Repositório RCAAP

A Síndrome de Leigh (LS) é uma doença mitocondrial rara e complexa que inicia normalmente durante a infância. É causada por danos na produção de energia devido a mutações no ADN nuclear e/ou mitocondrial. Os doentes com LS apresentam uma vasta gama de sintomas, tais como hipotonia e atraso no desenvolvimento neurológico. A LS tem sido associada ao metabolismo lipídico desde que foi demonstrado que níveis mais elevados de certos ácidos gordos no plasma aumentam o risco de desenvolvimento da doença. Este trabalho teve como objetivos: 1) validar um modelo de células estaminais pluripotentes induzidas (iPSC) com base na edição do genoma nuclear para estudar a LS; 2) investigar possíveis alterações nestas células por exposição a diferentes tipos de lípidos; e 3) gerar um novo modelo da LS através da edição do genoma mitocondrial. Para os dois primeiros objetivos, foram geradas células progenitoras neurais (NPCs) humanas com uma mutação nuclear específica da LS a partir de iPSCs humanas, assim como NPCs isogénicas de controlo. Ensaios de imunocitoquímica e qPCR ajudaram-nos a confirmar a eficácia da geração de NPCs. Curiosamente, a análise de Western blot indicou várias alterações em proteínas relacionadas com o metabolismo mitocondrial em NPCs com uma mutação nuclear específica da LS (nLS-like NPCs) quando comparados com NPCs de controlo, apoiando a validação deste modelo para estudar a disfunção mitocondrial em LS. Além disso, a análise metabólica do secretoma derivado de nLS-like NPCs revelou diferenças em vários metabolitos importantes, com destaque para o lactato e o piruvato. Surpreendentemente, ambos estão diminuídos em nLS-like NPCs, estando talvez relacionados com um aumento da glicólise e consumo de piruvato no interior das células. Relativamente ao segundo objetivo, descobrimos que concentrações crescentes de um ácido gordo de cadeia longa (LCFA), ácido oleico, e dois ácidos gordos de cadeia curta (SCFAs), propionato de sódio e butirato de sódio, podem aumentar a viabilidade tanto das NPCs de murganho como de humanos. Contudo, doses mais elevadas de SCFAs promoveram o efeito inverso em nLS-like NPCs, indicando que as NPCs dos doentes com LS poderão ser mais sensíveis a elevados níveis destes tipos de lípidos de cadeia curta saturados. Em relação ao último objetivo, em primeiro lugar foi realizada a identificação dos locais-alvo no ADN mitocondrial (mtDNA) associados a LS. Depois procedemos à sua confirmação, através da extração do mtDNA de células renais embrionárias humanas (HEKCs) e iPSCs, as primeiras para otimização e as últimas como a linha de células-alvo adequada. De seguida, procedemos à amplificação dos locais-alvo através de PCR e, seguidamente, por Sanger sequencing. Entretanto, utilizando a ferramenta de edição do genoma mitocondrial mediada por DdCBE (CRISPR/Cas), foi possível realizar a clonagem por Golden Gate cloning, o que tornou possível a inserção das mutações pretendidas. No conjunto, os resultados mostraram que as iPSCs poderão ser muito promissoras para o estudo da patogénese e possíveis terapias da LS. Além disso, os resultados revelaram não apenas que lípidos saturados de cadeia curta parecem impactar de forma negativa as NPCs dos doentes com LS, mas também que a edição do genoma mitocondrial em iPSCs parece ser um método exequível para gerar modelos celulares da LS associados a mutações mitocondriais.

The Eurobroadmap survey in Portugal has been done between October and December of 2009, n 3 portuguese cities; Lisbon city, capital of the country, and Coimbra and Évora, two medium-sized cities located in the center and south of Portugal. It was applied to 480 students. According to the main objectives of the project, the survey in Portugal was intended to produce a certain set of visions of the world/Europe, held by undergraduate students from 6 different domains. In this framework, the Portuguese sample should add to the project a specific perception of the world, shaped by the historical, political and economic background. The structure of the sample is allowed to identify different experiences and visions of the world, according to the students’ education level and, specially, according to their gender, spatial mobility and socio-economical background. The variables analyzed were: domain of study, gender, number of languages spoken, number of countries visited, number of countries where the students have lived more than 4 months, place of birth, level of education of parents, places where the students would like or not like to live in. The first results of the survey showed that the questioned students have a general knowledge of the world. Nevertheless, Portuguese students surveyed have a relatively limited experience of the world and a patterned perception of the world states and cities. Portuguese students also have a general north (like to live) –south (not like to live) patterned perception of the world states and cities.Taking into consideration the actual limited experience of the world (traduced by lowest number of visited countries and other subjects that the survey have), the conclusion that stands out is obviously that portuguese students knowledge is an indirect one, based on information provided by media and school, and on the local and national socio-cultural universe.

