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A técnica de PCR pode ser empregada para a detecção e identificação de agentes patogênicos e, tem por isso grande aplicabilidade em estudos de epidemiologia molecular. Particularmente no que se refere às infecções por Leishmania spp., a detecção do seu agente é de suma importância em animais sorologicamente positivos, no caso de inquéritos para a detecção direta em vetores e em animais de vida livre, cujo anti-soro para provas sorodiagnósticas, não são disponíveis. A PCR ainda pode oferecer o recurso de identificação molecular do agente em pesquisa, quando marcadores filogeneticamente informativos são amplificados e seqüenciados. Neste sentido, foi realizado o presente trabalho, cujo objetivo foi avaliar o desempenho analítico e diagnóstico de PCRs baseadas em primers direcionados a marcadores universais para diagnosticar Leishmania spp. localizados em dois genomas da célula parasitária, a saber, kDNA (maxicírculo e minicírculo) e DNA nuclear. Foram avaliadas PCRs baseadas em primers direcionados ao (i) DNA de kinetoplasto (kDNA) minicirculo, ao gene codificador de Citocromo B e Citocromo C Oxidase subunidade II presentes no (ii) kDNA maxicírculo, e ao gene codificador Citicromo C, presente no (iii) DNA nuclear. Pelos resultados infere-se que a PCR direcionada ao kDNA de minicírculo apresentou uma sensibilidade analítica muito superior às PCRs direcionadas ao DNA maxicirculo e nuclear. Pelo menos uma combinação dos primers de cada marcador foi capaz de detectar DNA de todas as espécies da Coleção de Leishmania do Instituto Oswaldo Cruz (CLIOC), tornando-os uma ferramenta útil para identificação de espécies de Leishmania spp. A PCR direcionada ao kDNA de minicírculo apresentou uma sensibilidade diagnóstica também muito superior às PCRs direcionadas ao DNA maxicirculo e nuclear. Amostras de baço e medula óssea produzem informações complementares para diagnóstico post-mortem de Leishmania spp. em cães soropositivos. Finalmente, as amostras de aspirado de medula óssea demonstraram ser uma alternativa confirmatória para o diagnóstico laboratorial do agente em animais soropositivos assintomáticos.

O objetivo deste trabalho foi analisar descritiva e criticamente a produção científica brasileira em ‘segurança dos alimentos’, no período de 2000 a 2012, utilizando para as buscas de trabalhos 47 descritores no português brasileiro e língua inglesa. Utilizou as bases de artigos indexados: Scielo - método Google Acadêmico, Scielo método Integrado, CAB Abstract, Scopus, Web of Science, LILACS, Food of Science and food and process e BINAGRI. Do total de trabalhos identificados no tema ‘segurança dos alimentos’ no contexto da Segurança Alimentar, houve predominância de estudos sobre alimentos, manipuladores, equipamentos/utensílios e ambiente; os tipos de estabelecimentos mais frequentemente focados nos estudos foram: restaurantes, churrascarias, lanchonetes e bares; as naturezas de estudo mais utilizadas pelos pesquisadores foram: check-list para avaliar boas práticas de higiene e manipulação, entrevistas, observações in loco e visitas técnicas; houve predomínio de trabalhos provenientes das regiões Sudeste e Sul; as entidades públicas federais e estaduais são as que mais investem nas pesquisas acadêmicas; predominaram trabalhos sobre alimentos, manipuladores e equipamentos/ utensílios e ambiente nas regiões Sudeste e Sul; Apesar da ampla variedade de Objetos de Estudo, quando comparada às Naturezas de Estudo utilizadas pelos pesquisadores, pode ser observado que estão gerando soluções, incremento e inovações para o setor de alimentação, no sentido de aprimoramento dos processos, das BPF e da redução de riscos de ocorrência de DTAs; pode ser observado um baixo número de trabalhos que apresentam intervenções práticas nos estabelecimentos alimentícios utilizados nas pesquisas.

A raiva dos bovinos permanece endêmica no Brasil e apesar dos esforços no controle, a doença ainda se espalha insidiosamente. O principal transmissor é o morcego hematófago Desmodus rotundus. O presente trabalho objetivou o desenvolvimento de um modelo preditivo qualitativo para a ocorrência da raiva de bovinos, por município, em 25 dos 27 Estados brasileiros. O risco de transmissão de raiva de morcegos hematófagos para bovinos foi estimado utilizando modelos baseados em árvores decisórias de receptividade e vulnerabilidade. Questionários abrangendo questões relacionadas à vigilância de possíveis fatores de risco, como focos em bovinos, presença de abrigos de morcegos, morcegos positivos para ao vírus da raiva e mudanças ambientais foram aplicados às unidades locais veterinárias de cada Estado. A densidade de bovinos e as características geomorfológicas foram obtidas através de bases de dados nacionais e sistemas de informação geográfica. Dos 433 municípios que apresentaram focos de raiva bovina em 2010, 178 (41.1%) foram classificados pelo modelo como de alto risco, 212 (49.0%) foram classificados como de risco moderado, 25 (5.8%) com baixo risco, enquanto o risco não pode ser determinado em 18 (4.1%) municípios. Uma curva ROC foi desenvolvida para determinar se o risco avaliado pelo modelo poderia discriminar adequadamente os municípios em relação à ocorrência de raiva nos anos seguintes. O estimador de risco para os anos de 2011 e 2012 foi classificado como moderadamente acurado. No futuro, estes modelos poderão permitir o direcionamento de esforços no controle da raiva, com a adoção de medidas de controle direcionadas para áreas de maior risco e a otimização do deslocamento das equipes veterinários de campo pelo território nacional. Adicionalmente, esforços deve ser realizados para encorajar uma vigilância contínua dos fatores de risco.

