Repositório RCAAP

A colecistite aguda é um processo inflamatório da vesícula biliar. Associa-se em 90 – 95% dos casos à presença de litíase, com uma prevalência média de 18.5% na Europa. É uma doença multifatorial que se relaciona com fatores ambientais e genéticos. A litíase manifesta-se maioritariamente sob a forma de cólica biliar, mas pode complicar-se e levar a uma colecistite aguda. Para orientar a atitude clínica foram desenvolvidas as Guidelines de Tokyo em 2007, tendo sido recentemente atualizadas em 2013 e 2018. Estas guidelines estabelecem critérios de diagnóstico, de gravidade e orientações terapêuticas. A colecistite aguda é classificada em ligeira, moderada ou grave. A maioria das colecistites agudas resolve-se de forma conservadora, mas o tratamento definitivo é a colecistectomia que pode ser realizada por via aberta ou laparoscópica. A colecistectomia laparoscópica é o tratamento de eleição, apresentado mortalidade e morbilidade inferiores. O timing ideal para a realização da colecistectomia considera-se ser o mais precocemente possível. O objetivo deste trabalho é analisar o tratamento da colecistite aguda, tendo em conta o grau de gravidade, a duração dos sintomas e a opção terapêutica escolhida em relação a vários parâmetros: a mortalidade, a morbilidade, a duração do internamento, entre outros. A população estudada consistiu em 148 casos de doentes do Serviço de Cirurgia Geral do Hospital Santa Maria, maiores de 18 anos, internados com diagnóstico de colecistite aguda entre 01 de Janeiro de 2018 e 31 de Dezembro de 2018. Concluiu-se que, no geral, os resultados obtidos no estudo vão de encontro às guidelines de Tokyo de 2018, chegando mesmo a favorecê-las em relação às de 2013. Os resultados permitem concluir que a abordagem laparoscópica é superior à abordagem por via aberta. Em relação ao timing, a análise favorece maioritariamente as colecistectomias precoces.

Nos últimos anos, tem-se assistido a um crescente interesse na investigação das alterações climáticas e dos seus impactos, tanto no presente como no futuro. Em Portugal também têm sido desenvolvidos inúmeros trabalhos sobre o tema, abordando o aumento das temperaturas, a diminuição da precipitação, o aumento dos eventos extremos, entre outros tópicos. No entanto, a questão da aridez e da sua evolução acaba por não ser um dos temas mais tratados, apesar da sua importância para vários aspetos como na biodiversidade, cultura, economia e até no nosso modo de vida, sendo por isso o tema proposto para a realização deste trabalho. Para o estudo evolutivo da aridez em Portugal Continental foram estabelecidos dois períodos temporais, o período recente definido pelos anos 1971 a 2015, e o período futuro, pelo espaço de trinta anos entre 2041–2070. Utilizaram-se projeções climáticas de modelos regionais produzidos no âmbito do programa Euro-Cordex e consideraram-se dois patamares de estabilização de gases de efeitos de estufa, os conhecidos cenários RCP4.5 e RCP8.5. Adotaram-se quatro índices climáticos de aridez, nomeadamente, o Índice de Aridez de De Martonne, o Índice de Aridez de Emberger, o Índice de Aridez de Bagnouls-Gaussen e o Índice de Aridez de Thornthwaite. No caso do período recente, verificou-se a uma tendência de ligeiro aumento das condições de aridez para Portugal Continental, principalmente no sul do território. No entanto, esse incremento não foi muito expressivo, ainda que revelado pelos quatro índices usados, concretizando-se num aumento ligeiro da representação das classes de maior aridez. Para o período futuro, os cenários apresentam-nos um aumento generalizado das condições de aridez em Portugal Continental, sendo os maiores aumentos registados nas classes associadas a aridez mais marcada e quando se considera um dos modelos regionais utilizados (SMHI) e o cenário RCP8.5. Esta aumento projetado já para meados do século é muito significativo, antevendo-se que o agravamento do stress hídrico no território português possa ter efeitos a nível socioeconómico, na biodiversidade, no aumento dos incêndios florestais, entre outros problemas, suscitando a aplicação de medidas de adaptação e mitigação imediatas e nos próximos anos.

