Repositório RCAAP

Introdução: A investigação clínica constitui a base da evidência na área da Medicina e inclui estudos com e sem intervenção. Os ensaios clínicos (ECs), estudos de intervenção, são realizados com vista a analisar efeitos de um medicamento experimental. Por outro lado, os estudos sem intervenção avaliam os efeitos da terapêutica mas em contexto da prática clínica habitual. Dentro dos estudos sem intervenção, podem incluir-se os estudos de eficácia pós autorização (PAES, na sigla inglesa), realizados quando são necessários dados adicionais de efetividade de um medicamento. Ambos os estudos podem ser promovidos por entidades independentes, denominados estudos da iniciativa do investigador (EII). Os EII assumem particular importância porque exploram questões da prática clínica habitual relativas por exemplo ao uso off-label de medicamentos ou a doenças raras. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi a análise, no âmbito dos EII, dos requisitos regulamentares existentes para EC e estudos PAES sem intervenção, bem como a avaliação crítica e comparação das diferenças regulamentares entre estes tipos de estudos, tendo como resultante um Manual Prático para o Investigador. Metodologia: Foi efetuada uma pesquisa da regulação de ECs e estudos PAES, nomeada-mente da legislação nacional e europeia vigente. Foram também analisadas orientações e documentos divulgados nas páginas eletrónicas geridas pelas Autoridades Competentes nesta área. Adicionalmente, foram consultados artigos científicos relacionados com o tema. Resultados: A concretização de estudos clínicos, sejam ECs ou estudos PAES sem intervenção, segue o mesmo conjunto de requisitos ético-regulamentares independentemente do Promotor ser comercial ou independente (estudos da iniciativa do investigador). Estes requisitos poderão incluir, entre outros, a realização de pedido de autorização e/ou parecer às Autoridades Nacionais, registos em bases de dados específicas, pedido de aprovação do estudo ao Conselho de Administração do centro clínico, cumprimento dos requisitos de boas práticas clínicas e/ou de farmacoepidemiologia, bem como a garantia da proteção dos dados dos participantes destes estudos. Conclusões: A investigação clínica é uma área bastante regulada, exigindo o conhecimento e aplicação de diversas leis, regulamentos, diretivas e orientações científicas consoante o tipo de estudo. A regulação dos ECs é extensa e harmonizada a nível europeu. Por seu turno, a regulação da implementação dos estudos PAES sem intervenção é menor, comparativamente com os ECs, e efetua-se maioritariamente a nível nacional. O cumprimento de todas as exigências previstas na legislação constitui um exigente contexto burocrático para os Investigadores independentes, comprometendo por vezes a exequibilidade dos EII.

