Repositório RCAAP

Introdução: A hipertensão pulmonar representa uma condição clínica associada a diversas etiologias, podendo também ser uma das potenciais causas de distúrbios respiratórios do sono. Objetivo: O principal objetivo deste trabalho foi estudar a frequência e o tipo de distúrbios respiratórios relacionados com o sono em doentes com hipertensão arterial pulmonar idiopática/hereditária, e hipertensão pulmonar recorrente/persistente pós tromboendarterectomia pulmonar ou hipertensão pulmonar tromboembólica crónica por doença distal inoperável. Materiais e métodos: Estudo observacional do tipo transversal. Onze doentes com diagnóstico prévio de hipertensão pulmonar idiopática/hereditária ou hipertensão pulmonar tromboembólica crónica realizaram polissonografia. Foi feita a recolha de dados clínicos e polissonográficos. A análise estatística foi executada com recurso ao software Statistical Product and Service Solutions, versão 24. Na análise descritiva foram utilizadas frequências absolutas e relativas, medidas de localização e dispersão. Na análise comparativa utilizou-se o teste de Qui-Quadrado e o teste T-Student, ou a sua alternativa não paramétrica, o teste de Mann-Whitney. Por fim, para relacionar as variáveis associadas à gravidade da hipertensão pulmonar com as variáveis associadas à gravidade de distúrbios respiratórios do sono, foi ainda utilizado o teste de Pearson. Resultados: Incluíram-se 11 doentes com hipertensão pulmonar do grupo 1 e 4 (72,7% género feminino; idade média: 42,1 ± 9,2 anos). A maioria dos doentes (45,4%) tinha hipertensão arterial pulmonar idiopática e pertencia maioritariamente à classe II NYHA. Dos 11 doentes avaliados polissonograficamente, 54,5% (n=6) apresentaram distúrbios respiratórios do sono. Deste grupo de doentes, 27,3% (n=3) apresentou apneia obstrutiva e os restantes 27,3% hipoxemia noturna isolada. A hipoxemia noturna isolada ocorreu mais em doentes com hipertensão arterial pulmonar idiopática, enquanto que a apneia obstrutiva do sono ocorreu mais nos doentes com hipertensão pulmonar tromboembólica crónica. Não se verificou relação entre a gravidade da hipertensão pulmonar e a gravidade dos distúrbios respiratórios do sono. Conclusão: Os doentes com hipertensão arterial pulmonar (idiopática/hereditária) e hipertensão pulmonar tromboembólica crónica apresentaram uma elevada prevalência de distúrbios respiratórios do sono, sendo a apneia do tipo obstrutivo o tipo de apneia mais frequente.

Introdução: A metaplasia intestinal gástrica é uma lesão pré-cancerígena que pode progredir e originar cancro gástrico. A dieta é um dos fatores de risco modificáveis com maior impacto no processo da carcinogénese. No caso da Dieta Mediterrânica, pelas suas características, tem sido associada à prevenção de cancro gástrico. Contudo, o benefício da adoção desta dieta para a prevenção da metaplasia intestinal gástrica ainda carece de investigação. Este estudo tem como objetivo avaliar a associação entre a adesão à Dieta Mediterrânica e a presença e severidade de metaplasia intestinal gástrica. População e métodos: Este estudo observacional transversal incluiu 145 indivíduos adultos que foram submetidos a avaliação clínica, avaliação nutricional e endoscopia digestiva alta de alta resolução com narrow band imaging. Enquanto os hábitos alimentares foram avaliados através de um questionário de frequência alimentar validado para a população portuguesa, a adesão à Dieta Mediterrânica foi medida pelo PREvención con Dieta MEDiterránea. Resultados: Dos indivíduos com baixa adesão à Dieta Mediterrânica, 60% apresentava metaplasia intestinal gástrica. A não adesão à Dieta Mediterrânica constituiu um fator de risco para a presença e para a severidade da lesão. A ingestão de folato e de ferro foi superior no grupo sem metaplasia intestinal gástrica. Por outro lado, observou-se uma ingestão de folato significativamente inferior à Dietary Reference Intake no grupo com metaplasia. O grupo com metaplasia intestinal gástrica revelou-se mais cumpridor da Dietary Reference Intake para o sódio. Conclusões: Nesta amostra uma maior adesão à Dieta Mediterrânica foi considerada um fator protetor contra a presença e severidade de metaplasia intestinal gástrica.

This study aimed to examine the associations between lower-body explosive strength (squat jump-SJ, and countermovement jump-CMJ), speed (10- and 35-m linear sprints), and agility (t-test) capacities, after controlling for crucial predictors such as chronological age (CA) and body composition. The sample was composed of 164 adolescent male football players from under 19, under 17, and under 15 age groups. Body fat percentage (BF%) was significantly and positively related to body mass, speed, and agility. In contrast, BF% was a significant negative predictor of lower-body explosive strength. Sprint and t-test times were significantly and negatively correlated with lower-body explosive strength. After controlling for CA and body composition, SJ was the most significant predictor, accounting for 36 to 37% of the variance observed in the 35 m linear sprint and the t-test performance. Our main results suggest that lower-body explosive strength, particularly in the SJ, is a significant predictor of male adolescent male football players' speed and agility capacities. Conversely, detrimental relationships between BF% and these outcomes were observed. Sports agents should consider lower-body explosive strength development as part of the youth football training process, particularly to improve maximal sprint and change of direction times, which are crucial to game performance.

Background: The UN has recognised well-being as a main goal of The Global Strategy for Women's, Children's and Adolescents' Health (2016-2030). Objective: The aim was to identify the areas of mental health that are the most significant to teenagers. Material and methods: The mixed-method approach was applied. Quantitative research included adolescents aged 11-15 years (6,026 in Portugal; 4,545 in Poland). HBSC study results (2013/2014) were analysed in terms of the following variables: self-rated health, life satisfaction (Cantril Ladder, KIDSCREEN-10 Index), and psychosomatic complaints (SCL scale). Focus workshops took place in 2018, with 72 teenagers aged 14 to 16. Results: 16.6% of the Polish participants and 12.7% of the Portuguese participants were concerned about their health. Polish participants were less satisfied with their life [KIDSCREEN score: 25.48 for Poland (SD=6.39), and 29.96 (SD=6.03) for Portugal]. Both nations associated mental health (MH) with the family setting and relationships with friends. An additional association among Portuguese teenagers involved social issues, whereas Polish adolescents were more focussed on relationships with various people in their environment, as well as on experiencing issues at school and in the family. Conclusions: Adolescent MH is determined by stress, environmental pressure and high expectations. The viewpoints of adolescents are the most valuable source of knowledge for specialists, researchers and youth institutions, who can benefit greatly from taking advantage of this resource.

Parkinson's disease is a common neurodegenerative disease that affects a large part of the world's population. This disease involves a lot of symptoms, however the most prevalent is the change in the patient's movements or even the loss of functionality. There is no treatment, however it exists medication that relieves and reduces the symptoms for a period. A Parkinson’s patient needs to be watched by clinicians to understand if the medication is working correctly and to analyse the disease progression. The current way of doing this evaluation is at clinics where the patient needs to go to the clinic or to live there. With this into consideration it was requested a monitoring system of activities of daily living for Parkinson’s patient. The monitoring system consists in a mobile application in an Android smartphone serving as a diary for the patient of clinician to record the activities done at that moment. With this application, the patient needs to wear an accelerometer in the wrist to gather the acceleration in the 3-axis. The application besides the monitoring function, it gives the ability to the clinician to schedule lists of activities for the patient to do during the day, allowing the clinician to have some control. We carried out a study with 10 healthy participants which used the monitorization system for 3 days each. The patient would worn the accelerometer and record the activities that they would do throughout the day, was asked a minimum of 5 activities per day. Alongside this recording it was schedule 1 list of activities to be carried out each day, this list only had motor activities such as walk, sit down, and stand up. At the end of each participant study, it was made a questionnaire with standard usability questions and an interview that helped us understand if the system was reliable or not.