Importance: Patients with cerebral venous thrombosis (CVT) are at risk of recurrent venous thrombotic events (VTEs). Non-vitamin K oral anticoagulants have not been evaluated in randomized controlled trials in CVT. Objective: To compare the efficacy and safety of dabigatran etexilate with those of dose-adjusted warfarin in preventing recurrent VTEs in patients who have experienced a CVT. Design, setting, and participants: RE-SPECT CVT is an exploratory, prospective, randomized (1:1), parallel-group, open-label, multicenter clinical trial with blinded end-point adjudication (PROBE design). It was performed from December 21, 2016, to June 22, 2018, with a follow-up of 25 weeks, at 51 tertiary sites in 9 countries (France, Germany, India, Italy, the Netherlands, Poland, Portugal, Russia, and Spain). Adult consecutive patients with acute CVT, who were stable after 5 to 15 days of treatment with parenteral heparin, were screened for eligibility. Patients with CVT associated with central nervous system infection or major trauma were excluded, but those with intracranial hemorrhage from index CVT were allowed to participate. After exclusions, 120 patients were randomized. Data were analyzed following the intention-to-treat approach. Interventions: Dabigatran, 150 mg twice daily, or dose-adjusted warfarin for a treatment period of 24 weeks. Main outcomes and measures: Primary outcome was a composite of patients with a new VTE (recurrent CVT, deep vein thrombosis of any limb, pulmonary embolism, and splanchnic vein thrombosis) or major bleeding during the study period. Secondary outcomes were cerebral venous recanalization and clinically relevant non-major bleeding events. Results: In total, 120 patients with CVT were randomized to the 2 treatment groups (60 to dabigatran and 60 to dose-adjusted warfarin). Of the randomized patients, the mean (SD) age was 45.2 (13.8) years, and 66 (55.0%) were women. The mean (SD) duration of exposure was 22.3 (6.16) weeks for the dabigatran group and 23.0 (5.20) weeks for the warfarin group. No recurrent VTEs were observed. One (1.7%; 95% CI, 0.0-8.9) major bleeding event (intestinal) was recorded in the dabigatran group, and 2 (3.3%; 95% CI, 0.4-11.5) (intracranial) in the warfarin group. One additional patient (1.7; 95% CI, 0.0-8.9) in the warfarin group experienced a clinically relevant non-major bleeding event. Recanalization occurred in 33 patients in the dabigatran group (60.0%; 95% CI, 45.9-73.0) and in 35 patients in the warfarin group (67.3%; 95% CI, 52.9-79.7). Conclusions and relevance: This trial found that patients who had CVT anticoagulated with either dabigatran or warfarin had low risk of recurrent VTEs, and the risk of bleeding was similar with both medications, suggesting that both dabigatran and warfarin may be safe and effective for preventing recurrent VTEs in patients with CVT.

Adenosine is an endogenous anticonvulsant and neuroprotectant of the brain. Seizure activity produces large quantities of adenosine, and it is this seizure-induced adenosine surge that normally stops a seizure. However, within the context of epilepsy, adenosine plays a wide spectrum of different roles. It not only controls seizures (ictogenesis), but also plays a major role in processes that turn a normal brain into an epileptic brain (epileptogenesis). It is involved in the control of abnormal synaptic plasticity and neurodegeneration and plays a major role in the expression of comorbid symptoms and complications of epilepsy, such as sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). Given the important role of adenosine in epilepsy, therapeutic strategies are in development with the goal to utilize adenosine augmentation not only for the suppression of seizures but also for disease modification and epilepsy prevention, as well as strategies to block adenosine A2A receptor overfunction associated with neurodegeneration. This review provides a comprehensive overview of the role of adenosine in epilepsy.

Extracellular vesicles (EVs) are small membrane vesicles released by all cells and involved in intercellular communication. Importantly, EVs cargo includes nucleic acids, lipids, and proteins constantly transferred between different cell types, contributing to autocrine and paracrine signaling. In recent years, they have been shown to play vital roles, not only in normal biological functions, but also in pathological conditions, such as cancer. In the multistep process of cancer progression, EVs act at different levels, from stimulation of neoplastic transformation, proliferation, promotion of angiogenesis, migration, invasion, and formation of metastatic niches in distant organs, to immune escape and therapy resistance. Moreover, as products of their parental cells, reflecting their genetic signatures and phenotypes, EVs hold great promise as diagnostic and prognostic biomarkers. Importantly, their potential to overcome the current limitations or the present diagnostic procedures has created interest in bladder cancer (BCa). Indeed, cystoscopy is an invasive and costly technique, whereas cytology has poor sensitivity for early staged and low-grade disease. Several urine-based biomarkers for BCa were found to overcome these limitations. Here, we review their potential advantages and downfalls. In addition, recent literature on the potential of EVs to improve BCa management was reviewed and discussed.