A doença de Alzheimer (AD) é uma doença neurodegenerativa crónica responsável pela maioria dos casos de demência no mundo. Apesar da grande incidência da AD na população mundial, ainda não existe uma abordagem de tratamento eficaz para a patologia. A terapia farmacológica que existe para a doença de AD apenas trata os sintomas, não sendo capaz de induzir ou prevenir regressão da doença. Devido aos muitos fatores que estão envolvidos na patologia da AD, uma terapia de múltiplos alvos seria a ideal para esta patologia. Isto, aliado ao facto de a AD ser uma doença do sistema nervoso central (CNS) e de o CNS estar protegido por uma barreira altamente seletiva, a barreira hematoencefálica (BBB), explica a ausência de um tratamento eficaz da doença. Outra limitação para tratar a perturbação é a falta de um diagnóstico preciso. No passado, um diagnóstico preciso desta patologia era mais difícil. No entanto, hoje em dia o uso de técnicas de neuroimagem como a ressonância magnética (MRI) podem dar importantes informações sobre biomarcadores. Devido a todas as limitações existentes para criar um tratamento eficaz e local da AD, esta tese de mestrado propõe o desenvolvimento de um nanossistema composto por nanopartículas híbridas de tamanho suficientemente pequeno para passar pelo BBB, que encapsulam, por sua vez, nanopartículas superparamagnéticas de óxidos de ferro (SPIONs) e um fármaco (curcumina). O nanossistema incluirá também a funcionalização destas nanopartículas com um péptido penetrante de células (CPP) que permite a translocação de membranas celulares. O nanossistema proposto pode ser considerado um agente de teranóstico, uma vez que é capaz de ter tanto um efeito terapêutico como de diagnóstico na AD. O efeito terapêutico é dado pela curcumina presente nas nanopartículas, e o efeito de diagnóstico é dado pelas SPIONs encapsuladas uma vez que podem atuar como agentes de contraste para ressonância magnética, permitindo o diagnóstico da AD. Todas as nanopartículas foram caracterizadas durante as diferentes fases do trabalho. As SPIONs produzidas foram analisadas por microscopia eletrónica de transmissão e o tamanho médio obtido foi de 12,3 ± 2,3 nm. Em seguida, todas as nanopartículas produzidas durante a otimização das nanopartículas híbridas foram caracterizadas utilizando a técnica DLS. Os diâmetros hidrodinâmicos obtidos para as nanopartículas não funcionalizadas foram de 91,6 ± 1,6 nm e para o nanossistema final (funcionalizado) foram de 120,1± 0,1 nm. Para avaliar a eficiência de internalização das nanopartículas nas células, foi utilizada uma linha celular de células endoteliais humanas do cérebro. A mesma linha celular foi também utilizada para realizar ensaios de citotoxicidade. Os ensaios celulares mostraram que as nanopartículas conseguem internalizar nas células, sendo que o nanossistema mostrou uma capacidade de internalização mais elevada do que as nanopartículas híbridas + SPIONs. Os dois tipos de nanopartículas testados também mostraram uma tendência para se tornarem citotóxicos nas concentrações testadas mais elevadas. As características do nanossistema produzido nesta tese de mestrado mostram-se promissoras para atravessar a BBB devido à sua capacidade de internalização numa linha celular de células endoteliais do cérebro humano in vitro.

Sarcomas são um grupo heterogéneo de tumores malignos com origem na transformação de células mesenquimais nos tecidos conjuntivos. Estes representam menos de 1% dos cancros adultos e abrangem mais de 170 subtipos, dos quais aproximadamente 87% provêm de tecidos moles e 13% do osso. A carcinogénese depende de alterações metabólicas e apresenta características comuns a um vasto espetro de diferentes cancros, tal como evasão à apoptose, potencial replicativo ilimitado, reprogramação do metabolismo energético, entre outros. Dois substratos metabólicos comummente utilizados pelas células cancerígenas para satisfazer as exigências biossintéticas e bioenergéticas são a glucose e a glutamina. Uma forma de estudar as características metabólicas dos tumores, incluindo os sarcomas, abrange diversas técnicas que serão descritas nesta Tese. A resultante Metabolómica é uma ampla análise quantitativa e qualitativa do metaboloma e uma das vantagens desta abordagem reside no facto dos metabolitos estarem a jusante de genes, transcrição e proteínas e, portanto, oferecem a representação mais próxima do fenótipo. Neste projeto, tínhamos como objetivo criar uma coleção de amostras de sarcoma no Biobanco do iMM-CAML, bem como caracterizar metabolicamente estas amostras, utilizando espectroscopia de RMN e avaliação da expressão genética por PCR quantitativo. Os resultados preliminares obtidos por RMN apresentaram diferenças evidentes entre o tecido tumoral e o tecido saudável adjacente. As amostras tumorais indicaram uma alta atividade glicolítica, apresentando níveis elevados de lactato acompanhados por níveis reduzidos de glucose. Além disso, foram demonstrados níveis elevados de glutamato juntamente com níveis mais baixos de glutamina, o que sugere um metabolismo de glutamina mais elevado nestas amostras. Outras diferenças observadas envolvem níveis de glucose-1-fosfato e UDP-glucose, bem como BCAA, aminoácidos aromáticos e carnosina. No que diz respeito à expressão genética, os resultados obtidos mostraram uma expressão mais elevada de LDHA, seguida por GAPDH e ALDOC. A GLS2, envolvida no metabolismo da glutamina, mostra o nível mais baixo de expressão entre os genes avaliados. A continuação da caracterização metabolómica de amostras de STS permitirá o estabelecimento de diferenças discriminativas entre STS e tecido normal, contribuindo para o desenvolvimento de terapias mais eficazes para estes tumores.