A tuberculose bovina, cujo agente etiológico é o Mycobacterium bovis, é uma zoonose de caráter crônico que representa uma das principais enfermidades em rebanhos bovinos. Devido às perdas consideráveis de bacilos viáveis nos processos de descontaminação, e também pelo consumo de várias semanas entre o isolamento primário e a identificação final da espécie, métodos moleculares funcionam como metodologia diagnóstica auxiliar à bacteriologia clássica. Estes métodos têm ampla aplicação no diagnóstico e tipificação da tuberculose bovina, no entanto, a baixa sensibilidade quando aplicados diretamente sobre homogeneizados de tecidos tem limitado sua difusão como método diagnóstico de rotina. A solução do problema, ao que tudo indica, passa por métodos de extração mais eficientes e menos vulneráveis aos fatores inibidores da amplificação. Assim, foram selecionadas 60 lesões granulomatosas de 60 bovinos condenados em abatedouro, 30 positivas ao isolamento de Mycobacterium bovis (padrão ouro positivo) e 30 negativas (padrão ouro negativo). Dessas lesões foram obtidos homogeneizados que foram submetidos a diferentes protocolos de extração de DNA, que por sua vez foram todos submetidos ao mesmo protocolo de amplificação. Os resultados mostraram que o protocolo de BOOM et al. (1990) modificado apresentou sensibilidade superior ao isolamento de M. bovis pelo método clássico.

A leptospirose, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira, é uma doença de importância médica e veterinária altamente difundida em todo mundo. Atualmente, as leptospiras são classificadas em mais de 300 sorovares agrupados em 64 espécies distintas (patogênicas e saprófitas). Estas espiroquetas produzem diversas proteases potencialmente capazes de produzir danos nos tecidos. Hoje, sabemos que proteínas presentes no sobrenadante de cultura de estirpes patogênicas são capazes de degradar diversas moléculas do hospedeiro incluindo proteínas da matriz extracelular, da cascata de coagulação e do sistema complemento, contribuindo para os processos de invasão e evasão imune. A análise dos genomas de leptospiras disponíveis nos levou à identificação de quatro termolisinas, presentes somente nas espécies patogênicas, codificadas pelos genes LIC13320, LIC13321, LIC13322 e LIC10715. Tendo em vista que enzimas da família das termolisinas são fatores cruciais na patogênese de várias doenças causadas por bactérias e representam alvos potenciais para intervenção terapêutica, este projeto teve por objetivo caracterizar funcionalmente essas metaloproteinases de Leptospira. As quatro termolisinas de L. interrogans foram obtidas na forma recombinante e realizou-se também a expressão heteróloga da termolisina codificada pela LIC13322 de L. interrogans (estirpe patogênica) em L. biflexa (estirpe saprófita). Os resultados indicam que as termolisinas de L. interrogans são capazes de degradar diversas proteínas envolvidas na ativação do sistema complemento humano, assim como algumas proteínas da matriz extracelular, e devem, portanto, auxiliar a bactéria nos processos de invasão e evasão imune. A expressão heteróloga da LIC13322 na estirpe saprófita não conferiu resistência ao soro, sugerindo que as termolisinas devem possuir um papel aditivo e certo grau de especificidade de ação.

Este estudo teve o objetivo de refinar e reaplicar o instrumento de caracterização de Cultura de Segurança de Alimentos (CSA) validado por Galvão, Ferreira e Balian (2020), fazendo ajustes de alguns itens que o compõem, visando reduzir indução de respostas e vieses indesejáveis. O instrumento original possuía 31 itens e escala Likert de 7 pontos, e teve 10 itens alterados neste estudo, sem alteração do contexto dos mesmos. O instrumento foi aplicado em 300 manipuladores de alimentos prontos para o consumo, em 13 lojas de uma rede de hipermercados. Após a aplicação do instrumento, sucederam-se análises estatísticas descritivas e comparativas dos dados com o instrumento original. A análise fatorial demonstrou inadequação do item 6 “As políticas e os procedimentos de segurança alimentar da empresa são só uma obrigação para evitar problemas com a fiscalização” ao instrumento. Observou-se que as respostas aos itens alterados foram significativamente diferentes entre o instrumento modificado e o original. Assim, concluiu-se que (1) o estudo permitiu refinar o instrumento. As alterações propostas para o refinamento do modelo validado por Galvão, Ferreira e Balian (2020) geraram resultados mais robustos; (2) o instrumento foi capaz de detectar elementos de Segurança de Alimentos, permitindo a caracterização da CSA na organização; (3) o instrumento pode ser aplicado em estabelecimentos varejistas de alimentos e é capaz de caracterizar a CSA; (4) recomenda-se a retirada do item 6 em usos futuros do instrumento.

