RCAAP Repository

Apesar dos avanços notáveis no tratamento da insuficiência cardíaca (IC), esta continua a ser uma das principais causas de mortalidade e de morbilidade nas sociedades ocidentais. Os inibidores do co-transportador de sódio e glucose 2 (iSGLT2), uma nova classe terapêutica projetada inicialmente para reduzir a glicémia em doentes com diabetes mellitus do tipo 2 (DM2), emergiram como uma abordagem terapêutica promissora na IC. Os ensaios clínicos de segurança cardiovascular (ECSC) mostraram que os iSGLT2 reduziram consistentemente e de modo significativo os internamentos por IC em doentes com DM2. Estes resultados geraram uma intensa investigação no sentido de elucidar os mecanismos subjacentes a este efeito. No mesmo sentido, os iSGLT2 reduziram a progressão de doença renal nos ensaios clínicos. Recentemente a evidência clínica e a farmacologia dos iSGLT2 sugerem que a proteção cardio-renal conferida por estes fármacos é independente do seu efeito sobre a glicemia. Este percurso de investigação clínica culminou na realização de ensaios clínicos em doente com IC com e sem DM2, tendo sido confirmado o seu efeito terapêutico independente da diabetes. Esta revisão abrangente sumariza a evidência clínica e os dados de segurança que apoiam a utilização dos iSGLT2 na IC e procura esclarecer os efeitos hemodinâmicos, metabólicos e celulares subjacentes à proteção demonstrada pelos iSGLT2 nesta patologia, independentemente da presença de DM2.

De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) as doenças cardiovasculares são a principal causa de mortalidade e morbilidade no mundo. Em situações patológicas, quando o sistema hemostático é incapaz de manter o seu equilíbrio, ocorre trombose, a formação de coágulos (trombos) na circulação levando a obstrução do fluxo sanguíneo. Estes trombos são parte da patologia que define o acidente vascular cerebral (AVC) isquémico e outras doenças trombóticas. Vários agentes trombolíticos foram desenvolvidos, mas até ao dia de hoje, ativador de plasminogénio tecidual recombinante (rtPA), denominado de alteplase é o único aprovado pelas entidades reguladoras para pacientes com AVC isquémico. O ativador de plasminogénio recombinante é uma enzima que converte o plasminogénio endógeno na protéase plasmina, que então cliva e digere a rede de fibrina eventualmente levando à lise do trombo no processo conhecido como fibrinólise. Apesar da sua grande atividade trombolítica, rtPA apresenta várias limitações. Especificamente no AVC isquémico, a alteplase tem um fraco perfil farmacocinético com uma curta semi-vida, uma janela temporal terapêutica curta, baixa penetração e recanalização de trombos de maior dimensão e ainda apresenta um risco de hemorragia intracraniana sintomática e severa. Desta forma, é de extrema importância encontrar e desenvolver novos fármacos ou sistemas de entrega de fármacos para melhorar as deficiências da atual terapia trombolítica. Alguns progressos têm sido alcançados com rtPAs de nova geração como a desmoteplase e a tenecteplase, mas esta revisão concentra-se no desenvolvimento da nanomedicina no campo do AVC isquémico, denominado como nanotrombólise. Sistemas de entregas de fármacos usando nanomateriais como lipossomas, nanopartículas poliméricas e nanopartículas magnéticas, quer sozinhas quer em combinação com estímulos externos, como ultrassom ou forças magnéticas têm apresentado resultados muito positivos. Apesar de a maioria destes resultados ser em estudos pré-clínicos, a nanotrombólise aparenta ser capaz de produzir avanços verdadeiramente significativos e de trazer uma perspetiva otimista ao futuro do tratamento do AVC isquémico.

Background: Pre-mRNA splicing is an essential step in gene expression that occurs co-transcriptionally in the cell nucleus, involving a large number of RNA binding protein splicing factors, in addition to core spliceosome components. Several of these proteins are required for the recognition of intronic sequence elements, transiently associating with the primary transcript during splicing. Some protein splicing factors, such as the U2 small nuclear RNP auxiliary factor (U2AF), are known to be exported to the cytoplasm, despite being implicated solely in nuclear functions. This observation raises the question of whether U2AF associates with mature mRNA-ribonucleoprotein particles in transit to the cytoplasm, participating in additional cellular functions. Results: Here we report the identification of RNAs immunoprecipitated by a monoclonal antibody specific for the U2AF 65 kDa subunit (U2AF65) and demonstrate its association with spliced mRNAs. For comparison, we analyzed mRNAs associated with the polypyrimidine tract binding protein (PTB), a splicing factor that also binds to intronic pyrimidine-rich sequences but additionally participates in mRNA localization, stability, and translation. Our results show that 10% of cellular mRNAs expressed in HeLa cells associate differentially with U2AF65 and PTB. Among U2AF65-associated mRNAs there is a predominance of transcription factors and cell cycle regulators, whereas PTB-associated transcripts are enriched in mRNA species that encode proteins implicated in intracellular transport, vesicle trafficking, and apoptosis. Conclusion: Our results show that U2AF65 associates with specific subsets of spliced mRNAs, strongly suggesting that it is involved in novel cellular functions in addition to splicing.

In most clinical microbiology laboratories optochin susceptibility is used in the screening and identification of Streptococcus pneumoniae. We report the characterization of 32 optochin-resistant S. pneumoniae strains from 10 laboratories that constituted 3.2% of all isolates recovered in 2005 in 30 laboratories in Portugal. Resistant isolates consisted of bile-soluble optochin-susceptible and optochin-resistant subpopulations with identical antimicrobial susceptibility patterns, capsular types and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) profiles. The most frequent serotypes—1, 19A, 11A, 3, 8, and 15A—were all common serotypes present in infection and colonization isolates in the country. The PFGE profiles of the 32 isolates corresponded to those of previously identified clones and confirmed that the emergence of these strains could not be attributed to clonal expansion. Clinical laboratories must be aware that optochin-resistant pneumococci are presently circulating in the community. Because accurate identification of S. pneumoniae is essential for correct diagnosis and adequate therapy of patients, we recommend that at least the bile solubility test should be routinely performed in cases of suspected pneumococcal etiology, even if the isolates are optochin-resistant.