A Drepanocitose ou Anemia das Células Falciformes (ACF) é uma doença hereditária com transmissão recessiva, causada pela mutação c.20A>T no gene HBB:. Origina uma variante estrutural da hemoglobina adulta normal denominada de hemoglobina falciforme (HbS). Sob condições de hipoxia, a solubilidade da HbS reduz para um quinto, comparativamente com a hemoglobina adulta. Esta situação causa a polimerização da molécula de HbS com consequente falciformação dos eritrócitos, tornando-os menos flexíveis e mais rígidos, e propensos a eventos de vaso-oclusão e hemólise. As principais manifestações clínicas da ACF são altamente heterogéneas e advém dos eventos de vaso-oclusão e hemólise, causando anemia, isquemia e múltiplas crises de dor que requerem hospitalizações frequentes. Os indivíduos homozigóticos para a HbS têm o fenótipo mais severo e têm uma prevalência de aproximadamente 70% entre todos os indivíduos com ACF. Estes pacientes desenvolvem uma anemia grave devido à ausência da produção de hemoglobina adulta por falta de síntese de cadeias beta-globina normais. A ACF afeta mais de 300 000 recém-nascidos mundialmente por ano, particularmente na África Subsariana, onde a incidência é de 75%. Esta doença é bastante negligenciada, contabilizando uma taxa de mortalidade entre 50-90% em crianças não diagnosticadas com menos de cinco anos de idade. Apesar de ser uma doença monogénica, a ACF tem uma heterogeneidade clínica notavelmente elevada na sua expressão fenotípica. Vários fatores demonstraram modular as manifestações clínicas desta doença, nomeadamente moduladores genéticos como a alfa talassémia e os haplótipos da beta-globina, que modificam parâmetros biológicos como o grau de anemia hemolítica ou os níveis de hemoglobina fetal (HbF). Os genes ZBTB7A e ZNF410 foram propostos como possíveis influenciadores da fisiopatologia da ACF. O ZBTB7A é um regulador importante da transição da expressão de HbF para hemoglobina adulta, atuando como um repressor de transcrição aquando da sua ligação ao promotor do gene da gama-globina, responsável pela expressão de HbF. A potência de repressão do ZBTB7A pode originar a perda de 50% da HbF. Apesar da quantidade reduzida de estudos, sabe-se que o ZNF410 atua somente num alvo nas células eritroides, que é responsável por silenciar a gama-globina e, consequentemente, inibir a expressão de HbF. Dado que o ZNF410 e o ZBTB7A atuam no complexo co-repressor que desempenha funções cruciais na troca de hemoglobinas, acredita-se que estes genes representam uma influência considerável na síntese de HbF e, subsequentemente, nos fenótipos da drepanocitose. Posto isto, destaca-se a importância de explorar e estudar novos polimorfismos no ZBTB7A e ZNF410, que possam estar positivamente correlacionados com os níveis de HbF na drepanocitose, severidade da doença e diferenciação de manifestações clínicas. O tratamento primário da ACF são as transfusões de sangue e estima-se que a maioria dos pacientes com SCA tenham recebido pelo menos uma transfusão. Atualmente, existem quatro medicamentos aprovados para o tratamento da ACF: Hidroxiureia, L-Glutamina, Crizanlizumab-tmca e Voxelotor. Tecnologias de edição genética como o CRISPR/Cas9 podem alterar permanentemente os genes causadores de doenças, através da correção, exclusão, adição e interrupção de regiões específicas. Assim, este novo método de tratamento pode providenciar a cura para a maioria dos doentes drepanocíticos. No entanto, questões de segurança necessitam de ser resolvidas para garantir o seu uso clínico seguro. O objetivo deste estudo é determinar e avaliar a frequência e influência de determinados polimorfismos na severidade da doença e na resposta ao tratamento da ACF, numa população de doentes pediátricos e adultos Africanos, acompanhados na consulta da drepanocitose na Clínica Girassol, em Luanda, Angola. Adicionalmente, pretendemos definir a frequência alélica e genotípica das principais variantes genéticas relacionadas com a drepanocitose, nomeadamente o alelo S, haplótipos da beta-globina e variantes do gene BCL11A. Sendo um marcador da ACF, serão analisadas as frequências alélica e genotípica da alfa-talassémia de 3,7kb. Com os dados obtidos, tencionamos realizar estudos de associação entre os marcadores genéticos da drepanocitose e a severidade clínica da doença. Neste estudo pretendemos identificar moduladores genéticos da ACF, através do estudo de 120 pacientes angolanos drepanocíticos acompanhados na consulta de drepanocitose na Clínica Girassol em Luanda, Angola. Realizaram-se estudos de associação entre fenótipos clínicos e parâmetros bioquímicos e hematológicos, bem como 12 variantes genéticas em 7 genes relacionados com a gravidade da doença (HBB, HBBP1, HBA, HBE, HBG1, ZBTB7A e ZNF410). Moduladores genéticos conhecidos da ACF (alfa-talassémia e haplótipos da beta globina) e genes putativos modificadores de parâmetros hematológicos foram caracterizados, e as diferenças na sua distribuição foram avaliadas. Adicionalmente, tencionamos relacionar a resposta à terapia farmacológica com Hidroxiureia, com os marcadores genéticos estudados, no decorrer de uma análise retrospetiva. A presença da deleção alfa-talassémia de 3,7kb demonstrou-se protetora em fatores de severidade da doença como a idade de diagnóstico, idade de manifestação dos primeiros sintomas, número de transfusões de sangue recebidas, grau de anemia e ocorrência de crises dolorosas. Neste estudo, observámos um aumento na prevalência do alelo com a deleção relacionada com o envelhecimento, o que se confirmou por uma frequência de 50% de pacientes heterozigóticos e 16,7% de homozigóticos para a deleção com idade superior a 20 anos. No nosso projeto, verificou-se uma redução da percentagem de indivíduos a receber tratamento com Hidroxiureia diretamente proporcional ao aumento da idade. Além disso, observou-se que a maior percentagem corresponde a pacientes sem deleção. Deste modo, é possível aferir que os pacientes mais velhos e, por consequente, com mais alelos da deleção, não requerem tanto tratamento farmacológico como os indivíduos sem deleção, salientando a componente protetora da alfa-talassémia de 3,7kb em doentes drepanocíticos. O haplótipo CAR/CAR, predominante em indivíduos angolanos, foi o mais prevalente na nossa população. É caracterizado por um fenótipo mais severo, corroborado no nosso estudo por uma diminuição no número de indivíduos com este haplótipo com o aumento da idade, sugerindo uma redução na sobrevivência. Confirmou-se a severidade nos indivíduos CAR/CAR na idade de diagnóstico, necessidade de tratamento com Hidroxiureia, dactilite, crises de dor e AVCs. Contrariamente ao esperado, pacientes CAR/SEN apresentaram maior severidade na idade de manifestação de primeiros sintomas, necessidade de transfusões de sangue e demonstração de sintomas da ACF. Relativamente aos polimorfismos, a frequência de mutações no ZNF410 foi demasiado baixa para tirar elações em análise estatística. Nos polimorfismos do ZBTB7A, verificou-se um aumento na idade a que surgiram os primeiros sintomas em indivíduos com a mutação, bem como redução nas crises de dor e anemia e vantagens hematológicas, designadamente o aumento da concentração de HbF e de hemoglobina A2. Este estudo fornece uma contribuição relevante para o conhecimento genético da população angolana, na qual o haplótipo CAR é indiscutivelmente o mais comum, e a co-herança da alfa-talassémia de 3,7kb tem um grande impacto na severidade clínica da ACF. Neste projeto foram estudados, pela primeira vez, polimorfismos encontrados em genes abordados recentemente e foram realizados estudos de associação entre esses polimorfismos e os parâmetros que caracterizam o fenótipo dos pacientes drepanocíticos. Observaram-se diferenças significativas em vários parâmetros clínicos e em alguns dados hematológicos, em todos os polimorfismos estudados. Ainda há um longo caminho a percorrer antes de entendermos completamente uma doença tão complexa como a drepanocitose e o motivo pelo qual ela se manifesta de diferentes formas nos pacientes. Esta heterogeneidade é, sem dúvida, influenciada pela herança genética dos pacientes, mas esse não é o único fator. Deste modo, são necessários mais estudos para corroborar os resultados obtidos e confirmar as nossas hipóteses acerca do impacto dos polimorfismos na severidade clínica da ACF.