Procurou-se avaliar o impacto das ações de esterilização animal na dinâmica populacional canina no município de São Paulo, bem como sugerir um método de controle a fim de se manter todos os distritos administrativos com uma população homogeneamente castrada. Os resultados foram comparados com as ações realizadas atualmente pelo órgão municipal de controle animal. Foram avaliadas taxas de esterilização de 10, 20, 30, 40, 50 e 60% ano-1 para a população canina total ao longo de 5, 10, 15 e 20 anos aplicando-se modelo matemático de dinâmica populacional para dois sexos, sem diferenciação etária. Demonstrou-se que com uma taxa de 60% ano-1 ocorre diminuição de 56,05% da população canina após 20 anos de programa permanente de esterilização animal. Para se obter 20% da população canina homogeneamente castrada por distrito administrativo no município após 10 anos foi avaliada a necessidade de se utilizar uma taxa mínima de esterilização de 5% ano-1. Verificou-se que a taxa de esterilização de 2,7% realizada em 2011 e 2012 pelo município é baixa para se diminuir a população canina total e que há necessidade de se melhor alocar os locais onde se realizam cirurgias no município, sendo o local de maior urgência a região sul do município, A distribuição homogênea de clínicas conveniadas à prefeitura em cada um dos distritos administrativos apresentaria melhores resultados em relação aos mutirões.

A criptosporidiose já foi descrita em várias espécies animais, incluindo várias espécies de aves. É considerada uma das principais infecções por protozoários em aves das ordens Anseriformes, Charadriformes, Columbiformes, Galliformes, Passeriformes, Psittaciformes e Struthioniformes. Três espécies de Cryptosporidium infectam aves: Cryptosporidium baileyi, Cryptosporidium galli e Cryptosporidium meleagridis, além de vários genótipos distintos geneticamente, como os genótipos I, II, III, IV e V de aves. Cryptosporidium galli e Cryptosporidium genótipo III de aves estão relacionados com infecções crônicas no proventrículo, de forma semelhante à infecção por Cryptosporidium serpentis, em serpentes. Vários métodos de diagnóstico são utilizados para detecção do parasito, mas somente aqueles com base em biologia molecular são capazes de determinar a espécie de Cryptosporidium. O projeto teve com objetivo o desenvolvimento da PCR duplex em tempo real, tendo como alvo o gene da subunidade 18S do rRNA, por meio de ensaio TaqMan, para detecção de DNA de C.galli e Cryptosporidium genótipo III de aves, e avaliar os atributos diagnósticos da PCR duplex em tempo real quando comparada à nested PCR, utilizando 1027 amostras fecais de aves das ordens Passeriformes e Psittaciformes. A PCR duplex em tempo real apresentou positividade em 580/1027 (56,47%) para C. galli, enquanto que a nested PCR resultou em positividade para Cryptosporidium spp. em 104/1027 (10,13%) amostras. Para Cryptosporidium genótipo III de aves, houve positividade em 21/1027 (2,04%). A PCR duplex em tempo real resultou em alta especificidade analítica quando foram utilizadas amostras de DNA de outras espécies e genótipos de Cryptosporidium. A única exceção foi a amplificação de DNA de C. serpentis, com a utilização de primers e sonda para detecção de Cryptosporidium genótipo III de aves, porém, com uma baixa eficiência de amplificação. Foram identificados novos hospedeiros aviários para ambas as espécies gástricas, assim como foi possível a identificação de C. baileyi e, pela primeira vez no Brasil, de Cryptosporidium genótipo V de aves. Conclui-se que a PCR duplex em tempo real desenvolvida neste estudo é um recurso que apresenta rapidez e confiabilidade para diagnóstico de criptosporidiose gástrica em aves

No presente estudo, foi inicialmente padronizada uma PCR para detecção do DNA viral da semente de Parvovírus Canino utilizado na vacina brasileira Imunovet® (VR-953TM), tendo como alvo o gene VP2. O produto de PCR foi submetido ao seqüenciamento a fim de caracterizar geneticamente a semente vacinal. A seguir, foi padronizada uma reação de PCR em tempo real (RT-PCR) para detecção de um fragmento de 119 pb do gene VP2, a qual foi empregada para avaliar a cinética de replicação da amostra vacinal do CPV em diferentes métodos e tempos de cultivo celular. A correlação entre os resultados do título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi avaliado pelo Coeficiente de Correlação de Pearson. A PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 457 DICC50/mL. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que a amostra vacinal é do tipo CPV-2. A RT-PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 1030 cópias de DNA/mL e uma boa especificidade analítica, pois não detectou o DNA de Adenovírus canino tipos 1 e 2 e Herpesvírus Equino tipo 1. A RT-PCR exibiu Coeficientes de Variação de triplicatas intra-ensaio de 0,43% e inter-ensaio de 0,29%. O Coeficiente de Correlação de Pearson entre o título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi de 0,55, considerado moderadamente positivo. Considerando que a região alvo da RT-PCR padronizada apresentou 100% de identidade com 93,52% (159/170) das amostras pesquisadas no GenBank pelo BLAST, a RT-PCR padronizada sugere ter um potencial uso no diagnóstico.