Shewanella spp. são bactérias que se encontram distribuídas mundialmente, em ambientes diversificados com grande importância no ramo da biotecnologia, principalmente devido às suas capacidades de biorremediação. O género Shewanella tem como características ser constituído por bactérias Gram-negativas, móveis, com um único flagelo e com forma de bastonete, apresentando colónias avermelhadas, devido à elevada produção de citocromos tipo c. São oxidase e catalase positivas e produzem H2S. A primeira estirpe de Shewanella foi isolada de manteiga putrificada, tendo sido identificada como Alteromonas putrefaciens. Esta identificação passou ainda por Pseudomonas putrefaciens, até MacDonell e Colwell, em 1985, definirem um novo género, Shewanella. Em termos de identificação, este início atribulado perpetua-se até aos dias de hoje, continuando ainda a haver problemas de identificação entre espécies do género Shewanella. Devido à evolução das técnicas de sequenciação, o número de novas espécies deste género tem vindo a aumentar drasticamente e outros problemas de má identificação entre as espécies têm vindo a ser identificados. Apesar de maior parte das estirpes de Shewanella spp. serem de origem ambientais, os casos relatados de infeções em humanos têm vindo a aumentar, sendo Shewanella também considerada um agente patogénico emergente. As infeções mais frequentes por Shewanella são infeções da pele e tecidos moles, mas meningites, otites médias e infeções sistémicas também já foram documentadas. Shewanella spp. é considerada um agente patogénico de origem marinha, uma vez que a maior parte das infeções têm como origem a exposição marinha ou a algo relacionado, tais como a ingestão de peixe cru ou a participação em passatempos aquáticos, como aquariofilia. É também considerada um agente patogénico oportunista, sendo mais comum em infeções polimicrobianas ou em indivíduos imunocomprometidos. Várias estirpes de Shewanella mostram uma elevada resistência a diversos antibióticos, devido à presença de agentes genéticos móveis, como plasmídeos. Esses plasmídeos podem ser transferidos para outras bactérias, aumentando a resistência de outros organismos. Assim, Shewanella é um agente patogénico bastante relevante, uma vez que a resistência aos antibióticos é um dos grandes problemas que enfrentamos nos dias de hoje. Shewanella algae e Shewanella putrefaciens são as espécies que mais frequentemente causam infecções deste género. Apesar das diferenças fenotípicas entre estas duas espécies serem bastante significativas, uma vez que, ao contrário de S. putrefaciens, S. algae cresce a 42 ᵒC e a elevada concentração de sal, a distinção entre estas espécies é por vezes difícil. Isto deve-se ao facto de ambas não se encontrarem devidamente identificadas nas bases de dados dos métodos automáticos e semiautomáticos de identificação. Nestes casos, a sua identificação requer a sua sequenciação, de modo a perceber qual é o agente infecioso. Como agentes infeciosos, estas bactérias contêm genes que codificam para proteínas que lhes conferem vantagem perante um hospedeiro. Estes genes, denominados de fatores de virulência, são ainda desconhecidos nestas espécies. Analisando as suas características, sabe se que ambas as bactérias têm estratégias de captação de ferro, assim como a capacidade de formar biofilme e de se mover, permitindo propor alguns dos possíveis fatores de virulência. A sua identificação, bem como o seu conhecimento torna-se bastante importante para melhorar as estratégias de ação perante infeções causadas por Shewanella. Através de uma análise genómica, este trabalho teve como objetivo avaliar estirpes de S. putrefaciens e S. algae isoladas de infeções em humanos de modo a melhor identificar as espécies patogénicas e identificar possíveis fatores de virulência. De seguida, avaliar a patogenicidade dos possíveis fatores de virulência, através da utilização de um modelo animal em estádio embrionário. Para tal, o genoma de S. putrefaciens DSM 9451, estirpe isolada de um líquido cefalorraquidiano, foi sequenciado e comparado com outros genomas do género Shewanella. Após a análise filogenética, o genoma revelou uma maior semelhança com Shewanella bicestrii, uma espécie não validada e também denominada por Shewanella sp. JAB-1. Ao analisar o genoma de S. putrefaciens DSM 9451 comparando com todos os genomas de Shewanella outrora sequenciados, verificou-se que outros dois genomas, o de S. putrefaciens SA70 e o de Shewanella sp. BC20 eram bastante semelhantes, ao contrário do genoma de S. putrefaciens 95, considerada a estirpe tipo de S. putrefaciens, do qual divergia significativamente. Outras análises filogenéticas revelaram que, para além destes quatro genomas, existem ainda outros quatro: Shewanella sp. ANA-3, Shewanella sp. MR-4, Shewanella sp. MR-7 e Shewanella sp. Shew256 que se encontram numa zona indefinida, uma vez que os resultados filogenéticos não são totalmente concordantes. Uma vez que para definir uma nova espécie é necessária uma análise fenotípica, as condições ótimas de crescimento, as características bioquímicas, a morfologia das células e colónias, assim como a suscetibilidade a antibióticos foram testadas em quatro estirpes de Shewanella (duas estirpes filogeneticamente semelhantes – S. putrefaciens DSM 9451 e S. putrefaciens SA70 , uma da zona indefinida – Shewanella sp. ANA-3; e a estirpe tipo – S. putrefaciens 95). Os resultados mostraram que S. putrefaciens DSM 9451, S. putrefaciens SA70 e Shewanella sp. ANA-3 são fenotipicamente semelhantes, revelando que as maiores diferenças se encontram na suscetibilidade a antibióticos, possivelmente devido à presença de plasmídeos. A diferença entre estas estirpes e a estirpe tipo foi notória, mostrando mais uma vez tratar se de uma espécie diferente. Através desta análise foi então possível propor uma nova espécie, Shewanella bicestrii, de modo a manter a taxonomia já existente. Esta nova espécie é constituída por outras estirpes já sequenciadas, que se encontravam mal identificadas ou sem espécie definida, sendo eles S. putrefaciens SA70, Shewanella sp. JAB-1 e Shewanella sp. BC20. Durante a execução deste projeto, foram isoladas e identificadas pelo Hospital Santa Maria (HSM) duas S. algae, uma de um paciente com otorreia e outra isolada de uma ferida. A identificação destes isolados foi confirmada através de sequenciação genómica e análise fenotípica, através das características típicas de S. algae como o crescimento a 42 ᵒC e a 6,5 % NaCl. Uma vez que as estirpes corresponderam às características fenotípicas, foi possível demonstrar que o sistema de identificação do HSM é adequado para a identificação de S. algae. De modo a identificar os possíveis fatores de virulência, podem remover-se os genes que codificam para proteínas que conferem vantagens perante o hospedeiro e comparar as duas estirpes (isto é, com e sem o possível fator de virulência) em estudos de patogenicidade. Para tal, observou-se a infeção em embriões de peixe-zebra (Danio rerio), após a otimização da técnica de infeção. A otimização passou por vários passos: (i) a escolha da estirpe patogénica, onde S. bicestrii SA70 foi escolhida devido à sua resistência a vários antibióticos, destacando-se do microbioma dos embriões; (ii) a utilização da técnica de imersão estática, pelas suas características não invasivas e facilidade da técnica, não requerendo trabalho especializado. Esta técnica apesar de ser pouco reprodutível, revelou um fenótipo interessante nos embriões infetados, que levava à sua morte; (iii) a utilização da técnica de microinjeção na veia da cauda, que apesar de invasiva e requerer trabalho especializado, mostrou ser reprodutível, tendo sido a técnica utilizada para os estudos de patogenicidade. Para a deleção do gene de interesse, foi usada a técnica de recombinação genética, que consiste na troca do gene de interesse por um gene que promove a resistência a um antibiótico. Os genes responsáveis pela captação de ferro (fsr e sip), produção de biofilme (bolA) e mobilidade (fliP) foram considerados como possíveis fatores de virulência. Uma vez que no genoma de S. bicestrii SA70 existem dois genes homólogos ao bolA, seria necessária realizar uma dupla mutação para os testes de patogenicidade, razão pela qual este gene foi desconsiderado. Para os restantes, os primeiros passos de recombinação genética foram realizados, apesar de apenas a remoção do gene fsr ter sido concluída com sucesso. Este gene, que codifica para a proteína que promove a redução do ferro no siderófero (ferric siderophore reductase – FSR), foi trocado pelo gene que confere resistência ao cloranfenicol, formando assim a estirpe Δfsr. A patogenicidade da estirpe S. biscestrii SA70 e da estirpe Δfsr foi então testada em embriões de peixe-zebra através da técnica de microinjeção. Foi possível observar que embriões infetados com a estirpe Δfsr apresentam uma redução de 30 % na mortalidade, quando comparados com embriões infetados com a estirpe WT de S. bicestrii SA70. De modo a confirmar os resultados, a estirpe complementar terá de ser construída, esperando-se a recuperação da mortalidade. Estes resultados mostram pela primeira vez a importância das proteínas FSR na patogenicidade. A FSR tem como função reduzir o ferro captado pelos sideróferos específicos da espécie, de modo que este cofator fique disponível para que o agente patogénico o possa utilizar para sobreviver e estabelecer uma infeção. Devido a estes resultados, podemos também afirmar que este gene é importante para a patogenicidade do organismo, revelando uma vez mais a importância das vias de captação do ferro. Deste modo, tornam-se viáveis novas estratégias de tratamento, como a utilização de antibióticos usando estratégias como “Cavalo de Tróia”, onde o ferro é substituído por substância nociva para o agente patogénico em questão, e não para todo o microbioma do hospedeiro. Assim, é possível o desenvolvimento de novas estratégias para o tratamento de infeções que não aumentem o grande problema mundial da resistência a antibióticos.

