RCAAP Repository
Clinical manifestations and impact of systemic vasculitides
As vasculites são um grupo de doenças multissistémicas, raras e heterogéneas, que provocam inflamação e lesão nos vasos sanguíneos. De forma a caracterizar as manifestações clínicas mais comuns e a avaliar o impacto das vasculites na capacidade laboral e estado vital, foi realizada uma análise transversal a doentes diagnosticados com vasculites no serviço de Reumatologia do Hospital Garcia de Orta (de 1994 a 2021), incluídos no registo Reuma.pt. Um total de 86 doentes foi avaliado. A vasculite mais comum foi a doença de Behçet (37.2%), seguida pela arterite de células gigantes (ACG) (23.3%). As vasculites associadas a ANCA (VAA) e outros subtipos de vasculites foram diagnosticados em 24.4% e 12.8%, respetivamente. Os sintomas iniciais foram frequentemente não específicos, como fadiga, perda ponderal, febre, artralgias, mialgias, úlceras orais ou genitais, e cefaleias, reforçando a importância do reconhecimento das vasculites. A frequência das manifestações cumulativas refletiu as vasculites mais comuns nesta coorte. A maioria dos doentes (72.1%) foi tratada com corticoides, embora 66.3% e 29.1% tiveram imunomoduladores e biológicos como terapêutica a dado ponto, respetivamente. Este facto provavelmente indica uma mudança de paradigma, perspetivando terapêuticas mais dirigidas no futuro. Verificou-se que as vasculites tiveram um impacto significativo no estado laboral e vida dos doentes. Aquando do diagnóstico de vasculite, 52 doentes estavam a trabalhar a tempointeiro, número este que desceu para 36 doentes na última avaliação. Durante um follow-up mediano de 3.0 anos, 13 doentes reformaram-se e 5 outros encontravam-se de baixa médica. Tal facto pode ser atribuído não só a uma idade superior, como também à incapacidade cumulativa mediada pela doença em si e às complicações do tratamento. Treze doentes faleceram, 6 dos quais com VAA, 4 com vasculites crioglobulinémicas e 3 com ACG. Foi possível apurar as causas de morte em 10 destes doentes, sendo as infeções a mais comum (N = 8), seguindo-se eventos cardiovasculares (N = 2). Nesta coorte, a mortalidade relacionada com a vasculite em causa foi ultrapassada pela mortalidade associada a complicações infecciosas, provavelmente condicionadas pelo tratamento imunossupressor. Os doentes falecidos eram mais velhos e tinham o início de doença e o diagnóstico estabelecido numa idade superior. A idade estava independentemente associada com morte (OR = 1.209 por ano; 95% IC = 1.056-1.383; p-value = 0.006). Não se verificaram diferenças relativamente ao sexo, etnia, hábitos tabágicos, hábitos alcoólicos, e duração de doença, entre doentes vivos e falecidos. Embora o controlo da doença e a prevenção das complicações relacionadas com as vasculites tenham vindo a melhorar, o rácio risco-benefício das terapêuticas convencionais requer um processo de decisão personalizado. Estudos futuros devem procurar identificar marcadores clínicos e/ou biológicos que diferenciem doentes com alto risco de recidiva, necessitando de terapêutica de manutenção, daqueles que têm um risco de recidiva baixo, nos quais o tratamento possa ser descontinuado. Em jeito de conclusão, estes dados confirmaram a multiplicidade das manifestações clínicas, as distintas abordagens terapêuticas dos doentes com vasculites e a elevada taxa de letalidade. Demonstrou-se igualmente o impacto das vasculites na vida dos doentes em termos de diminuição da capacidade laboral.
2025-10-28T12:27:41Z
Fernandes, Carlos André Justino
Study of CFTR delivery and stabilization at the plasma membrane
A fibrose quística (FQ) é a principal doença genética, autossómica recessiva, a afectar a população Caucasiana, embora se estenda igualmente a outras etnias. Apesar de caracterizada no pâncreas pela primeira vez em 1938, a FQ foi sucessivamente associada a defeitos em tecidos epiteliais exócrinos de outros órgãos, nomeadamente dos pulmões, onde se registam os efeitos mais nefastos, os quais incluem acumulação de muco espesso e sensibilidade aumentada a infecções, que normalmente originam complicações conducentes à morte prematura do doente. Só em 1989 foi possível clonar o gene responsável pela doença, então designado cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR), o qual codifica um canal selectivo para cloreto (Cl−), também permeável à passagem de hidrogenocarbonato (HCO3 −), expresso na membrana apical dos epitélios que revestem os órgãos afectados. A glicoproteína CFTR é constituída por 1480 resíduos de aminoácidos, de cujo folding resultam três domínios citoplasmáticos – um regulatório central (RD) e dois de ligação a nucleótidos (NBD1 e NBD2) – e dois domínios transmembranares (MSD1 e MSD2). A sua actividade é controlada por (i) ligação de ATP aos domínios NBD, que dimerizam e promovem alterações conformacionais que conduzem à abertura e fecho do canal, e (ii) por fosforilação do seu domínio RD pela PKA, que aumenta ou diminui a probabilidade de abertura. Adicionalmente, a CFTR regula ela própria a expressão e actividade de outras proteínas, de que são exemplo os canais de sódio epiteliais (ENaC), sujeitando-os a alterações de estabilidade e probabilidade de abertura. Estas funções conferem à CFTR um estatuto pleiotrópico. Actualmente sabe-se que diversas mutações, classificadas de I a VI com base no fenótipo celular resultante, estão na origem do desenvolvimento da FQ. Destas, a mais comum, afectando cerca de 90% dos genomas em pelo menos um dos alelos, pertence à classe II e corresponde à delecção de uma fenilalanina na posição 508 da proteína (ΔF508), contida no NBD1. A proteína mutada, CFTR-ΔF508, apresenta defeitos ao nível do folding no retículo endoplasmático (RE), onde é rapidamente degradada, pelo que o seu tráfego vesicular para a membrana plasmática é muito reduzido. Para além disso, a pequena população de canais mutados que escapam ao controlo no RE, sofre de uma instabilidade acrescida na membrana. De facto, o domínio C-terminal da CFTR é capaz de interagir com diversas proteínas contendo pelo menos um domínio PDZ, como é o caso das proteínas NHE-RF1 e CAL, que asseguram a regulação da sua expressão transmembranar. Notavelmente, o adaptador NHERF1 estabelece uma ponte entre o canal e o citoesqueleto de actina filamentosa (F), mediada por proteínas da família Ezrin/Radixin/Moesin (ERM), tendo sido já descrita uma acção estabilizadora do NHE-RF1 sobre a CFTR. Para além destas interacções, também a ubiquitinação do canal na sua região C-terminal e a acção de desubiquitinases como a USP10, que reverte o processo, definem um ponto de controlo da estabilidade da CFTR ao nível da membrana plasmática. O canal é endocitado por um processo dependente de clatrina. No entanto, quando endocitado, é rapidamente reciclado para a membrana plasmática (mais de 75%), o que justifica a sua elevada expressão transmembranar, apesar da baixa taxa de transcrição do seu gene. De forma a possibilitar um tráfego vesicular eficiente, a célula faz uso de uma complexa rede de F-actina, à qual proteínas motoras, como as miosinas, se podem ligar, promovendo o transporte das vesículas. Para além disso, diversas Rab GTPases medeiam a ligação das miosinas às vesículas e são responsáveis pelo seu correcto endereçamento. Neste contexto, já se observou que a CFTR é internalizada em vesículas contendo Rab5a/miosina Va, e reciclada em vesículas com Rab11a/miosina VI. Contudo, nenhuma destas vias parece estar alterada em células com expressão de CFTR-ΔF508 pelo