A população de cães errantes tem sido um problema na sociedade moderna e levanta discussão sobre o bem estar dos animais, a responsabilidade ambiental e assuntos relacionados saúde pública, como agressão, zoonoses e acidentes de trânsito. São Paulo é uma cidade com mais de dez milhões de habitantes e uma população de cães domiciliados em torno de 2,5 milhões de animais. Não há pesquisas a respeito da distribuição da população de cães errantes e isso dificulta o planejamento de ações de intervenção neste campo. O problema foi abordado do ponto de vista da probabilidade de abandono e capacidade de suporte ambiental. Foi criado um escore composto por treze variáveis de risco de abandono. Os dados foram agrupados por distrito administrativo e estes classificados em três categorias (tercis). Foi definida uma amostra de conveniência de seis áreas a serem visitadas, duas em cada categoria, que fossem pequenas e isoladas, passiveis de percorrer a pé. O número de animais foi estimado pelo método de pseudo-captura, utilizando fotos e anotações para identificar os animais. Simultaneamente, foi aplicado um questionário em uma amostra aleatória sistemática dos domicílios de cada área. Das seis áreas visitadas, em duas foi observada presença de cães errantes e em apenas uma delas, uma população fixa. Dos fatores associados a presença de cães errantes, destacam-se os relacionados a proximidade homem-cão e ao ambiente. Intervenções nestes fatores e incentivo à guarda responsável podem ser soluções desejáveis para redução gradativa da população de cães errantes

Neospora caninum é um protozoário parasita de grande importância em todo o mundo, sendo considerado a principal causa de abortamento bovino em algumas localidades. Enquanto a implicação deste parasita em distúrbios reprodutivos na espécie bovina seja conhecida, as informações disponíveis com a espécie bubalina são escassas. Este estudo avaliou e comparou as consequências da infecção experimental por N. caninum em búfalas e vacas, no estágio inicial da gestação, o de maior importância no que se refere à ocorrência de morte fetal. Protocolos de inseminação artificial em tempo fixo foram utilizados para maior controle da fecundação. Foram utilizados para inoculação dois isolados distintos, Nc-Bahia e Nc-1, possibilitando a comparação entre o isolado nacional e o isolado padrão. Todos os animais foram inoculados com 5 x 108 taquizoítos, pela via endovenosa, no 70º dia de gestação. Três búfalas e cinco vacas foram infectadas com o isolado Nc-Bahia, sendo detectado abortamento 42 dias pós-infecção (DPI) em somente uma das vacas inoculadas. Três búfalas e duas vacas foram inoculadas com o isolado Nc-1 e morte fetal foi detectada 35 DPI em todas as búfalas e vacas. Uma búfala e uma vaca permaneceram como controles negativos, sem infecção. A transmissão vertical foi verificada por semi-nested PCR nos animais infectados com Nc-Bahia e Nc-1. Diferentes graus de inflamação não-supurativa foram detectados em tecidos maternos, fetais e placentários. Todas as fêmeas inoculadas apresentaram resposta humoral frente à infecção. Embora a infecção estivesse mais disseminada pelo organismo das búfalas (p<0,05), a resposta humoral foi menor (p<0,05) e as lesões histológicas foram menos frequentes (p<0,05), indicando haver maior adaptação entre N. caninum e as búfalas, em comparação com os resultados obtidos nas vacas. O isolado Nc-Bahia foi menos patogênico que o Nc-1, por causar menos abortamentos (p<0,05) e menor frequência de lesões histológicas (p<0,05). A patogenicidade do agente na espécie bubalina foi confirmada, consideradas as lesões encontradas na análise histopatológica e a detecção da presença do agente por semi-nested PCR nos diversos tecidos estudados, além da positividade por imunoistoquímica em placenta e cérebro fetal bubalino. Esta é a primeira detecção de abortamento causado por N. caninum na espécie bubalina, em fêmeas infectadas experimentalmente com o protozoário, confirmando que problemas reprodutivos podem ser causados pelo N. caninum em búfalas.

