Repositório RCAAP

Introduction/aims: In amyotrophic lateral sclerosis (ALS), the role of spinal interneurons in ALS is underrecognized. We aimed to investigate pre- and post-synaptic modulation of spinal motor neuron excitability by studying the H reflex, to understand spinal interneuron function in ALS. Methods: We evaluated the soleus H reflex, and three different modulation paradigms, to study segmental spinal inhibitory mechanisms. Homonymous recurrent inhibition (H'RI ) was assessed using the paired H reflex technique. Presynaptic inhibition of Ia afferents (H'Pre ) was evaluated using D1 inhibition after stimulation of the common peroneal nerve. We also studied inhibition of the H reflex after cutaneous stimulation of the sural nerve (H'Pos ). Results: Fifteen ALS patients (median age 57.0 years), with minimal signs of lower motor neuron involvement and good functional status, and a control group of 10 healthy people (median age 57.0 years) were studied. ALS patients showed reduced inhibition, compared to controls, in all paradigms (H'RI 0.35 vs. 0.11, p = .036; H'Pre 1.0 vs. 5.0, p = .001; H'Pos 0.0 vs. 2.5, p = .031). The clinical UMN score was a significant predictor of the amount of recurrent and presynaptic inhibition. Discussion: Spinal inhibitory mechanisms are impaired in ALS. We argue that hyperreflexia could be associated with dysfunction of spinal inhibitory interneurons. In this case, an interneuronopathy could be deemed a major feature of ALS.