que, para além do misfolding no RE, deverá ser ao nível da própria membrana plasmática, e não do transporte a partir do Golgi, que é induzida uma destabilização adicional do canal mutado. Tanto as proteínas ERM como o adaptador NHE-RF1, referidos acima, encontram-se normalmente numa conformação inactiva no citoplasma. As primeiras, quando activadas, ligam directa ou indirectamente (via NHE-RF1) proteínas transmembranares ao citoesqueleto de actina. Esta activação depende de dois factores: a ligação do seu N-terminus ao fosfatidilinositol 4,5- bisfosfato (PIP2) e a fosforilação de resíduos críticos de treonina na região Cterminal. A actividade de um grupo de pequenas GTPases da subfamília Rho, nomeadamente as GTPases canónicas Rac1, Cdc42 e RhoA, tem sido implicada tanto no metabolismo do PIP2 como na fosforilação das proteínas ERM, pelo que se pensa que a sua acção esteja implicada na activação destas proteínas. Para além disso, estas Rho GTPases também promovem alterações no citoesqueleto que podem condicionar o desempenho do processo de transporte sub-membranar de vesículas, ou seja, a endocitose e a reciclagem de proteínas como a CFTR. Por seu turno, o NHE-RF1 é activado por fosforilação, por exemplo mediada pela PKC, ou por ligação de proteínas ERM ao seu C-terminus, de forma que as Rho GTPases acabam, indirectamente, por também poderem ter um papel na activação do adaptador ao activarem as proteínas ERM. O presente estudo foi conduzido em duas fases, separadas pela utilização de dois modelos celulares: uma linha estavelmente transfectada com o gene CFTR normal (BHK-wt) e uma outra com o gene mutante CFTR-ΔF508 (BHK- ΔF). Começámos por realizar um ensaio de precipitação, com partículas de agarose revestidas com streptavidina, de CFTR marcada com biotina na sua porção extracelular. Para tal trataram-se células BHK-wt com Sulfo-NHS-Ssbiotina a 0 °C (para bloquear os processos de endocitose e exocitose), com vista a averiguar se a expressão transiente de mutantes constitutivamente activos (CA) ou dominante negativos (DN) das três Rho GTPases canónicas induziam alterações na expressão da CFTR na membrana plasmática. Descobrimos que, nestas células, tanto o Rac1-CA como o RhoA-CA aumentavam os níveis de CFTR à superfície das células, e que os seus mutantes DN os diminuíam significativamente. A observação, por imunofluorescência (IF), de células transfectadas nas mesmas condições, não só corroborou estes resultados como mostrou que nas células transfectadas com RhoA-DN havia uma acumulação de CFTR no Golgi, sugerindo uma acção do RhoA no tráfego do canal deste compartimento para a membrana plasmática. Estes resultados indicavam que Rac1 e RhoA poderiam exercer o seu efeito através de mecanismos diferentes pelo que, a fim de averiguar se estes incluíam alterações no processo de endocitose e/ou reciclagem da CFTR, utilizámos um ensaio de biotinilação modificado no qual células transfectadas com mutantes activos de RhoA ou Rac1, depois de biotiniladas a 0 °C, foram brevemente repostas a 37 °C por diferentes períodos de tempo, de modo a reactivar o tráfego vesicular, permitindo-nos assim seguir a cinética de internalização da CFTR. Observámos que enquanto o Rac1-CA provocava um marcado retardamento da endocitose da CFTR (2.0 ± 0.74% CFTR internalizada por minuto, contra 12.0 ± 1.80% para o controlo, transfectado com vector vazio), o RhoA-CA não o fazia (9.0 ± 1.8%, p > 0.05), estimulando, pelo contrário, a reciclagem do canal para a membrana. Estando já descrita a importância do adaptador NHE-RF1 na ancoragem da CFTR na superfície celular, realizámos um ensaio de co-imunoprecipitação (co-IP) dos complexos NHE-RF1/CFTR em células transfectadas com ambas as formas CA e DN das Rho GTPases Rac1 e RhoA e constatámos que, enquanto o Rac1-CA induzia, de facto, um incremento notável na formação dos complexos, o RhoA-CA não apresentava efeitos significativos. Por outro lado, se a redução da actividade do Rac1 produz apenas uma redução parcial na associação NHE-RF1/CFTR, já a diminuição da actividade do RhoA reduz notoriamente esta associação, o que é uma vez mais concordante com um papel desta GTPase no tráfego da CFTR do Golgi para a membrana plasmática, situação na qual ocorre a ligação inicial de NHE-RF1 à CFTR. Analisámos também a actividade global da população de canais na membrana através de um ensaio de efluxo de iodeto (I−). Neste, células BHK-wt transfectadas como na co-IP, previamente incubadas numa solução de NaI, foram estimuladas com Forskolina e IBMX (dois agentes que aumentam os níveis de cAMP na célula, activando a PKA, que fosforila e activa a CFTR) a expelir o I−, detectado com um eléctrodo específico. Observámos que tanto a activação do Rac1 como do RhoA aumentavam a actividade da CFTR, de acordo com o incremento na expressão membranar do canal observado logo na fase inicial do presente estudo. Pelo contrário, o uso dos mutantes Rac1-DN e RhoA-DN diminuiu significativamente a actividade da CFTR, também concordante com os dados dos ensaios de precipitação e IF. Na segunda fase, usando o modelo celular de FQ, com excepção dos ensaios da cinética de internalização e da co-IP, por limitações técnicas devidas à reduzida quantidade de CFTR na membrana plasmática, os restantes ensaios referidos acima foram conduzidos em células BHK-ΔF transfectadas com os mutantes CA de Rac1 e RhoA. Observámos que apenas a activação do Rac1 conseguia um aumento tanto da expressão de CFTR na membrana plasmática (precipitação com streptavidina) como da sua actividade global (ensaio de efluxo de I−). Estes incrementos foram confirmados por IF, observando-se claramente uma pequena mas notória acumulação de CFTR na membrana plasmática. O mutante RhoA-CA, por outro lado, não induziu quaisquer alterações relativamente ao controlo em nenhum dos ensaios. O presente trabalho contribuiu para a compreensão dos mecanismos de acção de duas Rho GTPases na expressão e actividade da CFTR ao nível da membrana plasmática de células epiteliais não polarizadas. Com os dados obtidos, articulados com outros da literatura, propomos um modelo de acção para cada GTPase. No que respeita ao RhoA, a sua activação conduzirá à formação de fibras de actomiosina, propícias ao desenrolar dos movimentos de transporte vesicular da CFTR de (endocitose) e para (reciclagem) a membrana plasmática. Estas fibras, constituindo filamentos complexos, em tensão, não formam redes de F-actina que permitam a formação estável de complexos CFTR/NHE-RF1/ERM por ancoragem ao citoesqueleto, não contribuindo, portanto, para a estabilização do canal na membrana mas sim, como vimos, para o aumento da sua taxa de reciclagem. No caso do Rac1, quando activo induz a formação de redes de F-actina na região cortical (mais periférica) das células, permitindo uma maior associação da CFTR com o adaptador NHE-RF1, como observado, formando os complexos referidos acima e justificando, em parte, uma endocitose menos eficiente e, desta forma, retardada. Para além disso, o Rac1 parece ter um papel preponderante no ajustamento dos níveis de PIP2 na célula, contribuindo directamente para a activação das proteínas ERM e, indirectamente, para a do adaptador NHE-RF1. Infelizmente, o simples aumento da actividade do Rac1 não serve o propósito de terapia para a FQ, uma vez que está descrita a sobre-expressão da GTPase em tumores pulmonares. Devem, portanto, ser realizados no futuro ensaios com efectores a juzante do Rac1 a fim de estabelecer se poderão ser usados como alvos terapêuticos em doentes com FQ.