Um inquérito soroepidemiológico foi conduzido para a pesquisa de anticorpos anti-Chlamydophila abortus, anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Brucella abortus em caprinos leiteiros do semiárido da Paraíba. A amostragem foi delineada para a determinação da prevalência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos. Foi realizada uma seleção aleatória de propriedades (unidades primárias) e, dentro dessas, foi escolhido, de forma aleatória, um número pré-estabelecido de fêmeas caprinas (unidades secundárias). Ao todo foi colhido sangue de 974 fêmeas caprinas provenientes de 110 propriedades. Na ocasião da colheita, foi aplicado um questionário epidemiológico por propriedade e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho de GPS. Para o diagnóstico sorológico das infecções por C. abortus e B. abortus, foram utilizados os testes de Fixação de Complemento e do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), respectivamente. Para o diagnóstico das infecções por T. gondii e N. caninum foram utilizadas reações de imunofluorescência indireta (RIFI). Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. As análises realizadas foram: determinação das prevalências de focos e de animais soropositivos e identificação de fatores de risco. As prevalências de focos de C. abortus, T. gondii, N. caninum e B. abortus foram de 50,0% [40,3% - 59,7%], 70,0% [60,5% - 78,4%], 16,4% [10,0% - 24,6%] e 0,0% [0,0% - 3,3%], respectivamente. As prevalências de animais soropositivos para C. abortus, T. gondii, N. caninum e B. abortus foram de 11,9% [8,3% - 16,8%], 18,1% [14,3% - 22,6%], 1,9% [1,0% - 3,4%] e 0,0% [0,0% - 3,8%], respectivamente. Os fatores de risco para a infecção por C. abortus foram: compartilhar reprodutores e/ou sêmen (odds ratio = 2,35) e histórico de abortamentos (odds ratio = 3,06). Presença de plantas tóxicas na propriedade (odds ratio = 5,11) e a caprinocultura não ser a principal atividade (odds ratio = 3,34) foram apontadas como fatores de risco para a ocorrência de focos de infecção por T. gondii. Para a infecção por N. caninum, os fatores de risco associados à ocorrência de focos foram: alugar pastos (odds ratio = 10,34), não usar seringas descartáveis (odds ratio = 3,78) e possuir 25 ou mais caprinos (odds ratio = 6,51). Sugere-se que esforços sejam concentrados na condução de medidas de prevenção e controle das infecções por C. abortus, T. gondii e N. caninum em caprinos leiteiros do semiárido da Paraíba, especialmente aquelas relacionadas à correção de fatores de risco, visando a redução da prevalência e da disseminação desses agentes nesses animais e a possível exposição de seres humanos.

Realizou-se um inquérito epidemiológico para estimar a prevalência da tuberculose bovina no Estado de Rondônia. O Estado foi estratificado em três circuitos produtores, e em cada um dos circuitos escolheu-se aleatoriamente as propriedades a serem visitadas, totalizando 904 propriedades e 19.640.animais amostrados. Um número pré-estabelecido de animais foram aleatoriamente escolhidos e submetidos ao teste cervical comparativo, de modo que em propriedades com até 100 fêmeas com idade superior a 24 meses, foram testadas 20 fêmeas ou menos e, em propriedades com mais de 100 fêmeas com idade superior a 24 meses, foram testadas 40 fêmeas. Foram considerados focos as propriedades com um animal reagente entre os 20 amostrados e nas propriedades com 40 fêmeas amostradas que tiveram dois animais reagentes. As prevalências de focos e animais para o Estado foram, respectivamente, 2,3% [1,5; 3,5] e 0,1% [0,1; 0,2], e para os circuitos pecuários foram: Circuito 1 (Norte-Oeste-Sul), 1,7% [0,7; 4,0] e 0,1% [0; 0,4], Circuito 2 (Nordeste), 3,0% [1,6; 5,7] e 0,2% [0,1; 0,3] e Circuito 3 (Sudeste), 2,3% [1,1; 4,7] e 0,1%[0; 0,2]. Além dos testes tuberculínicos, aplicou-se um questionário para levantamento dos fatores de risco para tuberculose bovina. As variáveis foram submetidas à analise univariada e aquelas que apresentaram p < 0,20, foram submetidas à regressão logística. A aquisição de animais sem tuberculinização foi associada a condição de foco de tuberculose (OR = 7,1 [1,6;31,1], p=0,009). As baixas prevalências tanto de focos como de animais no Estado de Rondônia, sugerem a adoção de medidas de erradicação, previstas no PNCEBT. A obrigatoriedade de execução de testes tuberculínicos para trânsito interestadual independentemente da finalidade e a regulamentação de rastreamentos de novos focos a partir de amostras coletadas em frigoríficos tornam-se imprescindíveis para detecção de focos residuais e subsequente erradicação da tuberculose bovina.