The main objective of this work was to introduce students to the format of letters written in English as a vehicle of intercultural communication. The research experiment was carried out in a 4th grade Primary School class, in the English subject. Like letters written in Portuguese, letters written in English can be divided into formal and non-formal (Magazine, 2008). And this is where the intervention started. It started with the presentation of a questionnaire with the objective of finding out what the students knew about the subject and if they had friends in other countries. Then, a PowerPoint presentation was used with the differences between formal and informal letters, consolidating them with a poster. With the help of a partnership between the school and an ERASMUS+ project partner school, each student received a letter cut into a puzzle, which they had to assemble and answer, thus starting an international correspondence project. Later, a Web 2.0 tool (ELT, 2015) called Storybird was used to develop writing skills. This research experiment concluded with a videoconference with their correspondents so they could meet each other. After completing the experiment, I could reflect that the main objectives were not fully achieved, as this thematic unit would need more research time to consolidate it in a solid and meaningful way. However, this project had a very positive impact on the way the students related to their correspondents.

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O doente cirúrgico é um grupo heterogéneo e com uma grande diversidade de diagnósticos, no qual se encontram diferentes estadios de gravidade de doença. Para além disto, o doente é submetido em muitos casos a cirurgias de grande porte que inviabilizam a via oral, o que interfere na evolução clínica do doente, com relação direta nos outcomes cirúrgicos. Daqui advém a importância do Suporte Nutricional Terapêutico (SNT) efetivo, adequado e ajustado ao doente que é incapaz de satisfazer adequadamente as suas necessidades nutricionais diárias por via oral. No presente trabalho foi avaliado a relação entre o SNT efetivo e as complicações cirúrgicas em 59 doentes do CHLN-HSM com um tempo médio de internamento de 40,81±22 dias. Tratou-se de um estudo quantitativo, observacional, transversal e analítico. Pela aplicação do NRS-2002, verificou-se que a totalidade da amostra estava desnutrida e pelo SGA confirmou-se que 42,4% desta estava em desnutrição severa. Os diagnósticos principais foram: patologia gástrica, neoplasia intestinal e choque sético, sendo que pela escala Clavien-Dindo, 44,1% da amostra foi avaliada como grau IIIb, 35,6% grau II, 10,2% grau IVa e 5,1% grau IIIa. Em relação ao balanço energético, verificou-se que o VET administrado (830±488kcal) cumpriu 79% e 78% face ao VET calculado (1460±154kcal) e ao prescrito (1300±332kcal), mas só assumiu valores >90% a partir do dia 12 do estudo. Em relação aos macronutrientes, verificou-se que o aporte fornecido foi sempre inferior ao aporte prescrito e ao calculado. Verificaram-se ainda como principais fatores que contribuíram para o underfeeding proteico-calórico apontado, a ausência do doente para exame e/ou cirurgia com 49,1%, as complicações gastrointestinais com 42,1%, os problemas mecânicos com 38,6% e os procedimentos de transição para a dieta oral com 35,1%. Não foi encontrada correlação significativa entre o SNT fornecido e o tempo de internamento, o procedimento cirúrgico ou o grau de complicações cirúrgicas.

Introdução: Esta tese faz parte de um projeto com o objetivo de caracterizar mais em detalhe as condições metabólicas das células e tecidos do cancro. O carcinoma escamoso da cabeça e pescoço serviu de paradigma para tumores malignos sólidos. As células cancerígenas têm uma alta necessidade de energia, alta taxa de proliferação e são expostas a condições stressantes como hipóxia, privação de nutrientes e stress metabólico. Como resultado, as células tumorais desenvolvem uma produção de energia altamente adaptada, conhecida como reprogramação metabólica. Essas vias metabólicas alteradas no cancro levam ao aumento da agressividade e resistência à radioterapia e/ou quimioterapia. Por outro lado, essas vias metabólicas alteradas podem servir como alvo para tratamentos futuros. Existem algumas características de tumores relevantes a este nível. Uma é a glicólise aeróbica, conhecida como efeito Warburg. Células normais, normalmente usam a glicólise, seguida pela fosforilação oxidativa (OXPHOS) nas mitocôndrias para a produção de energia. As células cancerígenas produzem energia via glicólise, seguida pela conversão do piruvato em lactato. O lactato acumulado é utilizado como suporte anabólico e para a progressão do cancro. Outra característica de malignidade de tumores sólidos são as condições de hipóxia. A hipóxia induz um conjunto de genes, que são controlados por fatores indutíveis de hipóxia (HIFs). O HIF 1 α e o HIF 2 α funcionam como sensores de hipóxia, fatores-chave para a transcrição regulatória, sendo responsáveis por alterações celulares adaptativas e reprogramação metabólica. As células cancerígenas também interagem fortemente com o microambiente do tumor (TME). Todo o TME é caracterizado pela baixa disponibilidade de nutrientes e oxigénio, o que resulta em stress celular causado pela privação de nutrientes, hipóxia e baixo pH. Esse tipo de stress pode promover a transição epitélio-mesenquimal (EMT). EMT é a conversão de um fenótipo epitelial para um fenótipo mesenquimal. Os sinais histopatológicos característicos da EMT incluem a diminuição da adesão célula-célula, separação celular e aquisição de morfologia semelhante a fibroblastos. É importante obter uma visão mais profunda do comportamento metabólico das células cancerígenas sob stress e das complicações associadas, especialmente na terapia do cancro. Objetivos: O principal objetivo deste estudo foi a caracterização das condições metabólicas das células e tecidos no cancro, sob stress e em condições basais. Métodos: Para medir e analisar o metabolismo nas células, foi feito uma análise de fluxo extracelular com o Seahorse XFp Analyzer. A taxa de consumo de oxigênio (OCR) e a taxa de acidificação extracelular (ECAR) foram obtidas em duas linhas celulares bem caracterizadas (SCC25 e Detroit562), sob condições basais e condições de stress. As influências dos dois meios diferentes também foram avaliadas. Para obter uma visão mais profunda do EMT, foi utilizado um microscópio holotomográfico. As células foram colocadas em dois tipos diferentes de meios, com e sem adição de TGF-ß. Parâmetros e sinais de EMT e stress foram analisados. O último método foi a otimização das condições de cultura para slice cultures (SC) de carcinoma da região da cabeça e pescoço. Com a coloração hematoxilina/eosina, as áreas necróticas nas SC no dia 7 foram registadas semiquantitativamente. Resultados: Os parâmetros de resultado taxa de consumo de oxigênio (OCR), taxa de acidificação extracelular (ECAR) e a razão OCR/ECAR foram registados pelo sistema Seahorse em 8 tempos de teste (2, 8, 15, 21, 28, 35, 41, 48 e 48 min). A mistura stressante foi adicionada após 15 min. Houve um aumento acentuado de OCR e ECAR logo após adicionar a mistura stressante. Por exemplo, a OCR foi 358 ± 159 pmol/min antes da adição da mistura stressante (valor basal) e 576 ± 258 pmol/min posteriormente. Os dados de OCR e ECAR eram normalmente distribuídos. As médias estimadas de OCR marginal do modelo de efeitos principais foram 443 ± 44 pmol/min para células Detroit562 e 492 ± 44 pmol/min para células SCC25 (p = 0,43). As médias marginais estimadas de OCR foram 380 ± 44 pmol/min para o meio de cultura de células DMEM/F12 e 555 ± 44 pmol/min para EMEM (p = 0,009). Para o meio sem soro fetal bovino (FBS), as médias marginais estimadas de OCR foram de 562 ± 44 pmol/min e para o meio com FBS foram de 372 ± 44 pmol/min (p = 0,005). A adição da mistura stressante levou a um aumento da média marginal estimada de OCR de 358 ± 44 pmol/min antes da mistura stressante para 576 ± 44 pmol/min após a adição da mistura stressante (p = 0,001). Para a ECAR, os valores foram 130 ± 61 mpH/min antes da adição da mistura stressante (valor basal) e 190 ± 87 mpH/min após a adição da mistura stressante. As médias estimadas de ECAR marginal do modelo de efeitos principais foram de 155 ± 15 pmol/min para as células Detroit562 165 ± 15 pmol/min para as células SCC25 (p = 0,63). As médias estimadas de ECAR marginal foram 134 ± 15 pmol/min para o meio de cultura DMEM/F12 e 186 ± 15 pmol/min para EMEM (p = 0,020). Para o meio isento de FBS, as médias marginais estimadas de ECAR foram 199 ± 15 pmol/min e para o meio com FBS foram 121 ± 15 pmol/min (p = 0,001). A adição da mistura stressante levou a um aumento da média marginal estimada da ECAR de 130 ± 15 pmol/min antes da mistura stressante para 190 ± 15 pmol/min após a sua adição (p = 0,009). As imagens holotomográficas revelaram diferenças nos dois meios isentos de FBS. Em DMEM/F12 sem TGF-ß as células comportaram-se normalmente. Com a adição de TGF-ß foi possível induzir EMT. No EMEM sem TGF-ß foi possível observar sinais de stress e nenhum sinal de EMT. Com o TGF-ß quase não havia sinais de EMT, mas sinais de stress sim. SC mantidas sem antibióticos não foram capazes de sobreviver completamente até o dia 7 sem contaminações. Cultivar as SC com PRF (platelet rich fibrin) e com uma mistura de antibióticos mostrou que as SC foram capazes de sobreviver até ao dia 7. Também foi possível observar que SC sobreviveram e mostraram mais partes vivas, comparado com os explantes inteiros de tumor que não são SC, sendo cortados com bisturi em vez de vibratome. Discussão: As células cancerígenas têm comportamentos diferentes e mostram também um fenótipo metabólico diferente das células normais. Elas podem-se adaptar quando stressadas usando reprogramação metabólica. Esses comportamentos diferentes têm uma grande influência no resultado clínico. É por isso que um microambiente diferente, stress e outros compostos podem alterar o fenótipo metabólico das células e, portanto, alterar o resultado dos métodos de tratamento. A caracterização do fenótipo metabólico das células SCC25 e Detroit562 com o Agilent XFp Seahorse Analyzer mostrou a OCR e a ECAR com e sem inibição do conjunto de FCCP e oligomicina (mistura stressante) em dois meios com componentes diferentes. Sob stress as células apresentaram maiores OCR e ECAR. A composição do meio, o FBS e a mistura stressante mostraram ter uma influência significativa na OCR e na ECAR. O tipo de célula, por outro lado, não teve influência significativa na OCR (p = 0,432) nem na ECAR (p = 0,629). O XFp Analyzer só é capaz de fazer medições com células aderentes ou suspensões de células. Não foi possível estabelecer uma medição com tecido normal neste momento do estudo. Projetos futuros vão ser a medição metabólica com SC e/ou explantes inteiros de tumor, com a ajuda de enzimas digestivas e uma solução de revestimento (Cell-Tak) específica para células não aderentes, para gerar uma suspensão celular e células aderentes. A microscopia holotomográfica mostrou que a EMT foi induzida em células SCC25 em DMEM/F12 pela adição de TGF-ß. Com as células EMEM e Detroit562, essa transição não ocorreu. Os dois meios utilizados não continham FBS e geravam stress geral para as células, sem adição de TGF-ß. Para analisar esses resultados, um sistema de pontuação próprio foi utilizado. Ainda não está claro se a linha celular por si tem impacto na indução da EMT ou se o meio é responsável por essa mudança. Usando um sistema de pontuação melhor e fazendo mais repetições destas experiências, estudos adicionais podem fornecer uma visão mais profunda e apoiar este resultado. As SC mostraram ter uma taxa de sobrevivência mais alta em comparação com os explantes que não foram cortados com um vibratome. A PRF autóloga também parece ter uma influência positiva na taxa de sobrevivência dos tecidos. Adicionar antibióticos também ajudou muito na prevenção de contaminações. Ainda havia áreas viáveis após 7 dias quando as SC e os explantes inteiros do tumor foram tratados com uma mistura 1:1 de Medium199 e Keratinocyte SFM com PRF autólogo e antibióticos. Além disso, os métodos de cultivação de SC podem ser otimizados usando uma técnica de ar líquido e diferentes consistências de PRF. Essas modificações podem levar a uma cultura melhor e mais longa.