Tendências antropogénicas globais, como o crescimento populacional, a transformação socioeconómica, as alterações climáticas, a redução de habitats, e a fragmentação da paisagem e alterações do uso do solo, têm vindo a afetar as interações entre microrganismos e hospedeiros, conduzindo à (re)emergência de doenças infeciosas conhecidas e desconhecidas. Entre estas, as doenças transmitidas por vetores causam mais de 700.000 mortes anualmente, afetando desproporcionalmente os países de baixo e médio rendimento (WHO, 2020). Nesta dissertação, explorou-se a adequabilidade e contextos ecológicos para a circulação no território nacional de um arbovírus negligenciado, o vírus do Nilo Ocidental (VNO), a principal causa global de encefalite viral. O VNO é um vírus zoonótico reemergente, mantido entre múltiplas espécies de aves e mosquitos e cuja endemicidade está estabelecida em vários continentes. Pertence ao género Flavivirus da família Flaviviridae, à semelhança de outros vírus mais conhecidos como o dengue, Zika e a febre amarela. É biologicamente diverso, estando atualmente propostas nove linhagens, no entanto os surtos em humanos têm sido associados apenas às linhagens 1, 2 e 5. Foi identificado pela primeira vez em 1937 no norte do Uganda. Nos anos 50 e 60 causou alguns surtos em populações humanas, nomeadamente no Egito, Israel, França e África do Sul, que contribuíram para os primeiros registos relativos às características virais e sintomáticas da doença causada pelo VNO, a febre do nilo ocidental (FNO). Depois de alguns anos com circulação limitada e registo esporádico de casos, em 1999 decorreu um surto em Nova Iorque, com numerosos casos severos de encefalites associados, registando-se o interesse da comunidade científica neste agente patogénico desde então. Posteriormente, expandiu-se para todo o território americano, levando a milhares de casos e centenas de mortes até à data. Nos últimos anos, a Europa tem registado um aumento da atividade epidémica do VNO, com vários países a tornarem-se endémicos. Em 2018, registou-se, na Europa, a pior época de sempre de transmissão, com 2083 casos e 181 mortes. Mais recentemente em 2022, uma onda de transmissão de proporções semelhantes resultou em 1340 casos e 104 mortes. Neste contexto, Portugal permanece um caso atípico, pois embora partilhe condições ecológicas favoráveis para a presença de VNO com outros países da Bacia do Mediterrânico que anualmente reportam casos em humanos, até à data apenas foram reportados quatro casos em humanos, embora anualmente se registem casos em equinos, tipicamente geograficamente restritos ao sul do país. Os equinos são, tal como os humanos, hospedeiros acidentais, incapazes de produzir virémia suficiente para manter o ciclo de transmissão, sendo usados como espécie sentinela para spillover visto que os surtos nesta família taxonómica seguem geralmente as mesmas dinâmicas que os surtos em humanos. O trabalho realizado nesta dissertação tem então como base a seguinte pergunta biológica: Qual é a configuração de condições climáticas em combinação com características da comunidade de hospedeiros suscetíveis e da paisagem que favorece a circulação do VNO em Portugal? Este estudo pretende responder a essa pergunta, explorando que outros fatores, em combinação com o clima, podem explicar a divisão norte-sul nos dados históricos de ocorrência do VNO. Para além disso, investiga-se a hipótese da existência de barreiras ecológicas para a transmissão do VNO em Portugal, que sustentem a ausência de reporte de surtos humanos. A estratégia metodológica de resposta assentou no desenvolvimento e implementação de modelos eco-epidemiológicos alimentados com dados de várias espécies de hospedeiros incluídas no ciclo epidemiológico do vírus, dados climáticos, variáveis da paisagem e uma lista atualizada de dados históricos sobre a ocorrência de VNO, incluindose informação sobre surtos não previamente publicados, obtida através de colaboração com a Direção Geral de Alimentação e Veterinária (DGAV). Assim, através de modelação ecológica, utilizando algoritmos de aprendizagem automática, como Random Forest (RF) e Boosted Regression Trees (BRT), definiram-se três objetivos principais: O primeiro objetivo foi quantificar a importância de diferentes variáveis relacionadas com os hospedeiros e a ecologia do ciclo de transmissão do VNO, doravante denominados de preditores, para explicar as ocorrências históricas do VNO em Portugal. Várias parcerias permitiram a construção do conjunto vasto de preditores, que inclui variáveis climáticas como temperatura, humidade e precipitação, distribuição de hospedeiros mamíferos e de aves, usos do solo, altitude e variáveis relacionadas com humanos e mosquitos. Verificou-se que a temperatura pode ser unanimemente considerada o preditor principal na explicação da distribuição espacial das ocorrências históricas do VNO em Portugal, o que pode ser interpretado pela sua influência no comportamento, reprodução e atividade dos mosquitos envolvidos na transmissão, bem como de alguns hospedeiros. Em segundo lugar, identificou-se como preditor o uso do solo, seguido de uma métrica de biodiversidade da comunidade de aves que ocorre no território nacional e de um índice de probabilidade de transmissão do VNO baseado no clima, previamente validado, para Israel e Itália, o Índice P. O segundo objetivo visou inferir a probabilidade de circulação de VNO nas diferentes freguesias de Portugal continental. Os resultados mostraram que as áreas ambientalmente adequadas para o VNO se localizam principalmente a sul do Rio Tejo, incluindo as regiões de Lisboa e Vale do Tejo, Alentejo e Algarve (costa sul). O norte também possui algumas áreas adequadas, embora em menor extensão, que abrangem as regiões de Aveiro, Vila Real e o Parque Natural do Douro Internacional. Posteriormente, ao analisar-se o contexto ecológico por detrás destas projeções de adequabilidade ecológica, foi verificada uma associação positiva com temperaturas mais elevadas. Para além disso, verificou-se uma relação negativa com a precipitação, o que está de acordo com os resultados de outros estudos de modelação de VNO. Relativamente aos hospedeiros, encontrou-se uma associação positiva entre a densidade de equinos e a probabilidade de circulação de VNO, que pode ser produto de uma vigilância que é essencialmente reativa a sintomas neurológicos reportados em cavalos, uma espécie de elevado valor comercial. Por fim, também se verificou uma associação positiva entre o número de espécies de aves (riqueza específica) e a circulação de VNO, o que destaca o papel da comunidade de aves selvagens como um todo, ao invés de um conjunto limitado de espécies. O terceiro e último objetivo deste estudo foi o de informar decisões de vigilância no contexto de Uma Só Saúde, através do estabelecimento de linhas orientadoras para um futuro plano de vigilância epidemiológica. Para isso, foram estabelecidos vários níveis de risco, por freguesia, em função da adequabilidade ecológica e da existência, ou não, de casos de VNO no passado. De seguida, foram analisadas as associações entre o risco e várias variáveis de interesse para a vigilância e saúde animal (humana, aviária e equina), com o objetivo de destacar as freguesias potencialmente promissoras para iniciativas associadas. Nesse sentido, foram criados vários mapas e listas de freguesias de interesse, que se localizam essencialmente no sul do território nacional, e delineadas recomendações para futuros planos de vigilância e controlo de VNO em Portugal. Este estudo fornece a primeira projeção espacial da probabilidade de transmissão do VNO em Portugal, bem como das características ecológicas que a sustentam, estabelecendo um quadro estratégico de dados que podem guiar futuros estudos epidemiológicos e, mais importante ainda, para informar futuros planos de vigilância integrada. Recomendam-se estudos epidemiológicos adicionais, bem como uma vigilância ativa do VNO, incluindo vigilância genómica, dada a ameaça que este agente patogénico representa para animais, humanos, aves e para o ecossistema como um todo. Somente abordagens holísticas na perspetiva de Uma Só Saúde permitirão entender se a circulação de VNO em Portugal é endémica ou epidémica, e adequar as intervenções em conformidade.