Regulatory T cells (Tregs) are essential for the maintenance of tolerance to self and non-self through cell-intrinsic and cell-extrinsic mechanisms. Peripheral Tregs survival and clonal expansion largely depend on IL-2 and access to co-stimulatory signals such as CD28. Engagement of tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily members, in particular TNFR2 and DR3, contribute to promote peripheral Tregs expansion and sustain their survival. This property can be leveraged to enhance tolerance to allogeneic transplants by tipping the balance of Tregs over conventional T cells during the course of immune reconstitution. This is of particular interest in peri-transplant tolerance induction protocols in which T cell depletion is applied to reduce the frequency of alloreactive T cells or in conditioning regimens that allow allogeneic bone marrow transplantation. These conditioning regimens are being implemented to limit long-term side effects of continuous immunosuppression and facilitate the establishment of a state of donor-specific tolerance. Lymphopenia-induced homeostatic proliferation in response to cytoreductive conditioning is a window of opportunity to enhance preferential expansion of Tregs during homeostatic proliferation that can be potentiated by agonist stimulation of TNFR.

Nos dias de hoje, em pleno século XXI, seria impensável submeter-nos a um procedimento mais invasivo sem antes nos assegurarmos, através do uso de anestésicos, que o mesmo seria indolor. No entanto, nem sempre foi assim – antes da descoberta da anestesia, os procedimentos cirúrgicos assemelhavam-se a verdadeiros cenários de tortura para o doente. Felizmente, atualmente essa não é uma preocupação, graças à curiosidade, inteligência e estudo dos clínicos que desenvolveram a utilização de anestésicos inalados para este fim. Mantém-se ainda hoje a controvérsia de a quem seria de atribuir a autoria dessa descoberta – se ao dentista Dr. Morton, que foi o primeiro a demonstrar publicamente e posteriormente publicar os resultados da utilização com sucesso anestésico do gás éter durante um procedimento cirúrgico, ou ao médico de família rural Dr. Long, que conseguiu provar que, anos antes de Dr. Morton, já ele teria usado o mesmo anestésico com sucesso em pequenos procedimentos cirúrgicos por ele executados. Independentemente da autoria, sabemos que estes e outros clínicos e químicos foram indispensáveis para o desenvolvimento desta especialidade, como o Prof. Jackson, que sugeriu a utilização de éter a Dr. Morton, o obstetra Dr. Simpson que utilizou pela primeira vez clorofórmio como gás anestésico e tantos outros que deram os seus inestimáveis contributos. Outros procedimentos de grande importância desenvolvidos foram a traqueostomia e a entubação endotraqueal. Desde as primeiras tentativas de realização de traqueostomia na Idade do Bronze, à utilização de tubos de diversos materiais, e desenvolvimento de laringoscópios, até aos dias de hoje, houve inúmeras modificações e clínicos envolvidos. Destes, destacam-se o pediatra Dr. O’Dwyer, que utilizou tubos de metal na via aérea de crianças com difteria, o cirurgião Dr. Kuhn que utilizou pela primeira vez cocaína para anestesiar localmente a via aérea dos doentes entubados, os médicos Dr. Guedel e Dr. Waters que adicionaram um cuff aos tubos de entubação, o que permitiu a ventilação de pressão positiva, e o anestesista Dr. Jackson, Dr. Miller e Dr. Macintosh que desenvolveram laringoscópios e técnicas de laringoscopia, algumas delas ainda hoje utilizadas.

Este trabalho, intitulado “Extracção líquido-líquido de Fe(III) de soluções aquosas cloretadas por amidas gordas N,N-dissubstituídas” teve como objectivo avaliar a capacidade que algumas amidas N,N-dissubstituídas apresentam para extrair iões Fe(III) de soluções de HCl, assim como avaliar a sua capacidade para reextraírem e de serem selectivas relativamente ao mesmo ião metálico. O método de análise e quantificação metálica utilizado foi a espectroscopia de absorção atómica (AAS). As amidas N-fenil-N-etiloctanamida (NFNE), N-fenil-N-metildodecanamida (NFNM), N-ciclohexil-N-etiloctanamida (NCNE) e N-ciclohexil- N-metildodecanamida (NCNM) foram sintetizadas, caracterizadas e utilizadas como extractantes neste trabalho. Efectuaram-se ensaios de extracção utilizando diferentes concentrações de ácido clorídrico, e de reextracção com água destilada. Os estudos realizados com as quatro amidas sintetizadas, e a comparação dos resultados obtidos com os das amidas N-fenil-N-metiloctanamida (NFNM1) e N- ciclohexil-N-metiloctanamida (NCNM1), já conhecidos, permitiu determinar que as amidas com grupo ciclohexilo são melhores extractantes de Fe(III), considerando a gama total de concentrações de HCl estudada; no entanto, são as amidas com grupo fenilo que são reextraídas com maior eficiência. Do mesmo modo, verifica-se que as amidas com cadeias mais curtas extraem melhor, mas são as amidas com cadeias mais compridas que apresentam maior selectividade para o Fe(III). Considerando a gama de concentrações estudada, os dados de equilíbrio obtidos com as amidas NCNE e NCNM sugerem que a estequiometria das espécies amida:Fe(III) não é fixa. A determinação dos volumes molares para as soluções orgânicas das várias amidas permitiu concluir que a NCNM apresenta tendência para se agregar em solução. Pelos dados obtidos por aplicação de 1H NMR, observou-se que as amidas sintetizadas parecem não apresentar tendência para se protonarem. Para as quatro amidas estudadas neste trabalho, o diluente 1,2-DCE pode ser substituído por tolueno, desde que se utilizem concentrações de HCl superiores a 8 M como fase aquosa inicial.