The globalisation process has been changing the Portuguese productive structure but also the urban and regional economic geography, phenomenon particularly important after Portuguese integration in the European Community in 1986. The increase of foreign direct investment (FDI), the growth of the service sector, the industrial restructuring and the change of exports constitute the main economic effects of globalisation in Portugal. In the present paper we will present a brief empirical analysis of these recent trends and their urban and regional dynamics.

Introdução: O mau uso de medicamentos psicoativos (MUMP) é um problema de saúde pública, sendo mais significativo nos Estados Unidos da América. Na União Europeia (UE), a evidência é limitada e quase ausente em Portugal. O objetivo desta dissertação é adquirir conhecimento sobre as consequências do MUMP a nível europeu e nacional, e identificar indicadores de morbilidade associada a este fenómeno em Portugal (2014-2018). Metodologia: De forma a avaliar as consequências do MUMP na UE foi realizada uma scoping review. A PubMed, Scopus e a Web of Science foram as bases de dados (BD) utilizadas para a realização da pesquisa entre 2011 e 2020. Adicionalmente, artigos de outras fontes foram incluídos na pesquisa. Uma análise preliminar foi realizada à BD de hospitalizações. Resultados:Com a scoping review, foram identificados 1.339 artigos, dos quais 110 artigos foram incluídos. Os mesmos reportaram dados sobre o consumo, fatores de risco, mau uso e suas consequências e características da população. A análise preliminar da base de dados realça um total de 13.813 admissões hospitalares (AH) registadas num período de 5 anos, com uma tendência de cresci-mento observada (aumento de 2,2 vezes). A maioria das AH associadas ao mau uso de MP foram em mulheres e as principais classes terapêuticas foram ansiolíticos (65%) e antidepres-sivos (16%). Conclusão:A evidência disponível na UE sobre o MUMP, foca-se nos opioides, benzodiazepinas/z-hipnó-ticos e gabapentinoides. Foi observada uma diferença entre mulheres e homens, com estudos a reportar o mau uso de benzodiazepinas/z-hipnóticos em mulheres e o mau uso de opioides nos homens. Em Portugal, as AH envolveram mais mulheres, com ansiolíticos e sedativos como a causa principal de admissões hospitalares.

As vesículas extracelulares (EVs), envolvidas na comunicação intercelular e a necroptose, uma via de necrose regulada, cuja maquinaria facilita o tráfico endosomal e a geração de EVs, foram recentemente implicadas na patogénese de fígado gordo não alcoólico (NAFLD). Neste trabalho tivemos como objetivo caracterizar o papel funcional da maquinaria necroptótica na geração de EVs provenientes de hepatócitos (Hep-EVs) e o seu impacto na função dos hepatócitos com sobrecarga lípidica. Hep-EVs foram isoladas por precipitação a partir de células AML12 wild-type (WT), deficientes em Ripk3 e em Mlkl na presença ou ausência de 125 µM ácido palmítico (PA) durante 24h, sendo depois caracterizadas por immunoblotting e análise de rastreamento de nanoparticulas. De seguida, após 1h de pré-exposição a 10 µg/mL Hep-EVs, os hepatócitos foram incubados com 125 µM PA por 48h, seguido de avaliação da morte celular e do metabolismo lípidico. Os nossos resultados mostram que a incubação com PA aumenta a secreção de Hep-EVs, um fenótipo que é dependente da maquinaria necroptótica. Em contraste com os hepatócitos Mlkl-/-, os hepatócitos Ripk3-/- estiveram protegidos da morte celular provocada pelo PA, a qual por sua vez não foi afetada pela exposição a EVs. Ainda assim, as EVs derivadas de células WT tratadas com PA aumentaram ainda mais os níveis de RIPK3 em células WT tratadas com PA, um efeito que foi anulado pela deficiência em Ripk3. De igual modo, embora os hepatócitos Ripk3-/- tenham uma expressão aumentada de enzimas lipogénicas, estas células apresentaram menor acumulação lipídica, a qual foi ainda mais reduzida pela incubação com Ripk3-/- Hep-EVs. Este efeito foi concomitante com o aumento da expressão de marcadores de β-oxidação e autofagia. Por fim, as células Ripk3-/- apresentam níveis diminuídos de NLRP3 e Tgf-β, indicando que a RIPK3 pode regular a ativação do inflamassoma e a sinalização profibrogénica após sobrecarga lipídica. Em conclusão, a deficiência em Ripk3 protegeu os hepatócitos da lipotoxicidade, acompanhada pela redução da expressão de mediadores pró-inflamatórios e fibrogénicos, bem como alterações no metabolismo lipídico. Além disso, EVs necroptóticos podem ter um papel na comunicação hepatocelular, particularmente afetando o metabolismo lipídico e os níveis de RIPK3 nos hepatócitos vizinhos, provavelmente contribuindo para a patogénese de NAFLD.