A cada ano, o ambiente marinho e costeiro é progressivamente mais afetado pelos efeitos nocivos do lixo marinho, representando uma ameaça para o ecossistema marinho e para a sua biodiversidade. O presente estudo analisou, pela primeira vez, a prevalência, abundância e características dos resíduos antropogénicos, com ênfase nos detritos plásticos, em colónias de gaivota-de-patas-amarelas (Larus michahellis) no arquipélago da Madeira. Um total de 228 amostras de egagrópilas, ninhos e excrementos foram recolhidas em colónias mais próximas de zonas urbanas (ilha da Madeira) e em colónias mais isoladas (ilhas Desertas), no qual se verificou a presença de resíduos antropogénicos em 65,8% e 57,0% das amostras analisadas para cada local, respetivamente. Os resultados obtidos evidenciam a presença de detritos plásticos em todos os tipos de amostra para ambos os locais de amostragem, bem como uma maior prevalência e abundância de detritos plásticos detetados na ilha da Madeira. Verificaram-se diferenças significativas entre locais para as características dos detritos plásticos, nomeadamente nas categorias, cores e tamanhos. O estudo evidencia, ainda, diferenças entre os três tipos de amostra. As cores mais predominantes foram o verde e o branco nas egagrópilas da Madeira e o azul e o branco nas Desertas; o branco nos ninhos; o azul e o preto nos excrementos. Cordas e filamentos, muito semelhantes aos materiais de pesca, foram as categorias de plástico mais observadas, o que indica uma pressão desta atividade nos locais de amostragem. Dos 169 detritos de plástico identificados através da técnica de espectroscopia FTIR, obteve-se uma grande variedade de polímeros, dos quais o PE (25,2%), PET (16,6%) e PVC (13,3%) foram os mais frequentes. São necessárias mais investigações futuras sobre a interação dos detritos plásticos com outras espécies de aves marinhas no arquipélago da Madeira em diferentes intervalos temporais, de forma a compreender os potenciais efeitos destes resíduos nos organismos marinhos deste ecossistema insular.

A doença de Alzheimer tem sido reconhecida como a doença neurodegenerativa mais prevalente na população idosa, ainda sem uma cura ou um tratamento eficaz, pelo que se torna de extrema importância mobilizar recursos para que o conhecimento e a procura de tratamento para esta doença evoluam. Aquela que se acredita ser a principal causa da patologia é a acumulação extracelular do péptido β-amiloide (Aβ) que acaba por se aglomerar em placas e causar danos neuronais. Esta doença, tal como outras doenças neurodegenerativas, tem vindo a ser associada à neuroinflamação, uma resposta comum do sistema imune que, quando exacerbada, provoca danos no tecido e morte neuronal. No sistema nervoso central, esta resposta é maioritariamente atribuída à microglia e aos astrócitos, as células imunes do cérebro, que expressam os mediadores da inflamação: os inflamassomas. Existe um, em particular, que tem sido cada vez mais bem caracterizado e evidenciado como tendo um papel importante na progressão da doença: o inflamassoma NLRP3. Este complexo é composto por uma proteína sensorial (domínio NLRP3), uma proteína de ligação (ASC) e uma proteína efetora (Caspase-1). O inflamassoma NLRP3, quando ativo, é responsável pela clivagem da pro-caspase-1 em Caspase-1 que, por sua vez, cliva as citocinas pró-inflamatórias, pró-IL-1β e pró-IL-18, nas suas formas ativas: IL-1β e IL-18. A ação do péptido Aβ no NLRP3 tem vindo a ser investigada e, em pacientes de Alzheimer encontraram-se elevados níveis de IL-1β no líquido cefalorraquidiano, assim como de NLRP3 e Caspase-1 no tecido nervoso. Assim sendo, parece que a compreensão da ação deste inflamassoma e a sua inibição poderão ser potenciais alvos terapêuticos para esta patologia. Apesar da ação do NLRP3, associada ao péptido Aβ, ser maioritariamente atribuída à microglia, os astrócitos são um tipo celular bastante importante no cérebro que também expressam o inflamassoma. Assim, é plausível assumir que estas células podem contribuir para a resposta inflamatória observada na doença de Alzheimer, através do NLRP3. Os astrócitos, tal como a microglia apresentam dois fenótipos principais: A1 e A2. Os astrócitos A1, são nocivos para os neurónios e expressam em abundância o componente 3 do complemento (C3) que se tem revelado um marcador promissor destas células. Para além disso, são principalmente ativados por estímulos inflamatórios e estão relacionados com a microglia M1, uma vez que fatores libertados por esta (IL-1α, TNF-α and C1q) mostraram induzir este fenótipo nos astrócitos. O objetivo deste trabalho é compreender se o péptido Aβ sozinho é capaz de induzir o fenótipo A1 nos astrócitos e de promover a formação e ativação do inflamassoma NLRP3 nestas células; ou se apenas após uma conversão para A1 pela microglia, conseguem responder eficientemente ao péptido Aβ via NLRP3. Para isto, este projeto utilizou culturas puras de astrócitos preparadas a partir de ratos Sprague-Dawley com 2-3 dias de vida. A microglia contaminante foi eliminada pela combinação do método de agitação e do tratamento com clodronato. As culturas foram estimuladas com o péptido Aβ25-35 (condição Aβ25-35), com os fatores derivados da microglia previamente mencionados (condição F) ou com ambos (condição F/Aβ25-35) e usadas como um modelo para estudar a ativação do NLRP3 nos astrócitos, num contexto de toxicidade induzida por Aβ. Numa segunda fase do projeto, as culturas foram tratadas com o inibidor específico do NLRP3, MCC950, previamente aos insultos anteriormente referidos. A reatividade dos astrócitos, e a expressão dos componentes do inflamassoma (proteínas NLRP3, ASC e Caspase-1) foram analisados por Western Blotting (WB) e imunocitoquímica, enquanto a secreção de IL-1β foi avaliada por ELISA. Numa primeira análise, através de WB, os resultados demonstraram que o péptido Aβ25-35 promoveu um aumento na expressão do C3 quase tão eficientemente como os fatores derivados da microglia e também promoveu o início da clivagem desta proteína, refletido na formação do fragmento iC3b que participa, entre outras, na fagocitose. A reatividade dos astrócitos também foi avaliada pela expressão da proteína GFAP que demonstrou ser extremamente heterogénea entre experiências, comprovando a tendência que tem vindo a surgir de que esta não é um bom marcador de reatividade dos astrócitos. Por imunocitoquímica foi possível observar que a proteína C3 marcou principalmente o núcleo, que sugere um papel desta proteína na regulação da transcrição génica, papel este que também já foi sugerido noutras células. Em relação à expressão dos componentes do inflamassoma, por WB foi possível observar que os astrócitos expressam todos os componentes do complexo e que, em particular, o domínio NLRP3 e a Caspase-1 ativa são significativamente aumentados pelas condições Aβ25-35 e F o que se revelou surpreendente porque, apesar do péptido Aβ ser descrito como um ativador do complexo, os fatores derivados da microglia são maioritariamente descritos como estímulos de priming, promovendo o aumento da transcrição do domínio NLRP3, mas sem ativação da Caspase-1. Surge, assim a hipótese de que algo neste sistema poderá estar a induzir a ativação do inflamassoma. De facto, a anafilotoxina C3a, derivada da clivagem do C3, já foi sugerida como ativadora do complexo e poderá estar a ser o estímulo ativador nesta condição. Por imunocitoquímica foi possível observar que todos os componentes do inflamassoma co-localizaram com a marcação de GFAP, corroborando os resultados previamente obtidos por WB de que os astrócitos realmente expressam estes componentes. Para além disso, os componentes do complexo localizaram-se maioritariamente na zona perinuclear e não só se co-localizaram com o GFAP como se co-localizaram entre si, sugerindo a junção dos diferentes domínios para formar o inflamassoma. A produção de IL-1β pelas células foi avaliada por ELISA e, apesar de terem sido as condições Aβ25- 35 e F que anteriormente demonstraram maior expressão dos componentes que constituem o NLRP3, foi a condição F/Aβ25-35 que apresentou um aumento significativo na secreção de IL-1β para o meio. A condição Aβ25-35 também demonstrou uma tendência de aumento, mas na condição F a secreção de IL 1β manteve-se praticamente idêntica ao controlo. Há várias hipóteses que podem explicar estes resultados, nomeadamente a produção de IL-1β na condição F/Aβ25-35 não estar a acontecer via NLRP3 ou a ocorrência de um mecanismo repressivo nas condições Aβ25-35 e F que impede a libertação da IL 1β para o meio extracelular, mecanismo esse inexistente na condição F/Aβ25-35. A primeira hipótese é descartada quando as células são tratadas com o MCC950. Neste caso, observou-se uma diminuição drástica na produção e IL-1β, em todas as condições incluindo o controlo, mas principalmente na condição F/Aβ25-35, o que constitui uma forte evidência de que os astrócitos expressam um inflamassoma NLRP3 funcional. Por fim, foi avaliada a clivagem da GSDMD (GSDMD-NT), a proteína com capacidade de formação de poros nas membranas celulares conduzindo à piroptose, um tipo de morte celular inflamatória. A GSDMD é clivada pela Caspase-1 ativa e, portanto, é dependente do NLRP3. Neste modelo observou se uma tendência de aumento da GSDMD-NT na condição F e na condição Aβ25-35, o que vai de encontro à maior expressão da Caspase-1 ativa encontrada nestas condições. No entanto, a amostra analisada foi pequena e mais experiências são necessárias para se atingir significância estatística. Tendo em conta todas os resultados deste trabalho, podemos concluir que os astrócitos A1 são capazes de contribuir para a neuroinflamação observada na doença de Alzheimer, via NLRP3. Estas células, não só respondem ao insulto do péptido Aβ, como um contacto próximo com a microglia, nomeadamente com os fatores por si secretados, potenciam esta resposta. Para além disso, os próprios astrócitos A1 parecem ser susceptíveis ao efeito deste complexo, através de morte celular por piroptose, comprometendo assim a homeostasia do sistema nervoso.