Este artículo tiene por objeto explorar las claves que atraviesan la obra plástica de Juan Fernando de Laiglesia (Madrid, 1946). Partiremos del análisis de las convergencias formales y conceptuales entre algunas de sus obras más recientes para llegar a caracterizar el universo de este autor. Profundizaremos también en su proceso de trabajo, íntimamente ligado a la reflexión conceptual. Veremos como su particular modo de hacer se ha traducido en un particular modo de dedicarse a la construcción de pensamiento desde y para el Arte.

The Neolithic site of Casas Novas (Coruche, Portugal) has provided the earliest evidence of Neolithic occupation currently known on the left bank of the Tagus River. The material culture and the radiocarbon date show an occupation that fits in the earliest moments of the regional Neolithic. The typological and decorative characteristics of the ceramic assemblage show contacts and influences both from Mediterranean and the Iberian Meseta. In order to determine the origins of the raw materials and to reconstruct the manufacture sequence, 26 ceramic samples were selected for petrographic analysis. The archaeometric analysis shows local and regional procurement strategies, which can be related to seasonal settlement patterns and exploitation of estuarine resources. The data provided by the research offers the possibility to analyze ceramic technology within a community which is still in the process of consolidating a new way of life, and how these circumstances may have influenced technological choices and potter’s practice.

Objetivo: Avaliar a eficácia de uma técnica de branqueamento in office com um verniz paint-on de 6% de Peróxido de Hidrogénio, utilizando dois tipos diferentes de isolamento relativo. Materiais e métodos: Doze pacientes foram selecionados de acordo com critérios de inclusão e exclusão, sujeitos a uma consulta de profilaxia oral e distribuídos aleatoriamente por dois grupos. Uma técnica de branqueamento in-office foi realizada (VivaStyle Paint On PIus, lvoclarVivadent®, Liechtenstein), com dois tipos de isolamento relativo: Grupo 1 – Vaselina; Grupo 2: Resina block-out. A eficácia de branqueamento foi avaliada através dos valores de ΔE00 e ΔWID, calculados a partir dos valores de CIE L*a*b* obtidos pela análise espetrofotométrica (SpectroShade). Os resultados foram expressos como média e desvio padrão de valores CIE L*a*b* e respetiva diferença. Os testes de Wilcoxon e U de Mann-Whitney foram utilizados de forma a avaliar as diferenças de CIE L*a*b* e WID após o branqueamento em cada grupo e as diferenças de ΔE00 e ΔWID entre os grupos com um nível de significância de α=0,05. Foram considerados os limiares de percetibilidade e aceitabilidade para ΔE00 de 0,8 e 1,8 e para ΔWID 0,72 e 2,60, respetivamente. Resultados: Ambos os grupos apresentaram diferenças estatisticamente significativas (P<0.01) nos valores de CIE L*a*b* e WID após o branqueamento. O grupo 1 apresentou valores globais de ΔE00 e ΔWID 2,43±1,00 e 6,79±3,24 respetivamente e o grupo 2 ΔE00=3,69±1,51 e ΔWID=9,35±4,05 sendo estatisticamente superior (P<0.01). Conclusão: A técnica de branqueamento com verniz paint-on de 6% de peróxido de hidrogénio foi eficaz nos dois grupos, no entanto os resultados sugerem que o tipo de isolamento relativo utilizado interfere na eficácia da mesma . É recomendada a realização estudos adicionais com tamanhos amostrais superiores.