Introdução: O quilotórax neonatal é uma condição rara, potencialmente fatal, multifatorial, que se caracteriza pela acumulação de linfa no espaço pleural. Pode ser responsável por complicações nutricionais, metabólicas e imunológicas. O objetivo deste estudo é descrever a experiência da abordagem de recém-nascidos (RN), com o diagnóstico de quilotórax, internados numa Unidade de Cuidados Intensivos Neonatais (UCIN) terciária. Métodos: Estudo observacional, descritivo, retrospetivo, com base na análise dos processos clínicos de RN com o diagnóstico de quilotórax, internados na UCIN do Hospital de Santa Maria, CHULN, EPE, de janeiro de 2012 a fevereiro de 2023. Resultados: Foram incluídos oito doentes. A mediana da idade gestacional foi de 34 semanas e a mediana do peso foi 2350g. Metade dos casos foram congénitos, com diagnóstico pré-natal, 3 dos quais submetidos a intervenção pré-natal com colocação de shunt pleuro-amniótico. Metade foram iatrogénicos, secundários a trauma durante cirurgia torácica ou cervical. A maioria dos derrames pleurais eram unilaterais (n=5) e localizados à direita (n=3). Dois recém-nascidos apresentavam doença genética. Todos necessitaram de ventilação invasiva e sete de drenagem torácica. Todos fizeram nutrição parentérica e nutrição entérica com fórmula hipolipídica. Sete fizeram MCT oil. Nenhum respondeu totalmente à terapêutica conservadora pelo que todos foram tratados com octreótido, 6 dos quais com sucesso. Dois RN foram submetidos a pleurodese. Três necessitaram de terapêutica com imunoglobulina. Todos apresentaram complicações: 6 tiveram sépsis tardia, 2 tiveram pneumonia. A mediana do tempo de internamento foi de 35 dias. Registaram-se dois óbitos, um no contexto de sépsis com pneumonia e outro por hipoplasia pulmonar. Conclusão: Nesta série de casos, metade dos doentes tinham diagnóstico pré-natal e metade foram iatrogénicos, refletindo a estreita colaboração da nossa unidade com o centro de diagnóstico pré-natal do Departamento de Obstetrícia e Ginecologia e com o Serviço de Cirurgia Pediátrica do CHULN, EPE. No que diz respeita à abordagem, não há diretrizes, nacionais ou internacionais, universalmente aceites ou baseadas na evidência, gerando controvérsia nalgumas das terapêuticas utilizadas. São imprescindíveis mais estudos, sobretudo multicêntricos, para avaliar a eficácia e os resultados a curto e longo prazo das várias estratégias utilizadas na prática clínica.

Introdução: A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória caracterizada por uma poliartrite simétrica e aditiva, com mecanismos fisiopatológicos potencialmente diferentes consoante a seropositividade para o FR ou ACCP. Definir a AR seronegativa é complicado, questionando-se sobre a existência de um fenótipo estável para a condição, pois há doentes posteriormente reclassificados com outra doença reumatológica. Objetivo: Este projeto pretende investigar sobre a presença de características clínicas, laboratoriais e radiológicas tipicamente atribuídas a outras entidades reumatológicas na AR seropositiva e seronegativa, comparando-as. Métodos: Introduziram-se dados clínicos, laboratoriais e de atividade da doença na plataforma Reuma.pt. As informações obtidas foram trabalhadas recorrendo a testes estatísticos como o t-student e o qui-quadrado. Foi considerada a significância estatística para valores p < 0,05. Resultados: Foram incluídos 60 doentes acompanhados na consulta externa de AR do Hospital de Santa Maria, 30 com AR seropositiva e 30 com AR seronegativa. A manifestação clínica mais prevalente na amostra são as queixas secas, afetando 57% dos doentes com AR seronegativa. Entre os doentes pertencentes a este subgrupo, 50% evidenciam erosão óssea em pequenas articulações das mãos, 40% manifestam entesite e 20% demonstram condrocalcinose do punho em exame de imagem. Conclusão: A elevada prevalência de doença erosiva obtida na AR seronegativa, demonstra que esta não é uma doença menos agressiva. A entesite e a condrocalcinose do punho são mais prevalentes em doentes com AR seronegativa. Salvo as diferenças enunciadas, a AR seronegativa é semiologicamente semelhante à AR seropositiva.

A biodeteção móvel participativa tem a capacidade de desempenhar um papel relevante na identificação de geografias afetivas e locais de memória, bem como no planeamento urbano e turístico, transmitindo informações acerca das respostas emocionais dos cidadãos ao(s) ambiente(s) urbano(s) e contribuindo assim para a criação de lugares que promovam a satisfação das pessoas, o seu envolvimento emocional com o lugar e o bem-estar nas cidades. Esta apresentação procurará refletir sobre os resultados do projeto UrBio – Making urban planning and design smarter with participatory mobile biosensing, um projeto experimental financiado pela Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT). O principal objetivo do UrBio é o de desenvolver e testar metodologias mistas participativas que utilizem a informação produzida pelos biodetetores móveis para conceber espaços turísticos, de consumo e de lazer que promovam experiências quotidianas mais saudáveis, sustentáveis e convidativas a uma maior sociabilização. Este projeto foi desenvolvido e incluiu participantes de três cidades diferentes – Lisboa (Portugal), Varsóvia (Polónia) e Cuiabá (Brasil). A experimentação passou pela utilização de biodetetores móveis em caminhadas, realizadas de forma individual e a pares, e por uma reflexão por parte destes participantes sobre o impacto que o ambiente urbano tem nas suas experiências quotidianas através da análise dos seus próprios dados de biodeteção. Através desta reflexão, em forma de entrevista, foi possível compreender e identificar geografias emocionais e locais de memória associados a determinados espaços urbanos e explorar os modos como a biodeteção móvel pode ser uma ferramenta útil na investigação mista sobre memória e ambientes afetivos urbanos.