Protected areas are sensitive ecosystems that need considerate and sustainable management. Trails are the primary recreational resource facility on which activities are performed in Protected Areas. They create an opportunity for hiking, biking, wildlife observation and protection of natural resources when well-managed. Yet, they can also create negative impacts like degradation of the environment when poorly managed. Visitor trampling associated with recreational activities results in a variety of impacts to vegetation, including a reduction in vegetation cover, height, biomass, changes in species composition, and the introduction and spread of non-native species. This study seeks to assess information and evaluate how a National Park, which is economically moved by big groups of tourists, is being affected on flora distribution and composition, as well as the prevalence of generalist flora species within the defined areas for tourist activities. The case of study was developed in Brijuni National Park, Croatia A total of five recreational trails, (i) Train Trail, (ii) Path of Good Vibration Trail, (iii) Cycling Trail, (iv) Belvedere Trail, and (v) Zelenikovac Educational Trail were surveyed, along the two main types of habitats, the Holm-Oak Forest, and the Eu-Mediterranean and steno-Mediterranean rocky pastures. For the assessment of information three main methodologies were applied: The Trail Assessment Survey, where trail conditions and observable impacts were assessed; and the spatial quadrat methodology, using Brijuni National Park trails as transects, on both road-verge and far (10 m) from trail. As long as wider evaluation using trails as transects and a 20 m border starting from the road-verge to assess information on distribution of the overpopulation of generalist species Scolymus hispanicus. Data analysis was performed using linear mixed models, and pair-wise dissimilarity matrices, together with indicators of species evaluation. During this study 116 quadrats were evaluated. We identified, a total of 85 plant species, of which 6 were common grasses, 14 trees and shrub species, and the other 65 species were perennial plants and small herbaceous. We found a generally good condition of trails in BNP, associated with a low significance of impact caused by trails in associated flora distribution and composition. Nonetheless, it was observed that more degraded areas seem to be a preferable habitat for generalist species like Scolymus hispanicus. A deeper evaluation of these areas is necessary. Studies that include an evaluation of big game species, their feeding habits, and their palatability is a must since this species can have major roles in structuring vegetation composition. Evaluation of soil properties and conditions may be part of the solution, especially if there is an interest in not only maintaining, as also improving ecological conditions within this protected area. In the meanwhile, it is necessary to ensure and improve the existing means for recreational purpose that are the network of harden roads in the park, since these ones only show to affect the environment when reaching high levels of degradation. The flora distribution and composition in the Park could benefit by the limitation of exiting the roads by motorized vehicles, that could be implemented by applying small wooden columns, as for a deeper knowledge of visitation movements and pressure through the park.

