Repositório RCAAP

The tumor suppressor protein p53 is inactive in a large number of cancers, including some forms of sarcoma, breast cancer, and leukemia, due to overexpression of its intrinsic inhibitors MDM2 and MDMX. Reactivation of p53 tumor suppressor activity, via disruption of interactions between MDM2/X and p53 in the cytosol, is a promising strategy to treat cancer. Peptides able to bind MDM2 and/or MDMX were shown to prevent MDM2/X:p53 interactions, but most possess low cell penetrability, low stability, and/or high toxicity to healthy cells. Recently, the designed peptide cHLH-p53-R was reported to possess high affinity for MDM2, resistance toward proteases, cell-penetrating properties, and toxicity toward cancer cells. This peptide uses a stable cyclic helix−loop−helix (cHLH) scaffold, which includes two helices connected with a Gly loop and cyclized to improve stability. In the current study, we were interested in examining the cell selectivity of cHLH-p53-R, its cellular internalization, and ability to reactivate the p53 pathway. We designed analogues of cHLH-p53-R and employed biochemical and biophysical methodologies using in vitro model membranes and cell-based assays to compare their structure, activity, and mode-of-action. Our studies show that cHLH is an excellent scaffold to stabilize and constrain p53-mimetic peptides with helical conformation, and reveal that anticancer properties of cHLH-p53-R are mediated by its ability to selectively target, cross, and disrupt cancer cell membranes, and not by activation of the p53 pathway. These findings highlight the importance of examining the mode-of-action of designed peptides to fully exploit their potential to develop targeted therapies.

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Aim Previous data suggest the existence of retinal vascular changes and impaired autoregulation in the very early stages of diabetic retinopathy (DR). We compared the retinal plexuses between patients with type 1 diabetes (T1D) without DR and a demographically similar healthy cohort, using optical coherence tomography angiography (OCT-A). Methods Patients with T1D and no signs of DR were prospectively recruited from an outpatient clinic. Using OCT-A (AngioVue®), the parafoveal superficial (SCP) and deep (DPC) capillary plexus as well as the foveal avascular zone (FAZ) and perimeter were gathered. Mean comparison tests and linear regression analysis were used as statistical tests (STATA v14). Results Studied population included 48 subjects (24 T1D). The analysis of SCP revealed an attenuation of the capillary network compared with the control group in both parafoveal (51.8 ± 4.5 vs. 55.8 ± 3.2, p < 0.001) and perifoveal (51.9 ± 3.3 vs. 53.9 ± 1.9, p = 0.01) regions. A similar finding was observed in the DCP for both parafoveal (56.4 ± 4.3 vs. 60.4 ± 2.2, p < 0.001) and perifoveal (54.7 ± 3.9 vs. 60.8 ± 3.4, p = 0.001) sectors. Also, a longer time since T1D diagnosis was associated with a larger FAZ area (p = 0.055) and perimeter (p = 0.03). Conclusions Significant differences in the retinal microvasculature were observed between healthy subjects and T1D patients using OCT-A, even before clinically detectable disease on fundus biomicroscopy.

One of the most important causes of failure in tumour treatment is the development of resistance to therapy. Cancer cells can develop the ability to lose sensitivity to anti-neoplastic drugs during reciprocal crosstalk between cells and their interaction with the tumour microenvironment (TME). Cell-to-cell communication regulates a cascade of interdependent events essential for disease development and progression and can be mediated by several signalling pathways. Exosome-mediated communication is one of the pathways regulating these events. Tumour-derived exosomes (TDE) are believed to have the ability to modulate TMEs and participate in multidrug resistance mechanisms. In this work, we studied the effect of the natural defensin from common bean, PvD1, on the formation of exosomes by breast cancer MCF-7 cells, mainly the modulatory effect it has on the level of CD63 and CD9 tetraspanins. Moreover, we followed the interaction of PvD1 with biological and model membranes of selected composition, by biophysical and imaging techniques. Overall, the results show that PvD1 induces a dual effect on MCF-7 derived exosomes: the peptide attenuates the recruitment of CD63 and CD9 to exosomes intracellularly and binds to the mature exosomes in the extracellular environment. This work uncovers the exosomemediated anticancer action of PvD1, a potential nutraceutical agent.