A diversidade tem sido tratada por várias áreas do conhecimento. Cabe à antropologia oferecer perspetivas descentradas sobre a sua existência histórica. Neste artigo mobilizo conhecimento etnográfico de contextos que conheço por experiência de trabalho de campo – indígenas na mata atlântica do sul da Bahia e os fataluku da região sociocultural do sudeste asiático (Timor-Leste) – para reforçar historicidades de vivência da paisagem que resultam em biodiversidade. Mostro a relevância de relacionalidades para a emergência dessa biodiversidade, em consonância com os estudos sobre florestas antropogénicas. Com essa perspetiva, enveredo por uma reflexão crítica sobre o território de eucaliptais em Portugal, mostrando a inviabilidade da monocultura de árvores – a reprodução do similar no solo - como floresta. Reequaciono assim os debates públicos sobre floresta (e incêndios rurais), argumentando que ressurgências de biodiversidade não brotam dessa simplificação ecológica.

Objetivo Este artigo apresenta o projeto exploratório UrBio, que tem como principais objetivos desenvolver e testar metodologias mistas participativas que utilizem os dados de biodetetores móveis no planeamento e design de espaços de turismo, lazer e consumo, tornando-os mais sustentáveis, saudáveis e conviviais. Estes dados, interpretados diretamente pelos participantes no projeto, permitirão identificar geografias afetivas e informar sobre respostas emocionais dos cidadãos em relação ao espaço urbano. Enquadramento teórico Existe um interesse crescente no potencial dos biodetetores para o estudo das experiências urbana e turística. Dispositivos como detetores de atividade eletrodérmica, eletroencefalogramas ou equipamentos de rastreamento ocular (eye-tracking) têm sido utilizados para estudar reações emocionais e cognitivas a ambientes urbanos (Pykett et al., 2020). As vantagens da utilização destes dispositivos centram-se na objetividade e precisão dos seus dados, que podem ser obtidos de forma continuada e prolongada, ao contrário do que acontece com dados obtidos em entrevistas ou inquéritos por questionário (Birenboim et al., 2019). Porém, muitas vezes é difícil estabelecer uma relação direta entre estímulos ambientais e os dados obtidos através da biodeteção (Osborne & Jones, 2017; Reif & Schmücker, 2021), pelo que alguns estudos têm procurado articular a biodeteção com métodos qualitativos, por forma a contextualizar as reações fisiológicas em termos geográficos (ex. Stadler et al., 2018).

No setor B2B de uma empresa de telecomunicações, cada empresa/cliente tem associados vários contactos à sua carteira. Deste modo, a comunicação com um cliente específico traduz-se num grande desafio, dado que se torna difícil para a operadora identificar qual o número mais eficaz para o contactar. Note-se que o contacto com o cliente é um fator crucial para o sucesso de qualquer empresa, no que diz respeito ao aumento a satisfação do mesmo, prolongamento dos períodos de fidelização e à identificação de oportunidades comerciais. Posto isto, o objetivo do presente projeto de trabalho consistiu em desenvolver um modelo preditivo, que estimasse a probabilidade de um determinado contacto ser o contacto decisor de um cliente. Por outras palavras, pretende-se que o modelo identifique o contacto da pessoa que decide a recusa ou aceitação de uma proposta, em nome de uma empresa. Para esse efeito, foi criada uma variável resposta binária, sendo que, foram testadas quatro formulações distintas da mesma, a partir da informação dos resultados de negócio. Este projeto teve por base metodologias de manipulação e modelação de dados, nas áreas de Estatística e Machine Learning, sendo implementado na linguagem de programação Python. Neste sentido, para cada formulação da variável resposta, efetuou-se uma comparação entre dois tipos de modelos, o Random Forest e o Gradient Boosting, ambos com otimização Bayesiana de hiper-parâmetros. Posteriormente, foi selecionado o modelo que apresentou melhores resultados e procedeu-se à validação dos respetivos outputs, em campanhas de telemarketing. Desta forma, verificou-se que que o modelo desenvolvido permitiu dar resposta ao desafio de identificar o contacto decisor, tendo-se revelado ser uma mais-valia para a empresa de telecomunicações em questão. Por conseguinte, o modelo garante ganhos de eficiência e taxa de decisão superior, em comparação com a metodologia anteriormente utilizada para contacto de clientes nos processos de negócio.

The objective of this project is to develop and test inclusive and participatory mixed methodologies that use biosensor data to plan and design healthy, convivial, and sustainable tourism, consumption and leisure areas.

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Este trabalho foi desenvolvido no âmbito do Mestrado em Ciências da Educação, especialidade em Educação e Formação de Adultos e Jovens pouco Escolarizados. A motivação para a escolha deste tema prende-se com questões profissionais, pois encontro-me a exercer as funções de profissional de RVC num Centro Novas Oportunidades. No decorrer da minha actividade profissional, incentivei sempre os adultos a apostarem na sua formação e ciente dessa necessidade constante, decidi, eu também, apostar na minha formação. Assim, e tendo vontade de aprofundar os meus conhecimentos na área da educação e formação de adultos, decidi realizar o presente Mestrado. No nosso país, os Centros de Reconhecimento, Validação e Certificação de Competências, actualmente designados por Centros Novas Oportunidades, e o processo de reconhecimento, validação e certificação de competências (RVCC), enquanto modalidade de educação e formação, assumem cada vez mais um papel de destaque no quadro da aprendizagem ao longo da vida. Este projecto é composto por três eixos: o primeiro eixo consiste numa reflexão pessoal sobre a minha experiência profissional no campo da educação e formação de adultos; o segundo é de natureza teórica, sobre a evolução da prática de reconhecimento de competências; o terceiro, de natureza empírica, reporta-se à construção de um guia orientador para a construção do portefólio reflexivo de aprendizagens (PRA) de nível básico. Esta experiência permitiu-me reflectir sobre a minha actividade profissional, fazendo um balanço do próprio processo, evidenciando os pontos fortes e os paradoxos existentes.

