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A renovação que o campo católico atravessa ao longo da década de 60 do século XX é uma dimensão‑ -chave para compreender a dinâmica de democratização que lentamente começa a ganhar forma na sociedade portuguesa e que irá constituir um dos eixos que conduzirão ao 25 de abril de 1974. O problema da liberdade religiosa e o modo como esta questão se irá colocar nos primeiros anos da década de 70, quer pelas posições da chamada “Ala liberal” na Assembleia Nacional, quer pelos trabalhos da SEDES (Associação para o Desenvolvimento Económico e Social), pode constituir assim um novo ponto de observação para esta dinâmica. Utilizamos estes dois grupos como forma de circunscrever o problema.

The present volume marks the bimillennium of the death of the princeps with a selection of essays that offer new approaches to the Emperor Augustus and his reign. The essays cover a variety of subjects related to Augustan scholarship from a twenty-first century perspective. The studies brought together in this volume are based on papers delivered and discussed by archaeologists, philologists, and historians of ancient Rome at the conference on ‘XIV A.D. SAECVLVM AVGVSTVM. The Age of Augustus’ held in Lisbon (the Roman Olisipo) in September 2014. The title, Augustan Papers, is intended to commemorate the eightieth anniversary of the publication of Ronald Syme’s Roman Papers (1939).

A necessidade do acesso à informação científica, enquanto condição indispensável para a geração de novo conhecimento, coloca o problema da informação num papel central no desenvolvimento da ciência. Este trabalho procura perceber a interação entre as bibliotecas especializadas e do ensino superior e as unidades de investigação científica que operam em Portugal, particularmente o papel que as bibliotecas desempenham nos processos de produção e de disseminação da ciência. Essa análise é feita em torno de três vertentes: as perceções mútuas entre bibliotecários e investigadores, o comportamento informacional dos investigadores face às bibliotecas e o impacto das bibliotecas na investigação. Através de um estudo de caso, são analisadas sete Unidades de Investigação & Desenvolvimento da Área Metropolitana de Lisboa e nove bibliotecas associadas. Enquadradas no paradigma pragmático e com recurso a métodos mistos, foram utilizadas três técnicas de recolha de dados: análise documental, inquérito por questionário e inquérito por entrevista. Os resultados mostram que das perceções mútuas entre investigadores e bibliotecários emergem duas visões distintas, marcadas pelo desconhecimento e pelas debilidades no diálogo entre as partes. Por um lado, os investigadores mostram uma perceção pragmática sobre as bibliotecas, ao passo que os bibliotecários revelam uma perspetiva otimista e positiva sobre o papel que as bibliotecas exercem. O comportamento informacional face às bibliotecas é entendido pelos investigadores como negativo, surgindo amiúde evidências da dispensabilidade das bibliotecas. A profusão de serviços digitais que competem com as bibliotecas reforça o quase desaparecimento da sua dimensão física e dos seus espaços. Em sentido oposto, os bibliotecários tendem a revelar uma perceção positiva sobre o comportamento informacional dos investigadores face às bibliotecas. Em termos de impacto das bibliotecas na ciência, este é reconhecido de forma insuficiente pelos investigadores, o que pode ser explicado pela ausência detetada de serviços dedicados de apoio à investigação prestados pelas bibliotecas. A falta de recursos humanos e materiais, a concentração nas tarefas relativas ao ensino-aprendizagem e a fragilidade histórica das bibliotecas portuguesas, são outros fatores que podem ajudar a compreender esta perceção. A visão dos investigadores não é partilhada pelos bibliotecários, que tendem a afirmar, numa perspetiva otimista, os efeitos positivos do impacto das bibliotecas. Em face destes resultados, recomenda-se aos investigadores e aos profissionais da informação a mudança de mentalidades, como um elemento essencial da equação que envolve a criação de novos serviços, adequados e próximos das diferentes fases do ciclo de vida da investigação. Esta mudança pode afastar as bibliotecas de uma certa exclusão do futuro, reforçando a sua posição de fornecedora de serviços e de produtos, e transportando-a para uma posição de intervenção ativa na produção e na disseminação da ciência. A chave desta equação é a ideia de parceria entre investigadores e profissionais de informação, concretizada com a imersão destes profissionais em equipas de trabalho multidisciplinares e imbuídas de espírito colaborativo, em prol do desenvolvimento científico.