2025-10-28T12:28:59Z
Moraes, Bruno José Rother Rocha de
POPI.pt : adaptation of a pediatric prescribing tool to the portuguese setting
O uso inapropriado de medicamentos é um problema comum na prática clínica, sendo as crianças uma das populações que se encontram mais vulneráveis a este fenómeno, pelo que beneficiariam de medidas que visassem a sua redução.A ferramenta POPI foi previamente desenvolvida com o objetivo de avaliar a prescrição racional na população pediátrica. É composta por 105 proposições que incluem prescrições inapropriadas e omitidas em pediatria. Dado o potencial desta ferramenta para a diminuição da prescrição inapropriada, este trabalho tem como objetivo dar um primeiro passo na adaptação ao contexto português, para que possa ser utilizada na prática clínica nacional. Para o conseguir, procedeu-se a uma comparação das proposições do POPI com a informação presente em fontes nacionais relevantes. As fontes utilizadas neste trabalho foram as seguintes: Normas de orientação clínica da Direção Geral da Saúde, Protocolos de Urgência do HSM/Porto, Recomendações da Sociedade Portuguesa de Pediatria e Resumo das Características do Medicamento. Posteriormente, as proposições foram classificadas em quatro categorias diferentes, consoante o seu grau de concordância com a informação presente nestes documentos (ie, de acordo, em desacordo, com necessidade de alterações, sem informação). Tendo por base esta classificação, considerou-se a relevância e prevalência atribuída a cada proposição no contexto clínico português, para decidir quais seriam incluídas na nova ferramenta. Da comparação efetuada: 37 proposições estavam de acordo, 5 estavam em desacordo e 21 necessitavam de algumas alterações para corresponder às normas de orientação nacionais. Para as restantes 42 não foi encontrada qualquer informação nas fontes usadas. Na nova proposta, foram excluídas 39 proposições, sendo 18 alteradas e 48 mantidas. O POPI.pt é a primeira versão no processo de adaptação da ferramenta POPI e abrange 66 critérios, 51 prescrições inadequadas e 15 omissões. Esta adaptação possibilita a aplicação desta nova ferramenta ao contexto clínico português, tendo como objetivo diminuir a prescrição inapropriada
2025-10-28T12:15:53Z
Sousa, Carlota Cabral de Andrade Ribeiro de
Integração de requisitos GMP's e ISO 17025 para qualificação de equipamentos e validação de sistemas na indústria farmacêutica pelo ISQ
O LabMetro Solutions é uma entidade que pertence ao Instituto de Soldadura e Qualidade (ISQ), que presta serviços na área de Qualidade e Validação de Equipamentos, Instalações, Utilidades e Sistemas Computadorizados, para a Indústria Farmacêutica e de Dispositivos Médicos. Neste momento, o LabMetro Solutions necessita de atualizar os seus protocolos e procedimentos de modo a cumprir todos os requisitos legais aplicados a estas indústrias (nomeadamente a norma EN ISO/IEC 17025 e o guia da Eudralex Volume 4), como também os requisitos estabelecidos pelo ISQ. A norma EN ISO/IEC 17025:2017 incorpora os requisitos gerais de competência para laboratórios de ensaio e calibração de modo a proporcionar uma maior confiança nos seus resultados e facilitar a cooperação entre vários laboratórios. Os requisitos que esta norma trata são os requisitos de estrutura, de recursos e de processos. A Eudralex Volume 4 refere as boas práticas de fabrico de medicamentos para o uso humano e veterinário. Este guia fornece os requisitos necessários para que um fabricante consiga produzir os seus medicamentos com a maior qualidade possível. Alguns tópicos que este guia aborda são gestão de equipamentos, documentação, controlo de qualidade, entre outros. Assim, esta tese tem como objetivo a análise das normas aplicáveis, o desenvolvimento dos novos protocolos e procedimentos para o LabMetro Solutions e a sua implementação.
2025-10-28T12:27:41Z
Santos, Catarina Dumas Brousse Sampaio
O Papel do Poder Judiciário como Ator na Efetivação do Direito ao Clima Estável
Este artigo tem como objetivo compreender o papel do Poder Judiciário como ator na efetivação do direito ao clima estável, sob a ótica do fenômeno do Ativismo Judicial e da Judicialização da Política, partindo do pressuposto de que o direito ao clima estável deve ser garantido a todos e é dever do Estado garanti-lo. Para tanto, trouxemos reflexões da literatura sobre os dois fenômenos, demonstrando a distinção relevante que há entre eles. A partir dessa diferenciação e da análise de casos concretos, verificamos se há na litigância climática, os elementos que podem caracterizar o Ativismo Judicial, tendo em vista suas consequências prejudiciais ao equilíbrio dos poderes. Adotando raciocínio indutivo, a pesquisa qualitativa engloba teoria e prática e reúne as técnicas de análise documental, revisão bibliográfica e estudo de caso. Assim, avaliando a atuação do Poder Judiciário e discussões acerca dessa legitimidade, expusemos parâmetros que devem ser utilizados pelo operador jurídico a fim de alcançar a efetividade do direito ao clima estável e garantir a manutenção da democracia e da separação dos poderes, levando em conta as capacidades em virtude da sua estrutura orgânica, meios e procedimentos de atuação e preparação técnica. Como resultado, defendemos o argumento de que os avanços ligados às questões de ordem climática devem ocorrer nas arenas políticas do Executivo e do Legislativo; mas, diante de omissões inconstitucionais ou ações deficitárias, o Judiciário deve intervir ao ser provocado. Destacamos que essa intervenção deve ser pautada pela proporcionalidade, tornando-se urgente a fixação de parâmetros de atuação.