A malária é uma das principais doenças infeciosas a nível mundial. Em 2018 esta doença infetou 228 milhões de pessoas, das quais 405 mil morreram em todo o mundo. Anualmente são gastos vários biliões de dólares americanos na tentativa de controlar e erradicar a malária. Contudo, apesar do número de casos e mortes causados por esta doença terem vindo a diminuir ao longo dos anos, a Organização Mundial de Saúde considera que demore mais de uma década até que a malária seja totalmente erradicada. A malaria é causada por parasitas protozoários do género Plasmodium. Em humanos esta doença pode ser causada por cinco diferentes espécies: P. falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae e P. knowlesi. Destas espécies de Plasmodium, o P. falciparum é a espécie predominante na maioria das regiões afetadas por esta doença, sendo responsável por 99.7% dos casos em África, para além de ser a espécie responsável pela maioria das mortes a nível global. Os parasitas Plasmodium necessitam de dois hospedeiros distintos: um vetor mosquito e um hospedeiro vertebrado. Em humanos, os parasitas são geralmente transmitidos através da picada do mosquito fêmea Anopheles infetado e têm duas fases distintas quando no corpo humano, a fase hepática e a fase sanguínea. Quando o mosquito se alimenta de sangue, liberta os esporozoítos existentes nas glândulas salivares para o sangue do hospedeiro vertebrado. Após entrarem na corrente sanguínea, os parasitas migram para os hepatócitos dando início à fase hepática, assintomática para o hospedeiro. Adicionalmente, é na fase hepática que ocorre o desenvolvimento das formas latentes (hipnozoítos) das espécies P. vivax e P. ovale. Os hipnozoítos podem ficar inativos nas células hepáticas até vários anos. Após a fase hepática, os parasitas regressam à corrente sanguínea para invadirem os eritrócitos, dando começo à fase sanguínea. Dentro dos eritrócitos, os parasitas evitam as defesas imunitárias do hospedeiro e degradam a hemoglobina dos mesmos, permitindo o seu crescimento e replicação. O consumo excessivo de hemoglobina por parte do parasita é a causa dos sintomas no hospedeiro. O tratamento para a malária deve ser iniciado nas primeiras 24 horas após o aparecimento de sintomas. No entanto, os primeiros sintomas causados pelos parasitas Plasmodium são muito semelhantes a outras doenças febris, dificultando o seu diagnóstico. Quando não tratada nestas 24 horas, a malária pode desenvolver-se em malária severa, podendo causar malaria cerebral, ou mesmo a morte. Tradicionalmente, as terapias contra a malária têm a fase sanguínea como alvo. No entanto, a fase hepática é obrigatória e essencial para a maturação e replicação dos parasitas, sendo um alvo importante no controlo e erradicação da malária. De forma geral, os fármacos que atuam na fase sanguínea não têm atividade contra os parasitas hepáticos devido às diferenças biológicas entre as duas fases dos parasitas. Assim, é altamente desejável desenvolver fármacos ativos para a fase hepática, ou para ambas as fases, de modo a exercer profilaxia, erradicar as formas latentes, evitar o aparecimento de estirpes resistentes e bloquear a transmissão dos parasitas para o vetor mosquito. Adicionalmente, outros modos de combater o desenvolvimento de resistência aos vários fármacos são: utilização de terapias combinadas, ou fármacos híbridos. Atualmente, é recomendado pela Organização Mundial de Saúde recorrer a terapias combinadas baseadas em artemisininas para o tratamento da malária, de modo a reduzir o risco de aparecimento de resistência. As artemisininas são compostos apenas ativos contra as formas eritrocíticas, e já existem casos de resistência a estas moléculas. O desenvolvimento de resistência aos vários fármacos é a principal razão para que a terapêutica contra a malária não seja tão eficaz quanto desejado. A cloroquina, fármaco antimalárico que permitiu a erradicação da malária de muitos países, hoje em dia é ineficaz contra os parasitas Plasmodium devido ao aparecimento de estirpes resistentes a este composto. Várias classes de compostos têm atividade contra a fase hepática. No entanto, tem sido difícil desenvolver um fármaco com efeito profilático eficiente devido à falta de conhecimento sobre a biologia dos parasitas hepáticos e respetivos alvos terapêuticos. A primaquina é uma 8-aminoquinolina com potente atividade para os parasitas pré-eritrocíticos, para além de ser um dos poucos fármacos com atividade hipnozoiticida. Além da primaquina, outras 8-aminoquinolinas também exibem atividade profilática, apesar de poucas serem ativas contra as formas latentes como é o caso da tafenoquina. No entanto, o uso desta classe de compostos não é indicado para pessoas com deficiência a nível da enzima glucose 6-fosfato desidrogenase, devido aos seus efeitos secundários. Dentro dos grupos dos antifolatos, alcalóides, antibióticos, anti-histamínicos, inibidores do complexo bc1, pirimidinas, entre outros, podem ser encontradas moléculas com atividade para a fase hepática. Entre os vários compostos abordados destacaram-se dois devido aos seus baixos valores de IC50 na fase hepática: o decoquinato (177 pM) e a nigericina (< 1 pM). O primeiro composto é um inibidor do complexo bc1 da cadeia eletrónica mitocondrial do parasita, enquanto que o segundo composto é um antibiótico ionóforo cujo alvo são transportadores de iões K+. As pirimidinas nitrilo geralmente são compostos ativos para a fase sanguínea. No entanto, Oliveira e colaboradores descobriram uma série de híbridos tetraoxano-pirimidina nitrilo com atividade para ambas as fases do parasita. A unidade pirimidina nitrilo (grupo aceitador de Michael) destas moléculas é um inibidor da falcipaína-2, enzima expressa apenas nos parasitas eritrocíticos. No entanto, a mesma unidade revelou também ter atividade inibitória para os parasitas hepáticos. Isto sugere a existência de um ou mais alvos terapêuticos com um resíduo de cisteína ativo na fase hepática. Apesar de estar descrita a possível atividade antimalárica de tetraoxanos na fase hepática, nestes híbridos essa hipótese não é considerada, pela existência de atividade hepática num composto apenas com a unidade pirimidina nitrilo. Neste projeto foram sintetizados dois compostos com um grupo aceitador de Michael, e com potencial atividade inibitória para as fases sanguínea e hepática. Duas pirimidinas substituídas na posição 2 com uma unidade acrilato, cujas atividades inibitórias contra a malária (fases sanguínea e hepática) e células cancerígenas do tipo estaminais foram avaliadas. No entanto, não foi possível expor o alvo terapêutico destas moléculas na fase hepática. Ao longo do trabalho laboratorial certas reações foram otimizadas. Por exemplo, na obtenção dos compostos finais efetuou-se um acoplamento de Suzuki-Miyaura na posição 2 de duas pirimidinas distintas. Quando esta reação foi efetuada numa pirimidina não substituída na posição 5, o rendimento obtido foi de 6% (composto 64). Por outro lado, verificou-se que a mesma reação numa 5-bromopirimidina levou à obtenção do composto di-substituído, 65, com um rendimento de 13%. Ambos os compostos mostraram ter atividade moderada contra os parasitas hepáticos, o composto 65 exibiu um valor de IC50 = 9.49 μM. O valor de IC50 do composto 64 não foi determinado devido à possibilidade de toxicidade nas concentrações mais elevadas. Quanto à avaliação da inibição de parasitas sanguíneos, apenas um dos compostos mostrou atividade (composto 64), sendo esta reduzida relativamente a outros compostos com grupos aceitadores de Michael. Para além disso, os compostos finais foram também testados numa linha de células cancerígenas do tipo estaminais do cólon humano (HT-29), e ambos apresentaram baixa atividade inibitória. Nos ensaios em monocamada os compostos 64 e 65 apresentaram valores de IC50 = 35.56 μM e 28.96 μM, respetivamente. Nos ensaios em células cancerígenas estaminais do tipo esferóides os valores de IC50 determinados foram de 0.77 μM e 0.70 μM, respetivamente. O facto dos compostos 64 e 65 conterem um grupo na posição 2 que atua como aceitador de Michael, e apresentarem atividade para a fase hepática (composto 64 também apresentou atividade para a fase sanguínea), reforça a hipótese de existir um alvo que contenha uma cisteína ativa para esta mesma fase. Assim, este trabalho serve de diretriz para a síntese de híbridos e sondas químicas estruturalmente relacionadas com os compostos 64 e 65, possibilitando a compreensão do mecanismo de ação destes na fase hepática.