Introdução: A gengivite caracteriza-se por uma inflamação gengival induzida pela presença de placa bacteriana. A forma mais eficaz de controlo da placa bacteriana é através de corretos hábitos de higiene oral, como a escovagem e o controlo de placa bacteriana interproximal. A utilização de elixires, pode atuar de forma coadjuvante e complementar os efeitos mecânicos da escovagem e do fio dentário. Objetivo: Avaliar o efeito da utilização de um elixir com flúor e 0,05% de cloreto de cetilpiridínio - Colgate® Plax, após escovagem dentária, no controlo da acumulação de placa bacteriana e no tratamento da inflamação gengival após um período de 15 dias de utilização. Materiais e métodos: Foi realizado um ensaio clínico em 8 participantes voluntários, alunos de 4º e 5º anos do curso de Mestrado Integrado em Medicina Dentária da FMDUL. Todos os participantes realizaram uma consulta, onde, inicialmente, foram registados os valores dos índices de placa bacteriana de Quigley e Hein (1962), modificado por Turesky et al. (1970) e os valores do índice gengival de Löe & Silness (1963) para avaliação do estado de inflamação gengival. De seguida, realizou-se profilaxia para remoção da placa bacteriana e cálculo existente. Após o exame inicial, os participantes foram orientados para realizarem a escovagem com um de dois protocolos: (a) o dentífrico - Colgate® Total® ou (b) dentífrico - Colgate® Total® e elixir - Colgate® Plax durante um período de 15 dias. No fim deste tempo foi feito novo registo dos valores dos índices. Resultados: Os resultados deste estudo demonstraram uma diminuição estatisticamente significativa na redução da placa bacteriana (p=0,029) e da gengivite (p=0,029) com a utilização do elixir com 0,05% de CPC. Conclusão: A utilização de um elixir com flúor e 0,05% de CPC, após escovagem, demonstrou ser eficaz na redução da acumulação da placa bacteriana e da gengivite.

Num contexto histórico, a frequência de gestações trigemelares atingiu o seu auge nos finais do século XX e diminuiu significativamente a partir de então, registando-se atualmente uma frequência de 0,2 por 1000 grávidas. Atualmente, os grandes fatores etiológicos que estão na origem da trigemelaridade são o adiamento da maternidade e o recurso a técnicas de procriação medicamente assistida. De entre as possíveis complicações obstétricas, é de salientar a prematuridade, como a principal, seguida da pré-eclâmpsia, anemia, e diabetes gestacional. Do conjunto de possíveis complicações fetais, destacam-se as malformações, o compromisso do crescimento e a morte fetais. Pode ainda falar-se de riscos intrínsecos à monocorionicidade, tais como a Síndrome de Transfusão Feto Fetal, Twin Anemia Policythemia Syndrome, ou Twin Reversed Arterial Perfusion; e outros exclusivos da monoamnionicidade, como o enrolamento dos cordões umbilicais. Atendendo à multiplicidade de variáveis que acompanham a progressão e desfecho destas gestações de risco, é pertinente que a sua abordagem seja individualizada e intensiva com promoção da prevenção e terapêutica precoces, de modo a otimizar o prognóstico da grávida e de cada um dos fetos.

Identifying the opportunities and barriers of promoting and fulfilling the sexual health rights of migrants remains a challenge that requires systematic assessment. Such an assessment would include estimating the influence of acculturation processes on sexual and reproductive health, and mapping intersectional inequities that influence migrants’ sexual and reproductive health in comparison with the native population. The aim of this research was to locate, select, and critically assess/summarize scientific evidence regarding the social, cultural, and structural factors influencing migrants’ sexual and reproductive health outcomes in comparison with native population. An umbrella review of systematic reviews and/or meta-analyses, following preferred reporting items for systematic reviews and meta-analysis (PRISMA) standards was undertaken. Medline, Scopus, Web of Science, and the Cochrane Database of Systematic Reviews were searched from their start date until June 2019. The quality of the included articles was determined using the assessment of multiple systematic reviews tool (AMSTAR 2). From the 36 selected studies, only 12 compared migrant with native populations. Overall, the findings indicated that migrants tend to underuse maternal health services and have an increased risk of poor sexual and reproductive health outcomes. Specific intersectional inequities were identified and discussed.

The physical therapy profession has been severely affected by the crisis. In Portugal, regulatory rules have determined that only “urgent” care should be provided for the duration of the pandemic—leaving each physical therapist with the discretionary power to determine which cases could benefit the most from their intervention. Although many may recognize the benefit of physical therapy in the face of this infection, many cases may fall into a gray area, resulting in asymmetrical accessibility to care.