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Introdução: A taquicardia ventricular (TV) ocorre no contexto de doença cardíaca estrutural, afetando negativamente o prognóstico e a qualidade de vida dos doentes. Tratamentos atuais, como implantação de um cardioversor desfibrilador implantável ou medicação antiarrítmica são abordagens subótimas na redução da recorrência de TV. Apesar de avanços na tecnologia de mapeamento, a ablação por cateter de radiofrequência (ARC) apresenta resultados limitados, com taxas de recorrência aos 5 anos acima de 50%. Objetivos: O principal objetivo deste estudo foi comparar a segurança e eficácia da ARC em doentes submetidos a ablação de TV no contexto de Miocardiopatia isquémica (MCI) e miocardiopatia não isquémica (MCNI). Métodos: Estudo retrospetivo unicêntrico de doentes submetidos a ablação de TV guiada por substrato e guiada por ativação utilizando cateteres multipolares (PentaRay™, Orion™, ou HDGrid™) e sistemas de mapeamento 3D (Carto™, Rhythmia™, or Ensite Precision™). Mapas em miocardiopatia estrutural foram avaliados para identificar canais intracicatriciais (áreas de voltagem bipolar <1,5mV) nos quais se observou propagação sequencial de atividades ventriculares anormais locais (LAVAs), durante ou após o QRS. A estratégia de ablação visava a abolição de todos os LAVAs intracicatriciais, direcionando as aplicações de radiofrequência principalmente para as entradas dos canais. A segurança foi avaliada pela taxa de mortalidade em 30 dias após a ablação de TV. A eficácia foi avaliada pela ausência de mortalidade por todas as causas, choques apropriados do CDI ou hospitalização cardiovascular aos 36 meses.Resultados: 102 doentes foram incluídos, sendo 75 MCI e 27 MCNI (94,1% do sexo masculino, 66,7±10,8 anos, seguimento médio de 31,2±21,2 meses). Houve um perfil de segurança semelhante entre MCI e MCNI (4% vs. 3,7%, P = 0,95) e uma eficácia semelhante em 36 meses (58,7% vs 33,3%, p = 0,12). Choques apropriados do CDI em 36 meses foram significativamente reduzidos em doentes nos quais o mapeamento de ativação complementou a ablação de substrato versus ablação baseada em substrato isolada (5,7% vs 21,2%, p <0,05). Conclusão: Houve um perfil de segurança e eficácia semelhante entre os deontes MCI e MCNI encaminhados para ablação de TV. Esses resultados evidenciam a importância da ablação da TV em doentes não isquémicos com cardiopatia estrutural e taquicardia ventricular recorrente.

Esta Newsletter (NL) surge de uma colaboração entre o Instituto de Saúde Baseada na Evidência (ISBE) e a Cochrane Portugal com o objetivo disponibilizar informação sobre a área da saúde digital, com base na melhor evidência científica disponível. Tratando-se de uma área recente e em constante evolução, esta publicação quinzenal inclui a análise de um estudo relevante, criticamente avaliados pela sua validade, importância dos resultados e aplicabilidade prática, tal como a explicação de um termo técnico e a referência a uma ou duas notícias relevantes. A NL inclui ainda a divulgação de atividades do ISBE que possam ser do interesse dos leitores. O objetivo é de permitir a atualização de conhecimentos na área. O conteúdo da NL é da exclusiva responsabilidade do(s) seu(s) autor(es).

Background: The use of peptides as drug carriers across the blood-brain barrier (BBB) has increased significantly during the last decades. PepH3, a seven residue sequence (AGILKRW) derived from the α-helical domain of the dengue virus type-2 capsid protein, translocates across the BBB with very low toxicity. Somehow predictably from its size and sequence, PepH3 is degraded in serum relatively fast. Among strategies to increase peptide half-life (t1/2), the use of the enantiomer (wholly made of D-amino acid residues) can be quite successful if the peptide interacts with a target in non-stereospecific fashion. Methods: The goal of this work was the development of a more proteolytic-resistant peptide, while keeping the translocation properties. The serum stability, cytotoxicity, in vitro BBB translocation, and internalization mechanism of DPepH3 was assessed and compared to the native peptide. Results: DPepH3 demonstrates a much longer t1/2 compared to PepH3. We also confirm that BBB translocation is receptor-independent, which fully validates the enantiomer strategy chosen. In fact, we demonstrate that internalization occurs trough macropinocytosis. In addition, the enantiomer demonstrates to be non-cytotoxic towards endothelial cells as PepH3. Conclusion: DPepH3 shows excellent translocation and internalization properties, safety, and improved stability. Taken together, our results place DPepH3 at the forefront of the second generation of BBB shuttles.