Nas últimas décadas tem-se vindo a observar um crescente interesse pelo uso de plantas e seus derivados na terapêutica, nos países desenvolvidos. Por outro lado, o recurso às plantas medicinais por parte dos países em desenvolvimento para os seus cuidados de saúde primários é estimado em 80% da população mundial, o que confere grande importância aos estudos de qualidade, eficácia e segurança destes recursos terapêuticos de forma a permitir o desenvolvimento de fórmulas farmacêuticas seguras passíveis de utilização na terapêutica. A Guiné-Bissau é um país que detém uma flora vasta, estimada em 1507 espécies, das quais 1495 são nativas, havendo já alguns estudos confirmativos da utilidade das plantas da sua flora, tanto a nível alimentar como medicinal. No entanto, estes estudos são ainda escassos e não englobam os hábitos das comunidades deste país quando emigradas. O presente trabalho integra a inventariação das plantas guineenses usadas na alimentação e na medicina tradicional pela comunidade guineense da área metropolitana de Lisboa. Sobre as plantas mais citadas como úteis para estes fins no decurso de inquéritos realizados junto dos consumidores guineenses, sumariaram-se conhecimentos relativamente aos estudos químicos, farmacológicos e toxicológicos descritos na literatura. As cinco espécies mais citadas pelos inquiridos foram: Abelmoschus esculentus L. (quiabo); Anacardium occidentale L. (cajú); Arachis hypogaea L. (amendoim); Elaeis guineensis Jacq. (dendezeiro) e Hibiscus sabdariffa L. (hibisco), sendo Elaeis guineensis Jacq. (dendezeiro) a de maior utilização pela comunidade guineense inquirida na área metropolitana de Lisboa. Tanto quanto é do nosso conhecimento, o presente trabalho permitiu a obtenção, pela primeira vez, de dados relativos à frequência de utilização das plantas da flora guineense utilizadas pela comunidade guineense na área metropolitana de Lisboa. Todo o trabalho efetuado durante este estudo vem dar a conhecer as plantas existentes na flora da Guiné-Bissau, de maior uso pela comunidade guineense, residente na área metropolitana de Lisboa.

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Background: The COVID-19 pandemic has put community pharmacists at the frontline of prevention, preparedness, response, and recovery efforts. Pharmacies had to reorganize and implement several different interventions and measures within a very short time frame. Objectives: 1) To map the current reported practice and trends and to review the literature on pharmacy-based interventions on COVID-19 provided in Europe; 2) To identify knowledge gaps and future avenues for pharmacy research, policy, and practice in response to public health emergencies. Methods: We used a mixed methods approach combining country mapping of current practices of pharmacy interventions on COVID-19 reported by pharmacy associations in Europe with a scoping review of published literature. Results: We mapped current practices on 31 pharmacy interventions on COVID-19 in 32 countries in Europe. Almost all preventive measures to reduce health risks have been provided in most countries. Other frequent interventions reflected preparedness for stockpiling, increased demand for services and products, and important patient care interventions exceeding dispensing role. Expanded powers granted to pharmacies and legislation passed in view of COVID-19 enabled services that improve access to medicines and relevant products, patient screening and referral including point-of-care antigen testing, support to vulnerable patients, and COVID-19 vaccination. We identified 9 studies conducted in pharmacies in 7 countries in Europe. Most studies are cross-sectional and/or descriptive. Pharmacy associations played an important supporting role by developing and updating guidance and emergency plans to assist community pharmacists. Conclusions: A wide array of pharmacy interventions on COVID-19 was implemented in several countries within a very short time frame. Research on pharmacy interventions on COVID-19 is still in its infancy but confirmed the wide array of interventions provided and expanded powers granted to pharmacies. These findings may provide a significant impact to improve pharmacy research, policy, and practice in response to future public health emergencies in Europe and globally.

During excavation of the prehistoric necropolis of Galeria da Cisterna in 1988-1989, the remains of several individuals were recorded. The direct dating of four attests to use of the cave for funerary purposes during Beaker times. Whilst no Beaker pottery was found, a small fragment of a golden spiral and a set of V-perforated ivory buttons are diagnostic of the period. These items can be securely associated with the human remains dated to the corresponding time range. Visual inspection identified sperm whale ivory as the raw-material the buttons were made of, which density measurements confirmed. This indicator was chosen because it is non-destructive and discriminates well between the different types of ivory found in the Chalcolithic of Iberia. The average obtained for the 13 specimens from Galeria da Cisterna is 2.32 ± 0.12, well outside the range for elephant and hippopotamus ivories and consistent with the average value (2.2) for sperm-whale ivory published by Schuhmacher et al. (2013). The gold object was most likely made from regional sources. These data reflect on the wide intra-regional networks in operation during the Chalcolithic of the Lisbon peninsula. They also suggest that extra-regional exchange was rather more limited, as the golds of the Alentejo sites usually are of a distinct composition and sperm-whale has never been identified among their ivories (which are of North-African elephant, a rare occurrence in the Lisbon peninsula).