O cancro colorretal (CRC) é uma doença agressiva com elevada incidência e mortalidade em todo o mundo. Apesar dos avanços no diagnóstico e terapia, a recorrência e as metástases são comuns, principalmente devido à existência de células estaminais cancerígenas (CSCs). Tal apela à descoberta de novos fármacos, que induzam vias de morte celular alternativas nas CSCs do CRC, para o seu uso em combinações terapêuticas. Assim, tivemos como objetivo validar três compostos previamente selecionados de uma triagem fenotípica para inibidores de CSCs no CRC e caraterizar a sua citotoxicidade. As linhas celulares HT29 e HCT116 foram plaqueadas a baixa densidade, utilizando meio para não-diferenciação e em condições de baixa adesão, para promover a formação de esferas enriquecidas em CSCs. A morte e a viabilidade celular foram avaliadas através de ensaios bioquímicos, seguidos do estudo de marcadores de morte celular, estaminalidade e diferenciação por qPCR e immunoblotting. A eficácia dos compostos foi validada in vivo em modelos de xenotransplante de HT29 à dose de 10 mg/kg i.p., três vezes por semana. Os nossos resultados revelam que os compostos foram tanto ou mais eficazes do que a salinomicina no impedimento da formação e crescimento das esferas colorretais enriquecidas em CSCs. Apesar das inconsistências na expressão de marcadores de estaminalidade/diferenciação, os compostos reduziram a viabilidade celular de esferas tumorais de células HT29 e HCT116, concomitante com um aumento da libertação extracelular de ATP, um damage associated molecular pattern bem estabelecido. A co-incubação com inibidores de morte celular revelou que os compostos induzem uma combinação de apoptose, necroptose e ferroptose em ambas as linhas celulares. Estes resultados foram apoiados pela modulação de marcadores característicos de apoptose e necroptose pelos compostos, nomeadamente caspase-3/7, PARP-1 e MLKL. Além disso, a indução de ferroptose em esferas tumorais de HCT116 foi corroborada pela alteração dos níveis proteicos de SLC7A11, GPx4, FTH1 e ALOX5, proteínas envolvidas no metabolismo do ferro e na peroxidação lipídica. Por fim, dois compostos foram bem tolerados e inibiram o crescimento tumoral in vivo, para além de modularem a expressão proteica dos principais marcadores de morte celular. Em conclusão, com este estudo descobrimos novos inibidores de CSCs de CRC que activam vários tipos de morte celular regulada com potencial imunogenicidade. Em particular, demonstrámos que a eliminação de CSCs colorretais por ferroptose poderá constituir uma estratégia para superar a resistência à morte celular em cancro.

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This chapter uses Tönnies’ notions of Gemeinschaft and Gesellschaft to examine the issue of plagiarism from a culturalist perspective. According to this, plagiarism is understood not as a universal or unequivocal evil, but as one component of a particular ethical system that took hold within a specific historical and social context, roughly contemporary with the European Enlightenment. Today, that ethical framework is so deeply entrenched in the power structures of the modern world that its values go largely unquestioned in countries at the centre of the world economic system. However, as we move away from the centre towards the periphery, we find that those values become weaker, and may enter into conflict with another moral code, which is usually more traditional in nature, though no less coherent. Indeed, in some parts of the world, it is those traditional values that actually hold sway in local universities, raising serious problems for academic mobility and the internationalization of knowledge. The very concept of plagiarism is also full of inherent contradictions, caused, at least in part, by historical tensions generated by the passage from one kind of society to the other. Vestiges of the Gemeinschaft continue to penetrate all aspects of modern university culture, ranging from teaching practices (the persistence of imitatio in academic writing courses) and hierarchical relations (the power balance inherent in the tutor/student dynamic) to the very philosophy of knowledge underlying modern science (where the rhetorical implications of the citation procedure sit uncomfortably alongside a metadiscourse of transcendental truth). Hence, this chapter argues that, in a context of increased globalization, there is a need for a deeper understanding of the various dynamics at work in this complex concept.

A pesquisa visa trabalhar o estado de Minas Gerais, aprofundando para as análises no Cerrado, especificamente na mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba e, tem como objetivo geral elaborar uma tipologia de municípios segundo o grau de vulnerabilidade social. A metodologia consistiu no levantamento teórico acerca da temática e na coleta dos indicadores representativos de cinco dimensões Demografia e estrutura urbana; Nível de infraestrutura básica; Renda e trabalho; Educação (Níveis de escolarização e acesso à prestação do serviço); Saúde (Estado de saúde e acesso à prestação do serviço). Após isso, foi realizada uma avaliação dos dados para os municípios das sete microrregiões da mesorregião estudada correlacionando os dados com as dinâmicas urbanas locais, o processo histórico de formação territorial e da implantação de polícias governamentais, através da realização de uma análise fatorial de componentes principais, com resultados sintetizados numa posterior análise de clusters. Nota-se menor grau de vulnerabilidade nos municípios das microrregiões beneficiadas pelas polícias públicas como, por exemplo, no entroncamento de importantes rodovias ligadas à Brasília.