This presentation will analyse how participatory mobile biosensing can help identify affective geographies and sites of memory and inform urban and tourism planners about citizens’ emotional responses to the urban environment, hence contributing to the creation of spaces that increase people’s satisfaction, emotional engagement and well-being in cities. We will present and address the findings of UrBio – Making urban planning and design smarter with participatory mobile biosensing, an experimental project whose main goal is to develop and test participatory mixed methodologies that use biosensor data to plan and design tourism, consumption, and leisure areas following healthier, more convivial, and more sustainable perspectives. UrBio has included citizens from three different cities – Lisbon (Portugal), Warsaw (Poland), and Cuiabá (Brazil) – in the research process and has used wearable biosensor data in individual and pair transect walks to allow citizens to reflect upon the impact of the urban environment on their everyday experiences. By looking at the results of these transect walks and post-walk interviews, we will analyse how biosensing technologies provide insight into the emotional engagement of citizens with the urban environment through the identification of specific affective geographies and sites of memory, thus exploring how data provided by wearable biosensors can be used to enhance qualitative research on the experience of affective urban atmospheres. The results of this project show, indeed, that allowing subjects to interpret biosensing data creates moments of ‘bounded interference’ where individuals rethink their own experiences, yet retain an ‘agential super-position’ over the meanings of the data. UrBio provides an innovative perspective on the advantages of biosensing as a mixed-method research tool. We show how the elicitation of biosensors in interviews can spark in-depth reflection and discussions about aspects of the urban experience that often go unnoticed in conventional qualitative methods.