Amnesty continues several of the social justice themes of precarity and subalternity (at times, a violent subaltern agency) of Aravind Adiga’s fiction, and its literary narrative centres again on criminal acts and the moral dilemma the protagonist faces over whether to report a murder and expose his illegality to do “the right thing.” Offering a postcolonial reading of Amnesty supported by concepts from migration, citizenship, and human rights studies, this essay discusses the novel’s representation of the inhospitable conditions experienced by migrants victimized by the precarity of their status, whether discursively categorized as illegal, irregular, undocumented, unauthorized, or unlawful; by the consequent exploitations and abuse without recourse to justice; and by the suspension of their human rights. The theme of illegality is approached in Adiga’s narrative from a more radical perspective of liminality – the state of “legal liminality” in which irregular migrants find themselves when longing to belong in the host country, or at least be legalized, while gripped and besieged by myriad daily fears and anxieties that their legal status will be discovered, compounded by a resolute refusal to leave the host country. Adiga forces this theoretical question of legal liminality to an extreme by presenting a protagonist who, as an irregular migrant, has committed the political crime of illegally overstaying in the host country. The central question of amnesty is raised when the protagonist faces the dilemma of stepping up to civic responsibilities without having been conceded participatory rights.

Smaug is a conserved translational regulator that binds numerous mRNAs, including nuclear transcripts that encode mitochondrial enzymes. Smaug orthologs form cytosolic membrane-less organelles (MLOs) in several organisms and cell types. We have performed single-molecule fluorescence in situ hybridization (FISH) assays that revealed that SDHB and UQCRC1 mRNAs associate with Smaug1 bodies in U2OS cells. Loss of function of Smaug1 and Smaug2 (also known as SAMD4A and SAMD4B, respectively) affected both mitochondrial respiration and morphology of the mitochondrial network. Phenotype rescue by Smaug1 transfection depends on the presence of its RNA-binding domain. Moreover, we identified specific Smaug1 domains involved in MLO formation, and found that impaired Smaug1 MLO condensation correlates with mitochondrial defects. Mitochondrial complex I inhibition upon exposure to rotenone, but not strong mitochondrial uncoupling upon exposure to CCCP, rapidly induced the dissolution of Smaug1 MLOs. Metformin and rapamycin elicited similar effects, which were blocked by pharmacological inhibition of AMP-activated protein kinase (AMPK). Finally, we found that Smaug1 MLO dissolution weakens the interaction with target mRNAs, thus enabling their release. We propose that mitochondrial respiration and the AMPK-mTOR balance controls the condensation and dissolution of Smaug1 MLOs, thus regulating nuclear mRNAs that encode key mitochondrial proteins. This article has an associated First Person interview with the first authors of the paper.

Since optical coherence tomography (OCT) was first performed in humans two decades ago, this imaging modality has been widely adopted in research on coronary atherosclerosis and adopted clinically for the optimization of percutaneous coronary intervention. In the past 10 years, substantial advances have been made in the understanding of in vivo vascular biology using OCT. Identification by OCT of culprit plaque pathology could potentially lead to a major shift in the management of patients with acute coronary syndromes. Detection by OCT of healed coronary plaque has been important in our understanding of the mechanisms involved in plaque destabilization and healing with the rapid progression of atherosclerosis. Accurate detection by OCT of sequelae from percutaneous coronary interventions that might be missed by angiography could improve clinical outcomes. In addition, OCT has become an essential diagnostic modality for myocardial infarction with non-obstructive coronary arteries. Insight into neoatherosclerosis from OCT could improve our understanding of the mechanisms of very late stent thrombosis. The appropriate use of OCT depends on accurate interpretation and understanding of the clinical significance of OCT findings. In this Review, we summarize the state of the art in cardiac OCT and facilitate the uniform use of this modality in coronary atherosclerosis. Contributions have been made by clinicians and investigators worldwide with extensive experience in OCT, with the aim that this document will serve as a standard reference for future research and clinical application.

Aim: To evaluate the efficacy of switching from bevacizumab to ranibizumab or aflibercept in eyes with diabetic macular edema (DME) unresponsive to bevacizumab. Methods: Single-center retrospective comparative study of patients with DME unresponsive to intravitreal bevacizumab that was switched to ranibizumab or aflibercept. Best-corrected visual acuity (BCVA) and central foveal thickness (CFT) were analysed prior to and 4 months after the switch. Ocular coherence tomography (OCT) biomarkers were also analysed. Results: Fifty-six eyes from 40 patients were included in the study, 33 eyes switched to ranibizumab and 23 to aflibercept. A significant median CFT decrease was observed in both groups (p<0.001), with no between-group differences. BCVA gain was only significant in the ranibizumab group (p<0.001). None of the pre-baseline or baseline parameters were associated with the response to ranibizumab or aflibercept. Conclusion: In persistent DME unresponsive to bevacizumab, both anatomical and functional improvements were observed with ranibizumab whereas aflibercept only showed an anatomical improvement.

The purpose of this study was to cross-sectionally estimate the prevalence of recreational running in Portugal and describe characteristics of adult recreational runners. A random representative sample of 1068 Portuguese adults was selected. Socio-demographic information, physical activity habits and running behavior were assessed. Recreational runners' training habits, motivations, barriers, vitality and flow were also assessed. The prevalence of recreational running in Portugal was 10.6%. It was higher in men (14.6% vs. 6.6%, p = .024) and in younger runners (13.6% vs. 7.7%, p = .026). Participants ran on average 3 times, 20 kilometers and 3 hours per week. General health orientation (88%), self-esteem (63%), and life meaning (57%) were the most predominant motives for running, while time was the most prevalent barrier (43%). This first Portuguese running prevalence representative study, indicates that almost 11% of adults ran regularly, and describes correlates of running, which can inform future running promotion interventions.