As reações adversas a alimentos têm vindo a assumir cada vez mais importância no dia-a-dia de vários indivíduos pelo mundo. O termo alergia alimentar é utilizado para descrever respostas imunológicas que podem ser desencadeadas após o consumo de alimentos específicos ou devido a determinadas condições fisiológicas desencadeadas nos indivíduos após o seu consumo. As reações adversas aos alimentos, sejam elas alérgicas ou não, surgem de uma variedade de mecanismos diferentes. Estas podem envolver o sistema imunológico quando se trata de alergias, ou por outro lado, serem apenas reações fisiológicas ou enzimáticas quando se trata de intolerâncias ou intoxicações por determinadas componentes do alimento, nomeadamente aminas biogénicas. Esta dissertação está dividida em cinco partes, onde primeiramente é apresentada uma revisão de bibliografia sobre esta temática, depois a discussão metodológica e aplicação prática, a apresentação de resultados, a sua discussão e a conclusão. Foram realizadas três componentes práticas de forma a fundamentar a bibliografia já existente através dos resultados obtidos. Ao longo do trabalho serão explanadas as características das diferentes proteínas que causam as principais reações adversas, assim como a influência da qualidade microbiológica dos alimentos no desenvolvimento de aminas biogénicas, que são um importante veículo para o desencadeamento de reações adversas ligadas ao consumo de alimentos e que podem desencadear quadros alérgicos. Foi realizado um capítulo experimental onde foram analisados microbiologicamente e quimicamente diversos pratos confecionados com peixe e produtos do mar, assim como foi criado um questionário on-line (amostra conseguida por método de bola de neve) direcionado à população com o objetivo de fazer uma breve identificação e caracterização da população que é afetada com este tipo de patologia. Dada a complexidade de sinais e sintomas que decorrem deste tipo de condição clínica, impõe-se a necessidade de um diagnóstico diferencial que remete a vários fatores de promoção deste tipo de condição. Por esse motivo foi essencial entender a origem de certas debilidades que muitas das vezes surgem no próprio alimento e que após serem consumidos por indivíduos mais sensíveis, podem mesmo desencadear quadros graves de reações adversas. Foi possível concluir que existe uma relação clara entre a qualidade microbiológica dos alimentos e o desenvolvimento de aminas biogénicas, que desencadeiam quadros toxicológicos semelhantes aos alérgicos. Foi também concluído que a alergia ao peixe e produtos do mar é bastante significativa na população portuguesa.

Enquadramento: O consumo crescente de suplementos alimentares por parte de praticantes de desporto de variadas modalidades, que o façam quer a nível profissional quer de maneira recreativa, tem vindo a ser notado. Contudo, os motivos que apresentam para a suplementação são, muitas vezes, baseados em crenças pouco fundamentadas e não na compreensão das vantagens que esta realmente oferece. Para além de ter sido evidenciado algum desconhecimento, a obtenção de informação tem sido feita muitas vezes a partir de fontes inapropriadas ou por aconselhamento de pessoas despreparadas, que não conhecem a verdadeira eficácia dos suplementos e não têm qualificação para falar sobre nutrição desportiva. Objetivo: Esclarecer o potencial ergogénico dos suplementos que mais se consomem na atualidade, através da compreensão dos mecanismos de ação associados à prática de exercício físico, e detetar a possibilidade de ocorrência de reações adversas – de maneira a que os desportistas consigam enriquecer o seu conhecimento para tomar decisões assertivas. Método: Pesquisa sem horizonte temporal definido, a partir das bases de dados eletrónicas: PubMed, SciElo, MDPI, Science Direct e Google Académico. A partir dos artigos selecionados foi feita uma pesquisa manual. Foram incluídos estudos que permitiram compreender o tema base, que são os suplementos alimentares, e associando-o ao desporto, entender as motivações para o seu consumo e quais as fontes de informação/aconselhamento dos atletas, a forma como os suplementos atuam de maneira a resultar em benefícios na prática desportiva, os protocolos de dosagem adequados, e os riscos adversos que podem surgir com esse consumo. Resultados: A creatina e a proteína whey apresentam fortes evidências para apoiar a sua eficácia e segurança, quer a nível de construção muscular, quer de melhoria de desempenho físico. A β-alanina, o bicarbonato de sódio e a cafeína demonstraram melhorias significativas a nível de performance atlética, e aparentam ser seguros, numa grande quantidade de estudos. Por outro lado, o nitrato, os BCAA e a L carnitina apresentam fundamentação científica em menor quantidade. Conclusões: Na maioria dos estudos analisados foi evidenciada uma melhoria no desempenho físico pelos participantes que ingeriram os suplementos a ser estudados, comparativamente aos grupos placebo. Posto isto, a suplementação poderá ser recomendada, nas doses corretas e com a supervisão de um profissional entendido, que assegure a adequação, eficácia e segurança.

A escopolamina, um composto anticolinérgico, é frequentemente aplicada como modelo farmacológico para debilitar funções cognitivas. É usado principalmente em dose única e em animais jovens. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do tratamento crónico com escopolamina em várias funções cognitivas em ratos experientes. Também foi testado até que ponto o donepezil pode melhorar o deficite cognitivo. Ratos da espécie Long-Evans de 8,5 meses de idade foram treinados regularmente em paradigmas como 5CSRTT (medindo a atenção), MWM (aprendizado espacial), Pot jumping (aprendizado da função motora), discriminação em tela sensível ao toque de caixa (TS) (aprendizagem visual) e uma tarefa de cooperação (aprendizagem social). Após as medições iniciais, os ratos foram distribuídos aleatoriamente em três grupos de tratamento: solução salina, escopolamina (0,3 mg/kg) e escopolamina+donepezil (3 mg/kg). Os grupos de salina e escopolamina receberam tratamento via ip por 20 dias, o grupo escopolamina+donepezil foi injetado com escopolamina por 10 dias e então escopolamina e donepezil durante os 10 dias seguintes. A escopolamina prejudicou significativamente o desempenho em 5CSRTT, COOP e PJ: em 5CSRTT, os animais de controlo acertaram mais e produziram menos omissões do que os animais tratados. Os ratos tratados com escopolamina realizaram ensaios fracos em testes de cooperação, quando comparado com os de controlo. No entanto, o desempenho melhorou gradualmente durante o período de tratamento. Em PJ, o grupo de controlo pôde saltar distâncias significativamente maiores do que o grupo tratado com escopolamina, e a magnitude do efeito da escopolamina aumentou com tratamentos repetidos. A escopolamina exerceu um efeito fraco em TS e não mostrou efeitos significativos em MWM. Donepezil não melhorou o deficite de desempenho de aprendizagem em nenhum dos testes. Todos os grupos apresentaram desempenho semelhante aos níveis iniciais logo dois dias após a descontinuação dos tratamentos. Com base nos nossos resultados, o tratamento repetido com escopolamina não induziu mudanças duradouras no funcionamento das redes neurais cognitivas, portanto, provavelmente não será um modelo adequado para testar medicamentos de tratamento para demência especialmente em animais jovens.