Os humanos são organismos extremamente sociais que dependem de interações com outros indivíduos de forma a manter um estilo de vida funcional e saudável. O com portamento coletivo contribui para a criação de normas sociais que, por sua vez, têm o potencial de modelar consideravelmente as decisões e comportamentos de uma pessoa. Em contrapartida, comportamentos sociais primários, como agressividade ou repro dução, são também fundamentais para o nosso desenvolvimento. Como tal, torna-se importante perceber os mecanismos subjacentes a comportamentos sociais inatos e complexos. O peixe-zebra (Danio Renio) é um modelo de particular interesse para o estudo de interação social em vertebrados. Apresentando um repertório bem documentado de diferentes comportamentos sociais e um conjunto impressionante de ferramentas genéticas disponíveis, este modelo animal permite uma abordagem reducionista no mapeamento de comportamentos sociais específicos em redes neuronais. Estudos recentes sugerem que a região ventral do telencéfalo pode estar envolvida em comportamentos de caráter social, particularmente na atenção social. Contudo, este comportamento foi explorado num contexto estritamente visual. Isto é, um par de peixes, em regime de isolamento, foi colocado num tanque e separado por uma divisória transparente. A atenção social - interesse demonstrado pelo peixe vizinho - foi avaliada através da orientação entre os dois peixes enquanto estes interagiam visualmente através da divisória. Devido à simplicidade do paradigma descrito, torna se relevante investigar o papel desta área do prosencéfalo no comportamento social do peixe-zebra, num contexto sensorial mais rico, no qual múltiplos peixes podem interagir fisicamente entre si. Assim, o principal objetivo deste estudo foi avaliar o impacto causado pela ablação do telencéfalo ventral, na dinâmica de grupos de peixes-zebra, num contexto menos restrito. Para tal foi necessário otimizar um protocolo de ablação adequado para peixe-zebra em fase juvenil; perceber quais as características comportamentais que poderiam ficar comprometidas devido à ablação; e compreender que circuitos neuron ais poderiam estar subjacentes a estas alterações comportamentais. A ablação quimio-genética é uma técnica não invasiva que permite a ablação con trolada de um alvo específico. Tem por base o sistema GAL4/UAS de modo a pro mover a expressão de um determinado gene apenas em locais onde o promotor GAL4 está presente. Um método popular baseado neste conceito é a ablação mediada por NTR/MTZ. Células que contém GAL4 expressam a enzima nitroreductase (NTR). Ao entrar em contato com o pró-fármaco metronidazol (MTZ), a enzima produz com postos citotóxicos e induz morte celular nessas regiões. Neste estudo, utilizamos a técnica descrita na linha transgénica y321 :GAL4. Esta linha em particular sinaliza o telencéfalo ventral (vTel) e o diencéfalo rostral, incluindo a área pré-óptica (POA), tubercular posterior (PT) e hipotálamo rostral (RH). A rede do cérebro social (SBN) consiste em várias áreas cerebrais associadas à reg ulação do comportamento social. Foi originalmente proposta para mamíferos, exclu sivamente. No entanto, com base em evidências de homologia funcional e anatómica foi sugerida uma conservação da SBN nos vertebrados, o que permitiu uma extensão do modelo. Em paralelo, a via mesolímbica (MRS) é um sistema fundamental que avalia a saliência de um estímulo. A integração das duas redes forma a rede social de tomada de decisões (SDN). O telencéfalo ventral do peixe-zebra, por sua vez, inclui estruturas cerebrais implicadas na SDN. O peixe-zebra é um teleósteo de água doce encontrado no sul e no leste da Ásia. É uma espécie social que vive em extensos cardumes. O seu ciclo de vida é relativa mente curto e a sua manutenção é bastante simples. O fato da maioria das estruturas envolvidas no SDN estarem conservadas no cérebro do peixe, conjugado com as van tagens anteriormente descritas, torna este animal um excelente modelo para estudos de comportamento social. Os peixes têm tendência para se agregar em grupos coesos com fins sociais - cardumes - apresentando um comportamento social complexo conhecido como shoaling. A for mação de cardumes confere diversas vantagens ao nível de proteção contra predadores, acasalamento ou na procura de alimentos. Os cardumes são sensíveis a fatores inter nos e externos, o que lhes conferem uma qualidade plástica. Não apresentam uma estrutura específica associada e facilmente sofrem alterações na sua conformação. No entanto, existe um caso particular em que um cardume apresenta uma estrutura polarizada, onde os peixes se movem de forma coordenada. Neste estado específico de organização o cardume é considerado um school. Um coletivo de peixes pode alternar facilmente entre os dois estados de polarização, de acordo com suas necessidades. Por exemplo, com a habituação a um ambiente, os peixes tendem a passar menos tempo num estado polarizado e a tornar-se gradualmente mais desorganizados com o passar do tempo. Comportamentos de agrupamento, como shoaling ou schooling, são formados a partir de interações locais entre os indivíduos. Sabe-se que os peixes ajustam seu compor tamento de acordo com sua própria velocidade e com a velocidade e posição relativa dos seus vizinhos. Por conseguinte, como foi referido anteriormente, utilizamos o método de ablação mediada pelo sistema NTR/MTZ. Este permitiu alcançar o telencéfalo ventral e o di encéfalo rostral, promovendo morte celular nesses locais. O tratamento de ablação foi avaliado através de técnicas de microscopia LightSheet. Posteriormente, exploramos o comportamento coletivo num paradigma sem restrições. A avaliação comportamental consistiu numa sessão de deslocamento livre em que cada grupo testado tinha um total de cinco elementos. A otimização do protocolo de ablação foi relativamente bem sucedida uma vez que atingimos ablação parcial das regiões pretendidas. No entanto, a toxicidade associada ao MTZ foi mais elevada do que o esperado. A aplicação do tratamento nos peixes levou a complicações ao nível das funções motoras que se traduziram em claros sinais de acinesia e lentidão no movimento. Por outro lado, os nossos resultados sugerem uma disrupção em comportamentos de ansiedade. Como esperado, os grupos controlo exibiram um comportamento ansioso ao serem introduzidos num novo ambiente. No entanto, os peixes que sofreram ablação não se mostraram tão sensíveis à nova situação. Curiosamente, peixes que não ex pressavam NTR mas que foram tratados com MTZ, exibiram um nível mais alto de proximidade do que os controlos, o que indica um comportamento ansioso mais forte. Acontece que a POA é considerada uma área importante em respostas ao stress e na regulação da ansiedade no peixe-zebra. Consequentemente, os resultados apresenta dos podem ser uma indicação de que a ablação da POA pode ser um fator contribuinte para a alteração da resposta normal ao stress e para a regulação negativa do circuito de ansiedade. Além disso, enquanto a coesão do grupo foi preservada na sua generalidade, o alin hamento local entre os animais foi severamente alterado. As distâncias inter-individuais entre os peixes, uma medida útil para a avaliação da coesão, permaneceram pratica mente inalteradas ao longo das experiências. Pelo contrário, enquanto todos os grupos testados exibiram uma diminuição gradual no alinhamento local ao longo do tempo, o grupo submetido à ablação não mostrou qualquer alinhamento à partida. Estes resultados sugerem que a ablação do vTel e da POA pode exercer um efeito local no comportamento, levando a mudanças no alinhamento individual dos peixes, enquanto mantém a integridade geral do grupo. Estas conclusões vão de acordo com estudos anteriores, pois indicam que o vTel pode estar particularmente envolvido no compor tamento de orientação. Contudo, o papel da POA nesses resultados não se encontra claro. Em suma, com o estudo apresentado demonstramos a importância de áreas ventrais específicas do prosencéfalo na plasticidade do comportamento social. O vTel e a POA podem ser responsáveis por impulsionar o comportamento de orientação a nível local em ambientes sociais. Também confirmamos a importância dessas duas estruturas no circuito da ansiedade.