Pulmonary exacerbations are a cause of significant morbidity in patients with primary ciliary dyskinesia (PCD) and are frequently used as an outcome measure in clinical research into chronic lung diseases. So far, there has been no consensus on the definition of pulmonary exacerbations in PCD. 30 multidisciplinary experts and patients developed a consensus definition for children and adults with PCD. Following a systematic review, the panel used a modified Delphi process with a combination of face-to-face meetings and e-surveys to develop a definition that can be used in research settings for children and adults with PCD. A pulmonary exacerbation was defined by the presence of three or more of the following seven items: 1) increased cough, 2) change in sputum volume and/or colour, 3) increased shortness of breath perceived by the patient or parent, 4) decision to start or change antibiotic treatment because of perceived pulmonary symptoms, 5) malaise, tiredness, fatigue or lethargy, 6) new or increased haemoptysis, and 7) temperature >38°C. The consensus panel proposed that the definition should be used for future clinical trials. The definition should be validated and the usability assessed during these studies.

Most cells in our body communicate during development and throughout life via Notch receptors and their ligands. Notch receptors relay information from the cell surface to the genome via a very simple mechanism, yet Notch plays multiple roles in development and disease. Recent studies suggest that this versatility in Notch function may not necessarily arise from complex and context-dependent integration of Notch signaling with other developmental signals, but instead arises, in part, from signaling dynamics. Here, we review recent findings on the core Notch signaling mechanism and discuss how spatial-temporal dynamics contribute to Notch signaling output.

A tuberculose é uma das doenças infeciosas mais mortíferas do mundo, causada pelo agente patogénico Mycobacterium tuberculosis. O surgimento de novas estirpes resistentes, a elevada toxicidade dos fármacos de segunda-linha e os longos períodos de tratamento são as principais problemáticas para a erradicação desta patologia. É, por isso, urgente a descoberta de novos agentes antituberculose com novos mecanismos de ação rápidos e únicos, e de novas abordagens para combater este problema. A elevada hidrofobicidade e complexidade do envelope celular do Mycobacterium tuberculosis dificulta a passagem de alguns fármacos para o interior da micobactéria, impossibilitando os mesmos de atingir o alvo pretendido e atuar. Assim, com o intuito de desenvolver uma estratégia para ultrapassar esta problemática, procedeu-se à síntese de pró-fármacos mútuos utilizando dois fármacos de segunda-linha utilizados na terapia da tuberculose pertencentes à família das fluoroquinolonas (a ciprofloxacina e a levofloxacina) e álcoois de cadeia longa unidos por uma ligação éster. A priori, estes pró-fármacos aumentariam a lipofilia dos fármacos ciprofloxacina e levofloxacina, podendo facilitar a entrada na micobactéria. Os derivados de ciprofloxacina e de levofloxacina foram obtidos utilizando álcoois com cadeia de 6 a 16 átomos de carbono, através da metodologia descrita por Tehler et al., 2013. Para avaliar a estabilidade química e enzimática, realizaram-se ensaios de estabilidade em plasma humano e em tampão fosfato pH 7,4. De seguida, avaliou-se a atividade antimicobacteriana dos derivados contra a estirpe Mycobacterium tuberculosis H37Rv, determinando a Concentração Inibitória Mínima e a Concentração Bactericida Mínima. Além disso, com o intuito de estudar a possibilidade dos pró-fármacos poderem ser ativados pelas esterases micobacterianas, avaliou-se a estabilidade dos mesmos em homogenatos de Mycobacterium smegmatis. Por fim, realizaram-se ensaios de citotoxicidade em macrófagos THP-1. Todos os ésteres de fluoroquinolonas foram sintetizados com sucesso, apresentando rendimentos entre 19% e 94%. Em relação à atividade antimicobacteriana dos derivados contra a estirpe Mycobacterium tuberculosis H37Rv, observou-se que os compostos com cadeia alquílica curta demonstraram melhor atividade. Além disso, os compostos mostraram ser muito estáveis e resistentes à ação das enzimas no plasma humano e à hidrólise química. Sendo assim, uma vez que os pró-fármacos necessitam de ser biotransformados em fármacos para poderem atuar nas micobactérias, avaliou-se se estes seriam ativados pelas esterases micobacterianas e observou-se que estes permaneceram estáveis em homogenatos de Mycobacterium smegmatis. Assim, dado que estes pró-fármacos não passam pelo processo de ativação, não deverão ser estudados como pró-fármacos, mas sim como fármacos. Realizaram-se também ensaios de citotoxicidade, que revelaram que os compostos são mais tóxicos do que os ácidos correspondentes. Sendo assim, seria importante, futuramente, avaliar-se o modo de ação destes compostos, o que permitirá proceder à otimização dos mesmos.