Muçarela de búfala é um queijo fresco, de massa filada, que apresenta características como coloração branca, sabor adocicado e alto valor nutricional e que tem grande aceitação pelos consumidores, dispostos a pagar preços diferenciados pela peculiaridade do produto. No entanto, o queijo está sujeito à violação de autenticidade, tanto pela sazonalidade da produção do leite da búfala quanto pelo alto preço do leite e do queijo, quando comparado aos similares oriundos da vaca, bem como à contaminação microbiana. Assim, este trabalho teve por objetivos avaliar a ocorrência de fraude na muçarela de búfala por adição de leite de vaca, e a influência da sazonalidade da produção do leite de búfala na frequência desta adulteração, bem como avaliar a presença de alguns patógenos no queijo comercializado no município de São Paulo. Amostras de muçarela de bolinha cujo rótulo identificava o uso exclusivo de leite de búfala foram submetidas à pesquisa de DNA bubalino e bovino, usando primers para detecção do gene citocromo b (cytb), e à análise microbiológica. A fraude foi detectada em 73% das amostras (77/106), não havendo influencia da sazonalidade; em duas amostras (2/106) apenas o DNA bovino foi detectado. Do ponto de vista microbiológico, todas as amostras apresentaram ausência de Listeria monocytogenes e de Salmonella spp. em 25 gramas, mas 7% (10/138) foram consideradas impróprias para o consumo humano por apresentar Coliformes termotolerantes e/ou Staphylococcus coagulase positiva acima dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Conclui- se que a fraude por adição de leite de vaca é muito frequente e não é motivada apenas pela redução sazonal da oferta do leite bubalino. Além disso os problemas microbiológicos detectados estão associados às inadequadas condições de higiene da matéria prima e/ou do processo de fabricação e/ou abuso de temperatura de armazenamento do queijo.

Rickettsia rickettsii é uma bactéria Gram-negativa, intra-celular obrigatória, causadora de uma grave riquetsiose em humanos, chamada no Brasil de Febre Maculosa Brasileira (FMB). Os carrapatos vetores de R. rickettsii para humanos, conhecidos até o momento no Brasil são Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. O presente estudo avaliou o tempo mínimo de parasitismo de A. aureolatum (ninfas não-alimentadas, machos adultos em jejum e pré-alimentados), infectadas por R. rickettsii, para que ocorra a transmissão da bactéria para o hospedeiro vertebrado. Para a produção de ninfas infectadas, foi mantida uma colônia de carrapatos em laboratório, infectados por R. rickettsii através de infestação em cobaias (Cavia porcellus) inoculadas por essa bactéria (Cepa Taiaçu). Para os experimentos com as ninfas de A. aureolatum, dividiram-se as cobaias em dez grupos de duas, sendo essas infestadas com dez ninfas cada uma. Após 2 horas da infestação (fixação da primeira ninfa), o primeiro grupo (G1) teve todas suas ninfas removidas. Após 4 horas de infestação, um segundo grupo (G2) de cobaias teve todas suas ninfas removidas de forma semelhante. Este procedimento foi repetido com os demais grupos, cada um em um determinado número de horas após a infestação: após 6 (G3), 8 (G4), 12 (G5), 18 (G6), 24 (G7), 36 (G8) e 48 (G9) horas. Para um último grupo (G10), as ninfas foram deixadas em parasitismo até seu desprendimento natural (cerca de 10 dias). Os experimentos realizados com carrapatos machos adultos em jejum seguiram os mesmos períodos utilizados para as ninfas, para fixação e retirada de carrapatos, assim como o número de cobaias. Nos experimentos com carrapatos machos adultos previamente alimentados - 48 horas em coelhos (Oryctolagus cuniculus), utilizaram-se os períodos de fixação e retirada de carrapatos idênticos aos experimentos anteriores, e além desses foi necessária a utilização de períodos menores de fixação de A. aureolatum, variando entre um minuto e uma hora. As cobaias foram avaliadas clinicamente todos os dias, e sacrificadas 21 dias após a infestação. Amostras de sangue foram colhidas e testadas para presença de anticorpos anti-R. rickettsii. Carrapatos retirados das cobaias de todos os grupos foram testados por PCR, a fim de se certificar que estavam infectados por R. rickettsii. De acordo com os resultados obtidos, ninfas não alimentadas de carrapatos A. aureolatum, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 12 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; carrapatos adultos não alimentados, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; e carrapatos adultos infectados por R. rickettsii e pré-alimentados em coelhos por 48 horas, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 minutos, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado, utilizando-se cobaias como modelo experimental.

Apesar de o Brasil ser um país de destaque na produção e comercialização de produtos agropecuários, o setor produtivo de pescado ainda está em desenvolvimento no país. Os estudos sobre os sistemas agroalimentares são importantes ferramentas que permitem conhecer as cadeias produtivas, identificar entraves, formular estratégias e políticas públicas e privadas, visando o desenvolvimento do setor. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo caracterizar o sistema agroindustrial do pescado no Brasil, identificar seus principais entraves e analisar a atuação governamental perante tais problemas. Para tal, foram consultados órgãos governamentais, associações, bancos de dados, publicações e pessoas relacionadas ao segmento. O sistema agroindustrial, dividido em pesca, aquicultura, indústria e comércio, foi caracterizado quanto ao volume de produção, valores financeiros e número de estabelecimentos e trabalhadores. Após a identificação de entraves ao desenvolvimento do setor, como o estado de sobrepesca dos principais recursos pesqueiros, os diversos problemas enfrentados pela aquicultura, a baixa qualidade higiênico-sanitária dos produtos comercializados, a escassez de informações setoriais publicadas e o baixo consumo de pescado no Brasil, a atuação dos serviços oficiais foi analisada e discutida. Foram identificados como problemas de gestão governamental a sobreposição de funções dos diversos órgãos administradores, a falta de coordenação entre esses órgãos, a ausência de fiscalização do cumprimento da legislação, a carência de políticas públicas claras, a dificuldade na obtenção de crédito para o investimento, a escassez de informações setoriais publicadas, entre outros. Algumas sugestões para o ordenamento do segmento do pescado foram feitas, como a reorganização institucional e definição de governança, a atualização da legislação, a contratação e treinamento de pessoas para a fiscalização, a definição de políticas claras para a aquicultura, o incentivo a pesquisas por informações setoriais e divulgação de dados confiáveis e atualizados. Apesar do desenvolvimento setorial após a criação da Secretaria Especial de Pesca e Aquicultura, o setor ainda enfrenta muitos problemas que necessitam solução a fim de desenvolver esse sistema produtivo e elevar o Brasil a um nível de maior importância na produção mundial de pescado.