Objetivos: Avaliar o comportamento celular de fibroblastos (HGF-hTERT) em superfícies de Zircónia texturizadas por laser Nd:YAG comparativamente com superfícies convencionalmente texturizadas por jateamento e ataque ácido. Métodos: Prepararam-se discos de Zircónia e distribuíram-se aleatoriamente pelos grupos em estudo (N=12): sem tratamento (Grupo A); jateamento e ataque ácido (Grupo B); texturização por laser Nd:YAG espaçamento de 10 µm/ 10 passagens (Grupo C); texturização por laser Nd:YAG espaçamento de 20 µm/1 passagem (Grupo D). Cultivaram-se HGF-hTERT nestas superfícies. A viabilidade celular foi avaliada aos 1, 3 e 7 dias usando um método à base de resazurina. A morfologia e adesão celulares foram analisadas por microscopia de fluorescência e microscopia eletrónica de varrimento (FEG-SEM) aos 1 e 3 dias. A produção de interleucina 6 (IL-6) e interleucina 1β (IL-1β) foi medida aos 1 e 3 dias por ensaios enzimáticos de imunoabsorção (ELISA). Os resultados foram apresentados como média ± desvio padrão. Realizaram-se comparações entre grupos por ANOVA unidirecional e de medidas repetidas (teste post-hoc de Tukey) usando um software de estatística. A significância foi definida como p<0,05. Resultados: A viabilidade celular aumentou ao longo do tempo para todos os grupos. Aos 1 e 7 dias verificaram-se valores de viabilidade significativamente superiores no Grupo C comparativamente ao Grupo B (p<0,05). As imagens de microscopia revelaram adesão em ambos os tempos, com morfologia normal e prolongamentos celulares sobre as superfícies de todos os discos. Observou-se um maior número de células aderidas nos Grupos C e D do que nos outros grupos, em ambos os tempos. Não foram observadas diferenças na produção de IL- 6 e IL-1β entre os grupos em estudo (p>0,05). Conclusões: As superfícies implantares de Zircónia texturizadas por laser parecem beneficiar a resposta de fibroblastos comparativamente a superfícies tratadas com jateamento e ataque ácido. Mais estudos devem ser realizados para validar esta técnica de texturização.

Vitamin D is a fat-soluble hormone that plays a significant role in calcium-phosphate metabolism, in addition to intervening in cell metabolic activity, immune regulation, among other functions. Vitamin D is synthesized in skin epithelium under ultraviolet B (UVB) radiation. It then undergoes two successive hydroxylations in the 25- and 1- carbons, in the liver and in the kidney, respectively, to yield the active form, calcitriol. A minor portion of vitamin D is obtained from alimentary sources.

A síndrome Crigler-Najjar tipo 1 (SCN1) é uma doença rara caracterizada por uma hiperbilirrubinémia não conjugada grave desde o nascimento. Esta doença é causada pela ausência da atividade da enzima uridine diphosphate-5´-glucuronosyltransferase type 1 (UGT1A1), essencial para a conjugação e excreção da bilirrubina. Estes doentes têm um risco elevado de desenvolver kernicterus pela acumulação de bilirrubina não conjugada no sistema nervoso central, nomeadamente nos núcleos da base. Apesar da fototerapia ser eficaz na redução dos níveis séricos de bilirrubina, esta torna-se menos eficaz na adolescência, aumentando o risco nesta fase. Atualmente, o transplante hepático é o único tratamento com potencial curativo para esta síndrome. No entanto, apresenta desvantagens como o custo, a disponibilidade limitada de dadores, a imunossupressão prolongada e o potencial de rejeição do enxerto. O transplante de hepatócitos é uma alternativa terapêutica menos invasiva. Todavia, este procedimento tem um efeito terapêutico transitório e, requer igualmente dadores e terapêutica imunossupressora prolongada. Desta forma, a exploração de estratégias terapêuticas alternativas para esta doença é necessária, destacando-se o transplante de células estaminais e a terapia génica. O crescente interesse nas células estaminais é baseado no seu potencial de se diferenciarem em hepatócitos que são posteriormente infundidos no fígado do doente para corrigir o defeito metabólico. Na terapia génica, o gene deficiente é substituído por um normal, permitindo a produção da enzima UGT1A1 e, consequentemente, a prevenção da progressão da doença. Nos últimos anos foram desenvolvidas várias estratégias de terapia génica no modelo animal da SCN1, o rato Gunn, através da utilização de vetores virais e não virais. A terapia génica pode ser permanente, alcançando a cura desta doença. Ainda assim, neste momento, algumas adversidades como a segurança a longo prazo e a toxicidade associada ao vetor utilizado, limitam a sua aplicação clínica no humano.