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The emergence of bacterial resistance due to the indiscriminate use of antibiotics warrants the need for developing new bioactive agents. In this context, antimicrobial peptides are highly useful for managing resistant microbial strains. In this study, we report the isolation and characterization of peptides obtained from the venom of the toadfish Thalassophryne nattereri. These peptides were active against Gram-positive and Gram-negative bacteria and fungi. The primary amino acid sequences showed similarity to Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript peptides, and two peptide analogs—Tn CRT2 and Tn CRT3—were designed using the AMPA algorithm based on these sequences. The analogs were subjected to physicochemical analysis and antimicrobial screening and were biologically active at concentrations ranging from 2.1 to 13 μM. Zeta potential analysis showed that the peptide analogs increased the positive charge on the cell surface of Grampositive and Gram-negative bacteria. The toxicity of Tn CRT2 and Tn CRT3 were analyzed in vitro using a hemolytic assay and tetrazolium salt reduction in fibroblasts and was found to be significant only at high concentrations (up to 40 μM). These results suggest that this methodological approach is appropriate to design novel antimicrobial peptides to fight bacterial infections and represents a new and promising discovery in fish venom.

Cientes da estruturação clássica da discussão acerca do conceito de “doença” em torno do eixo naturalismo/normativismo e em torno mais de “doença” do que de “saúde”, procuraremos evidenciar os pressupostos éticos que cada lado assume mais ou menos voluntariamente, sem nunca chegar a aceitar abertamente a porção estritamente ética dos seus significados. Serão os próprios conceitos de “bom” e “mau” que estarão pressupostos nas várias definições mencionadas (“saúde” e “doença” respectivamente) e como tal, necessária se torna para a Medicina a investigação estritamente ética, que visa defini-los. Neste trabalho revisitamos o significado de “doença” e “saúde” enquanto conceitos essenciais para a Medicina, partindo de uma hipótese: ambos são conceitos éticos. Queremos com isto abrir a Medicina à Ética, não apenas no seu aspecto de Bioética, mas naquele que mais intimamente lida com as ideias de Bem e de Mal. Neste sentido – e através de uma análise crítica de várias tentativas paradigmáticas de definir “doença” e “saúde” – tentaremos evidenciar a persistência ilegítima da chamada “falácia naturalista” de G. E. Moore (1903), segundo a qual tendemos a incorrer no erro de definir o que é o “bom” ou o “mau” em termos naturais, nas propostas consideradas naturalistas de Cohen e Scadding e as normativistas de Engel, Nordenfelt e Linder. Concluímos daqui que qualquer destas propostas apresenta um fundo ético e assim somos levados a apontar para a necessidade de um reenquadramento da actividade médica como actividade hermenêutico-filosófica a par de científica.

The ketogenic diet (KD) is a restrictive therapeutic diet, distinguished by being hyperlipidic, normoproteic, and hypoglucidic. This diet simulates biochemical changes related to fasting periods to achieve systemic ketosis. The metabolic particularities of glioma tumors motivated the rise in investigations and nutritional strategies, such as KD, to modulate the glycemic response as a treatment. This systematic review followed the PRISMA recommendations and was published in PROSPERO, with the identification CRD42021264173. The databases used were EMBASE, PubMed/Medline, Scopus, and Web of Science, and the studies were analyzed using the web-based application Rayyan. To analyze the risk of bias, Cochrane RevMan 5 software was used. For the analysis and treatment of statistical data, Microsoft® Excel® was used. A total of nine original articles were included. Data on survival, symptomology, and quality of life were collected. Mean overall survival was 15.9 months. Constipation and fatigue were the most reported symptoms. In 44.4% of the studies, an improvement in the quality of life was found. The KD is supported by most published studies as an effective therapy in the treatment of malignant gliomas due to its positive effects on patient survival. It was not possible to conclude the effectiveness of KD on quality of life.