A videira (Vitis vinifera L.) é uma planta frutícola mundialmente cultivada, utilizada para vários fins, incluindo a produção de vinho, o consumo de frutos frescos, frutos secos e a produção de sumos. Originalmente nativa da região mediterrânica, da Europa Central e da Ásia Menor, a videira é atualmente cultivada em todo o mundo, com cerca de 7,3 milhões de hectares de área cultivada em 2022. A domesticação da videira começou há cerca de 7000-8000 anos, o que resultou numa diminuição da diversidade genética nas suas populações e num aumento da suscetibilidade a doenças, como o míldio e o oídio. O míldio da videira é causado pelo oomicete biotrófico obrigatório, Plasmopara viticola Berk. & M.A. Curtis (Berl. & De Toni), capaz de infetar todas as partes verdes da videira e causar perdas significativas nos rendimentos. Em condições favoráveis (temperatura elevada e humidade superior a 80%) e na presença de água, os zoósporos são libertados e deslocam-se para a superfície abaxial da folha. Os zoósporos formam uma hifa de penetração e um apressório para entrar no tecido vegetal, criando hifas e haustórios para extração de nutrientes e evasão de defesa por parte da planta. Esporângióforos são então formados pelo menos cinco dias após a infeção, possuindo esporângios com zoósporos que são dispersos em água na superfície abaxial da folha, dando início a infeções secundárias subsequentes (reprodução assexuada). Em condições secas, o patógeno diferencia oósporos que sobrevivem ao inverno. Os sintomas da doença manifestam-se por lesões circulares e amareladas nas folhas (“oil spots”) e esporulação branca na superfície abaxial da folha. Para resistir aos numerosos agentes patogénicos, as plantas possuem um sistema imunitário complexo para detetar e responder aos agentes patogénicos. O modelo zig-zag, proposto por Jones e Dangl em 2006, descreve as interações planta-patógeno como uma interação dinâmica. Esta interação envolve recetores de reconhecimento (PRRs) que reconhecem padrões moleculares associados a micróbios ou agentes patogénicos (MAMPs ou PAMPs). O reconhecimento bem sucedido desencadeia a PTI, que pode impedir a colonização por agentes patogénicos. Os agentes patogénicos, por sua vez, segregam moléculas efectoras para ultrapassar a PTI, conduzindo à ETS. A deteção das moléculas efectoras por parte de recetores específicos da planta desencadeiam, por sua vez, a ETI, caracterizada por uma resposta de defesa mais forte, incluindo espécies reativas de oxigénio (ROS) e influxo de cálcio. A ETI conduz frequentemente a uma resposta hipersensível (HR), uma morte celular programada localizada eficaz contra agentes patogénicos biotróficos. Durante esta interação, são trocados vários sinais moleculares entre a planta e o agente patogénico, entre as quais se encontram as proteases, proteínas responsáveis pela hidrólise de ligações peptídicas de outras proteínas. Recentemente, a sua importância tem sido investigada no contexto das interações planta-patógeno, tendo-lhes sido atribuído um papel importante na PTI, ETI, HR e outras respostas imunitárias. Adicionalmente, os agentes patogénicos libertam também proteases e inibidores de proteases a fim de manipular a imunidade do hospedeiro e exercer a sua virulência sobre o mesmo. Por estes motivos, aprofundar a compreensão dos mecanismos de ação de proteases é crucial no contexto da imunidade das plantas. As proteases estão divididas em várias classes, sendo as subtilases (SBT), proteases de serina, uma importante família de proteases em plantas. As SBTs contribuem para vários processos vegetais, incluindo a embriogénese, o desenvolvimento das sementes, a morte celular programada e as respostas a stresses bióticos e abióticos. Diferentes SBTs têm sido associadas a respostas imunes em diversas plantas, inclusive em videira na interação com P. viticola. Por exemplo, registou-se num cultivar tolerante de videira um aumento nos níveis de expressão do gene VviSBT4.19X1 após infeção por P. viticola, posteriormente, verificou-se também que esta era específica na resposta contra o P. viticola o que pode significar que esta proteína pode desempenhar um papel na imunidade. A compreensão dos mecanismos de ação da VviSBT4.19 X1 pode contribuir para um conhecimento mais profundo da interação entre a videira e o P. viticola. Para compreender o papel da VviSBT4.19 X1 na defesa da videira, é necessário identificar os seus parceiros de interação. Utilizando um yeast-two-hybrid assay, foram identificados potenciais interactuantes. Estas proteínas incluem, uma proteína com um domínio de hélice (CHCH), um fator de transcrição (TCP11), a subunidade Pcc1 do complexo KEOPS/EKC (Pcc1), a subunidade 5 do complexo de sinalização COP9 (CSN5) e a proteína relacionada com a autofagia (ATG8). Estas proteínas podem estar envolvidas em vários aspetos da defesa das plantas. Para validar estas interações, optou-se por utilizar a técnica de microscopia Föster resonance energy transfer – fluorescence lifetime imaging microscopy (FRET-FLIM). O FRET-FLIM é uma técnica de microscopia que consiste na medição da transferência de energia entre moléculas dadoras e aceitadoras muito próximas (menos de 10 nm) e do tempo de vida da fluorescência de uma molécula. O FRETFLIM permite a avaliação das interações proteína-proteína e pode fornecer informações sobre a sua dinâmica em tempo real. Esta técnica é valiosa para o estudo das interações entre plantas e agentes patogénicos. O principal objetivo deste projeto de tese de mestrado é investigar o papel da VviSBT4.19 X1 na imunidade da videira, identificando os seus interactuantes através de FRET-FLIM. Para tal, várias otimizações do protocolo de clonagem para todas as proteínas foram necessárias. O vector escolhido para o estudo de FRET-FLIM foi o pFRETgc-2in1-CC, pois foi descrito como sendo bom para expressão transiente em plantas e para a realização de FRET-FLIM. As open reading frames (ORF) de quatro possíveis interactuantes, TCP11, Pcc1, CSN5 e CHCH, foram clonados com sucesso no vetor pFRETgc-2in1-CC e nos vetores controlo pFRET.C.NOS. Quanto ao ATG8, apenas foi possível clonar a sua ORF em pDONOR221, impossibilitando a continuação do seu estudo. Relativamente à VviSBT4.19X1, e devido a desafios na sua clonagem no vector pFRET, o vector pGWB405 foi selecionado para a produção de proteína recombinante e estudos de localização subcelular, os resultados mostram que a clonagem foi também bem sucedida. Para estudar a localização subcelular tanto da SBT como dos seus interactuantes, folhas de N. benthamiana infiltradas com os diversos vetores foram observadas ao microscópio de fluorescência. O TCP11 mostrou uma acumulação de fluorescência no núcleo e no espaço extracelular. O facto desta proteína ser um factor de transcrição pode explicar a sua localização nuclear e a presença no espaço extracelular pode ser explicada pelo facto de esta interagir com PRR. Quanto ao Pcc1, este apresentou um padrão de fluorescência em forma de pontos espalhados pelo citoplasma, podendo representar vesículas, também observamos fluorescência no núcleo e no espaço extracelular. Esta proteína está envolvida no metabolismo de tRNA, podendo explicar a presença em diferentes compartimentos celulares. Relativamente ao CSN5, foi detetada fluorescência no citoplasma e no espaço extracelular, o que pode ser explicado devido ao envolvimento desta proteína na degradação de proteínas. Os padrões de fluorescência detetados para CHCH demonstram localização no citoplasma, também com um padrão em pontos, possivelmente indicando uma localização mitocondrial, foi também observado sinal de fluorescência no núcleo e no espaço extracelular. Já os estudos preliminares quanto à localização da VviSBT4.19 X1 mostraram fluorescência no núcleo e no espaço extracelular. Foi também detetado um padrão pontilhado no citoplasma, o resultado de uma possível acumulação da SBT em vesículas. Curiosamente, apenas foi observada fluorescência aquando da co-infiltração da VviSBT4.19 X1 com um inibidor específico, o pVit26. Estes dados revelam que VviSBT4.19X1 pode co-localizar no núcleo com TCP11, Pcc1 e CHCH e no espaço extracelular com os quatro interactuantes. Sabe-se que as proteínas com domínio CHCH podem estar envolvidas em vários processos na mitocôndria ligados a reações redox. Uma vez que a mitocôndria desempenha um papel fulcral na morte celular programada (PCD), associando-se também ao papel biológico de ROS, é possível que CHCH esteja envolvida no estabelecimento da HR, um fenómeno de PCD associado à resposta a patógenos. O papel de VviSBT4.19X1 pode consistir em contrariar a supressão da HR pelos agentes patogénicos, contribuindo assim para uma resposta imunitária mais robusta. A potencial interação entre VviSBT4.19X1 e TCP11 pode alterar a conformação deste fator de transcrição, influenciando a expressão de genes relacionados com a imunidade. A VviSBT4.19X1 também poderá facilitar a interação do TCP11 com PRRs e com o TCP15. A possível interação do Pcc1 e da VviSBT4.19X1 pode refletir um envolvimento desta SBT em processos relativos ao metabolismo de tRNA e de produção de proteínas. Finalmente a interação CSN5-VviSBT4.19X1 pode refletir um envolvimento desta proteína na degradação de proteínas e na resposta imunitária por ativação da via de defesa por ácido jasmónico. Todos estes resultados sugerem um papel importante da VviSBT4.19X1 durante as primeiras horas de interação videira-P. viticola. No futuro, será essencial confirmar efetivamente a interação entre a VviSBT4.19X1 e os seus interactuantes, bem como o significado biológico destas interações. Além disso, será importante aferir o papel biológico do inibidor Pvit26 na virulência de P. viticola.