Haemophilus influenzae é uma bactéria Gram-negativa polimórfica. O único hospedeiro conhecido para esta bactéria é o Homem. A interação entre bactéria e hospedeiro acontece através da colonização assintomática da mucosa do trato respiratório, podendo esta interação envolver formação de biofilme. H. influenzae está associado a infeções que podem ir desde infeções ligeiras do trato respiratório até infeções graves, como é o caso da meningite e septicémia. As estirpes de H. influenzae podem ou não expressar uma cápsula polissacarídica, sendo designadas, respetivamente, por capsuladas ou não capsuladas, sendo estas últimas também conhecidas por não tipáveis (NTHi). As estirpes capsuladas podem ser divididas em seis serotipos diferentes (a-f) de acordo com o polissacárido que expressam, sendo este o principal fator de virulência em H. influenzae. O locus onde se encontram os genes responsáveis pela produção da cápsula encontra-se dividido em três regiões distintas. A região I é formada por 4 genes bex que são responsáveis por codificar o transportador do polissacárido, enquanto que a região II é responsável pela produção do polissacárido (específico para cada um dos serótipos). Por último, a região III, formada por 2 genes hcs, codifica proteínas que são responsáveis pelo transporte do polissacárido para o exterior. As regiões I e III são comuns a todos os isolados capsulados, enquanto que a região II varia consoante o serótipo. As estirpes NT, como o nome indica, não possuem o locus da cápsula. Hib é considerado o serótipo mais virulento e foi, até à introdução da vacina, o principal serótipo em circulação e o serótipo associado aos casos mais graves de doença, como meningites, septicémias e pneumonias. Após a produção da vacina contra o Hib e a vacinação massiva da população, verificou-se uma mudança na epidemiologia de H. influenzae: NTHi tornou-se o principal tipo de H. influenzae em circulação e, apesar de ser menos virulento que as estirpes capsuladas, o número de casos de infeção aumentou; para além disso, ao longo das duas últimas décadas, tem-se verificado um ligeiro aumento dos serótipos não b em casos de doença. Este trabalho teve como objetivo contribuir para o estudo da epidemiologia de H. influenzae em Portugal. Especificamente, pretendeu-se comparar estirpes de colonização isoladas da nasofaringe de crianças saudáveis com estirpes clínicas, de forma a avaliar a relação entre ambas. Nos últimos anos surgiram, em crianças portuguesas, alguns casos de infeções causadas por Hib que foram associados a falências vacinais. Assim, pretendemos, também, avaliar se o Hib está em circulação entre as crianças mais novas. Para tal, partimos de uma amostragem de 891 exsudados da nasofaringe de crianças saudáveis, com idades inferiores a 6 anos, a frequentar infantários da região de Lisboa nos anos de 2018 e de 2019. Através de métodos fenotípicos, que incluíram o isolamento em meios de cultura seletivos e a observação da morfologia das colónias, isolámos 764 estirpes que identificámos, presumivelmente, como H. influenzae. Através de PCR convencional determinámos quais as amostras que possuíam cápsula (pela amplificação do gene bexA). A caracterização do serotipo das estirpes capsuladas foi determinada por um PCR específico para cada tipo capsular. Dos 764 isolados, 745 eram NTHi, quatro Hia, um Hib, sete Hie e sete Hif. Nenhuma das estirpes foi caracterizada com o serótipo c ou d. Analisámos a produção de β-lactamases em todos os isolados, através de uma reação colorimétrica com nitrocefim, e determinámos a concentração inibitória mínima (CIM) para vários agentes antimicrobianos de classes diferentes, nos isolados capsulados e nos isolados produtores de β lactamases. Os resultados obtidos mostraram que 6.3% das estirpes são produtoras de β lactamases. A determinação da CIM indicou que a maioria dos isolados são suscetíveis aos agentes antimicrobianos testados. Uma das estirpes produtoras de β-lactamases apresentou resistência a três antimicrobianos de três classes diferentes, pelo que foi considerada multirresistente. De forma a complementar o nosso estudo e de forma a comparar mais detalhadamente as estirpes de colonização com as estirpes clínicas, sequenciámos o genoma total das 19 estirpes capsuladas e de duas outras estirpes com potencial interesse epidemiológico: uma estirpe NTHi produtora de β-lactamase e resistente a amoxicilina/ácido clavulânico (BLPACR), e uma estirpe de Haemophilus parainfluenzae que, numa fase preliminar, tinha sido identificada como H. influenzae capsulado. Utilizando o esquema de MLST descrito para H. influenzae, determinámos os STs de todos as estirpes sequenciadas (exceto para a estirpe de H. parainfluenzae). Detetámos 7 STs (ST6, ST18, ST23, ST122, ST124, ST145 e ST973), sendo que as amostras com o mesmo ST foram consideradas como sendo do mesmo clone e as amostras que apresentavam uma única variação no perfil alélico foram consideradas relacionadas. Procedemos à análise da presença e ausência de 105 genes de virulência escolhidos a partir de uma revisão bibliográfica. Os resultados obtidos revelaram que a presença e ausência dos genes de virulência poderá estar relacionada com o serotipo capsular, pois não foram detetadas muitas variações dentro de cada serotipo (apenas uma num isolado do serotipo e). O serotipo b foi o que apresentou mais genes de virulência (n=91), algo que já era esperado tendo em conta que é considerado o serotipo mais virulento de H. influenzae. Investigámos a presença de genes que conferem resistência aos antimicrobianos estudados e detetámos genes que codificam β-lactamases em três das estirpes capsuladas, o que já era esperado tendo em conta o resultado positivo observado com o teste colorimétrico com nitrocefim. Para a estirpe identificada como BLPACR, detetámos alterações nos aminoácidos que compõem a proteína de ligação à penicilina do tipo 3 (PBP3), o que justifica o seu fenótipo de resistência à amoxicilina/ácido clavulânico. Por fim, construímos uma árvore filogenética com base no genoma core das estirpes de H. influenzae que sequenciámos e no genoma core de algumas estirpes clínicas capsuladas que se encontram descritas na literatura. Ao analisar o resultado da árvore filogenética percebemos que, dentro de cada serotipo, as estirpes de colonização e as estirpes clínicas estão muito próximas. Em suma, os nossos resultados permitem-nos concluir que: i) a percentagem de crianças saudáveis colonizadas com H. influenzae é elevada; ii) as principais estirpes em circulação são NTHi; iii) a vacina contra o Hib é eficaz, pois o número de isolados deste serotipo em circulação é residual; iv) as estirpes responsáveis por colonização assintomática são genotipicamente muito semelhantes, às estirpes responsáveis por doença invasiva. Conseguimos ainda detetar e caracterizar o locus capsular identificado na estirpe de H. parainfluenzae. O locus encontra-se incompleto, pois em comparação com o locus da cápsula de H. influenzae apenas as regiões I e III coincidem. A região II não coincide com nenhum dos serótipos de H. influenzae, sendo composta por um gene semelhante ao Hif (fcs1), por um gene descrito em H. parainfluenzae (pcsB) e por três genes com homologia em Haemophilus haemolyticus (dltC, dltA e xcbB). A descrição deste locus em H. parainfluenzae tem uma elevada relevância epidemiológica, se tivermos em consideração que esta bactéria normalmente não apresenta cápsula e a cápsula é um dos principais fatores de virulência descritos. Analisando a literatura disponível, apenas um trabalho reporta a deteção do locus capsular em estirpes de H. parainfluenzae, sendo que esse locus foi detetado em quatro estirpes diferentes. É necessário que se mantenha a vigilância ativa das estirpes de colonização em circulação de forma a detetar atempadamente alterações na epidemiologia de H. influenzae.