O Volume Viagem e Cosmopolitismo: da Ilha ao Mundo reúne trinta e três estudos que, com olhares diversos, mas complementares, interpretam os sentidos da condição humana, na sua relação com o espaço, o tempo, o Outro ou o próprio Eu, enfatizando e problematizando a realidade cosmopolita, que surge, de forma tão evidente, plasmada na produção literária e cultural. Nesse sentido, o presente Volume propõe-se contribuir para o estudo das relações inter e transculturais dos diversos saberes, que actualmente se têm destacado, impondo-se à exploração do conhecimento no âmbito das Humanidades e de outras áreas afins.

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Tiago Rodrigues is, today, one of the most credited European theatre artists. From an actor who wrote and often directed his own texts, Rodrigues quickly began to establish himself also as an author and director. There is an undoubtable singularity in Tiago Rodrigues’ theatre. He is one of the clearest examples in contemporary world performance of a Goethian drive for “world literature”. It is our argument that one of Rodrigues most perceivable dramaturgical axes is a desire to pay homage to European humanistic traditions as a gesture of political resistance through art and memory. His literary journey through the words and titles of the past aim poignantly to supersede the failures of the present.

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Este texto faz o balanço do Laboratório de Escrita para Teatro, promovido pelo Teatro Nacional D. Maria II (Lisboa), que coordenei de Setembro de 2015 a Setembro de 2019. Nesses quatro anos foram escritos vinte e três textos originais para teatro por vinte e três novos autores. O projecto surge integrado num programa mais lato de apoio a dramaturgias emergentes e ao incentivo à nova dramaturgia portuguesa, consistindo, neste caso, na aproximação de jovens autores dramáticos a processos de partilha, experimentação e colaboração que possam desafiar, influenciar e estimular a escrita original de um texto para teatro. Na primeira edição (2015/16) andámos em torno de “Um estado de excepção permanente”, sob a égide de Terry Eagleton (2003) e da ideia de quea dramaturgia contemporânea não tem outra hipótese senão dar conta do estado de guerra –um estado de excepção permanente –entre os indivíduos e as instituições de poder. Na segunda edição (2016/17) fomos questionando “A política de tudo”, num gesto de homenagem aos cem anos da Revolução de Outubro e de uma inquirição das contradições do século XX, inspirados pela lição de Alain Badiou (2005). Na terceira edição (2017/18) demorámo-­‐‑nos n’ “O quotidiano do homem comum e outras coisas sem importância”, conduzidos pela reflexão de Jean-­‐‑Pierre Sarrazac em torno da poética da dramaturgia contemporânea e das suas “microepopeias dos anónimos”. Na quarta edição (2018/19), quisemos “Interromper o real para a ele regressar”, confiando nos possíveis gestos políticos que o teatro pode compreender.

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O objeto de estudo desta tese é o controlo e gestão de fluxos migratórios em Moçambique no âmbito das alterações da legislação migratória ocorridas após a independência. O objetivo é compreender como é que a imigração foi percebida, compreendida e gerida neste período, considerando a evolução político-económica, o quadro legislativo e as práticas de controlo, designadamente nas fronteiras do país. Essencialmente, o estudo baseou-se na revisão da literatura relevante para o tema, em alguns dados estatísticos, em evidências das alterações na legislação sobre migrações, e nas perceções e perspetivas das autoridades moçambicanas e dos imigrantes. A relevância das primeiras resulta do seu papel central no quadro regulatório e na ação relativa à gestão e ao controlo das migrações, constituindo os segundos a população que se confronta diretamente com as estruturas de gestão migratória, sendo os “destinatários” últimos desta. Os dados foram recolhidos mediante entrevistas semiestruturadas, Grupos Focais com imigrantes, observação direta nos Postos de Travessia terrestre de Ressano Garcia e Machipanda e no Aeroporto Internacional de Maputo; para além da análise de documentos oficiais (Informes Anuais do Presidente da República e do Procurador-Geral da República à Assembleia da República), títulos e artigos sobre imigração publicados no Jornal Notícias de Moçambique e dados contidos nos cartões de desembarque preenchidos no Aeroporto Internacional de Maputo. O estudo concluiu que as experiências de pensamento trazidas da luta anti-colonial, a necessidade de afirmação da identidade moçambicana, preservação e consolidação das conquistas da independência nacional num contexto marcado pela Guerra de desestabilização entre a FRELIMO e a RENAMO por um lado e, pelas ameaças externas a partir da então Rodésia do Sul e da África do Sul, por outro, fundamentaram a adoção de uma abordagem securitária de gestão da imigração na era Socialista, onde os elementos de cunho ideológico explícito eram também evidentes. A emergência de novas ameaças no contexto Capitalista caracterizadas pela ocorrência do Crime Organizado Transnacional, como o tráfico de droga, de órgãos e seres humanos, contrabando, caça furtiva, roubo de gado e terrorismo reforçam o fundamento do incremento de medidas de segurança direcionadas para a gestão da mobilidade humana internacional que demanda o país, não obstante estes elementos se combinarem com imagens estereotipadas de alguns grupos de imigrantes e se detetarem, também, aspetos do discurso político que reconhecem benefícios associados à presença imigrante e a sua necessidade, em determinadas circunstâncias, de que é exemplo o esforço para promover a livre circulação na SADC. Em síntese, a conceção e regulação da imigração em Moçambique têm respondido à evolução dos contextos político-económicos macro e à representação destes, emergindo continuidades e descontinuidades relativamente às perspetivas securitárias e da livre circulação.