A sarcopénia tem vindo a ser associada a doenças oncológicas e doenças crónicas como a cirrose hepática. Neste momento existe um vasto número de artigos científicos a confirmar o valor preditivo da sarcopénia no prognóstico quer da cirrose hepática, como do carcinoma hepatocelular, sendo neste último menos consensual. Neste sentido, propusemo-nos a desenvolver um estudo de coorte cujo objetivo principal foi analisar o impacto da sarcopénia na gravidade da cirrose hepática e do carcinoma hepatocelular, utilizando o critério de diagnóstico que é atualmente proposto pelo European Working Group on Sarcopenia in Older People. Este estudo decorreu no serviço de hepatologia do Hospital de Santa Maria entre janeiro de 2018 e Dezembro de 2019, tendo sido todos os doentes avaliados nas primeiras 72h de internamento. No diagnóstico de sarcopénia foi utilizada uma bioimpedância elétrica tetrapolar para avaliação da massa muscular esquelética, um dinamómetro para avaliação da força e na avaliação do desempenho físico foi utilizada a velocidade de marcha num percurso de 4 metros. De forma a medir o impacto da sarcopénia foram avaliados os seguintes outcomes: duração do internamento, número de reinternamentos, realização de transplante hepático e mortalidade após 6 meses. A amostra deste estudo é composta por 134 indivíduos, destes 102 apresentavam cirrose hepática, 4 carcinoma hepatocelular e 28 as duas patologias em concomitância. Os indivíduos avaliados eram maioritariamente do sexo masculino (80,6%) com idade média de 61,5±11,2 anos. A etiologia de doença hepática crónica mais frequente foi o consumo excessivo de álcool (51,1%), seguido pela hepatite C (13,7%) e a associação dos dois fatores em 11,5%. Do ponto de vista nutricional, os indivíduos avaliados apresentaram em média um IMC de 25,1±4,8kg/m2 , com a esmagadora maioria a apresentar malnutrição independentemente da ferramenta utilizada (Subjestive Global Assessment: 84,6%; Royal Free Hospital- Global Assessment: 83,2%). No que concerne à sarcopénia, 27,6% dos casos apresentaram pré-sarcopénia/sarcopénia. A duração de internamento foi significativamente superior nos indivíduos que apresentaram pré-sarcopénia/sarcopénia comparativamente aos que não apresentaram sarcopénia (U= 2092,500; p= 0,009). Para além disso, a presença de pré sarcopénia/sarcopénia associou-se à diminuição da sobrevida na análise univariada tanto aos 6 meses após avaliação (HR=2,021; p=0,036), como na duração integral do estudo (HR=2,074; p=0,010). Contudo, na análise multivariada este resultado apenas se manteve significativo na duração integral do estudo e quando ajustado ao Model for End-Stage Disease score (HR= 1,827; p=0,033) ou diagnóstico principal (HR= 1,827; p=0,033), individualmente. No entanto, quando foi utilizado um modelo que juntou o Model for End-Stage Disease score e o diagnóstico principal, o mesmo apesar de não demonstrar significado estatístico, evidencia uma tendência (HR=1,746; p=0,051). No que respeita ao número de reinternamentos e à realização de transplante, não se obtiveram resultados significativos. Os resultados deste estudo vieram reforçar a importância de avaliar a presença de sarcopénia na doença hepática crónica, pois esta associou-se a um pior prognóstico, sendo sobretudo a médio/longo prazo que este indicador se torna mais relevante, por se tornar independente de outros parâmetros como o Model for End-Stage Liver Disease score ou o diagnóstico principal (Cirrose Hepática e/ou Carcinoma Hepatocelular).

Introdução: O envelhecimento populacional é um fenómeno global que assume especial relevância no nosso país. Portugal é atualmente um dos países mais envelhecidos da União Europeia, prevendo-se que venha a ser o mais envelhecido em 2050. Pela associação de uma maior longevidade a uma maior prevalência de doenças crónicas, é previsível um aumento de necessidades paliativas entre a população idosa (65 ou mais anos), e em particular entre o grupo dos mais idosos (85 ou mais anos). Por outro lado, as ERPI surgem cada vez mais como o último local de residência permanente destes idosos, sendo o contexto onde naturalmente devem ser identificadas e atendidas as suas necessidades paliativas. Objetivo: Determinar a prevalência de necessidades paliativas na população idosa (65 ou mais anos) residente nas ERPI da Santa Casa da Misericórdia de Lisboa (SCML) e identificar as suas características sociodemográficas e clínicas. Métodos: Estudo quantitativo, descritivo, transversal e observacional. Foram utilizados dois instrumentos de recolha de dados: (1) questionário de caracterização sociodemográfica e clínica; e (2) questionário NECPAL. Os questionários foram aplicados por enfermeiros, em 7 ERPI, a 301 idosos. Resultados: Foram identificados 121 idosos (40,2%) com necessidades paliativas (NECPAL+), com uma média de idade de 84,85 anos, dos quais 71,1% mulheres e 57,9% com rede social presente. A maioria dos idosos NECPAL+ não apresenta doença oncológica (83,5%), sendo as principais doenças ou condições crónicas: doença cardíaca crónica (76,9%), demência (56,2%), doença neurológica vascular (54,5%) e fragilidade (51,2%). Somente 38% dos idosos NECPAL+ tinham sido identificados por profissionais de saúde da equipa como tendo necessidade de cuidados paliativos e só um idoso tinha sido referenciado para apoio em cuidados paliativos. Conclusão: Os resultados deste estudo indicam que a maioria dos idosos residentes em ERPI, com doenças crónicas avançadas (sobretudo não oncológicas), não está a receber os cuidados paliativos necessários. A identificação atempada das necessidades paliativas, com recurso a instrumentos validados como o NECPAL, poderá contribuir para melhorar os cuidados prestados e promover uma melhor qualidade de vida destes idosos.