A Iniciativa sobre Medicamentos Inovadores é uma parceria público-privada entre a Comunidade Europeia, representada pela Comissão Europeia, e a Indústria Farmacêutica, representada pela Federação Europeia da Indústria Farmacêutica. Esta Iniciativa de Tecnologia Conjunta tem como objetivos acelerar o processo de investigação e desenvolvimento de medicamentos inovadores, bem como gerar novos conhecimentos científicos que promovam a integração da medicina personalizada nas doenças prioritárias definidas pela Organização Mundial de Saúde. Atualmente, no âmbito desta iniciativa foram estabelecidos dois programas, sendo que o primeiro (IMI1) decorreu entre 2008 e 2013 e teve um orçamento de 2 mil milhões de euros, enquanto que o segundo programa (IMI2) está em decurso desde 2014 e terminará em 2020 e o orçamento disponibilizado foi de 3.276 mil milhões de euros. A diabetes mellitus é uma das doenças prioritárias indicadas pela Organização Mundial de Saúde alvo de financiamento pelos programas IMI. As principais justificações para este facto prendem-se com os dados epidemiológicos da doença. No decorrer dos anos, verificou-se um aumento exponencial da taxa de prevalência desta doença a nível mundial. Esta evidência é suportada pelo facto de, entre o período de 1980 e 2014, esta taxa ter sofrido um aumento de 4.7% para 8.7%, o quadruplo do valor, em adultos com idade igual ou superior a 18 anos e também por as estimativas a 20 anos, realizadas pela Organização Mundial de Saúde, indicarem que o número total de casos existentes corresponderá a mais de 20% da população universal. Simultaneamente, constatou-se um crescimento progressivo tanto da taxa de mortalidade por diabetes bem como dos custos de saúde acarretados por esta doença. No que diz respeito à taxa de mortalidade, em 2016, a diabetes foi considerada a sétima principal causa de morte no mundo. Em termos de impacto económico, a diabetes e as complicações decorrentes desta doença, como é o caso das doenças cardiovasculares, nefropatia diabética e retinopatia diabética, impõem um grande peso económico para os sistemas de saúde. A nível mundial, os custos anuais provocados pela diabetes, entre o ano de 2007 e 2019, aumentaram de 232 mil milhões de dólares para 760 mil milhões de dólares, o que equivale a incremento de 528 mil milhões de dólares em 12 anos. Na área da Diabetes, o principal objetivo dos programas IMI1 e IMI2 é o de reduzir a tendência crescente observada na taxa de prevalência desta doença. De forma a atingir esta meta, os dois programas supramencionados primaram o financiamento de projetos cujo intuito consistia no desenvolvimento do conhecimento, medicamentos, métodos, ferramentas e modelos que facilitassem a implementação da medicina personalizada, como modelo de prática médica corrente, em doentes com diabetes. Até outubro de 2019, os programas IMI financiaram treze projetos para a área da Diabetes & Doenças Metabólicas, nomeadamente SUMMIT, IMIDIA, DIRECT, StemBANCC, EMIF, EBiSC, INNODIA, RHAPSODY, BEAT-DKD, LITMUS, Hypo-RESOLVE, IM2PACT e CARDIATEAM. Entre estes, o INNODIA tinha como objetivo a diabetes tipo 1, o DIRECT, EMIF e RHAPSODY tinham como foco a diabetes tipo 2, o SUMMIT, BEAT-DKD, LITMUS, Hypo-RESOLVE e CARDIATEAM estavam associados às complicações da diabetes e os restantes projetos, o StemBANCC, EBiSC, IMIDIA e IMI2PACT, estavam orientados para o desenvolvimento da vertente científica. Em geral, um investimento monetário total na ordem dos €447 249 438 foi realizado pelo IMI na área da Diabetes. Todavia, a deteção da lacuna existente na integração dos resultados produzidos pelos diferentes projetos, impulsionou a elaboração da presente dissertação intitulada de “Scientific Advances in Diabetes: The Impact of the Innovative Medicines Initiative”, ou seja, Avanços Científicos na Área da Diabetes: Impacto da Iniciativa sobre Medicamentos Inovadores. Os principais objetivos estabelecidos para esta dissertação foram os de recolher os artigos publicados pelos projetos financiados e sistematizá-los nos eixos de investigação definidos na agenda estratégica do programa IMI2, mais concretamente: 1) identificação de alvos e biomarcadores, 2) novos paradigmas de ensaios clínicos, 3) medicamentos inovadores e 4) programas de adesão terapêutica centrados nos doentes. A metodologia de investigação aplicada nesta dissertação consistiu numa revisão de literatura, tendo-se utilizado como fontes de dados as páginas eletrónicas oficiais de cada projeto, o contacto com os coordenadores e co-coordenadores dos projetos e a base de dados europeia Cordis. No geral, um total de 662 citações foram identificadas, das quais 185 foram incluídas na análise realizada neste trabalho. Através da sistematização e integração dos artigos recolhidos nos projetos financiados pelo IMI, averiguou-se que para o eixo de identificação de alvos e biomarcadores, os outcomes relevantes responderam a cinco das recomendações definidas na agenda estratégica do programa IMI2, nomeadamente: 1) identificar e validar marcadores biológicos, ferramentas e ensaios, 2) identificar as determinantes que justificam a variabilidade interindividual, 3) compreender os mecanismos moleculares subjacentes à doença, 4) desenvolver uma plataforma de ensaios pré-clínicos e 5) estabelecer modelos de sistemas. De um modo geral, um vasto número de biomarcadores, ferramentas, fatores responsáveis pela heterogeneidade da população, incluindo marcadores genéticos, e mecanismos relevantes foram identificados para a diabetes tipo 1 pelo INNODIA, para a diabetes tipo 2 pelo SUMMIT, IMIDIA, DIRECT e EMIF, para as células beta pancreáticas pelo IMIDIA e RHAPSODY, para a nefropatia diabética pelo SUMMIT e BEAT-DKD, e para as doenças cardiovasculares e retinopatia diabética pelo SUMMIT. Suplementarmente, um conjunto de ferramentas e ensaios foram desenvolvidos pelos projetos StemBANCC, EBiSC e IMIDIA com o intuito de impulsionar avanços na área investigacional. Ainda neste eixo foram propostos dois modelos de estratificação dos doentes, um relativo ao controlo glicémico em doentes com diabetes tipo 1 estabelecido pelo INNODIA e outro correspondente à identificação dos subtipos de doentes com diabetes desenvolvido pela parceria BEAT-DKD/RHAPSODY. Relativamente ao eixo de ensaios clínicos, os dados analisados compreendiam propostas de novos parâmetros clínicos e de desenhos de ensaios, sendo que estes resultados visavam espelharem com maior precisão as características da subpopulação com diabetes em teste. Os dados incluídos neste eixo foram obtidos a partir dos projetos SUMMIT, DIRECT e BEAT-DKD. No que concerne ao eixo de medicamentos inovadores, as informações recolhidas dos artigos publicados pelos projetos SUMMIT, IMIDIA, DIRECT, StemBANNC, EMIF, INNODIA e BEAT-DKD consistiam na identificação de novos potenciais alvos terapêuticos bem como no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, ambos com a finalidade de tratar ou prevenir tanto a diabetes como as complicações associadas a esta doença. Foi ainda proposta uma nova abordagem de produção de células estaminais pluripotentes humanas em larga escala pelo StemBANCC. No que tange aos programas de maximização de resultados de saúde benéficos centrados no doente com diabetes, dois novos modelos preditivos foram desenvolvidos e validados pelo projeto DIRECT, permitindo a sua utilização como ferramentas de diagnóstico por médicos especialistas. Adicionalmente, esta dissertação tem como objetivo apresentar uma proposta de visão de complementaridade entre os treze projetos financiados pelo IMI, realçando as possíveis estratégias a adotar para a integração da medicina personalizada na prática clínica. Esta abordagem engloba a criação de indicadores biológicos e genéticos que facilitem a identificação dos indivíduos com risco elevado de desenvolver diabetes, a inclusão de ferramentas que possibilitem o diagnóstico precoce dos doentes e, por último, a seleção do tratamento apropriado às características do indivíduo, ou seja o que evidencie ser mais eficaz e seguro, suportado em modelos de estratificação de doentes, tentando desta forma retardar a progressão da doença, assim como prevenir o desenvolvimento das complicações relacionadas com a progressão da doença.