2025-10-28T12:26:34Z
Santos, Andre C. Carvalho, Martina Batista de
Gender (trans)formations in Europe and beyond: Trans lives and politics from a transnational perspective
Focusing on trans and gender-diverse people in five European countries (Portugal, France, the United Kingdom, the Netherlands and Sweden), the Transrights research addressed one of the most challenging transformations of the institutional order of gender that thus far still reproduces the normative opposition between male and female. Rather than proposing a descriptive monograph, our angle of analysis emphasized the workings of gender through the ‘voices’ of trans people (within and beyond Europe) and their complex forms of self-identification vis-àvis the institutional apparatus (whether legal, medical, political or even socialscientific). Drawing on an extensive empirical research that combined document analysis of legal and medical developments, multi-sited ethnographic fieldwork and in-depth interviews, we investigated the doings of gender and gender politics. Three major findings are highlighted and summarized through a comparative strategy: trans/gender identifications, creative agency and embodiments; institutional and legal recognition vis-à-vis the medical apparatus and the “marketization” of trans-related healthcare; and discrimination, oppression and violence.
2025-10-28T12:16:07Z
Aboim, Sofia Vasconcelos, Pedro
Um amor com fronteiras : intimidade, sexualidade e satisfação em casais fisicamente separados devido à pandemia covid-19
A intimidade e a sexualidade correspondem a fatores fundamentais para o desenvolvimento da satisfação conjugal, essencial para a qualidade de vida e bem-estar dos indivíduos que vivem em casal. Com o surgimento da pandemia Covid-19, países de todo o mundo adotaram medidas para proteger a sua população. Consequentemente, devido a restrições impostas à circulação, casais que viviam separados viram-se obrigados a adiar reencontros, tanto a nível nacional como internacional. Deste modo, o presente estudo teve como objetivo compreender de que forma estes casais percecionaram a influência da pandemia Covid-19 na intimidade, sexualidade e satisfação conjugal. A presente pesquisa qualitativa apresenta um carácter exploratório, tendo recorrido a entrevistas semiestruturadas. Foram realizadas doze entrevistas no total, dez diádicas e duas individuais (N = 22) a membros de casais binacionais e nacionais. As entrevistas foram exploradas através de uma análise temática com recurso ao software de análise de dados qualitativo Nvivo12. Desta análise surgiram dois temas principais: Conjugalidade na Separação Pandémica e a Tecnologias na Conjugalidade. Os resultados sugerem que a separação física promoveu o envolvimento e a consolidação conjugal, sendo as tecnologias digitais percebidas como meios importantes de manutenção de relações à distância. Foi ainda possível observar que casais que outrora pareciam estar habituados ao contacto físico percecionaram mais sofrimento psicológico e menos adaptação aos meios digitais do que casais cuja distância se apresentava como condição pré-definida. Por fim, são descritas limitações do estudo assim como possíveis investigações futuras.
2025-10-28T12:28:59Z
David, Joana Raquel Soares Palhares de Oliveira
Spectral characterization of young free-floating planetary mass objects
Surveys in star-forming regions (SFRs) reveal the existence of free-floating planetary-mass objects (PMOs) that have masses that overlap with those of giant exoplanets but do not orbit a star. A detailed spectral characterization of PMOs is lacking due to their intrinsic faintness, significant extinction present in young environments, and, at these low luminosities, considerable contamination coming from background field objects. We have built a dataset of 59 publicly available near-infrared spectra from the X-Shooter instrument at the Very Large Telescope, where 36 objects also have optical spectra. Our data encompass brown dwarfs and PMOs, in nearby young moving groups and nearby SFRs, with spectral types (SpTs) M8 or later. These regions are ideal for this study due to their proximity (≲ 150 pc), low to negligible extinction, and youth (ages ≲ 100-200 Myrs). We derived SpTs for our dataset, both in the near-infrared and in the optical, by direct comparison with spectral templates. By complementing our dataset with data from the literature, we selected several spectral indices useful for SpT derivation in the range M3-T8. Particular attention was given to the analysis of gravity-sensitive spectral indices which can efficiently be used to separate young late-type members of moving groups and SFRs from field contaminants, in the range M0-L5. We computed pseudo-equivalent widths of the KI lines, present in the J-band, which are gravitysensitive, and confirmed that they are weaker for younger objects. We observed that they can be useful age indicators in the range M8-L6, however, they do not seem as gravity-sensitive in the T sequence. This work provides methods for spectral typing and gravity-class assessment and is important and timely since the upcoming observations with the James Webb Space Telescope will uncover large datasets of spectra from objects in this temperature range, which were previously non-detectable.
2025-10-28T12:25:13Z
Piscarreta, Lara Sofia Alvo
As tecnologias emergentes e os planos de ação para o desenvolvimento digital das escolas
Desde 2021 e até final de 2023, o Ministério da Educação, através da DireçãoGeral da Educação, desenvolve e implementa um programa nacional para todas as escolas públicas de Portugal Continental no âmbito das tecnologias digitais. Designado de Plano de Ação para a Transição Digital, tem como objetivos e dimensões de ação o desenvolvimento de competências digitais dos professores e o desenvolvimento digital das escolas. Esta segunda dimensão centra-se no diagnóstico ao nível da integração do digital nos processos pedagógicos e organizacionais e tem como principal objetivo a conceção e implementação de um Plano de Ação para o Desenvolvimento Digital das Escolas. Esta dissertação é o culminar de um estudo que pretendeu perceber se as tecnologias emergentes foram incluídas nos Planos de Ação para o Desenvolvimento Digital das Escolas, de quatro escolas de um concelho do distrito do Porto. Este estudo seguiu uma metodologia descritiva com base em dados quantitativos e partiu da análise pormenorizada destes planos e de um questionário aplicado aos docentes das escolas participantes sobre as tecnologias emergentes, baseado nos domínios do SELFIE. Identificaram-se as áreas e os domínios em que o desenvolvimento digital das escolas e dos professores estão mais avançados e onde revelam maiores fragilidades. Os questionários permitiram compreender o conhecimento que os professores possuem sobre as tecnologias emergentes na educação, sobre a sua aplicação nas práticas pedagógicas e nos vários domínios nas suas escolas. Os resultados sugerem que o processo de transição digital está ainda numa fase inicial e que as tecnologias emergentes têm um longo caminho a percorrer até fazerem parte dos planos de desenvolvimento digital das escolas e de serem integradas em contexto pedagógico e organizacional.