Cães e seres humanos compartilham os mesmos caminhos por pelo menos 14-100 mil anos e, atualmente, o cão doméstico (Canis lupus familiaris) é a espécie de carnívoro mais abundante e difundida do planeta, está presente em todos os continentes, exceto Antártida. Como conseqüência, cães representam um desafio global tanto para conservação da biodiversidade como para saúde pública, e esta problemática é ainda mais grave entre cães mantidos soltos e cães ferais em áreas rurais. No entanto, apesar da abrangência e da gravidade do problema, tanto a intensidade dos impactos causados por cães domésticos, como a eficácia de estratégias de manejo, ainda são incertas. Isso ocorre, pois estudos raramente quantificam aspectos básicos da ecologia dos cães. Aspectos que são cruciais tanto para compreensão dos processos de invasão biológica, como para elaboração de modelos epidemiológicos de dispersão de doenças. É nesta lacuna de conhecimento que buscamos nos aprofundar na presente tese de doutorado. Utilizando como modelo a população de cães de um agroecossistema de Cerrado no Brasil Central, realizamos um estudo longitudinal buscando elucidar como é a estrutura e a dinâmica populacional dos cães; de que forma eles utilizam o espaço e que fatores determinam seus caminhos; e como a população e o movimento dos cães podem ser modulados pelas pessoas. Com os estudos aqui apresentados, trouxemos avanços metodológicos, e reflexões de manejo, que contribuirão de forma substancial para aprofundar nossa compreensão de uma problemática comum a todas as partes do planeta. Vimos que, mesmo em uma população de tamanho estável, a estrutura populacional pode ser extremamente dinâmica, e este fluxo de indivíduos é regido essencialmente pelas pessoas. Observamos também que os cães têm um uso considerável da paisagem, ainda que eles permaneçam a maior parte do tempo ao redor de suas casas. Além disso, constatamos que os padrões de uso do espaço variam substancialmente a depender das características do indivíduo, do manejo e do papel social do cão na comunidade. Por fim, propomos estratégias de manejo que possam simultaneamente mitigar os impactos causados por cães e aprimorar o desempenho de suas funções na comunidade.

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório amplamente disseminado pelo mundo. Estima-se que um terço da população mundial esteja cronicamente infectada por esse coccídio. No Brasil, essa prevalência chega a ser estimada em 70% em algumas regiões do país. Apesar de apresentar uma alta prevalência, a primo-infecção por T. gondii acaba passando despercebida em pacientes imunocompetentes, com quadros subclínicos ou com sintomas semelhantes aos de uma gripe. Em pacientes imunocomprometidos e em mulheres grávidas, infecções recentes merecem grande atenção, pois a evolução clínica da doença é mais severa, podendo levar ao desenvolvimento de sequelas irreversíveis ou até à morte. Uma das manifestações mais comuns da infecção sistêmica por T. gondii é a forma ocular, acometendo principalmente a retina e a coroide. O isolamento de T. gondii a partir de amostras de seres humanos é imprescindível para verificar se existe ou não uma correlação entre a expressão fenotípica da doença e a linhagem do parasita. No Brasil, ainda há poucos relatos de isolamentos obtidos a partir de amostras humanas. O objetivo do presente estudo foi determinar a epidemiologia da toxoplasmose ocular em Bancos de Olhos das cidades de Ribeirão Preto (BORP) e São José do Rio Preto (BOSJRP), no interior do Estado de São Paulo. Foram recebidos um total de 395 globos oculares correspondentes a 201 doadores. Destes globos oculares, 289 foram captados pelo BORP, enquanto 106 foram captados pelo BOSJRP. Dentre os doadores do BORP, 42/148 (28,3%) possuíam ambos os tecidos (olhos e sangue) disponíveis para pesquisa e 5,4% (8/148) dos doadores possuíam lesões sugestivas para toxoplasmose ocular (TO). Três deles apresentavam lesões macroscópicas bilaterais, isto é, em ambos os olhos, e cinco possuíam lesões unilaterais. Dentre os 53 doadores do BOSJRP, 86,8% (46/53) possuíam ambos os tecidos disponíveis para pesquisa e nenhuma amostra de tecido ocular apresentava lesões sugestivas para TO. Do total de 88 soros analisados, 70,5% (62/88) apresentavam apenas anticorpos IgG anti-T. gondii, 6,8% (6/88) foram positivos para ambos os anticorpos (IgG e IgM) anti-T. gondii e 22,7% (20/88) foram considerados soronegativos. Todos os globos oculares com lesão potencialmente causada por T. gondii foram submetidos ao bioensaio em camundongos para tentativa de isolamento do parasita. Ao término do período de bioensaio, nenhum camundongo apresentou anticorpos anti-T. gondii no Teste de Aglutinação Modificado (MAT) ou cistos nos tecidos analisados durante a necropsia. Na cPCR, a amplificação dos fragmentos de interesse do gene B1 e da região repetitiva do genoma REP-529 foi observada em uma amostra que não apresentava lesão macroscópica aparente; esta amostra foi designada como PS-TgOTBrSP1. Além dessa amostra, outras oito apresentaram amplificação para os marcadores selecionados na PCR em tempo real, portanto, 2,3% (9/395) dos globos oculares foram diagnosticados como positivos para T. gondii. As demais amostras, incluindo todas as onze amostras com lesão macroscópica sugestiva para TO, foram diagnosticadas como negativas. A amostra PS-TgOTBrSP1 foi identificada como não-arquétipa por meio da análise de 15 marcadores microssatélites e um genótipo incompleto, não-arquétipo, foi obtido por meio de PCR-RFLP. O genótipo MS de T. gondii da amostra PS-TgOTBrSP1 é um genótipo único, o que contribui para corroborar a baixa circulação de linhagens clássicas clonais e a ampla diversidade genética de T. gondii no Brasil. E, embora só tenha sido possível examinar um número reduzido de amostras, o presente estudo também contribui para validar dados encontrados em outros estudos que apontam que 50-80% da população adulta tem anticorpos para T. gondii no Brasil.

