entre estudos com menor necessidade de regulamentação e estudos que, acarretando um maior perigo para a integridade física dos participantes requeriam, portanto, uma regulamentação mais exigente – ensaios clínicos. Atualmente existem diversos desafios nesta área, não só em Portugal como no mundo. Em Portugal é necessário aumentar o número de estudos quer a nível académico quer a nível da indústria, para tal o governo tomou medidas como a criação dos centros clínicos académicos e o projeto pilotos dos hospitais universitários. A nível mundial, atualmente encontramos o dilema ético do uso do placebo como controlo bem como a emergência dos estudos usando Big Data, tendo em conta o seu potencial e as suas limitações. Estes são alguns dos desafios atuais, aos quais as autoridades regulamentares têm de dar resposta, bem como os investigadores, de modo a que a investigação clínica possa evoluir preservando sempre a integridade física e psíquica dos participantes envolvidos.

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As intervenções arqueológicas realizadas no Monte Molião (Lagos, Portugal) proporcionaram um pequeno conjunto de materiais importados do Mediterrâneo Oriental. Trata-se, concretamente, de taças helenísticas com decoração a molde e de terra sigillata oriental A, que totalizam 18 fragmentos. Na maioria dos casos, estes exemplares surgem em contextos conservados de cronologia romano-republicana, especificamente entre 125 e 50/25 a. C., revelando a adopção de tradições helenísticas relacionadas com o consumo de líquidos e talvez até a existência de uma particular procura de vasos esteticamente mais apelativos. Apesar de ser um conjunto quantitativamente diminuto, assume uma particular relevância para o alargamento e compreensão da escala de distribuição destes produtos no litoral atlântico.

When the first cases of HIV infection appeared in the 1980s, AIDS was a deadly disease without any therapeutic alternatives. Currently, there is still no cure for most cases mainly due to the multiple tissues that act as a reservoir for this virus besides the high viral mutagenesis that leads to an antiretroviral drug resistance. Throughout the years, multiple drugs with specific mechanisms of action on distinct targets have been approved. In this review, the most recent phase III clinical studies and other research therapies as advanced antiretroviral nanodelivery systems will be here discussed. Although the combined antiretroviral therapy is effective in reducing viral loading to undetectable levels, it also presents some disadvantages, such as usual side effects, high frequency of administration, and the possibility of drug resistance. Therefore, several new drugs, delivery systems, and vaccines have been tested in pre-clinical and clinical trials. Regarding drug delivery, an attempt to change the route of administration of some conventional antiretrovirals has proven to be successful and surpassed some issues related to patient compliance. Nanotechnology has brought a new approach to overcoming certain obstacles of formulation design including drug solubility and biodistribution. Overall, the encapsulation of antiretroviral drugs into nanosystems has shown improved drug release and pharmacokinetic profile.

Breast cancer (BC) brain metastases is a life-threatening condition to which accounts the poor understanding of BC cells’ (BCCs) extravasation into the brain, precluding the development of preventive strategies. Thus, we aimed to unravel the players involved in the interaction between BCCs and blood–brain barrier (BBB) endothelial cells underlying BBB alterations and the transendothelial migration of malignant cells. We used brain microvascular endothelial cells (BMECs) as a BBB in vitro model, under conditions mimicking shear stress to improve in vivo-like BBB features. Mixed cultures were performed by the addition of fluorescently labelled BCCs to distinguish individual cell populations. BCC–BMEC interaction compromised BBB integrity, as revealed by junctional proteins (β-catenin and zonula occludens-1) disruption and caveolae (caveolin-1) increase, reflecting paracellular and transcellular hyperpermeability, respectively. Both BMECs and BCCs presented alterations in the expression pattern of connexin 43, suggesting the involvement of the gap junction protein. Myosin light chain kinase and phosphorylated myosin light chain were upregulated, revealing the involvement of the endothelial cytoskeleton in the extravasation process. β4-Integrin and focal adhesion kinase were colocalised in malignant cells, reflecting molecular interaction. Moreover, BCCs exhibited invadopodia, attesting migratory properties. Collectively, hub players involved in BC brain metastases formation were unveiled, disclosing possible therapeutic targets for metastases prevention.

The objective of this work was to analyze the flow behavior of a commonly used filler (pregelatinised starch) and the effect of two of the most used lubricants (talc and colloidal silicon dioxide). The studies were carried out according to the conventional methods (Angle of Repose, Bulk and Tapped densities and from these the Compressibility Index) and shear cell methods (Brookfield Powder Flow Tester apparatus) described in European Pharmacopeia (Ph. Eur.). The results showed some surprising and unexpected values for the flow behavior of this filler under influence of the methods and the used glidants. Regarding pure starch and mixtures containing talc, the flow behavior was similar between them and the Flow Index (ffc) values varied between 1.8 and 4 (very cohesive and cohesive) as consolidation stress (σ1) increased. In this case, the glidant effect was not observed. However, for the mixtures of starch with colloidal silicon dioxide this effect was observed providing Flow Index (ffc) values between 2.6 and 8.9 (cohesive and easy-flowing) as consolidation stress (σ1) increased. Other parameters that are also used to characterize flow properties, more specifically, within silos, chutes and hoppers, such as effective angle of internal friction (φe), effective angle of wall friction (φx), critical arching and critical rathole values, provided similar information. Based in the obtained results from all tests it can be said that the talc did not induce improvement on the starch flow behavior in the used conditions in opposition to the effect produced by colloidal silicon dioxide.