A formação e os saberes de educadores de rua - Desafios no contexto europeu
A investigação visa analisar a Formação e os Saberes de Educadores de rua no contexto europeu, tendo como base o seu trabalho com crianças e jovens, por meio da educação não formal. Trata-se de uma temática muito pouco explorada do ponto de vista científico e de grande relevância social. Do ponto de vista epistemológico, a investigação filiou-se na hermenêutica pois interessou-nos compreender a interpretação realizada pelos próprios Educadores de rua sobre a sua atividade profissional, a sua formação e os seus saberes. Assim, a investigação procurou compreender a experiência vivenciada pelos Educadores de rua no espaço europeu, compreendendo a sua atividade profissional, o cotidiano do Educador de rua, desvelado em suas diferentes formas de agir, por meio do exercício de compreensão da própria pesquisadora. A investigação qualitativa consistiu na realização de entrevistas semiestruturadas a Educadores de rua de 4 (quatro) países da União Europeia: Eslovênia, República Checa, Países Baixos e Portugal. As entrevistas semiestruturadas incidiram na caraterização da atividade profissional destes educadores, no seu processo de formação, seus saberes e nos desafios da sua intervenção social, cultural educativa. O Educador de rua, no contexto europeu, através do estudo, foi possível constatar que os Educadores de rua possuem um conjunto de funções, formação, saberes e desafios indispensáveis para as práticas de educação de rua que conduzem, resultantes de processos de educação não formal. A investigação permitiu ainda realizar uma reflexão sobre a importância da abordagem biográfica, as potencialidades de cada Educador de rua e das suas atividades com os jovens, assim como repensar as práticas de educação de rua e ainda reforçar a urgência do reconhecimento profissional e parcerias, stakeholders ou autoridades locais ou outros parceiros.
2025-10-28T12:16:21Z
Fraga, Marcia Virginia Almeida
Repensar o Chiado/Reviver o Chiado : conferências e exposições : jornadas europeias do património
No summary/description provided
Incidence, predictive factors and clinical significance of development of portal vein thrombosis in cirrhosis: a prospective study
Background and aims: The role of portal vein thrombosis (PVT) in the natural history of cirrhosis is controversial. There are few prospective studies validating risk factors for development of PVT. We analysed the incidence, factors associated with PVT development and its influence on cirrhosis decompensations and orthotopic liver transplant (OLT)-free survival. Methods: In this prospective observational study between January 2014 and March 2019, 445 consecutive patients with chronic liver disease were screened and finally 241 with cirrhosis included. Factors associated with PVT development and its influence on cirrhosis decompensations and OLT-free survival by time dependent covariate coding were analysed. Results: Majority of patients belonged to Child-Pugh class A 184 (76.3%) and the average MELD score was 10 ± 5. Previous cirrhosis decompensations occurred in 125 (52.1%), 63 (26.1%) were on NSBB and 59 (27.2%) had undergone banding for bleeding prophylaxis. Median follow-up was 29 (1-58) months. Cumulative incidence of PVT was 3.7% and 7.6% at 1 and 3 years. Previous decompensation of cirrhosis and low platelet counts but not NSBB independently predicted the development of PVT. During follow-up, 82/236 (34.7%) patients developed cirrhosis decompensations. OLT-free survival was 100% and 82.8% at 3 years, with and without PVT respectively. MELD score, but not PVT, independently predicted cirrhosis decompensations (HR 1.14; 95%CI:1.09-1.19) and OLT-free survival (HR 1.16;95%CI:1.11-1.21). Conclusion: Previous decompensations of cirrhosis and thrombocytopenia predict PVT development in cirrhosis suggesting a pathophysiologic role for severity of portal hypertension. PVT development did not independently predict cirrhosis decompensations or lower OLT-free survival.
2025-10-28T12:13:06Z
Ferreira, Carlos Marinho, Rui Cortez-Pinto, Helena Ferreira, Paula Dias, Margarida S. Vasconcelos, Mariana Alexandrino, Paula Serejo, Fátima Pedro, Ana Júlia Gonçalves, Afonso Palma, Sónia Leite, Inês Reis, Daniela Damião, Filipe Valente, Ana Xavier Brito, Leonor Baldaia, Cilenia Fatela, Narcisa Ramalho, Fernando Velosa, José
Differentiation and genetic variability in cork oak populations (Quercus suber L.)
O ano 2011 foi designado como “O Ano Internacional das Florestas” pela Assembleia Geral das Nações Unidas, na tentativa de despertar o interesse público e promover a sustentabilidade da gestão e conservação florestal para o benefício das gerações futuras. Estimativas da FAO (Food and Agriculture Organization) para o ano de 2010 demonstraram que 31% da superfície terrestre ainda está coberta por florestas e que as árvores correspondem a 90% da biomassa terrestre, compreendendo um total de 60.000 a 100.000 taxa. Contudo, certas alterações induzidas pelo Homem, principalmente a desflorestação e as alterações climáticas elevaram o número de espécies ameaçadas de extinção para 10%. Nos últimos tempos as espécies florestais têm sido bastante usadas em estudos de genética populacional e evolutiva, assim como em estudos genómicos. As principais razões são as características particulares que estes modelos não-clássicos apresentam, visto resultarem de milhões de anos de divergência e diversificação, e assim apresentarem impressionantes níveis de diversidade morfológica, divergência evolutiva e diversidade ecológica. Apesar de o impacto que as alterações globais vão ter sobre estas espécies depender grandemente da sua capacidade de reacção e da dos seus ecossistemas, os estudos genéticos permitem-nos, até certo ponto, prever as consequências evolutivas das alterações uma vez que nos possibilitam aumentar o conhecimento da biodiversidade e evolução destas espécies. O conceito de “Filogeografia” foi apresentado por Avise et al. em 1987, e durante os últimos 25 anos teve um grande impacto na investigação, particularmente em animais. Nas plantas os resultados produzidos não têm sido tão explícitos, principalmente devido à falta de variabilidade genética aplicável à análise filogeográfica. Tem sido consideravelmente difícil encontrar um marcador genético em plantas com um poder de resolução semelhante ao DNA mitocondrial animal. No entanto a filogeografia em plantas tem-se desenvolvido bastante, principalmente nos últimos anos, com o crescimento do uso de marcadores moleculares nucleares e com a recolha de informação de fragmentos maiores do genoma cloroplastidial. O género Quercus (carvalhos) (Fagaceae) é um dos grupos mais importantes de angióspermicas lenhosas no hemisfério norte, nomeadamente em relação à diversidade de espécies, dominância ecológica e valor económico. O género é bastante antigo considerando que o fóssil mais antigo encontrado pertence ao Oligoceno (34-23 milhões de anos). Os carvalhos são os membros dominantes de uma grande variedade de habitats e pensa-se que existam 500-600 espécies na Terra. O sobreiro (Quercus suber L.) representa umas das espécies arbóreas mais importantes da região Oeste do Mediterrâneo, tanto económica como