RCAAP Repository

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Civil e Ambiental, 2013.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Física, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Arquitetura e Urbanismo, Programa de Pesquisa e Pós-Graduação, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Educação, Programa de Pós-Graduação em Educação, 2013.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Centro de Desenvolvimento Sustentável, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Economia, Administração e Contabilidade, Programa de Pós-Graduação em Economia, Mestrado Profissional em Finanças Públicas, 2013.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Sociologia, Programa de Pós-Graduação, 2012.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Geociências, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Mecânica, 2008.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013.

We report the construction of two vectors for Escherichia coli: pUC72, for molecular cloning, and pPLT7, for thermal-induced expression. The main feature of pUC72 is a novel polylinker region that includes restriction sites for Nde I and Nco I which provide an ATG codon for proper translation initiation of expressed genes. Vector pPLT7 is ideal for thermo-inducible expression in host cells that carry the cI857 repressor gene. The use of pPLT7 was validated by the successful expression of the genes encoding carp and porcine growth hormones. These vectors provide novel cloning possibilities in addition to simple, non-expensive, high level expression of recombinant proteins in E. coli.

Urate oxidase (EC 1.7.3.3) is an enzyme involved in purine metabolism which is used in the treatment of gout and as diagnostic reagent for detection of uric acid. In order to produce this enzyme in large quantities for biotechnological purposes, the gene coding for the Bacillus subtilis urate oxidase was cloned and heterologously expressed in Escherichia coli. Time course induction in E. coli showed an induced protein with an apparent molecular mass of ∼60 kDa. Soluble recombinant enzyme was purified in a single-step procedure using Ni-NTA column. The enzyme was purified 2.1-fold with a yield of 56% compared to the crude extract. MALDI-TOF analysis revealed an ion with a mass of 58675 Da which is in agreement with the expected mass of the recombinant protein. The purified enzyme showed an optimal pH and temperature of 8.0 and 37◦C, respectively, and retained 90% of its activity after 72 hours of incubation at −20◦C and 4◦C.

Acompanha errata.

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5’- ggcttgtttgaatggtttgacg- 3’) foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5’-cgactcatgaagataaacaaggt-3’) e TBR- 5 (5’-cggtcgaacagaccataaatct-3’) e TBR-6 (5’- gctactacacctaaattctaacc- 3’) para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregandose DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.

Este trabalho relata uma clonagem e seqüenciamento das subunidades alfa e beta do hormônio folículo estimulante de Bos taurus indicus. Também apresenta os resultados de comparação realizada das seqüências gênicas dessas cadeias com as seqüências das cadeias alfa e beta do FSH de suínos e da cadeia beta de bovinos Bos taurus taurus já presentes no GenBank. Na comparação das seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos predita da cadeia αFSH de Bos taurus indicus com as cadeias αFSH de outras espécies como suínos e búfalo (Bubalis bubalis), observou-se que as seqüências são bastante similares. A comparação da seqüência da subunidade αFSH de Bos taurus indicus com a de suíno demonstrou diferenças em três resíduos de aminoácidos. Na comparação com ßFSH, registrou-se modificação na primeira base do codon que levou à alteração no resíduo do aminóacido 83, que, em Bos taurus indicus, é uma glicina, ao invés da serina presente em Bos taurus taurus. Confirmaram-se essa modificação e todas as outras identificadas na seqüência dos cDNA das cadeias αFSH e βFSH em outra clonagem. A modificação Ser para Gly na posição 83 foi a única que alterou a identidade do resíduo de aminoácido na comparação entre as subunidades beta do FSH de Bos taurus indicus e Bos taurus taurus. Contudo, ela não deve alterar significativamente as propriedades fisiológicas do FSH, uma vez que o resíduo de glicina encontrado nessa posição também é encontrado na cadeia βFSH suína. Trata-se, portanto, de uma modificação particular que distingue as cadeias βFSH de B. taurus taurus e B. taurus indicus.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, 2013.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ecologia, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2013.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Economia, Administração, Contabilidade e Ciência da Informação e Documentação, Departamento de Economia, Programa de Pós-Graduação em Economia, 2013.