A campylobacteriose é a doença gastrointestinal e a zoonose humana mais reportada na União Europeia, originando enormes impactos sanitários, sociais e económicos. Os sintomas incluem diarreia, dores abdominais e/ou febre, e apesar destes durarem apenas alguns dias, as sequelas pós-infecção podem incluir síndrome de Guillain-Barré, artrite reactiva ou doença inflamatória do intestino. As bactérias Gram-negativas Campylobacter coli e C. jejuni são os agentes causadores de campylobacteriose mais reportados, e apesar do uso de antibióticos em casos de campylobacteriose ser restrito a grupos específicos, a tendência crescente de resistência entre isolados destas espécies, especialmente a ciprofloxacina, é extremamente preocupante. De entre as várias potenciais soluções para este problema, as lisinas codificadas por fagos aparecem na primeira linha das mais promissoras armas contra a resistência a antibióticos. As lisinas são enzimas típicas de bacteriófagos que hidrolisam o peptidoglicano bacteriano. No ciclo lítico de infecção bacteriofágica, as lisinas estão ligadas à libertação da descendência por promoverem a lise osmótica do hospedeiro após a replicação e montagem fágicas. Tipicamente pequenas (15-40 kDa) e modulares, as lisinas tendem a ser bastante eficientes, podendo apresentar especificidade ao nível de espécie ou até mesmo de estirpe. Várias estratégias têm sido desenvolvidas no sentido de melhorar a actividade das lisinas e o seu espectro de acção. Apesar da potencialidade das endolisinas no combate à resistência a antibióticos, só se identificaram profagos em genomas de Campylobacter spp. a meio da década passada e, correntemente, ainda não existem muitos bacteriófagos de Campylobacter spp. descritos. A identificação de novos profagos e lisinas é, então, um trabalho da maior importância e para o qual devem ser movidos esforços. Um conjunto de 22 genomas de C. jejuni e 82 genomas de C. coli foi recentemente sequenciado no âmbito deste trabalho. Aqui, utilizámos ferramentas bioinformáticas para identificar regiões profágicas nestes genomas. Durante esta análise, uma região promissora foi identificada em C. coli Cco1598. A revisão detalhada desta região aponta para a identificação do profago Cco1598. Este profago presente em isolados de C. coli parece estar incompleto e ser um homólogo ainda não reportado do profago CJIE2 (do inglês, Campylobacter jejuni integrated element 2) que se encontra presente em C. jejuni. Estudos de indução são necessários para melhor entender a biologia do profago Cco1598, bem como o seu impacto no hospedeiro. Nas restantes regiões profágicas detectadas e num conjunto de 66 genomas de bacteriófagos de Campylobacter spp. disponíveis para livre acesso, foram identificadas 47 endolisinas putativas distintas com potencial biotecnológico. Quatro das lisinas identificadas – duas identificadas nos genomas recentemente sequenciados e duas identificadas em genomas de bacteriófagos -, tal como a lisina Cje_EndoPepM15 anteriormente identificada no nosso laboratório, foram escolhidas como candidatos promissores com estruturas previstas significativamente distintas. As sequências codificantes foram optimizadas para expressão em Escherichia coli, clonadas em vectores de expressão e submetidas a análises laboratoriais tendo em vista o desenvolvimento de enzibióticos. A expressão em E. coli levou à produção de três das lisinas identificadas. Uma delas, Cje_Goose, é produzida em corpos de inclusão e várias condições foram testadas para futura obtenção de quantidades e volumes apreciáveis de enzima solúvel. Apenas duas, Cje_EndoPepM15 e Cje_Lysozyme, foram obtidas em volumes e concentrações apreciáveis. Apesar das várias condições testadas, as duas lisinas identificadas em genomas de bacteriófagos causaram a estagnação e redução da densidade óptica dos hospedeiros de expressão após indução, e não puderam ser avaliadas como potenciais enzibióticos. As três lisinas purificadas demonstraram actividade bactericida directa contra a bactéria Gram-positiva Micrococcus luteus, e actividade hidrolítica indirecta em preparados celulares das bactérias Gram-negativas C. coli 817, C. jejuni 3625 e E. coli RR1. Isto confirma o potencial biotecnológico das lisinas identificadas como armas contra isolados resistentes a antibióticos com um amplo espectro de acção. A aplicação de endolisinas em bactérias Gram-negativas é dificultada pela membrana externa que protege o peptidoglicano da actividade hidrolítica das lisinas fágicas. Neste trabalho, tentámos utilizar a encapsulação das lisinas Cje_EndoPepM15 e Cje_Lysozyme em lipossomas como estratégia para ultrapassar essa barreira. Formulações lipídicas não tóxicas foram testadas, mas não se obtiveram eficiências de incorporação satisfatórias. Não foi detectada actividade bacteriolítica após aplicação de quantidades subóptimas de lisinas encapsuladas contra isolados de Campylobacter spp.. Trabalhos complementares são necessários tendo em vista a transformação das lisinas produzidas em armas efectivas contra isolados de Campylobacter spp. resistentes a antibióticos. Os genomas recém-sequenciados foram submetidos a tipagem molecular recorrendo ao esquema de MLST descrito para isolados de Campylobacter spp.. Confirmando a variabilidade dos genomas de Campylobacter spp., esta tipagem resultou na identificação de duas novas variantes alélicas e oito novos perfis alélicos em onze isolados de C. coli. As novas variações alélicas e novos perfis foram submetidas à base de dados pública para tipagem molecular e diversidade genómica microbiana, PubMLST. Capazes de transformação natural e com um genoma plástico e dinâmico, além de resistência a antibióticos, C. coli e C. jejuni têm sido descritas como estando a passar por eventos de introgressão, i.e. a transferência de material genético entre espécies diferentes, com alguns isolados a compartilharem perto de um quarto do seu genoma, com a consequente partilha de mecanismos moleculares e características fenotípicas coincidentes entre isolados de espécies diferentes. Posto isto, colocámos a hipótese de que bacteriófagos de Campylobacter spp. têm capacidade de realizar saltos entre hospedeiros destas duas espécies, contribuindo para o processo de introgressão. Profagos idênticos ao profago Cco1598 e aos profagos de referência CJIE1 e CJIE4 foram identificados na população de Campylobacter spp. e analisados em relação aos locais de inserção, ao tamanho e cobertura dos fagos-modelo, e em termos de filogenia fágica. A análise dos locais de inserção dos fagos identificados demonstrou que fagos idênticos a CJIE4 e ao profago Cco1598 possuem locais de inserção relativamente conservados. Fagos idênticos a CJIE1 possuem locais de inserção variados, consistente com a capacidade de integração aleatória anteriormente descrita. Comparações de tamanho e cobertura dos profagos identificados sugerem diferenças entre profagos de C. coli e de C. jejuni, apontando para a aquisição destes profagos previamente ao evento de especiação das duas espécies. A análise filogenética confirmou a identidade do profago Cco1598 como homólogo próximo do elemento genético CJIE2. Observações pontuais em profagos idênticos a CJIE4 e ao profago Cco1598 aqui identificado sugerem que saltos bacteriofágicos entre hospedeiros parecem ocorrer no contexto de C. jejuni e C. coli, ainda que sejam fenómenos raros. A generalidade dos resultados aponta para que os profagos estudados tenham sido maioritariamente adquiridos antes do evento de especiação, e evoluído depois em conjunto com o genoma do hospedeiro bacteriano. Estudos adicionais são necessários para clarificar a existência e o papel dos saltos fágicos entre hospedeiros no processo de introgressão. Vários genes com interesse biotecnológico foram rastreados nos profagos identificados. O profago CJIE2, bem como alguns profagos idênticos a CJIE4 e Cco1598, transportam uma endolisina putativa não detectada previamente, representando uma nova fonte de potencial no combate à resistência a antibióticos, e que deve ser submetida a análises laboratoriais. Paralelamente, os genes dns e nucA foram identificados nos fagos encontrados e analisados. Estes genes integram o genoma fágico e codificam para endonucleases extracelulares inibidoras da transformação natural em Campylobacter spp., que potencialmente modula os eventos de introgressão. É interessante que no contexto de profagos idênticos a CJIE1, genes completos são encontrados em profagos de C. jejuni, enquanto que em profagos de C. coli encontram-se maioritariamente versões parciais dos mesmos. Esta realidade pode ser explicativa da aparente direccionalidade dos eventos de introgressão de C. jejuni para C. coli. Um estudo mais detalhado da distribuição destes genes na população de Campylobacter spp. e avaliação da sua actividade são necessários para clarificar o impacto destas endonucleases codificados por fagos no processo de introgressão em curso.