ecologicamente, onde define espaços florestais abertos (criados e mantidos pelo Homem) conhecidos em Portugal como “montados”. A área de distribuição do sobreiro, apesar de descontínua, vai desde a costa Atlântica do Norte de África e Península Ibérica até às regiões sudoeste de Itália, incluindo as ilhas Mediterrânicas Sicília e Sardenha, assim como as zonas costeiras do Mediterrâneo da Argélia e Tunísia. As florestas de sobreiro cobrem uma área total de cerca de 2,2 milhões de hectares, de onde são extraídas 340.000 toneladas/ano de cortiça. As maiores extensões de área coberta estão localizadas em Portugal com cerca de 700.000 hectares, correspondendo a 21% da área florestal Portuguesa e 30% da área mundial de produção de cortiça. O sobreiro tem sido usado desde a Antiguidade para a produção de cortiça e este produto natural apresenta um grande valor económico. As maiores ameaças contudo, são enfrentadas pelas populações naturais e marginais, que muitas vezes são pequenas e se encontram dispersas e em habitats restritos. Muitas destas populações podem estar em risco de desaparecer, principalmente devido à falta de regeneração. Devido ao seu valor económico e também porque os espaços florestais de sobro são reservatórios de biodiversidade e abrigo para uma grande variedade de espécies ameaçadas de extinção, estas populações representam material importante para estudos genéticos que possam servir de base ao delineamento de programas de conservação. Assim sendo, é necessário fortalecer e aumentar o conhecimento da organização espacial da variação genética da espécie, para assim se poder tomar decisões conscientes e informadas sobre a conservação dos recursos genéticos. Os estudos filogeográficos em Quercus suber têm sido pouco aprofundados e alguns até inconclusivos. Isto leva a que não haja uma boa compreensão da história evolutiva da espécie, muito provavelmente devido ao número limitado de áreas amostradas ou o baixo conteúdo informativo dos marcadores usados. Por exemplo, nos estudos que envolveram populações Portuguesas, foram feitas inferências com base numa amostragem deficiente de Portugal, e sendo esta uma das regiões mais relevantes na história presente e passada do sobreiro, é necessária uma maior cobertura da área de distribuição, incluindo algumas zonas referidas como potenciais zonas de refúgios glaciais para outras espécies. Por outro lado, uma vez que a maioria dos estudos filogeográficos são suportados por dados derivados do DNA cloroplastidial (cpDNA) (PCR-RFLPs e SSRs), deve considerar-se se outras abordagens moleculares ou marcadores genéticos, que evoluam a taxas mais rápidas que o cpDNA não indicariam um cenário evolutivo diferente. Esta tese de mestrado propõe uma abordagem diferente dos estudos anteriores, complementando dados obtidos a partir de DNA cloroplastidial e nuclear. Esta abordagem nunca foi aplicada ao sobreiro, e espera-se que possa adicionar informação filogeográfica relevante. Mais especificamente os objectivos deste trabalho foram: 1. Inferir a história evolutiva e os padrões demográficos de Quercus suber; 2. Explorar os padrões de hibridação e introgressão do sobreiro com outras espécies de Quercus; 3. Avaliar os níveis de diversidade e diferenciação entre e dentro de algumas populações chave de sobreiro. A sequenciação de vários fragmentos permitiu inferir alguns detalhes sobre a história evolutiva da espécie. O tradicional cpDNA foi seleccionado para sequenciação de 3 regiões inter-génicas (TrnL-F, TrnS-PsbC e TrnH-PsbA), num total de 148 amostras provenientes de 26 populações. No entanto, e porque inferências filogeográficas baseadas num único tipo de marcador não-recombinante pode dar informações erróneas sobre a história evolutiva da espécie, o genoma nuclear (nuDNA) também foi explorado com a sequenciação de um gene candidato potencialmente envolvido no stress osmótico (EST 2T13), em 104 amostras provenientes das mesmas 26 populações. Para ambos os conjuntos de dados foram detectadas duas linhagens presentes em sobreiro. Uma linhagem, a “linhagem pura”, parece praticamente exclusiva do sobreiro e divide-se em três sub-linhagens possivelmente resultantes de três zonas de refúgio, sendo uma predominante na zona Oeste do Mediterrâneo, e as outras duas na zona Este do Mediterrâneo. A outra linhagem aparece associada a Quercus ilex (azinheira) e Quercus coccifera (carrasco) e foi apelidada de “linhagem introgredida”. Esta linhagem parece resultar de vários fenómenos de hibridação e introgressão com Quercus ilex. A análise combinada das sequências do cpDNA e nuDNA sugere que esta introgressão aconteceu em ambos os sentidos entre as duas espécies, assim como sugere que estes eventos foram frequentes e consecutivos durante um período de tempo. Finalmente, microssatélites nucleares, derivados de ESTs (Expressed Sequence Tags) (EST-SSRs) e anónimos (nuSSRs), permitiram obter uma perspectiva dos padrões de diversidade genética e estrutura populacional do sobreiro. Numa primeira fase foi possível estabelecer os EST-SSRs como marcadores válidos no sobreiro, contrariando a ideia de que os EST-SSRs tendem a ser pouco polimórficos. Posteriormente, uma análise combinada destes dois marcadores (5 EST-SSRs e 3 nuSSRs) em 379 indivíduos provenientes de 13 populações detectou uma diversidade genética relativamente baixa, mas altamente significativa. Apesar de não ter sido detectada estrutura populacional nas populações Portuguesas, aparecendo em conjunto num grupo populacional, verifica-se uma tendência para considerar a Catalunha (Espanha) como uma das populações mais diferenciadas. No geral os objectivos do trabalho foram cumpridos, esclarecendo alguns pontos da filogeografia e história evolutiva do sobreiro. A introdução dos novos marcadores moleculares foi claramente informativa, revelando novos aspectos inesperados acerca dos padrões genéticos da espécie e assim o gerar de hipóteses explicativas completamente novas em sobreiro.
2025-10-28T12:17:04Z
Costa, Joana Seabra Pulido Neves da
Looking at resilience among transgender and gender diverse people in Portugal: gender affirmation paths and parenting aspirations
The transgender and gender diverse (TGGD) population is highly diverse. To date, research on the association of the various family–parenthood aspirations of TGGD people with distinct affirming paths and identities remains scarce. A survey was conducted aiming to characterize the TGGD population’s diversity and socio-demographic profile. A community-based convenience sample of 115 self-identified TGGD adults living in Portugal was collected. Most of the participants (69%) did not have any children, 10% had children of their own, and about 20% did not have children in the present but reported their intensions to have children in the future. The results were discussed, highlighting the heterogeneity found in terms of sociodemographic characteristics, gender identification, and gender affirmation pathways (social, legal, and medical), with a focus on the participants’ parenthood aspirations. The under- or non-representation of transgender individuals in population surveys, such as demographic and health surveys, is a barrier to understanding the social determinants and health disparities faced by this population.