Vitamin D is a key component for optimal growth and for calcium-phosphate homeostasis. Skin photosynthesis is the main source of vitamin D. Limited sun exposure and insufficient dietary vitamin D supply justify vitamin D supplementation in certain age groups. In older adults, recommended doses for vitamin D supplementation vary between 200 and 2000 IU/day, to achieve a goal of circulating 25-hydroxyvitamin D (calcifediol) of at least 50 nmol/L. The target level depends on the population being supplemented, the assessed system, and the outcome. Several recent large randomized trials with oral vitamin D regimens varying between 2000 and 100,000 IU/month and mostly conducted in vitamin D-replete and healthy individuals have failed to detect any efficacy of these approaches for the prevention of fracture and falls. Considering the well-recognized major musculoskeletal disorders associated with severe vitamin D deficiency and taking into account a possible biphasic effects of vitamin D on fracture and fall risks, an European Society for Clinical and Economic Aspects of Osteoporosis, Osteoarthritis and Musculoskeletal Diseases (ESCEO) working group convened, carefully reviewed, and analyzed the meta-analyses of randomized controlled trials on the effects of vitamin D on fracture risk, falls or osteoarthritis, and came to the conclusion that 1000 IU daily should be recommended in patients at increased risk of vitamin D deficiency. The group also addressed the identification of patients possibly benefitting from a vitamin D loading dose to achieve early 25-hydroxyvitamin D therapeutic level or from calcifediol administration.

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Nos tempos que correm, são cada vez mais utilizadas ferramentas que facilitam o trabalho a quem desenvolve software. Isto acontece por razões óbvias, sendo a mais determinante a de permitir ao programador preocupar-se o menos possível, compormenores irrelevantes ao processo de criação de software, sejam eles inerentes à linguagem, o memorizar da totalidade das bibliotecas disponíveis ou o descobrir a localização de erros de sintaxe. O aparecimento deste tipo de ferramentas tem vindo a rentabilizar bastante o trabalho de quem as usa, não só em termos de velocidade mas, também de criatividade já que, menos interrupções ao raciocínio permitem ir mais longe em termos de abstracção e complexidade. Neste contexto, a plataforma de desenvolvimento Eclipse tem tomado uma posição dianteira face a outras por várias razões. Destacam-se a facilidade de utilização, o excelente apoio à linguagem Java, e talvez a mais relevante para o contexto deste projecto, a possibilidade de alterar funcionalidades já existentes e até a de criar outras novas, integrando-as na plataforma. Esta mais valia tem proporcionado, nos últimos tempos, uma adaptação da plataforma original aos objectivos, gostos e preferências dos elementos de várias empresas sendo mesmo, muitas vezes criada uma nova versão do Eclipse à medida de cada um. Este projecto tem como objectivo a integração de novas funcionalidades no Eclipse, entre as quais, um construtor específico para uma linguagem usada internamente, acompanhado de todas as funcionalidades que permitam e maximizem o seu uso. Tendo como objectivo principal o de rentabilizar e facilitar o desenvolvimento de software da empresa EF Tecnologias de Software, SA, este projecto foi elaborado no âmbito da disciplina de Projecto em Engenharia Informàtica, com uma duração de nove meses e com o objectivo de obter o grau de Mestre em Engenharia Informática.

O projeto “Academia Digital para Pais” surgiu em 2020, num esforço conjunto da E-REDES e da Direção-Geral de Educação, com o intuito de apoiar as famílias que, em contexto pandémico, sentiram grandes dificuldades em lidar com as mudanças impostas pelo confinamento, já que, sem qualquer preparação prévia para professores, pais e alunos, as aulas passaram a acontecer por vias digitais. Esta mudança veio evidenciar os desafios de muitas famílias, quer por falta de acesso a dispositivos digitais, quer por falta de competências digitais, que lhes permitissem acompanhar os seus filhos nas atividades escolares. O projeto surge com 2 grandes objetivos: i) dotar os pais/encarregados de educação com as competências digitais necessárias para apoiar os seus filhos; e ii) dotar os pais/encarregados de educação com as competências digitais fundamentais para integração no mundo altamente digitalizado.Esta dissertação é o culminar de um estudo que pretendeu estudar o projeto “Academia Digital para Pais”, desde a sua conceção até à sua implementação, procurando perceber o seu contributo para o desenvolvimento das competências digitais dos pais/encarregados de educação que frequentaram as sessões de formação no ano letivo 2020/2021. Através de um estudo de tipo quantitativo, de natureza descritiva, enquadrando numa tipologia Survey, identificamos as competências digitais autopercebidas dos encarregados de educação, bem como o seu grau de satisfação em relação ao projeto. Os resultados indicam que o projeto teve um papel importante no desenvolvimento das competências digitais dos pais/encarregados de educação, revelando, ainda, elevados níveis de satisfação com o projeto. Estes resultados são um indicador de que o projeto pode contribuir para o empoderamento digital dos cidadãos, concorrendo para processos de inclusão digital.