The paper focuses on analysis of macro- and micromorphological characteristics of relict slope deposits in Serra da Estrela (Portugal) to understand the significance of different slope processes and paleoenvironmental settings. Micromorphology is a useful sedimentology technique allowing significant advances compared to macroscopic techniques. Results show that different processes are involved in the development of the slope deposits, reflecting different environmental conditions. The main processes responsible for the emplacement of the relict slope deposits are solifluction, debris-flow and runoff, but postdepositional changes are also present. Solifluction was identified in slope deposits between 650 and 1500 m a.s.l. The common microfeatures identified are circular arrangement of grains with a core grain, rounded vesicles, vertical grains, matrix deformations and fine-grained deposits. Slope deposits above 1300 m a.s.l have a platy microstructure and coincide with the altitudinal range of the relict rock glaciers, indicating the elevation limit of permafrost. Below this altitude platy microstructures are less frequent. Slope deposits in northfacing slopes were affected by frost-induced processes in a seasonal frost regime, followed by a postdeposition illuvial phase. Debris-flow and runoff were identified in slope deposits between 680 and 1260 m a.s.l. The common microfeatures are oblique grains, grain dumps, and coarse and fine grain lineations, and banded microstructures were identified in runoff processes. Debris-flow deposits have a circular arrangement of grains without a core grain, identified in sediments in paraglacial and periglacial environments. The slope deposits show evidence of past periods of enhanced periglacial activity since the last glaciation until the Younger Dryas.