A percentagem de população envelhecida, a nível mundial, tem vindo a aumentar progressivamente, o que, por seu turno, está associado a um aumento das doenças ligadas ao envelhecimento como as doenças cardiovasculares e neurodegenerativas . O envelhecimento, afeta as células de todo o sistema nervoso, causando um declínio das funções sensitivas e cognitivas sendo o principal fator de risco de Doença de Alzheimer (DA), que é a forma mais comum de demência . Entre as estruturas cerebrais, aquelas envolvidas na memória, como o hipocampo, parecem ser particularmente vulneráveis à senescência e degeneração. A DA é caracterizada por deficiências cognitivas progressivas que comprometem progressivamente a memória e aprendizagem e, eventualmente, a capacidade de realizar as tarefas mais simples. Patologicamente, esta doença é caracterizada : i. pela formação sequencial de placas senis (ou neuríticas) extracelulares que resultam da acumulação do péptido β-amilóide (Aβ); ii. Tranças neurofibrilares intracelulares formadas por filamentos de proteína tau hiperfosforilada; iii. Perda sináptica e neuronal seletiva, no hipocampo e córtex cerebral, responsável pela atrofia cerebral; iv. gliose, resultante da ativação e proliferação de células da microglia e de astrócitos. No entanto, os mecanismos pelos quais a patologia da DA afeta a neurogénese não estão completamente compreendidos. A agregação e a acumulação de péptidos Aβ e proteínas tau, inflamação, alterações genéticas nas vias e genes relacionados com a neurogénese podem prejudicar a maturação de neurónios recém-nascidos e inibir a neurogénese do hipocampo, com possível impacto na atrofia do hipocampo . Contudo, até à data, nenhum estudo verificou uma associação entre genes relacionados com a neurogénese e o volume do hipocampo. Foi recentemente descrita uma associação entre um polimorfismo do gene que codifica o recetor de adenosina de subtipo A2A (A2AR) – ADORA2A – com a memória episódica, volume do hipocampo e a tau total no líquido cefalorraquidiano em pacientes com Défice Cognitivo Ligeiro e com DA, sugerindo que esta variante genética pode afetar a produção de A2AR. A adenosina, metabolito presente em todos os subtipos celulares, tem o papel de neuromodulador que influencia a atividade neuronal a diversos níveis, mas também o papel de cotransmissor ou mesmo neurotransmissor . É, portanto, uma molécula sinalizadora extracelular que afeta a transmissão sináptica . Uma vez ligada a recetores acoplados à proteína G, tem a capacidade de atuar a nível pré- e pós-sináptico, inibindo ou facilitando a libertação de neurotransmissores e, afetando a ação de recetores, respetivamente . Os sensores de adenosina – recetores de adenosina – são muito mais abundantes no cérebro do que em qualquer outro órgão ou tipo celular, em mamíferos . São recetores acoplados à proteína G, e dividem-se nos subtipos A1, A2A, A2B e A3, embora sejam principalmente os recetores A1 (A1R) e A2A (A2AR), os responsáveis pelos efeitos da adenosina no cérebro . Os A1R são os mais abundantes e amplamente distribuídos, sendo responsáveis pela diminuição da libertação de glutamato, tendo, portanto um papel neuroprotetor. Por seu turno, os A2AR são mais abundantes nos gânglios basais e nas sinapses, sendo considerados recetores excitatórios, na medida em que facilitam a libertação de neurotransmissores Durante o processo de envelhecimento há um aumento da expressão dos A2AR nas zonas corticais, estando este associado ao aumento dos défices cognitivos. Apesar da baixa expressão e densidade desses recetores no hipocampo, em condições fisiológicas, os A2AR regulam a função metabotrópica, ionotrópica e catalítica de recetores de outros sistemas modulatórios. Assim, os A2AR têm um papel importante na modulação da transmissão sináptica, no hipocampo, portanto, na presença de danos sinápticos e cognitivos, presentes na população envelhecida e nos doentes com DA. Um “single nucleotide polymorphism” (SNP) – rs9608282-T – a montante do gene ADORA2A foi associado a um maior volume do hipocampo e a um melhor desempenho da memória4 , sugerindo que este SNP possa ter um efeito protetor sobre a estrutura e função do cérebro. Rs9608282-T está localizado a montante do gene ADORA2A, numa região caracterizada pelo read-through de dois genes vizinhos, SPECC1L (“sperm antigen with calponin homology and coiled-coil domains 1-like”) e ADORA2A (“adenosina A2A receptor”) no cromossoma 22. Este read-through é um forte candidato para o decaimento mediado por mRNA nonsense, levando, assim, à não produção de proteína. Tendo em conta estudos anteriores, em modelos animais, em que tanto a deleção e/ou a inibição de A2AR levam à melhoria da memória espacial e ao aumento da plasticidade sináptica, pretendemos, então, com este trabalho, explorar a hipótese de que a variação rs9608282-T está associada à inibição da produção de proteína A2AR. Contrariamente aos neurónios, as linhas celulares são capazes de realizar a recombinação homóloga, essencial para a edição genómica, por serem mitoticamente ativas. Deste modo, a primeira fase deste trabalho consistiu em verificar se ambas as linhas celulares, células H4 e células U2OS, eram um bom modelo para o estudo do impacto deste SNP. Primeiramente, avaliou-se se ambas as linhas celulares expressavam níveis detetáveis de mRNA e proteína A2AR por recurso às técnicas de biologia molecular qPCR e Western Blotting. Por último, procedeu-se à caracterização das linhas celulares H4 e U2OS pelo método de Sanger Sequencing. A segunda fase deste trabalho consistiu na indução do SNP descrito com recurso à edição genómica CRISPR/Cas9. Este método usa um RNA guia (gRNA) complementar à sequência de DNA alvo, acoplado a uma endonuclease – Cas9 –, a qual induz quebras na cadeia dupla (DSB) de DNA, nessa sequência alvo. O DNA é reparado por recombinação homóloga (HDR), quando na presença de uma molécula de DNA dador com regiões de homologia correspondentes às sequências a montante e a jusante do local de corte da Cas9. Deste modo, desenhou-se o gRNA, que flanqueia a região a ser modificada, e os dois oligonucleótidos (WT e SNP-) que funcionam como template do DNA dador. Por sua vez, as células H4 e as células U2OS foram transfetadas com o plasmídeo, que contem o gRNA, e com os DNA dadores. De seguida, os mutantes gerados (WT e SNP) em cada linha celular foram validados por PCR e caracterizados pelo método de Sanger Sequencing. A partir dos resultados obtidos, conseguimos validar os modelos in vitro – linha celular H4 e linha celular U2OS –, uma vez que ambas as linhas celulares mostraram expressar níveis detetáveis de mRNA e proteína A2AR e, também mostraram ser wild-type, não apresentando o polimorfismo em estudo. Aquando da edição genómica por CRISPR/Cas9 de ambas as linhas celulares, foi possível verificar que o gRNA foi capaz de induzir DSB, no local pretendido. Os mutantes gerados (WT e SNP) em cada linha celular foram caracterizados, contudo, não foi possível gerar um clone positivo (com o SNP) nos clones que analisamos até à data. Com este trabalho, foi possível otimizar a técnica de edição genómica por CRISPR/Cas9 nas duas linhas celulares utilizadas como modelo de estudo, implementando uma nova técnica no laboratório. Contudo, mais clones precisam de ser rastreados de forma a permitir uma melhor caracterização, aumentando, assim, a probabilidade de se conseguir um clone positivo para a condição SNP. Deste modo, permite-se um melhor estudo da reparação do corte pelo DNA dador por processos de recombinação homóloga.