Bacteriophages (phages), the most abundant entities in the biosphere, play a central role in the shaping of natural populations of bacteria. Phages have also been the focus of several studies due to their potential as tools for therapeutic purposes. Notably, detailed analysis carried out in different bacterial species established that phages have a prominent influence in virulence. The abundance of lysogenic phages in Streptococcus pneumoniae isolates associated with infection was suggested some years ago, and recently, it has been proposed that lysogens account for as much as 76% of the samples analyzed. However, the role of pneumococcal prophages in the pathogenic potential of its host remains so far unknown. Bacterial lysis promoted by the major autolysin LytA has been implicated in the capacity of pneumococcus to cause infection, essentially due to the release of proinflammatory cell wall compounds and intracellular virulence factors. Even if no phage-encoded virulence factors were ever found, prophage-mediated host lysis by itself may contribute significantly to pneumococcal pathogenesis. Therefore, investigating the phage lysis system is clearly important in furthering our understanding of this effect. This work explores the exact mechanism underlying the lysis strategy of S. pneumoniae phages to release their progeny and also the implications of lysogeny, particularly due to induced cell lysis, in the host ability to form biofilms, a bacterial lifestyle associated with pneumococcal human infections. Pneumococcal phages lyse their bacterial hosts, and consequently release the newly formed phage particles, at the end of the vegetative cycle through the combined action of holins that form lesions in the cytoplasmic membrane and lysins that degrade the bacterial peptidoglycan. The powerful lytic activity of the S. pneumoniae autolysin raised the possibility that it could play an important role in this process. By deleting the bacterial and phage lysins in both lysogenic and lysogenized strains, the contribution of LytA to phage release was evaluated based on bacterial culture lysis monitoring and phage plaque assays. It was found that, independently of the host genetic background, the bacterial autolysin is activated during phage-mediated lysis. Flow cytometry assessment of the membrane integrity after phage induction revealed that LytA triggering results from holininduced membrane disruption, similarly to the activation of the phage lysin. These results provide evidence that the energy status of the membrane may be involved in autolysin regulation at the cell surface. 3 We were able to demonstrate that, in the absence of the phage lytic enzyme, LytA by itself mediates extensive bacterial lysis, accompanied by the release of a large amount of fully functional phages capable of completing their life cycle since phage plaques were clearly detected. The overwhelming majority of phages of other bacterial species are absolutely incapable of bacterial lysis, trapping the phage progeny within the host cell, when the genes encoding lysins are deleted. Moreover, those rare mutants that bring about lysis depend only on phage-encoded factors. Nevertheless, exclusive dependence on the autolysin delayed the lysis timing and reduced the lysis extent. Accordingly, phage plaques were detected later than those in the presence of both host and phage lysins and a significant decrease on the number of virions released was observed. Therefore, lysis strictly dependent on LytA can lead to phage fitness impairment by retaining phage progeny longer within the host and reducing the amount of particles that actually escapes from entrapment. Nonetheless, under normal conditions, it was found that the concurrent activation of LytA with the phage lysin increases the total number of phages that exit the cell when the infective cycle is completed. Hence, pneumococcal phages use the ubiquitous host autolysin to accomplish an optimal phage exiting strategy and are unique among lysin-equipped phages in their dependence on bacterial lytic factors to achieve such task. Although the function of holin and phage lysin is characterized, the interplay between them to achieve lysis in S. pneumoniae was never fully determined. It has been shown that pneumococcal phage lysins are structurally and functionally similar to LytA, thus, they may share the same cellular localization and control mechanisms. Our finding that holin-induced membrane lesions trigger the bacterial cell wall autolysin prompted a deeper study of the pneumococcal lysis strategy. For this purpose, deletions of the holin and autolysin were performed in a lysogenic strain, in which the resident phage has a typical holin-lysin cassette. In the absence of these functions, western blot analysis and the effect of membrane permeabilizing and proton motive force (pmf)-dissipating agents on culture lysis allowed concluding that pneumococcal phage lysins accumulate with time across the lytic cycle and are continuously targeted to the cell wall. The phage lysin remains inactive associated with the choline residues within this structure. Therefore, the access of pneumococcal phage lysins to the bacterial surface is holin independent, hence they can be classified as exolysins. These findings are in contrast to what is observed in the large majority of holin-lysin phages where endolysins accumulate in the cytoplasm since they lack an intrinsic secretory signal sequence and consequently depend on holins to reach the peptidoglycan target. In addition, the involvement of the host Sec pathway in the phage lysin export was investigated. We assessed the cell wall localization of the phage 4 lysin by the same experimental procedures after culture treatment with the Sec inhibitor sodium azide. It was found that the phage lytic enzyme is possibly exported by the Sec system of pneumococci in spite of the striking absence of a signal sequence that could target it to the extracytoplasmic environment. This may constitute the first evidence, on phages encoding only holins and lysins in their lytic cassettes, of an exolysin without a secretion signal that is translocated through the membrane by the host Sec machinery. Furthermore, since the cell wall located autolysin also lacks obvious motifs or signals for an external localization, these results may provide clues for its transport mechanism. Dependence exclusively on the pmf-dissipating agent for complete host lysis, together with the previous observation of holin’s permeabilizing effect, showed that collapse of the cytoplasmic membrane electrochemical gradient achieved by the holins is the triggering signal to activate the phage lysin. In this study, it was further confirmed that activation of the externalized bacterial autolysin LytA, previously shown to contribute to phage progeny release, is also equally related to perturbations on the energized membrane. Thus, these results demonstrate that in S. pneumoniae phages, holin is not required for lysin export but is crucial to trigger the phage and bacterial lysins already residing in the cell wall by pmf dissipation upon formation of lesions on the membrane. In this regard, holins are the timing device that dictates when lysis takes place. After the characterization of the phage lytic mechanism, the contribution of lysis mediated by lysogenic phages to pneumococcal biofilms was investigated. S. pneumoniae lysogens are associated with human infections and pneumococcal biofilms have been implicated both in colonization and infection. It was explored if prophage spontaneous induction and consequent bacterial lysis enhance pneumococcal biofilm development providing a source of extracellular DNA (eDNA), a major factor in the biofilm matrix. Monitoring biofilm growth of lysogens and nonlysogenic bacteria by biomass quantification, viable cell counts and confocal laser scanning microscopy (CLSM), indicated that lysogenic bacteria are more prone to form biofilms, yielding structures with higher biomass and cell viability and showing denser biofilms in CLSM. Spontaneous phage induction was demonstrated to occur continuously as phages could be detected throughout biofilm formation through measurement of the total number of PFUs (plaque forming units) at specific time points. When comparing biofilm development between wild-type lysogens and those deleted in the phage lysin, bacterial autolysin LytA or both lysins, it was observed that phagemediated lytic events influence positively the biofilm structure. These results established that prophage promotes biofilm development due to bacterial lysis upon spontaneous induction. In 5 agreement, lysis inside biofilms also occurs in other bacterial species and it might be related to increased biofilm fitness. However, the effects created by the ablation of either the phage or bacterial lysins were overcome by the addition of external DNA. Additionally, in independent experiments, it was found that treatment with DNase I resulted in sparser and thinner biofilms while supplementation with DNA resulted in a thicker and more densely packed structure, confirming the important role of eDNA in pneumococcal biofilms. The quantification of eDNA released within these structures by real-time PCR also supported that lytic events promoted by phage are an important source of this matrix component, as biofilms of lytic strains contained more eDNA than those of nonlytic strains. Therefore, limited phage-mediated host lysis constitutes an important source of eDNA in S. pneumoniae biofilms favoring biofilm formation by lysogenic strains. Interestingly, massive phage induction leading to a high proportion of lysis was observed to disrupt severely biofilms of pneumococcal lysogens with a significant decrease in biofilm mass confirmed by CLSM visualization. These findings corroborate previous studies that show the potential use of lytic phages to destroy bacterial biofilms. The presented results and conclusions are of great value not only to directly increase our knowledge on phage biology and their relationship with the host bacteria, but ultimately to uncover the role of lysogeny in pneumococcal virulence. In this context, massive prophageinduced lysis of the host could mimic the major bacterial autolysin by releasing factors known to contribute to the course of infection. On the other hand, lysis due to spontaneous levels of induction, characteristic of prophage carriage, may have an impact in pathogenesis by enhancing S. pneumoniae biofilm formation, which has been implicated in the processes of colonization and disease. A deeper understanding of the mechanisms underlying pneumococcal infection is of vital significance to manage this important human pathogen.