Problem: Microscopy is a key tool for studying biological and physical systems, seeing beyond what is visible to the naked eye. However, optical imaging is often limited by the background signal in biological samples, the instability of fluorescence signal, and the difficulty of absolute quantification, which to some extent restrict its application. An alternative approach is the quantum magnetic sensor based on nitrogen-vacancy (NV) centers. Using this instrument, we are able to obtain magnetic images of cells immunologically targeted with magnetic nanoparticles (MNPs), providing exceptional detection sensitivity / of weak magnetic signals with resolution up to the nanometer level. Objectives: The purpose of this dissertation is to set up a quantum diamond microscope for optical magnetic imaging, and later modify and optimize it for biological applications e.g., with microfluidics or cell traps. In the last step, magnetically labelled cells will be imaged on this novel, quantum-based microscope. Materials and Methods: The instrument comprises a single diamond chip where the magnetic microparticles will be placed directly onto the diamond’s surface. A 532 nm excitation laser light illuminates the diamond chip, and optics collects nitrogen-vacancy fluorescence onto a camera. Permanent magnets were used to apply a bias magnetic field to the diamond and a planar, copper, round loop delivers microwaves to the diamond chip for NV control. Results and Discussion: We successfully build the quantum diamond microscope and gathered both brightfield and magnetic images of the magnetic microparticles. Due to some limitations of the instrument and little information of the microparticles, we did not advance to the magnetically labelled cells trials.

Cognitive faculty + socially and culturally construction • Memory as a politicised terrain • Selections and interpretations of the past • Creation of narratives of the self and identity (Staiger et al., 2009) • … places are composed not only of cultural heritage, but also of symbols and representations. A place is a discourse – a way of constructing meaning –, which influences and organizes both the actions of visitors and the conceptions of the local residents themselves. Visitors perceive images by producing meanings about a particular place with which they can identify. These are contained in the stories that are told about it; memories which connect its present with its past; and images which are constructed of it. (Groves and Go, 2009: 15)

Os museus se constituíram como espaço de resguardo e performance da memória e, a partir de funções essencialmente pedagógicas, atenderam às ideologias de suas épocas. À medida em que alguns museus enfrentam uma diminuição crescente no número de visitas, novas formas de atrair e reter os visitantes são propostas. Entretanto a adequação do espaço museológico ao contexto pós-moderno exige respostas mais complexas em âmbito teórico e prático. Por esse motivo, após uma revisão da literatura das teorias da cultura e comunicação - com destaque às práticas significantes e à teoria crítica, respetivamente - analisam-se estratégias que têm sido empregadas em museus para estreitar sua relação com o visitante e propõe-se um projeto para o Museu Nacional de Arte Contemporânea do Chiado (MNAC) com a finalidade de sugerir uma solução para um futuro em que a relação entre o museu e as pessoas seja mais íntima e ativa.

Antibiotic resistance is one of the main concerns of the scientific community for the future. There is a risk that antibiotic resistance can be disseminated through food production, namely by food consumption and/or direct contact with animals. Recycled manure solids are a kind of bed used for cows that has several advantages for the animal’s health and the producer's profit but has been associated with higher percentages of pathogens, which poses a risk to public health. Biochar is proposed as a possible sustainable solution to reduce pathogenic bacteria in this kind of bed. The goal of this work was to evaluate how the supplementation of recycled manure solids bedding with different percentages of biochar influence its Escherichia coli composition as well as to characterize the E. coli strains and evaluate bacterial diversity in the samples recurring to metagenomics. Samples of recycled manure solids were collected during the wet (April- May) and dry (JuneJuly) seasons and supplemented with 2.5%, 5%, and 10% biochar. From these samples E. coli was isolated and characterized and a metagenomics study was also performed. Recycled manure solids supplementation with biochar reduced E. coli counts for all wet season samples and for the dry season samples supplemented with 5% biochar. From the 42 representative isolates analyzed, 19% (n=8) showed resistance to ampicillin and 9.5% (n=4) to oxytetracycline, 31% (n=13) were biofilm-producers and all isolates presented a weak alpha-hemolytic activity. Moreover, the metagenomic analysis revealed that biochar supplementation reduced the relative abundance of some important pathogens for dairy cows. Further research is needed to assess biochar's broader impact on these pathogens and its implications for overall cow health.