O meio escolar influencia o comportamento alimentar infantil, considerando que muitas das refeições diárias são realizadas na escola e que este espaço é fulcral para a aprendizagem de hábitos de alimentação saudável. Assim, as refeições fornecidas devem seguir as orientações nacionais e ser adequadas às necessidades das crianças, sendo simultaneamente sensorialmente apelativas para diminuir o desperdício alimentar. Desenvolveu-se um instrumento de avaliação para avaliar a oferta e ambiente alimentar em escolas do 1º ciclo do ensino básico, que engloba parâmetros relativos às políticas alimentares, avaliação sensorial, segurança alimentar e desperdício alimentar, utilizando-se o método de pesagem e de estimativa visual. Para o cumprimento deste objetivo participaram no estudo 11 escolas inscritas no estudo COSI Portugal da região de Lisboa e Vale do Tejo, nas quais foi aplicada a Ferramenta de Avaliação. A caracterização escolar revela que as escolas apresentam preocupações com a melhoria da alimentação e redução da obesidade infantil apesar da ausência de política alimentares. Averiguou-se que os conhecimentos em segurança alimentar das assistentes operacionais são bastante heterogéneos, reforçando a necessidade de uniformizar comportamentos através da disponibilização de formação contínua. Verificaram-se diversos incumprimentos nas ementas, existindo itens a melhorar, nomeadamente, não preferência pelos peixes gordos, ausência semanal de leguminosas e baixa disponibilização de pratos de ovo. Ao avaliar o desperdício alimentar, observou-se que são desperdiçados cerca de 159 g por aluno, ou seja, 46,57% da refeição. Verificou-se que o método de estimativa visual subestima o desperdício real, avaliado pelo método de pesagem. Os resultados obtidos permitem afirmar que o ambiente alimentar escolar em Lisboa e Vale do Tejo possui oportunidades de melhoria, sendo necessário incluir novos modos de intervenção como a realização de aulas de culinária e hortas escolares. É relevante a realização de outros estudos neste âmbito para adotar estratégias focadas nas necessidades de cada escola.

As plantas halófitas são plantas tolerantes à salinidade, comestíveis e que se encontram por todo o mundo, inclusive em Portugal, ao longo da costa. Estas plantas possuem na sua constituição compostos fenólicos, que são antioxidantes naturais, e que têm sido apontados como responsáveis por alguns dos efeitos benéficos para a saúde do ser humano. Existem diversas espécies de plantas halófitas, no entanto, a mais conhecida e comercializada é a Salicornia ramosíssima. Dada a utilização cada vez mais importante deste tipo de plantas, justifica-se um estudo aprofundado sobre a sua composição e possíveis benefícios para a saúde. Para aumentar este conhecimento, há necessidade de otimizar metodologias de extração e análise que permitam ter uma informação detalhada sobre a composição destas plantas. Esta dissertação teve como principal objetivo extrair compostos bioativos de plantas halófitas, mais concretamente de S. ramosissima e caraterizar a sua composição química e bioatividade. Inicialmente realizou-se a caraterização da planta, onde foi possível identificar os compostos voláteis responsáveis pelo aroma das plantas presentes na sua composição, estudar o seu perfil lipídico e identificar e quantificar pigmentos e compostos fenólicos. Através desta caraterização verificou-se que a amostra, relativamente a compostos voláteis, possui maioritariamente álcoois (25%) e alcanos (27%), tendo também na sua composição compostos como o mentol (9.55%) e a cânfora (2.90%). Ao extrair o conteúdo lipídico da amostra foi possível identificar e quantificar os diferentes ácidos gordos presentes, sendo os maioritários o ácido alfa-linoleico (C18:3, 34%), o ácido linoleico (C18:2, 17%) e o ácido palmítico (C16, 21%). Possui carotenoides e clorofilas na sua composição. Relativamente a compostos fenólicos, foi possível identificar mais de 10 tipos diferentes, mas os maioritariamente presentes na planta são o ácido clorogénico e o quercetina-3-glucósido. Testaram-se depois diferentes técnicas de modo a extrair compostos bioativos utilizando-se técnicas convencionais – Soxhlet - e alternativas, como a extração por fluidos supercríticos, extração assistida por ultrassons e extração assistida por microondas. Com o auxílio de um programa estatístico, o MODDE, foi possível otimizar esta última extração. Ao comparar os resultados obtidos, concluiu-se que a extração assistida por microondas é o melhor método de extração uma vez que não consome muito tempo e energia, é um método relativamente simples e obtêm-se valores elevados de rendimento mássico e conteúdo fenólico total, 56.69% e 30.76 mg GAE/g extrato, respetivamente. Em suma, esta dissertação permitiu caraterizar a composição da Salicornia ramosissima e otimizar métodos de extração considerados “amigos do ambiente” para compostos bioativos.