2025-10-28T12:28:20Z
Moleiro, Carla Alarcão, Violeta Giami, Alain
Health literacy among older adults in Portugal and associated sociodemographic, health and healthcare-related factors
Although the health literacy level of the general population was described recently, little is known about its specific levels among older adults in Portugal. Therefore, this cross-sectional study aimed to investigate the levels of health literacy demonstrated by older adults in Portugal and explore associated factors. Using a randomly generated list of telephone numbers, adults aged 65 years or more living in mainland Portugal were contacted in September and October 2022. Sociodemographic, health and healthcare-related variables were collected, and the 12-item version of the European Health Literacy Survey Project 2019–2021 was used to measure health literacy. Then, binary logistic regression models were used to investigate factors associated with limited general health literacy. In total, 613 participants were surveyed. The mean level of general health literacy was (59.15 ± 13.05; n = 563), whereas health promotion (65.82 ± 13.19; n = 568) and appraising health information (65.16 ± 13.26; n = 517) were the highest scores in the health literacy domain and the dimension of health information processing, respectively. Overall, 80.6% of respondents revealed limited general health literacy, which was positively associated with living in a difficult household financial situation (4.17; 95% Confidence Interval (CI): 1.64–10.57), perceiving one’s own health status as poorer (7.12; 95% CI: 2.02–25.09), and having a fair opinion about a recent interaction with primary healthcare services (2.75; 95% CI: 1.46–5.19). The proportion of older adults with limited general health literacy in Portugal is significant. This result should be considered to inform health planning according to the health literacy gap of older adults in Portugal.
2025-10-28T12:10:48Z
Costa, Andreia Feteira-Santos, Rodrigo Alarcão, Violeta Henriques, Adriana Madeira, Teresa Virgolino, Ana Arriaga, Miguel Nogueira, Paulo Jorge
“Something yet remains…”: symbols of witchcraft, religion, and womanhood in Penny Dreadful
The television series Penny Dreadful (2014-2016) creates an intricate, ambiguous world inspired by Victorian Gothic literary works, paying tribute to the Gothic world and works of the past but simultaneously conscious of its place within the genre. Through unrestrained adaptations, intertextuality and self-awareness, the series reflects the transgressive nature of the Gothic style, additionally proving its postmodern quality. Furthermore, through the characters, the series defies social standards, in particular through the female protagonist, Vanessa Ives. Conventional in some ways, namely in her deep Catholic faith, and rebellious in others, specifically in the practise of witchcraft and exploration of sexuality, which in turn reflect her innate unruliness, Vanessa breaks down the walls that define the correct and acceptable way of being a woman. The present study examines Vanessa, focusing on her relationship with religion and with the Devil, who presents an alternate form of agency, as well as the importance of witchcraft as a practise of self-acknowledgement, the gendered biases that affect medical treatments and its connection to the Gothic trope of imprisonment, and how female unity represents a reaction of survival against the patriarchy. In turn, this analysis proves the ambiguous representation of the female character and the female experience, which has been deemed as both progressive and antifeminist, but which nonetheless provides a more flexible and more comprehensive portrayal of the complexity of the female experience.
2025-10-28T12:29:40Z
Lourenço, Rita Mariana Gomes
Genotipagem de isolados de Aspergillus fumigatus de origem clínica e ambiental
Aspergillus fumigatus é um fungo sapróbio, ubíquo no ambiente, com crescente importância clínica para a saúde humana, pois é responsável por provocar, entre outras patologias, infeções invasivas graves, especialmente em indivíduos imunocomprometidos. Dada a elevada taxa de mortalidade associada às infeções relacionadas com este fungo, bem como a emergência de um grave problema de resistência aos antifúngicos triazóis utilizados como primeira linha de tratamento nestas, torna-se importante perceber a sua dinâmica no ambiente e no organismo humano. Além disso, o aparecimento de novos grupos de risco aos quais a infeção está associada, tem vindo a levantar também uma crescente preocupação no que toca aos critérios para diagnóstico e tratamento da doença, que ainda representam um desafio. O conhecimento da epidemiologia do fungo permite uma melhor perceção das suas interações com o ambiente e com o Homem, tornando esta área de elevada importância no contexto da relevância crescente de Aspergillus fumigatus na clínica. No presente estudo, foi utilizada uma técnica robusta de genotipagem, específica para Aspergillus fumigatus sensu stricto, o ensaio STRAf, que permite distinguir diferentes estirpes desta espécie, através da amplificação de loci específicos numa reação de amplificação multiplex com primers marcados com fluorescência. Com o ensaio realizado foi possível comprovar a grande variabilidade genética de Aspergillus fumigatus, tendo-se observado 85 genótipos de entre os 100 isolados viáveis analisados. Foi também possível perceber a interação entre alguns dos isolados em estudo. A técnica revelou, como esperado, um elevado poder discriminatório (0,9820) o que confirma a sua utilidade em futuros estudos epidemiológicos de grande escala, essenciais para melhor entender como abordar a problemática crescente que este fungo tem representado.
2025-10-28T12:18:14Z
Morais, Susana Lúcia Monteiro
Brincadeiras e jogos para uma cultura da resistência
No summary/description provided
Identification and characterisation of new players involved in the assembly of the meiotic spindle in Human oocytes
A correta organização do fuso acromático é essencial para a segregação dos cromossomas durante a divisão celular. Durante a oogénese, os oócitos entram na meiose I, especificamente em prófase I, onde o material genético é condensado em cromossomas homólogos e se dá a recombinação. Estes oócitos ficam parados em prófase I até à puberdade. Com a puberdade, o aumento brusco da hormona luteinizante (LH) que ocorre todos os meses, estimula um oócito para recomeçar a meiose. Assim, o envelope nuclear começa a desintegrar-se, os cromossomas condensam e o fuso meiótico é organizado. Na etapa seguinte, metáfase I, o fuso meiótico alinha os cromossomas e migra para o córtex do oócito onde os cromossomas homólogos são segregados. Na meiose II, um segundo fuso meiótico é formado e os oócitos ficam parados em metáfase II até à fertilização. Com a fertilização, a meiose II é retomada e os cromatídeos são segregados. Assim, o fuso meiótico é responsável por separar os cromossomas, ou cromatídeos, de modo que metade seja corretamente colocada no corpo polar e extrudida, e que a outra metade fique no oócito. Por vezes ocorrem erros na segregação dos cromossomas ou cromatídeos, que podem ser causados por defeitos no fuso acromático. O fuso acromático é constituído por filamentos de microtúbulos (MT) nucleados por centros organizadores de microtúbulos (MTOCs, do Inglês Microtubule Organizing Centres). MTOCs são estruturas celulares