O conhecimento desenvolvido pelos formandos durante a sua formação inicial é um campo de muitas dúvidas e controvérsias. Independentemente das perspetivas, o ensino-aprendizagem dos números racionais é um tema matemático que levanta dificuldades na aprendizagem dos seus conceitos e desafia os professores a constituírem práticas que promovam aprendizagens significativas e conceptuais. Esta investigação teve como objetivo compreender o conhecimento didático e a prática pedagógica de futuros professores de 2.º ciclo sobre o ensino e a aprendizagem dos números racionais na prática de ensino supervisionada. Para tal, procuro analisar questões relativamente às tarefas, aos alunos, à comunicação e às ações dos futuros professores na sua prática pedagógica. Na discussão sobre o conhecimento didático, especificamente para ensinar o tema dos números racionais, emergiram as questões a considerar no ensino e na aprendizagem deste tema e nas práticas pedagógicas desenvolvidas. A investigação seguiu o paradigma interpretativo e uma abordagem qualitativa, seguindo um design de estudo de caso. As três futuras professoras participantes foram selecionadas em duas Escolas Superiores de Educação e são muito diferentes nos seus percursos escolares antes e na formação inicial, e ainda que tenham vivido algumas situações próximas, as perceções sobre o vivido foram diferentes. Também tiveram focos de trabalho diferentes durante a sua prática de ensino supervisionada. As três futuras professoras analisaram diferentes recursos, selecionaram ou (re)desenharam tarefas de natureza diferente e sequenciaram-nas estabelecendo um caminho com um propósito. Quando ajustaram ou desenharam as tarefas, sem apoio dos supervisores, desceram o seu nível de desafio. Durante a preparação das aulas, anteciparam erros e dificuldades ainda que não tenham previsto resoluções erradas, e previram orquestrar resoluções no momento de apresentação e discussão. Perante respostas esperadas desafiaram e apoiaram os alunos a ultrapassar as suas dificuldades. Perante as dificuldades que não foram previstas, recorreram a ações de apoiar, sugerir e informar alterando mais uma vez a natureza das tarefas. A comunicação e as ações a desenvolver foram previstas com diferentes níveis de detalhe. Quanto menos previram, mais desceram o nível de desafio da tarefa. No que respeita às representações, identificaram diferentes potencialidades para as representações e não previram que as representações pictóricas podiam não ser clarificadoras das ideias matemáticas. Assim, no que respeita à comunicação e às ações dos professores, em reflexões de natureza diferente, ficou clara a necessidade de uma previsão adequada dessas ações, quando o propósito é favorecer o desenvolvimento dos processos matemáticos e uma aprendizagem promotora da co-construção do conhecimento. A relação entre conhecimento e prática apresentou-se interrelacionada, espelhando de um modo mais ou menos nítido essa relação no que respeita aos alunos, às tarefas, às ações e à comunicação.

Background: Expectations of benefit have an important therapeutic impact. How well study participants understand the concept of slowing disease progression and how their expectations of benefit are shaped in related clinical trials is not well known. Objective: We aimed to assess expectancy and treatment arm preference of participants in a disease-modification trial in Parkinson disease (PD). Methods: Participant expectations and treatment preference were assessed before treatment randomization in the SURE-PD3 trial (NCT02642393). Results: We included 297 PD patients (0.71 ± 0.67 years after diagnosis). Pre-randomization, 90% of participants expressed a preference for inosine (active treatment) allocation (n = 266/297), and 53% (n = 158) expected to be "somewhat" or "a lot better" in their symptoms over 2 years of treatment with inosine. Conclusions: Participants of a disease-modification trial in PD had likely unrealistic expectations of benefit (ie, improvement in symptoms over years), which may affect clinical trial interpretation and calls for improved education in future disease-modification trials in PD. © 2021 International Parkinson and Movement Disorder Society.