Neste relatório apresenta-se o trabalho de intervenção letiva desenvolvido numa turma do 12º Ano do Ensino Secundário, do curso de Ciências e Tecnologia da Escola Secundária Padre António Vieira do Agrupamento de Escolas de Alvalade, na disciplina de Aplicações Informáticas B, no domínio do ensino da multimédia e animação por computador. Na metodologia seguida, os alunos foram desafiados a resolver problemas, cujas soluções são Animações Digitais em espaços cartesianos 2D (AD2D), resultantes de três tarefas de complexidade crescente. Na tarefa inicial, os alunos aplicaram técnicas de animação frame-by frame para criar AD2D do átomo C6. A segunda tarefa exigiu aplicação da técnica tweening para criar um genérico cinematográfico e a tarefa final a criação de um filme de animação sobre processos estudados na disciplina da Química. As criações multimédia resultantes desta multidisciplinaridade, constituíram instrumentos de recolha de dados da componente investigativa para analisar potencialidades da criação de AD2D no desenvolvimento do Pensamento Computacional (PC) dos alunos. As questões de investigação permitiram identificar: 1) dificuldades dos alunos; 2) atributos da dinâmica das AD2D; 3) carga cognitiva das tarefas; 4) indicadores de mecanismos algorítmicos fundamentais, de abstração, decomposição, reconhecimento de padrões e generalização subjacentes à criação dessas AD2D. Os resultados apontam correlações positivas desses indicadores do PC com a complexidade introduzida pela i) sincronização de alterações, simultâneas, dos atributos gráficos nos elementos animados, ii) combinação de técnicas de animação, e iii) nível taxonómico de Bloom mais elevado, esperado, para as tarefas. As diferentes perspetivas avaliativas, diagnóstica, formativa, sumativa, autorregulação e investigação, revelam em conclusão, que a especificação de tarefas como problemas de criação de produtos multimédia, AD2D, podem proporcionar contribuição efetiva para o desenvolvimento do PC dos alunos em diferentes contextos de ensino-aprendizagem, constituindo um instrumento na prática profissional docente para aferir e melhorar as aprendizagens e o desenvolvimento de competências transversais dos alunos.

Introdução: Nas últimas décadas, em Portugal, verifica-se um progressivo aumento do número de doentes com demência internados em hospitais de agudos. Sendo esta uma doença evolutiva, irreversível, limitadora de vida e indutora de considerável sofrimento ao doente e à sua família, a European Association of Palliative Care recomenda o envolvimento de Cuidados Paliativos no cuidado a pessoas com demência, tendo elaborado um conjunto de recomendações que o norteiam. Objetivos: Conhecer a realidade dos cuidados médicos prestados a pessoas com demência internadas em Enfermarias de Medicina Interna. Metodologia: Estudo quantitativo, descritivo, retrospetivo, transversal e observacional. Amostra não aleatória por conveniência, incluindo todos os doentes com demência internados num Serviço de Medicina durante um período de 3 meses. Resultados: Houve 39 admissões de 37 doentes, 26 eram homens (66,7%), mediana de 87 anos, amplitude interquartil de 6 anos. O tipo de demência era desconhecido em 20 doentes (51,3%) e de Alzheimer em 7 casos (17,9%). Em 25 doentes (64,1%) as Demências estavam em estádio Grave ou Muito Grave. O Índice de comorbilidades de Charlson foi de 6,18 (média, variando de 3-9), correspondendo a uma mortalidade >60% estimada a um ano. Em 17 doentes (43,6%) houve pelo menos um internamento nos 30 dias prévios. A mediana do tempo de internamento clínico foi de 17,26 dias (amplitude interquartil de 23 dias). A mortalidade foi de 18% (n=7), sendo de 41% (n=16) aos 6 meses. Em média foram utilizados 2,7 dispositivos por doente (mediana 3, variação 1-5). De notar, cateter vesical utilizado em 53,8% dos doentes (n=21), alimentação entérica em 41% (n=16), aspiração traqueal em 51% (n=20), contenção física em 15,4% (n=6). Após a aplicação da NECPAL-CCOMS-ICO©, verificou-se que a equipa médica não ficaria surpreendida se o doente falecesse nos próximos 12 meses em 82% das ocorrências. Houve uma média de 7,5/13 questões positivas por doente (mediana 7, amplitude interquartil 3,5), denotando a presença de necessidades paliativas, incluindo uma elevada carga sintomática prévia à admissão. Relativamente à referenciação, apenas um doente provinha de uma unidade de cuidados paliativos, e outro doente foi referenciado para Cuidados Paliativos à data da alta. Discussão/Conclusão: Os doentes com demência são uma população idosa, com múltiplas comorbilidades, prognóstico reservado e evidentes necessidades paliativas. Embora mais informação seja necessária para avaliar a adequação do uso dos dispositivos mencionados, enfatiza-se a premência da revisão de objetivos de cuidados nesta população, propondo-se a incorporação de uma abordagem paliativa nos cuidados de agudos.