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Fundamento: Os adenomas hipofisários podem ser de natureza esporádica ou hereditária. Uma minoria destes tumores surge no contexto de uma síndrome endócrina familiar. A Síndrome de Paragangliomas Familiares é uma destas situações; resulta de mutações nos genes SDHx, e caracteriza-se pelo desenvolvimento de feocromocitomas, paragangliomas e, raramente, tumores do estroma gastrointestinal, carcinomas de células renais e adenomas hipofisários. Caso clínico: Homem de 40 anos com o diagnóstico de prolactinoma gigante, aparentemente esporádico, que após uma anamnese rigorosa, passa a ser considerado candidato para a Síndrome de Paragangliomas Familiares tipo 4. Após a realização do teste genético, foi encontrada a mutação conhecida num ramo da família: deleção do exão 1 do gene SDHB. Por esse motivo, também os seus familiares de primeiro grau realizaram o teste genético, que revelou que o irmão e o filho mais velho eram igualmente portadores. Os três foram submetidos a rastreio para feocromocitomas e paragangliomas, cujo resultado foi negativo para todos. Na sequência do tratamento com cabergolina, dirigido para o problema ativo, observou-se uma melhoria dos sintomas, diminuição dos níveis séricos de prolactina e redução franca da massa tumoral. Tanto o doente como os elementos da família identificados como portadores da mesma mutação, mantêm vigilância regular para deteção precoce de Feocromocitoma/Paragangliomas. Conclusões: Uma anamnese rigorosa e focada na história familiar de cada paciente é da máxima importância, e pode fazer a diferença, permitindo um seguimento mais adequado do doente bem como o diagnóstico pré-clínico dos seus familiares.

Esmeraldas es una ciudad a la vez vulnerable y estratégica para Ecuador. La estructuración de su territorio es el resultado de sucesivos regímenes de acumulación, de dinámicas económicas que se han centrado, históricamente en el boom bananero, desde los años 1970 en el petróleo, y más recientemente en el turismo. Las inversiones estructurantes conciernen el territorio de la ciudad de manera selectiva: bordes de los ríos, valle del Teaone, frente marítimo respectivamente. Son ejecutadas fuera de toda planificación urbana por actores del sector petrolero y del gobierno nacional, dificultando el control del territorio por parte de los actores locales. Tales regímenes de acumulación no asumen las inversiones necesarias para la reproducción de la fuerza de trabajo, lo que explica en gran medida la informalidad de una parte importante de la ciudad y la autoconstrucción de vivienda. Los riesgos resultantes se recomponen permanentemente, a lo largo del tiempo y reflejan el peso de los actores dominantes correspondientes a cada régimen. Esto permite comprender las diferentes fases de urbanización y las principales modalidades de (no)planificación, derivadas de las relaciones asimétricas entre actores, públicos y privados, locales y nacionales.

Background: In patients with chronic renal failure under haemodialysis, we investigated the inter-relationships and relative contributions of disease, haemodialysis and of nutrition related factors on the patients' Quality of Life. Methods: Collected data in 60 adult patients comprised: co-morbidities (multiple medicines, other chronic diseases), duration of renal failure and of haemodialysis (in months), % weight loss since haemodialysis, nutrient intake derived from diet history analysis (DIETPLAN5 2003, UK). The EuroQoL instrument that includes 5 dimensions, mobility, self-care, activities, pain/discomfort, anxiety/depression, and an overall health visual analogue scale evaluated QoL. Results: Estimates of effect size attributed to each variable included in the general linear model revealed that 47% of patients' mobility/self-care scores were worsened by deficient protein/energy intake and 30% by weight loss =10%. Poor performance of usual activities was attributed in 45% to duration of haemodialysis and of disease, 70% to protein/energy/vitamin B12/zinc/iron deficits, and 20% to weight loss =10%. Pain/discomfort were worsened in 45% by the duration of haemodialysis and of disease, and in 15% by co-morbidities. Higher anxiety/depression were related in 43% to protein/energy/selenium & vitamin C deficits, in 40% to the duration of haemodialysis and of disease, in 10% to weight loss =10%, and in 3% to co-morbidities. Likewise, 47% of poor overall health was determined by protein/energy/vitamin B12/ zinc/selenium & vitamin C deficits, 25% by weight loss =10%, 10% by disease duration, and 7% by co-morbidities. Conclusion: Protein, antioxidants and key micronutrients involved in protein metabolism, did exert a major effect on patients' Quality of Life. Given the prevalence of nutrient deficits, the ensuing impaired functional capacity is likely to compromise QoL, timely nutrition is thus warranted.

Introdução: O internamento hospitalar é uma alteração do ambiente que é perturbadora do sono, estando as crianças internadas em UCIP mais expostas a fatores que aumentam a sua disrupção. Sendo o sono essencial ao processo de cura, a qualidade do mesmo durante o internamento tem um impacto importante na recuperação da doença. Objetivo: O objetivo deste estudo foi perceber de que forma a rotina noturna da UCIP permite cumprir os cuidados básicos de higiene do sono. Material e Métodos: De 1 de dezembro de 2019 a 15 de março de 2020 foram aplicados dois questionários, um para recolha de dados relativos à higiene do sono e dinâmica noturna da UCIP e outro para crianças e acompanhantes sobre a perceção geral da qualidade do sono durante o internamento. Resultados: Durante o período do estudo estiveram internadas 122 crianças, com uma idade média de 4,99 anos. O diagnóstico de internamento mais comum foi o de patologia do aparelho respiratório, com necessidade de ventilação mecânica em 62 crianças. A hora média de redução de iluminação foi às 2h21 min, de ligar as luzes às 7h49, existindo um período médio de redução de luminosidade de 5h28 min. Na maioria das noites, o ambiente foi interrompido menos que 3 vezes, sendo o motivo mais comum a prestação de cuidados. Não foi possível obter uma amostra significativa de respostas ao Questionário para crianças e acompanhantes. Conclusão: Existiu maior dificuldade em aplicar rotinas de higiene do sono no início do período noturno, sendo o período de redução luminosa deficitário em relação às necessidades de sono das crianças para cada faixa etária. A patologia respiratória e o recurso à ventilação mecânica contribuíram para o número de disrupções noturnas. Apesar de instituídas rotinas de higiene do sono, aplicar as mesmas de forma sistemática é um desafio.

CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells (Treg) are natural suppressors of autoimmunity but they can also dampen the effective clearance of infectious organisms. These cells have the potential to be exploited to prevent transplant rejection and to treat autoimmune disease. A paper in this issue of the European Journal of Immunology details a method to selectively expand antigen-specific Treg from a polyclonal Treg population, by using a specific dendritic cell (DC) subset. Furthermore, the authors show that such Treg can be used to prevent experimental type I diabetes; however, as Treg are positively selected by thymic epithelial cells (TEC) on the basis of self-reactivity, they would systematically suppress protective immune responses unless their repertoire is devoid of recognition towards peripheral antigen-presenting cells. This may be achieved by negative selection of developing Treg on thymic DC, thus creating a 'blind-spot' corresponding to DC-self-antigens in the mature Treg repertoire. Therefore, therapeutic use of DC subsets for the expansion of rare Treg populations should take into account this blind-spot, as peptides that are not accessible to thymic DC may be significantly more effective for the expansion of Treg.

Background/aims: This study aimed at evaluating whether patients with non-alcoholic steatohepatitis (NASH) had a specific dietary pattern and how it compared with data representative from the same geographical region individuals. Subjects and methods: Clinical, biochemical and anthropometrics: weight, height, body mass index (BMI) and waist circumference were collected in 45 NASH patients. Diet history was assessed using a validated semi-quantitative food frequency questionnaire, analysed with the Food Processor Plus, and was compared, after adjustment for BMI, with data from a sample of 856 free-living individuals, frequency matched for sex and age. Results: Patients' mean age was 49.6+/-10.6 years, 26 F: 19 M, BMI: 31.2+/-5.0 kg/m2. Comparison of their diet history with control data (C) revealed that carbohydrate consumption was lower in patients (P): P-243.6+/-5.7 g vs. C-261.5+/-1.6 g, P<0.05, and most patients had very low fibre intake. Conversely, total fat consumption was higher in patients: P-79.7+/-1.7 g vs. 73.0+/-0.4, P<0.01. A significantly higher intake of n-6 fatty acids (P=0.003) and n-6/n-3 ratio was found in patients, P<0.001. Conclusions: Our results suggest that the quality and combination of carbohydrates and fat intake may be more relevant than their isolated amount; an increased fat intake with an excessive amount of n-6 fatty acids can be implicated in promoting necro-inflammation, and provides further grounds for individualized dietary therapy.

Introduction: Nutrition and Quality of Life (QoL) are key issues. Aims: 1) to evaluate Quality of Life (QoL), nutritional status and dietary intake, taking into account the stage of disease and therapeutic interventions, 2) to determine potential inter-relations, 3) to quantify the relative contributions of cancer/nutrition/treatments on QoL. Methods: In 184 oesophagus, stomach and colon/rectum cancer patients, the following were evaluated: QoL (European Organisation for Research and Treatment of Cancer Quality of Life Questionnaire), nutritional status (% weight loss over the previous 6 months), usual diet (diet history), current diet (24 hr recall) and a range of clinical variables. Results: Stage III/IV patients showed a significant reduction from their usual energy/protein intake (p=0.001), worse in oesophagus (p=0.02), while current intakes were lower than in stage I/II patients (p=0.0002). Weight loss was greater in stage III/IV (p=0.001). Different diagnoses and cancer stages presented different patterns of QoL function scales (p=0,03), significantly and independently associated with nutritional factors (p=0,05). Patients in stage III/IV had increased symptomatology (p=0,003); symptom scales and single items were strongly associated with stage III/IV (p=0,04). Patients with stomach cancer presented the worst global QoL not significantly different from oesophagus, vs colon/rectum, p=0,02. Conclusions: In oesophageal, stomach and colon/rectum cancer, nutritional deterioration depends of diet intake, the latter is mainly determined by cancer location and stage. Patients' QoL was determined by cancer or nutrition-related factors with distinct relative weights. Due to this multidimensional construct, in which nutrition plays a major role, nutritional therapy must be integrated in early stages of the overall treatment.

The recent emergence and established presence of Aedes aegypti in the Autonomous Region of Madeira, Portugal, was responsible for the first autochthonous outbreak of dengue in Europe. The island has not reported any dengue cases since the outbreak in 2012. However, there is a high risk that an introduction of the virus would result in another autochthonous outbreak given the presence of the vector and permissive environmental conditions. Understanding the dynamics of a potential epidemic is critical for targeted local control strategies. Here, we adopt a deterministic model for the transmission of dengue in Aedes aegypti mosquitoes. The model integrates empirical and mechanistic parameters for virus transmission, under seasonally varying temperatures for Funchal, Madeira Island. We examine the epidemic dynamics as triggered by the arrival date of an infectious individual; the influence of seasonal temperature mean and variation on the epidemic dynamics; and performed a sensitivity analysis on the following quantities of interest: the epidemic peak size, time to peak, and the final epidemic size. Our results demonstrate the potential for summer and autumn season transmission of dengue, with the arrival date significantly affecting the distribution of the timing and peak size of the epidemic. Late-summer arrivals were more likely to produce large epidemics within a short peak time. Epidemics within this favorable period had an average of 11% of the susceptible population infected at the peak, at an average peak time of 95 days. We also demonstrated that seasonal temperature variation dramatically affects the epidemic dynamics, with warmer starting temperatures producing large epidemics with a short peak time and vice versa. Overall, our quantities of interest were most sensitive to variance in the date of arrival, seasonal temperature, transmission rates, mortality rate, and the mosquito population; the magnitude of sensitivity differs across quantities. Our model could serve as a useful guide in the development of effective local control and mitigation strategies for dengue fever in Madeira Island.

Unpaid care work, mostly performed by women, is a central but undervalued contributor to economies. During the COVID-19 pandemic, the need for unpaid care work increased due to restricted movement, social isolation, and economic challenges. This pandemic has highlighted the urgency of recognizing and valuing women's work at the household level which has been systematically overlooked. At the same time, it has increased the demand for technology usage, exposing the gender digital divide. This article aims to shed light on the additional burden women are facing, especially when trying to balance unpaid care work with paid employment from the seclusion of their homes. We do this by reviewing a number of surveys conducted in Indonesia. We combine this with other examples from additional contexts in order to draw attention to a global trend of amplified inequalities and struggles women are experiencing. We advocate for an urgent paradigm shift by providing vital recommendations for policymakers and managers.