O projeto onde esta tese se incluí, tem por objetivo produzir os pepinos-do-mar em aquacultura: Projeto Mar2020 nº MAR-02.01.01-FEAMP-0052, Newcumber – “Avanços para o cultivo sustentável de pepinos-do-mar”. Este trabalho descreve a avaliação metrológica de diferenças na composição elementar de tecidos de pepinos-do-mar de três espécies comerciais, colhidos em diferentes locais e habitats. Foram estudados quatro tecidos dos pepinos-do-mar (derme, músculo, gónadas e intestino) colhidos na costa da Arrábida, três espécies (Holothuria mammata Grube, 1840, Holothuria forskali Delle Chiaje, 1823 e Holothuria arguinensis Koehler & Vaney, 1906), dois habitats (areia e rocha) e três locais de colheita num gradiente de distância ao estuário do Sado. A avaliação e comparação dos teores de cádmio, cobre, níquel e chumbo (determinados por espetroscopia de absorção atómica) em diferentes tecidos dos pepinos-do-mar foi baseada na quantificação de incerteza utilizando a abordagem bottom-up e combinações de componentes de incerteza utilizando o método das Simulações de Monte Carlo. A comparação de médias de valores medidos de vários grupos de amostras permitiu concluir que a espécie que apresenta maior concentração de todos os metais estudados é a H. forskali. Os animais que habitam na rocha, das 3 espécies estudadas, também apresentam maiores teores de metais comparando com os animais que habitam na areia. O intestino é o tecido que apresenta maiores concentrações de metais e a derme corresponde ao tecido com menor quantidade de metais. Em termos de local de colheita, considerando o estuário do Sado como fonte potencial de contaminação, não foi observada uma tendência única nos níveis de metais bioacumulados. Embora os pepinos-do-mar colhidos no local mais próximo do estuário apresentassem concentrações mais elevadas de cobre e níquel, o chumbo foi determinado em maior quantidade no local de colheita mais afastado do estuário e no local intermédio foi encontrado o cádmio em maior quantidade.

A Perturbação de Hiperatividade e Défice de Atenção é uma das perturbações psiquiátricas com maior prevalência a nível mundial em idade pediátrica, manifestando-se por hiperatividade, impulsividade e/ou desatenção. O seu tratamento é apenas a nível sintomatológico, estando disponíveis várias opções terapêuticas não-farmacológicas e/ou farmacológicas, como psicostimulantes. O metilfenidato é um inibidor da recaptação da dopamina e da noradrenalina, indicado para o tratamento da PHDA em crianças com mais de 6 anos e em adultos. Existem poucos estudos sobre a segurança do uso do metilfenidato em crianças em idade pré-escolar, embora o fármaco seja frequentemente utilizado em regime off-label. Com o objetivo de identificar problemas de segurança relativos ao uso do metilfenidato nesta população, foi realizada uma revisão bibliográfica e uma análise das notificações de reações adversas ao metilfenidato com doentes de idade inferior a seis anos reportadas na base de dados europeia. Adicionalmente, foi realizada uma pesquisa mais simplista sem restrição de idade para melhor entendimento do universo total de reações adversas associadas ao metilfenidato. O número total de notificações foi inferior ao esperado. Não se verificaram diferenças significativas no padrão de distribuição das reações em nenhuma faixa etária, relativamente a grupos de reações da mesma tipologia, género do doente ou gravidade das reações. Observou-se a existência de dois casos de morte, sete de risco de vida, dezoito de falta de eficácia do metilfenidato e cinco casos de sobredose. As reações adversas são maioritariamente alterações do foro psiquiátrico e sistema nervoso. Destacaram-se alucinações, agressividade e perda de apetite como reações mais frequentes em idade pré-escolar. Verificou-se ainda uma frequência elevada de casos de ideação suicida, trombocitopenia, midríase, hipersecreção salivar e coma, que não é compatível com os casos reportados para as restantes idades. Foram encontrados doze casos de reações graves não descritas, que merecem ser estudadas mais aprofundadamente, como hepatite tóxica, hematoma ocular e paralisia facial. Esta análise apresenta algumas limitações, nomeadamente o número total reduzido de notificações, suas lacunas de informação, viés pela metodologia elegida, desconhecimento do universo exposto ao fármaco e dificuldade de dissociação entre reação adversa e manifestações clínicas e/ou comorbilidades.