Os quebra-mares desempenham um papel crucial na proteção costeira, garantindo a segurança das embarcações em portos e canais de navegação. Para avaliar o seu comportamento e planear a construção de novas estruturas, o Laboratório Nacional de Engenharia Civil (LNEC) utiliza modelos físicos 3D compostos por blocos de diferentes formas (cubos, antiferes e tetrápodes), tamanhos e cores, que simulam as condições reais de ondulação e correntes. Atualmente, a deteção de anomalias ou pontos fracos nessas estruturas, é feita com recurso a imagens óticas (IO) e imagens de profundidade (IP), capturadas antes e após o impacto das ondas. As alterações na superfície são identificadas por subtração de imagens ou seleção manual das faces dos blocos a serem avaliados. Esta dissertação propõe uma solução de segmentação semi-automática das faces dos cubos de forma a automatizar e melhorar a qualidade/velocidade do processo. Para obtenção dos dados foi utilizada a câmara RGB-D Kinect-V2, de modo a minimizar o custo. A metodologia utiliza os algoritmos Canny Edge Detector (CED) e Hough Transform (HT) para obter as arestas dos cubos. As arestas são posteriormente processadas para formar uma máscara que delimita as faces de cada bloco. Através da segmentação das IP com a máscara resultante da aplicação da metodologia às IO, é possível calcular o plano 3D que melhor se ajusta aos pontos de cada face e inferir o centro de massa de cada bloco. Os resultados obtidos demonstram os impactos positivos da segmentação semi-automática, utilizando técnicas de processamento digital de imagem, na melhoria da precisão e velocidade dos processos de monitorização de modelos físicos de quebramar. Esta abordagem contribui para aprimorar a eficiência e a precisão na avaliação/projeção de estruturas essenciais na proteção costeira.

In skeletal muscle tissue, the basement membrane lining the sarcolemma coats and protects myofibers from contraction-induced damage. A key component of this specialized structure is the Laminin-211 (LN211). Pathogenic mutations in the LAMA2 gene, which encodes the α2-chain of laminin-211, trigger a life-threatening and currently incurable disease, LAMA2-muscular dystrophy (LAMA2-MD). However, the classical gene therapy approaches are not feasible due to the size of the LAMA2 gene, which exceeds the packaging capacity of one of the most used viral vectors, the recombinant adeno-associated virus (rAAV). Instead of introducing the complete gene sequence into the cells, homology-directed repair (HDR) can theoretically correct the majority of pathogenic point mutations responsible for LAMA2-MD. Using the CRISPR/Cas9 system, we have established two C2C12 myoblast cell lines that carry point mutations in Lama2, which recapitulate the ones found in the dy2J/dy2J and dynmf417/dynmf417 mouse models for LAMA2-MD. Furthermore, the obtained single-cell clones were confirmed by nextgeneration sequencing (NGS) to be heterozygous for the intended mutations. The established cell lines were then characterized and had an impairment in myoblast differentiation and fusion into myotubes. The single-cell clone carrying the dynmf417 mutation was used to evaluate the reversion of the specific mutation with all-in-one rAAV vectors by HDR. The engineered vector encoded a smaller version of Cas9 from Neisseria meningitidis, Nme2Cas9, a single sgRNA and the HDR donor template. The rAAV production was also optimized and the AAV1 serotype was selected as the most suitable for the transduction of the C2C12 cells. The muscle-specific rAAV9:HDR system was not able to edit and revert the specific mutation in the Lama2 gene but gave critical insights into the best rAAV design strategies. This project will contribute to the development of a new therapeutic strategy targeting LAMA2-MD that will be preceded by the in vivo studies using the dy2J/dy2J mice.

To complete the master’s degree in Equipment Design, specializing in Urban and Interior Design, the present interior design project was developed, whose main objective is to apply the knowledge acquired academically in interior design, in the rehabilitation of the interior of the D. Miguel house, located in Queijas, Oeiras municipality, to perform functions of Local Accommodation for tourist purposes. This document is divided into four chapters, which describe the entire development of the project and the methodology used, as well as the justifications for the options taken and which contributed to the configuration of the interior space of the building. A reorganization and equipping of the interior space is proposed, as well as the selection and customization of equipment suitable for the functions and tailored to the architectural pre-existence, in this case aiming at functionality and comfort. This project aimed to develop T1 type housing for temporary or seasonal use (living room with integrated kitchen and a bedroom), with Scandinavian and functional design spaces using adaptive solutions, tending to be sustainable and incorporating home automation applications. Casa D. Miguel is a building with architectural features dating from the 19th century. XVIII, located in Queijas, Oeiras. It has a total implementation area of 301.25 m2, rectangular in plan, with two floors and a main facade comprising three doors on the ground floor for access to the street. The house is classified as a property of public interest and is currently very degraded and in danger of ruin