A Vertigem Posicional Paroxística Benigna (VPPB) é considerada a principal causa de vertigem nos adultos, sendo uma patologia frequente na prática clínica. No ouvido interno, nomeadamente nas ampolas dos canais semicirculares (CSC), encontram-se presentes otocónias (cristais de carbonato de cálcio) necessárias para a orientação da cabeça relativamente à gravidade. Associado ao envelhecimento, verifica-se a degradação com fragmentação destes cristais e o seu posterior deslocamento para os CSC, mais frequentemente o canal semicircular posterior (CSCp). Nesta situação, ao mexer a cabeça, pode ocorrer mobilização das otocónias provocando uma sensação ilusória de rotação (vertigem). Na maioria dos casos, o diagnóstico é feito pela história clínica e pela realização ao exame objetivo da manobra de Dix-Hallpike na qual se verifica a presença de nistagmo. O tratamento passa pela execução da manobra de Epley, Semont ou outra, conforme o CSC afetado. Nos últimos anos tem vindo a ser realizada a associação entre VPPB, a sua recorrência e a osteoporose. São apresentados os resultados e conclusões de vários estudos que procuraram associar estas temáticas. A conclusão deste trabalho é de que a osteoporose é um fator de risco para o desenvolvimento de VPPB, não sendo possível fazer a mesma associação para a recorrência da VPPB.