Após o inicio da pandemia causada pelo vírus SARS-COV-II, uma das características da sociedade moderna, que já se vinha a desenvolver desde o início da computação e posterior inserção das redes sociais, tem sido o aumento exponencial da ansiedade e sua respetiva progressão para a depressão, causada por uma maior agitação diária e permanente stress associado, bem como perspectivas irrealistas da vida que levam a comparações difíceis de alcançar. Por este motivo, cada vez mais pessoas procuram ajuda especializada ou decidem por auto recriação, encontrar soluções para aquilo que vão sentindo, nomeadamente a utilização de suplementos alimentares. Sendo os suplementos alimentares considerados um alimento, são tutelados pela DGAV (Direção Geral de Alimentação e Veterinária) e passam pelo crivo desta instituição antes da sua venda ao público, mas sem a necessidade de comprovação sobre qualidade, eficácia e segurança como, por exemplo, acontece com os medicamentos. Têm venda livre e não requerem nenhuma prescrição especifica e nem sempre têm sempre supervisão médica nem ajuda de profissionais com formação para aconselhamento. Para além do próprio suplemento alimentar poder ter algumas contraindicações de utilização, pode haver interação com medicação ou outros géneros alimentícios. A ansiedade e depressão são doenças mentais que já eram prevalentes no mundo e que agravaram consideravelmente durante o período da pandemia. Embora a medicação ainda seja considerada a primeira solução de intervenção, muitos indivíduos na procura de novas soluções, têm decidido por suplementos alimentares como uma resposta de recurso terapêutico na melhoria dos sintomas e na promoção da saúde. Os suplementos alimentares, enquanto alimentos com relevância na suplementação específica de determinados micronutrientes como, ferro, magnésio, cálcio, zinco, selénio e iodo, diversas vitaminas, tais como, A, complexo B, C, D, E, fontes alimentares que contenham ômega-3, probióticos, aminoácidos e extratos de ervas, são uma resposta benéfica no perfil de doenças do foro psicológico. Deste modo, são indicadas as evidências de uma boa saúde do trato Gastrointestinal, tendo esta uma relação direta entre a saúde física e a mental. Este estudo teve como objetivo compreender, através de uma revisão de literatura, o estado da ansiedade e depressão numa sociedade pós pandemia SARS-COV-2 e o papel dos suplementos alimentares como uma solução viável. Foi identificada a relevância da dieta , no estado clinico geral do paciente e o modo como pode contribuir para a melhoria da saúde nas patologias estudadas. Foi igualmente elaborado um questionário, distribuído por correio interno, durante o mês de Julho de 2022, pelas várias faculdades da Universidade de Lisboa, tendo os resultados sido recolhidos no final do mesmo mês. Após recepção, os questionários foram codificados, de forma a assegurar a confidencialidade. O inquérito foi dividido em duas secções e obteve um total de 83 respostas. Após a análise dos resultados, conclui-se que a maioria dos inquiridos estão muito habituados a interações sociais e podem ressentir-se com o aumento de stress e consequente ansiedade e depressão, com maiores ou menores consequências a confinamentos, em especial quem vive sozinho ou com um número reduzido de pessoas no seu agregado familiar, por isso a ansiedade associada ao impacto COVID-19, foi aumentada. Avaliou-se se os alunos d Universidade de Lisboa, representados pela amostra, acreditam que a toma de suplementos alimentares pode representar um benefício e são consumidores dos mesmos.

O consumo de frutas e os hortícolas é fundamental devido aos aspetos relacionados com a saúde, uma vez que são considerados alimentos de baixo valor energético e fonte de vitaminas e minerais, compostos antioxidantes e bioativos, que contribuem para a prevenção de inúmeras doenças crónicas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial funcional (atividade antioxidante, composto fenólicos in vitro, vitamina C) de 5 ingredientes (laranja, maçã, kiwi, espinafre e cenoura) e de 19 misturas. Foi desenvolvido e aplicado um questionário online disponibilizado ao público por e-mail e através das redes sociais, para avaliar a perceção dos consumidores relativamente às frutas e aos hortícolas. Nos ingredientes e nas misturas foi determinada a atividade antioxidante, fenólicos e flavonoides totais e teor de vitamina C. A análise elementar foi determinada nas misturas 2, 7 e 9. Posteriormente, com base nos valores obtidos para os diferentes parâmetros, foram avaliados os efeitos sinérgicos, antagónicos e/ou aditivos. Os resultados do questionário demonstraram que a maioria dos inquiridos desconhece o conceito de porção de fruta e hortícolas. De entre os ingredientes analisados o que apresentou os melhores resultados foi o kiwi, e a cenoura apresentou os valores mais baixos. A mistura 2 (50% kiwi, 15% laranja, 14% maçã, 11% cenoura e 10% espinafre), foi aquela que apresentou os valores mais elevados e a mistura 7 (50% cenoura, 20% kiwi, 10% espinafre, 10% maçã e 10% laranja) apresentou os valores mais baixos. Verificou-se que uma menor ingestão dos ingredientes, comparativamente às misturas, consegue contribuir com valores mais elevados. Por exemplo, a ingestão de 100 g de qualquer uma das misturas contribui com quantidades inferiores de vitamina C total, comparativamente à ingestão de 100 g de kiwi. Do ponto de vista do consumidor e da saúde pública é fundamental compreender os tipos de interações que ocorrem entre as misturas de frutas e hortícolas porque desta forma poderemos chegar às quantidades que devem ser utilizadas e potenciar os benefícios para a saúde associados ao consumo de frutas e hortícolas.

Abstract: Many overtouristified cities introduced limitations to the diffusion of short-term rentals, and are struggling to guarantee their enforcement, while evidence about the impact of those regulations is limited. The article provides an overview of the instruments adopted by 16 European cities, and an assessment of their effectiveness. By comparing regulated and unregulated cities, we show that the former obtained a persistent reduction in the number of listings of entire apartments, in the ratio between entire apartments and shared rooms, and in the number of professional hosts, but no significant impact on the spatial concentration of short-term rentals in the city. We also provide evidence of the effects of the diverse regulatory strategies, and of the importance of obtaining the cooperation of booking platforms.