A legislação permite o uso de leite cru para fabricar queijos com maturação superior a 60 dias em temperatura acima de 5°C, mas falta comprovação científica sólida sobre a eficácia desse processo quanto à inativação de importantes patógenos que podem estar presentes no leite, como o Mycobacterium bovis; além disso, não há metodologia oficial para pesquisa deste agente em alimentos. Desta forma, este trabalho se propôs a estabelecer um protocolo para estudar a curva de inativação do Mycobacterium bovis durante a cura do queijo. Foram fabricadas três partidas de queijo do tipo parmesão com leite pasteurizado e contaminado com uma cepa de Mycobacterium bovis isolada de bovinos abatidos no estado de São Paulo. O queijo foi curado a 18°C e analisado semanalmente até o 63ºdia. As amostras foram submetidas à diluição decimal seriada, semeadas em duplicata em meio Stonebrink-Leslie, acrescido de antibióticos, e incubadas a 37°C por 45 dias. Os resultados de um queijo foram perdidos por contaminação por fungos. O valor D18°C médio, ponderado pelas incertezas, foi de 37,5 dias ± 5,3 dias. Esse resultado indica a necessidade de outros estudos para ampliar o número de queijos estudados e obter, portanto, um resultado mais representativo do efeito da cura sobre o decaimento da população de M. bovis. Há também necessidade de melhorar o poder inibitório do meio de cultura para evitar perdas devido ao crescimento de fungos.

Os fatores de virulência presentes em Escherichia coli (E. coli) patogênicas vêm sendo estudados em diversas espécies animais devido à importância de algumas cepas. Estas podem ser classificadas em sorotipos ou mais recentemente através de patotipos, de acordo com algumas técnicas de biologia molecular. Os patotipos mais conhecidos atualmente incluem as ETEC, STEC, EPEC, EIEC, UPEC e APEC. Vários patotipos encontrados causando doenças em animais têm também afetado gravemente seres humanos. Diversas espécies de aves também revelaram possuir patotipos de E. coli capazes de causar infecções zoonóticas. Além do aspecto zoonótico, infecções por bactérias Gram-negativas em aves silvestres têm especial importância, pois o Taxon Psittacidae contém muitas das espécies que mais estão ameaçadas de extinção, e sua manutenção e reprodução em cativeiro é comprometida por infecções bacterianas constantes, em especial por E. coli. Nesse estudo 174 amostras de swabs cloacais de aves sintomáticas e assintomáticas e de casos de necropsias foram testadas através da técnica da PCR para a detecção de fatores de virulência e a classificação em grupos filogenéticos. Detectaram-se 93 amostras (53.45%) positivas para associações de fatores de virulência, em especial para os patotipos EPEC, APEC e UPEC e a classificação de grande parte das amostras de necropsias no grupo filogenético A. O gene iss foi encontrado com maior freqüência, sendo esta de 51.7% (n=30) nas aves sintomáticas e 23.2% (n=23) naquelas assintomáticas. Os resultados demonstraram serem de interesse não apenas com relação ao potencial zoonótico dessas aves em cativeiro, mas também para programas de conservação que visem à liberação de aves no meio selvagem.