O protagonismo das Cortes durante a primeira experiência liberal portuguesa é matéria consensual entre historiadores. Na sequência da Revolução do Porto, as Cortes aparecem como que destinadas a assumir o poder incontestado. Esse protagonismo e a parlamentarização da vida política seriam, num certo sentido, inevitáveis. Este artigo revisita essa leitura, defendendo que a parlamentarização da vida política em Portugal, ainda que aparentemente inevitável, foi, grande medida, fruto de um movimento peticionário sem precedentes na história do país. O texto sugere igualmente que esse movimento peticionário só foi possível porque as Cortes adoptaram regulação interna que valorizava o papel da nova instituição como destinatário privilegiado de todas expetativas da população. Considera-se que sem o regimento adoptado pelas Cortes a interação da nova instituição com a população teria sido menor, e o mesmo acontecendo inclusivamente ao protagonismo político das próprias Cortes.

O presente trabalho de projeto, elaborado no âmbito do Mestrado em Educação, na área de especialidade em Educação e Tecnologias Digitais, pretende investigar, através da realização de um estudo de caso num Agrupamento de Escolas da Área Metropolitana de Lisboa, formas de promover a realização de aprendizagens no domínio Instituições e Participação Democrática, na disciplina de Cidadania e Desenvolvimento, nos 2º e 3º ciclos do ensino básico. O estudo de caso apresentado seguiu uma abordagem de natureza qualitativa, tendo a recolha de dados sido feita através da análise de documentos oficiais de referência na área de Cidadania e Desenvolvimento e de documentos do Agrupamento de Escolas em estudo, e realização de entrevistas semidiretivas a professores e entrevistas em grupo focal a alunos, dos 2º e 3º ciclos do ensino básico. As entrevistas pretenderam recolher dados relativos às perceções de alunos e professores sobre a utilização de ferramentas e recursos digitais, assim como as atividades realizadas nas aulas de Cidadania e Desenvolvimento, com foco no domínio Instituições e Participação Democrática. Foi também intenção, recolher a sua opinião sobre atividades promotoras da participação democrática realizadas no Agrupamento de Escolas. Os resultados obtidos permitiram apresentar um módulo, em que são propostas atividades pedagógicas recorrendo a recursos e ferramentas digitais ou a dinâmicas em sala de aula, que poderão ser utilizadas pelos professores de Cidadania e Desenvolvimento, na abordagem ao domínio Instituições e Participação Democrática. Estas atividades foram desenhadas com base nos dados recolhidos junto dos professores e alunos, assim como da análise documental, indo ao encontro das preferências demonstradas pelos entrevistados, como por exemplo, a realização de trabalhos de pesquisa, a elaboração de apresentações utilizando ferramentas digitais, os trabalhos em grupo ou a organização de debates, promovendo também o desenvolvimento por parte dos alunos dos princípios, valores e áreas de competência definidos no Perfil dos Alunos à Saída da Escolaridade Obrigatória. Pretende-se que o módulo possa ser disponibilizado online para que fique acessível a todos os professores.

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Esta investigação aborda as lógicas de ação do diretor escolar na busca pela atratividade de sua escola, na promoção de sua imagem pública (interna e externa) e pela captação e manutenção de alunos na busca pela afirmação de seu espaço na interdependência competitiva existente em seu território. Buscou-se verificar quais são as lógicas de ação do diretor escolar na regulação local de educação e quais dentre elas são dominantes. Para tal, este estudo focou-se na descrição e compreensão das lógicas de ação de três diretores de escolas privadas e confessionais da Zona Sul da cidade de São Paulo, na compreensão das relações que estabelecem com as famílias, com a comunidade e concorrência de seu território. Para tal, este estudo exploratório recorreu à análise documental e a entrevistas semiestruturadas com os gestores e um estudo do contexto local, destacando as características urbanas e sociais, além da legislação estadual e nacional da educação. Os dados mostraram a existência de uma pluralidade de lógicas de ação que são utilizadas de modo singular por cada diretor, promovendo uma diversificação de ações e resultados. Os dados refletiram a perceção da autonomia do diretor em sua ação mobilizada pelos significados, crenças, valores e experiências que carrega, além de expor a diferença de atuação dentro de uma mesma lógica de ação, deixando claro a diversidade de ações que emergem na escola, mesmo que diante de semelhantes inputs. Ficou evidente a relevância dada à lógica de mercado na atuação dos diretores e a ênfase no ensino de valores diante da interdependência com outras escolas que fazem parte do círculo de disputa pela demanda de alunos.