que controlam a nucleação, estabilidade e ancoragem dos MTs. Em células eucariotas somáticas, os centrossomas são os principais MTOCs durante a divisão celular. Eles consistem em dois cilindros constituídos por MTs, chamados centríolos, e uma matriz pericentriolar (PCM). A PCM é uma massa constituída por várias proteínas que rodeia os centríolos e é essencial para a nucleação e ancoragem dos MTs. Durante a oogénese, a maioria das espécies, incluindo Humanos, eliminam os centrossomas e os MTs são organizados por MTOCs acentriolares. A maioria dos estudos sobre a oogénese em mamíferos são realizados em ratinhos. Neste modelo foram identificadas duas estruturas que compensam a eliminação dos centrossomas: os MTOCs acentriolares e os condensados LISD (Liquid Like Spindle Domain). Ambos os MTOCs acentriolares e os condensados LISD estão localizados nos polos do fuso meiótico, e ambos possuem na sua constituição proteínas da PCM. Os MTOCs acentriolares são responsáveis pela nucleação de MTs. Os condensados LISD também contêm proteínas reguladores de MTs como a AURKA, TACC3 e CHC17. Eles concentram as proteínas reguladoras de MTs à volta do fuso meiótico, permitindo que se difundam rapidamente nele. Perturbações nos condensados LISD, através de inibição ou depleção das proteínas mencionadas anteriormente, levam a defeitos no fuso meiótico e na segregação dos cromossomas. Em Humanos não se sabe muito sobre como o fuso meiótico é organizado. Um estudo demonstrou que os oócitos Humanos utilizam a via da Ran-GTP para nuclear os MTs. Isto foi demonstrado através do uso de um mutante que impede a Ran de executar a sua função. O uso deste mutante resultou em problemas na nucleação dos MTs e erros na organização do fuso meiótico dos oócitos Humanos. A via da Ran-GTP começa com o fator RCC1 a transformar a proteína nuclear Ran da sua forma ligada a GDP, para a forma ligada a GTP. O fator RCC1 está ligado à cromatina e a sua atividade gera um gradiente de Ran-GTP. Este gradiente induz a ativação de fatores de organização do fuso acromático, que por sua vez, participam na nucleação de microtúbulos ou estimulam a formação do fuso bipolar. Os oócitos Humanos têm sido considerados como não tendo MTOCs acentriolares óbvios. No entanto, um estudo recente identificou um MTOC, denominado huoMTOC, em oócitos humanos no estadío de vesícula germinal. Este huoMTOC é composto por quatro proteínas: TACC3, CKAP5, CCP110 e DISC1, e é um local de nucleação de microtúbulos, sendo necessário para a organização do fuso meiótico em oócitos Humanos. O huoMTOC é formado perto do córtex dos oócitos Humanos no estadío de vesicula germinal. Com o reinício da meiose, o huoMTOC migra em direção ao invólucro nuclear. Depois da rutura do invólucro nuclear o huoMTOC fragmenta e é recrutado pelos cinetocoros para a nucleação de MTs do fuso meiótico. Os autores também descreveram que mutações nos componentes do huoMTOC perturbam esta estrutura e levam a defeitos na organização do fuso meiótico. Aliás, pacientes com estas mutações demostraram problemas nos seus oócitos que levaram à paragem do desenvolvimento. Defeitos na organização do fuso acromático levam a erros na segregação dos cromossomas. Estes erros causam aneuploidias, uma condição onde a célula apresenta um número incorreto de cromossomas. Oócitos aneuploides apresentam severas disfunções celulares que, muitas vezes, causam problemas no desenvolvimento do embrião e a gravidez pára. Assim, aneuploidias são consideradas a principal causa de infertilidade nas mulheres, e insucesso nos tratamentos de fertilização in vitro. A infertilidade tem se tornado um problema de saúde crescente na nossa sociedade, e é observada muito mais frequentemente em Humanos que noutros mamíferos. Assim, ter conhecimento completo sobre os mecanismos para a organização do fuso meiótico em oócitos Humanos é fundamental para compreender as causas da prevalência de aneuploidias e infertilidade observados em Humanos. Com este objetivo em mente, selecionámos um grupo de proteínas para estudar. Estas proteínas candidatas foram descritas como tendo um papel importante na organização do fuso acromático noutros organismos, e estão presentes no proteoma e/ou transcriptoma de oócitos Humanos. Os candidatos incluem: 1) proteínas conhecidas como sendo necessárias para focar fusos acromáticos multipolares em fusos acromáticos bipolares, em linhas celulares Humanas cancerígenas. 2) proteínas motoras conhecidas por participar na organização do fuso acromático em mitose e em meiose. 3) proteínas conhecidas por estarem envolvidas na nucleação e/ou estabilização de MTs de forma independente do centrossoma. 4) proteínas que regulam a interação entre os MTs e a actina. O objetivo final é estudar estas proteínas através de imunofluorescência para investigar a sua presença e/ou localização em oócitos Humanos. Como é difícil obter oócitos Humanos em grande quantidade, perguntámos se poderíamos utilizar tanto oócitos frescos como oócitos vitrificados nas nossas experiências. Durante o processo de vitrificação, os oócitos estão expostos a nitrogénio líquido para os congelar rapidamente, sem formar gelo no interior do oócito. Durante este processo, os oócitos podem sofrer algum dano e por vezes degeneram e morrem. Desta forma, avaliámos se existem diferenças no citoesqueleto entre oócitos frescos e oócitos vitrificados. Para isto, olhámos para o fuso meiótico e outros marcadores através de imunofluorescência em ambas as condições. Nas nossas observações não detetámos diferenças entre oócitos frescos e oócitos vitrificados, em nenhum dos marcadores. Assim, podemos concluir que este processo de vitrificação não influencia o citoesqueleto de microtúbulos e que podemos utilizar tanto oócitos frescos como oócitos vitrificados na caracterização das proteínas candidatas. Para estudar as proteínas candidatas adquirimos anticorpos para cada uma e testámo-los em células de cultura Humanas, de modo a compreender se os anticorpos funcionavam corretamente usando o protocolo para oócitos. Com esta experiência conseguimos observar todas as proteínas em interfase e metafase, com localizações semelhantes às descritas na literatura. Assim, concluímos que os anticorpos funcionam com este protocolo e podem ser utilizados em oócitos Humanos. Desta forma, dispomos das ferramentas necessárias para iniciar a caracterização das proteínas candidatas em oócitos Humanos, e estudar os mecanismos de organização do fuso meiótico utilizados por Humanos durante a oogénese.
2025-10-28T12:13:20Z
Silva, Ana Maria Ferreira da
ISBE & Cochrane Portugal Newsletter nº 235: Tomografia computorizada ou angiografia coronária na dor retroesternal estável
Esta Newsletter (NL) resulta de uma parceria entre o Instituto de Saúde Baseada na Evidência e a Cochrane Portugal, e tem como objectivo disponibilizar informação sobre áreas importantes para a prática clínica, com base na melhor evidência científica disponível. São incluídos estudos relevantes, criticamente avaliados pela sua validade, importância dos resultados e aplicabilidade prática, resumidos numa óptica de suporte à decisão. É dada prioridade a estudos de causalidade incluindo-se ainda, quando justificado, estudos qualitativos e metodológicos, assim como revisões científicas. O conteúdo da NL é da exclusiva responsabilidade do(s) seu(s) autor(es).
2025-10-28T12:22:21Z
Lupi Manso, Nuno Rachadell, Juan José Carneiro, António Vaz