A Sensibilidade Não Celíaca ao Glúten (SNCG) pode ser considerada como uma síndrome, caracterizada pela presença de sintomas gastrointestinais e extra-intestinais, que surgem com o consumo de glúten. Alguns estudos recentes têm designado esta condição clínica de Sensibilidade Não Celíaca ao Trigo, pois existe a possibilidade de que os sintomas experienciados por estes indivíduos não se devam apenas ao glúten. Os sintomas podem ser influenciados por vários fatores, como os Inibidores da α amilase/tripsina, que poderão induzir uma disfunção na barreira intestinal, e desencadear a ativação do sistema imune. A evidência sugere que estas proteínas presentes no trigo ativam uma resposta da imunidade inata, induzida também por componentes do metabolismo microbiano, em particular Lipopolissacarídeos (LPS), através da ativação do recetor TLR4. Não existe evidência suficiente também relativamente ao papel das aglutininas do gérmen de trigo, mas estas parecem, da mesma forma, desencadear uma resposta da imunidade inata, aumentando a permeabilidade intestinal e translocação bacteriana. A gliadina desencadeia a libertação de zonulina, aumentando a permeabilidade intestinal, mesmo em indivíduos sem Doença Celíaca (DC) ou sensibilidade ao glúten, embora desencadeie uma resposta mais exacerbada na função da barreira intestinal em indivíduos com DC. Os FODMAPs (grupo heterogéneo de hidratos de carbono de cadeia curta e poliálcoois, altamente fermentescíveis e de baixa absorção) podem ser considerados como exacerbadores de sintomas em alguns indivíduos. Estes não podem ser inteiramente responsáveis pelos sintomas percecionados por indivíduos com SNCG, visto que se observa uma resolução dos sintomas através de uma dieta isenta de glúten, continuando a ingerir alimentos pertencentes ao grupo dos FODMAPs, como por exemplo as leguminosas. Além disso, a dieta isenta de glúten parece ter resultados superiores na melhoria dos parâmetros psicológicos e consistência das fezes, comparativamente com a dieta com baixo teor de FODMAPs. Esta dieta pode ter potencial como intervenção dietética para um subgrupo de indivíduos com Síndrome do Intestino Irritável (SII), sensíveis ao glúten. Como não existem métodos validados para avaliar a prevalência de SNCG, tem sido estimada por alguns estudos sem muito rigor, em indivíduos que reportam ter uma sensibilidade ao glúten ou que quando excluem o glúten por conta própria reportam melhoria clínica. O diagnóstico de SNCG deverá estará correto apenas numa minoria dos indivíduos que auto-excluem o glúten da sua dieta, ou que têm sintomas equivalentes aos reportados por indivíduos com SNCG. Isto pode ser parcialmente explicado por uma sobreposição de sintomas entre SNCG e SII. O diagnóstico mais específico de momento será uma monitorização dos indivíduos durante a eliminação e reintrodução de glúten, por desafio duplo cego controlado por placebo, após exclusão de DC e alergia ao trigo, como preconizado pelos Critérios de Salerno, guidelines criadas em 2015. Foi também sugerida uma dieta com baixo teor de FODMAPs/dieta isenta de glúten seguida da introdução de glúten/placebo, com o intuito de identificar SNCG em indivíduos com SII, pois ambas as condições clínicas podem coexistir. Os sintomas nestes indivíduos iniciam-se após ingestão de cereais contendo glúten, e resolvem-se após alguns dias, ou noutros casos até um mês, com a implementação da dieta isenta de glúten. Os sintomas são semelhantes aos associados à DC, mas parece existir um agravamento nos sintomas extra-intestinais. Os sintomas gastrointestinais mais prevalentes parecem ser dor e distensão abdominal. Outros sintomas gastrointestinais reportados são desconforto abdominal, obstipação, diarreia, dor epigástrica e flatulência. Relativamente aos sintomas extra-intestinais, estes indivíduos reportam fadiga crónica, dor de cabeça, ansiedade, confusão mental, prurido, depressão, mialgia, artralgia, dermatite, pior qualidade de vida, entre outros. Como não foram reportadas complicações a longo prazo na SNCG, pode ser recomendada a reintrodução de alimentos contendo glúten 1 a 2 anos depois do início da dieta. A SNCG começa a ser associada com doenças autoimunes, sendo principalmente associada à tiroidite autoimune. Existe evidência de um comprometimento da integridade da barreira intestinal nestes indivíduos, promovendo uma translocação bacteriana aumentada. Uma proposta recente é que a diminuição de espécies produtoras de butirato, espécies pertencentes ao grupo dos Firmicutes, ou de Bifidobacteria, estão na base do aumento da permeabilidade intestinal em SNCG, resultando numa maior translocação de LPS e aumento da inflamação. Parece existir um envolvimento da imunidade inata, descrito por alguns autores, mas são necessários mais estudos para determinar se a imunidade adquirida contribui para a patogénese de indivíduos com SNCG. O tratamento atual da SNCG é a dieta isenta de glúten, com vista à melhoria dos sintomas e qualidade de vida dos indivíduos. Têm surgido alguns complementos e alternativas à dieta isenta de glúten, como por exemplo o consumo de pão com menor teor de gliadina, que parece induzir mudanças positivas na composição da microbiota intestinal, como um aumento de Faecalibacterium (género anti-inflamatório), e uma diminuição em Bacteroides (género pro-inflamatório). Os sintomas são equivalentes aos obtidos com o consumo de pão sem glúten, e os resultados semelhantes aos obtidos através da variedade de farinha Senatore Cappelli. Esta última variedade de farinha gerou melhores resultados que a farinha de trigo comercial, reduzindo sintomas gastrointestinais e extra-intestinais nestes indivíduos. Variedades de trigo ancestral também podem ser consideradas como uma possível alternativa ao tratamento em alguns indivíduos, por terem menor concentração de inibidores da α-amilase/tripsina e péptidos tóxicos de glúten. Como grande parte dos alimentos sem glúten no mercado são constituídos por arroz, alimentos sem glúten beneficiariam da inclusão de grãos alternativos, como teff ou pseudocereais, além da inclusão de leguminosas e uso de pão de fermentação natural. O microbioma intestinal humano pode ser modificado através da composição da dieta, pré e probióticos, consumo de álcool, e através de farmacoterapia. Alterações alimentares afetam a microbiota intestinal, levando a uma alteração nos metabolitos produzidos por bactérias, nomeadamente na produção de ácidos gordos de cadeia curta. A dieta parece induzir alterações rápidas na microbiota em alguns casos, nomeadamente entre dietas à base de carne e vegetarianas, ou alternando entre uma dieta com elevado teor lipídico e pouca fibra, e uma dieta de elevado teor de fibra e baixo teor lipídico. Existem poucos estudos relativos à microbiota em indivíduos com SNCG. Foi observada uma maior abundância de Pseudomonas no duodeno, resultado de 4 semanas de dieta isenta de glúten, sem certezas do efeito exercido na integridade da mucosa duodenal. A maioria dos indivíduos com SNCG e SII apresenta um rácio Firmicutes:Bacteroidetes aumentado, que é parcialmente revertido através da dieta isenta de glúten. Através desta dieta, observou-se um aumento do nível de Bacterioidetes e uma diminuição de Firmicutes, em comparação com a dieta com baixo teor de FODMAPs. A microbiota de indivíduos com SNCG pode ser mais suscetível a alterações nutricionais, comparando com indivíduos saudáveis, e é sugerida a presença de um desequilíbrio na microbiota destes indivíduos. Em indivíduos adultos e saudáveis, a dieta isenta de glúten parece reduzir populações de bactérias vistas como benéficas para a saúde humana, como por exemplo Bifidobacterium e Lactobacillus, e um aumento de bactérias oportunistas, como a Escherichia coli e Enterobacteriaceae. Uma possível explicação passa pela redução do teor de fibra através da dieta isenta de glúten, não se devendo à redução da ingestão de glúten. Na DC está demonstrado um estado de disbiose, e a microbiota pode ser apenas parcialmente restaurada através da dieta isenta de glúten, visto que esta pode se associar também a uma redução na diversidade de Lactobacillus e Bifidobacterium, e uma abundância superior de Proteobacteria. Esta revisão da literatura analisa o impacto da exclusão do glúten na microbiota intestinal, particularmente em indivíduos com SNCG, além de sumarizar a evidência atual relativa à SNCG. Através de um melhor conhecimento das interações bactéria hospedeiro no intestino, existe a possibilidade de ser controlado o aspeto patogénico desta relação, mantendo e/ou restaurando os benefícios associados à microbiota. Devem ser feitos esforços no futuro para desenvolver biomarcadores sensíveis e específicos para auxiliar no diagnóstico da SNCG, além de serem necessários estudos relativamente à influência dos Inibidores da α-amilase/tripsina e aglutininas do gérmen de trigo nos sintomas e patogénese destes indivíduos. De momento, existe pouca evidência relativamente à microbiota destes indivíduos, sendo de extrema importância realizar estudos nesta temática, estudando as alterações causadas pela inclusão e exclusão de glúten nos mesmos, além de avaliar o impacto que uma dieta isenta de glúten com elevado ou reduzido teor de fibra terá na microbiota.

Resilience is a dynamic, multidimensional complex concept that implies risk and protective factors, adaptation, and success. Communication and language are often identified as barriers in deaf children's development. However, research linking deafness in childhood and resilience is scarce. The present comprehensive literature review aims to verify which are the predominant risk factors for this group, which protective factors may be identified and if significant differences have been found between deaf and hearing children regarding resilience. A systematic search, performed in seven databases, identified 11 articles published in peer-reviewed journals between 2000 and 2019 that met the criteria. Deaf children experience exposure to risk through obstacles in communication, language, and information failure. Consequently, differences between hearing and deaf children are related to more difficulties in emotion regulation and interpersonal relationships. Principal protective factors are a supportive family, school staff, and peers. Practical implications and recommendations for future research are provided.

Um dos problemas maiores da bioinformática é a previsão de função de uma proteína. A tecnologia existente já permite obter milhões e milhões de sequências a custo muito reduzido, mas a compreensão de sua função dentro dos vários organismos é ainda um grande mistério para a larga maioria de sequências proteicas existentes. A criação de software eficiente que permita analisar bases de dados de proteínas em busca de metadados é também um desafio para os biólogos e uma área de estudo recente para os cientistas da computação, por representar uma alternativa de baixo custo aos métodos de teste em laboratório. Uma metodologia que se propõe analisar estas bases de dados e anotar as proteínas são os Peptide Programs (PepProg), uma metodologia de aprendizagem automática (machine learning) para classificação funcional de sequências biológicas. Esta dissertação de mestrado se propôs a estudar meios de optimizar o desempenho da implementação existente do método PepProg através da construção de uma implementação alternativa que explore a arquitectura do processador CellBE, presente nas consolas Playstation 3 disponibilizadas pelo Departamento de Informática da Universidade de Lisboa. Para explorar os recursos do CellBE, foi necessário primeiro modificar a implementação existente do método PepProg para que pudesse correr instruções do tipo Single Instruction Multiple Data (SIMD). Esta modificação denominada vectorização, é necessária para que os múltiplos núcleos do processador CellBE pudessem ser utilizados, transformando o PepProg num algoritmo paralelo dentro da arquitectura CellBE. Com o estudo realizado, pode-se concluir que as propostas de vectorização sugeridas nesta dissertação não foram suficientes para a construção de um PepProg paralelo mais eficiente, pois o custo da vectorização do algoritmo em tempo de execução provou-se ser tão alto a ponto de não poder ser compensado pela paralelização do algoritmo.

Changes in routines and habits, fear of contamination from the coronavirus disease 2019 (COVID-19) virus, and economic crisis have resulted in significant impacts upon individuals' lives, health, and risk behaviors. The present study aims to analyze health risk behaviors and gender differences of Portuguese adults before and during the COVID-19 pandemic. A quantitative analysis using SPSS v. 26 software presents the evaluation of 5746 responses (M = 48.5 years, SD = 14.3), of which 67.7% were female. t Test was used to study differences in means before and during the pandemic and analysis of variance test to analyze gender differences. In the comparative study before and during the pandemic showed a decrease in the number of meals per day, physical activity and perception of sleep quality; an increase in tobacco use, beer consumption, and media use (TV, mobile phone, social networks, and online games). Gender differences study demonstrated that the number of meals per day suffered a decrease from pre to pandemic in women, while increasing in men, becoming prominent in the second moment under study. Both genders had an increase in consumption behaviors and substance use, but women revealed a decrease in the consumption of wine during the pandemic, while men revealed more consumption behaviors in the variables under study. The use of media also changed, with men showing a higher level in TV hours per day, social networks and online games before the pandemic and in TV hours per day and games/online during the pandemic. Women stand out in the use of mobile phone per day during the pandemic. Daily physical activity decreased during the pandemic, as did sleep quality. Males revealed a higher practice of physical activity at both periods, as well as sleep quality. Based on the results presented, it is expected that considerations and actions in the scope of public health policies and health prevention and promotion, will be rethought and adapted to the specificities of each gender.