As várias espécies pertencentes ao género Vaccinium L., nomeadamente o mirtilo têm revelado um grande potencial nas indústrias alimentares e farmacêuticas. O presente trabalho teve por objetivo estudar uma amostra de mirtilo produzido em modo biológico em Portugal relativamente ao cumprimento dos requisitos definidos nas farmacopeias Europeia e Portuguesa (Ph.Eur.10/FP 9) nas monografias de Vaccinium myrtillus L. fruto fresco recente e seco, assim como, caracterizar o seu perfil nutricional. Para o efeito utilizaram-se amostras de mirtilo fresco recente e seco (liofilizado), os métodos descritos nas Farmacopeias Europeia e Portuguesa, Ph.Eur.10/FP 9 (análise de fármacos vegetais) e métodos de análise de alimentos descritos pela Associação dos Químicos Analíticos Oficiais (AOAC). Enquanto fármaco vegetal, foi possível confirmar a conformidade do fruto fresco quanto à sua identificação química, e quanto aos seus teores de humidade e de cinzas totais, integrantes dos ensaios relativos à avaliação da sua pureza. De facto, verificou-se uma semelhança no perfil cromatográfico quando comparado ao descrito pelas Ph.Eur.10 e FP 9, bem como uma perda por secagem entre 83,8% e 84,1%, o que está dentro do intervalo de 80-90% definido nas Ph.Eur.10/FP 9 e um teor em cinzas totais entre 0,25% e 0,31%, inferiores à percentagem máxima definida pelas Ph.Eur.10 e FP 9 (0,6%). Os resultados do doseamento dos principais constituintes marcadores mostraram para esta amostra um teor em antocianinas de 0,12%, aproximadamente 1/3 do valor mínimo de 0,30% estabelecido pelas Ph.Eur.10 e FP 9. Relativamente à amostra de fruto seco, verificou-se também a sua conformidade quanto à identificação botânica macro e microscópica, tendo sido nesta, identificadas estruturas típicas tais como esclereídos e maclas de oxalato de cálcio e identificação química, apresentando esta amostra igualmente um perfil cromatográfico muito semelhante ao descrito nas Ph.Eur.10 e FP 9. Nesta amostra, verificou-se também a conformidade quanto à presença de elementos estranhos (0,038%), percentagem inferior ao máximo permitido (2%), teor em humidade (6-9%), inferior ao máximo permitido (12%) e teor em as cinzas totais (1,2-1,3%), inferior ao máximo permitido (5%). Os resultados do doseamento de constituintes marcadores mostraram para esta um teor em taninos de 0,34%, inferior ao mínimo de 1% definido pelas Ph.Eur.10 e FP 9. Em complemento, foi também determinado o teor em fenóis totais, tendo-se verificado ser este teor (60,6 mg Eq. de pirogalhol/100 g fruto seco) inferior ao valor relatado na literatura para o fruto fresco. Apesar da não conformidade das amostras em apreço quanto ao teor em constituintes marcadores verificou-se serem os valores obtidos para o fruto fresco concordantes com os descritos para fruto fresco na literatura, por outros autores. Relativamente ao perfil nutricional os resultados obtidos mostraram que o fruto fresco possui um conteúdo proteico de 0,5%, um teor de matéria gorda total de 0,36%, um teor em hidratos de carbono de 14,91% e um teor em fibras alimentares de 1,9%. As amostras de fruto fresco e seco possuem um pH ácido (2,9) e fornecem em termos energéticos 83 Kcal/100 g de fruto fresco e 334 Kcal/100 g de fruto seco, o que corresponde a 4% e 17% do valor energético diário de referência para um adulto. Em particular, a amostra de fruto seco de mirtilo analisada mostrou ser rica em açucares e em fibras alimentares, fornecendo, 100 g desta respetivamente 23,2% da dose diária de referência de açucares e 89,6% da dose mínima diária de referência em fibras alimentares. Além disso, o seu teor em vitamina C foi de 14 mg/100 g, correspondente a 17,5% da dose diária de referência para um adulto. Nesta amostra (fruto seco) foram ainda quantificados macrominerais - cálcio (51,8 mg/100 g), magnésio (40,4 mg/100 g) e fósforo (63,2 mg/100 g) e microminerais essenciais como o ferro (1,6 mg/100 g) e o zinco (10,5 μg/100 g). Os teores de chumbo (10,4 μg/100 g) e cádmio (<1 μg/100 g), desta amostra (fruto seco) mostraram ser inferiores aos teores máximos permitidos neste tipo de alimento. O estudo efetuado, sustentado pelos resultados laboratoriais obtidos, permitiu determinar a qualidade das amostras de mirtilo nacional em apreço enquanto possíveis fármacos vegetais e o seu perfil nutricional, servindo assim de base para a realização de trabalhos futuros.