A terapia génica tem-se revelado como uma abordagem terapêutica promissora pela manipulação de genes (quer por adição génica, quer por silenciamento ou edição de um gene mutante) para tratar doenças genéticas hereditárias, mas também doenças adquiridas ou infeciosas. Para que a terapia génica seja eficiente tem de compreender também uma forma eficiente de entrega do material genético às células alvo. Esta entrega é efetuada com recurso a dois tipos de vetores distintos: vetores virais e vetores não-virais. O primeiro grupo, que compreende por exemplo os retrovírus ou vírus adeno-associados, está associado a eficiências de transferência e expressão génica mais robustas. Porém, a estes vetores virais também estão associadas maiores toxicidade e imunogenicidade. Por outro lado, os vetores não-virais baseados em polímeros ou lipossomas, apesar de estarem associados a baixas eficiências de transfeção, causam poucos efeitos tóxicos e imunogénicos. Adicionalmente, estes veículos apresentam baixos custos de produção, e têm geralmente maior capacidade para transportar genes de maiores dimensões do que os vetores virais. Devido a todas estas vantagens, e apesar das suas baixas eficiências de transfeção, tem-se verificado um aumento do interesse nos vetores não-virais por parte da comunidade científica. Para que um vetor seja eficiente na entrega de material genético tem de ser capaz de (a) complexar com o DNA terapêutico, mas também ultrapassar diversas barreiras, nomeadamente (b) entrar na célula, (c) escapar ao sistema endo-lisossomal, (d) atingir o núcleo, (e) atravessar a invólucro nuclear e, finalmente, (f) permitir a expressão do DNA terapêutico. Trabalho previamente desenvolvido no nosso grupo mostrou que poliplexos (polímero complexado com DNA) de PDMAEMA [poli(2-dimetilamino(etilmetacrilato)] se acumulam em redor do núcleo em menos de 24 horas após a transfeção. Sendo que as células da retina são pós-mitóticas, há aqui uma dificuldade acrescida em ultrapassar a invólucro nuclear e assim expressar o gene de interesse. Assim, colocamos a hipótese de que se ligarmos nuclear localization signals (NLSs), que são sequências peptídicas que dirigem proteínas para o núcleo, aos poliplexos poderemos aumentar a eficiência de transfeção destes vetores não-virais. Para efetuar esta ligação, é necessário substituir as aminas terciárias que compõem os monómeros que constituem o PDMAEMA por aminas primárias. Nas aminas terciárias, os azotos encontram-se ligados a três carbonos, portanto são maus nucleófilos e, consequentemente, a reação de ligação com os NLSs seria pouco provável. Por outro lado, nas aminas primárias, os azotos encontram-se ligados a três hidrogénios e sendo este tipo de ligação mais fraca, estas aminas são melhores nucleófilos e, portanto, reagirão melhor para se ligarem aos NLSs. Para tal, foram testadas reações com 2 compostos diferentes para substituir algumas das aminas terciárias por aminas primárias: etilenodiamina (EDA) e etanolamina (EA). Os espectros de NMR (1H nuclear magnetic resonance) e FTIR (Fourier-transformed infrared spectroscopy) dos produtos finais de ambas as reações revelaram-se iguais ao espectro característico do polímero PDMAEMA e, portanto, estas reações não foram eficientes. Consequentemente, sintetizamos um novo polímero, poli(2-aminoetilmetacrilato) (PAEMA), cujos monómeros que o constituem apenas diferem na presença de aminas primárias relativamente aos monómeros que constituem o PDMAEMA que, por sua vez, contêm aminas terciárias. Os espectros de NMR e FTIR deste novo polímero, PAEMA, apenas revelam a presença de aminas primárias e assim concluímos que a síntese por polimerização RAFT (reversible addition-fragmentation chain transfer) foi eficiente. Para testar se a adição de NLSs melhora a capacidade de transferência de genes do PAEMA, foram testados cinco diferentes NLSs. Em primeiro lugar foram utilizadas duas sequências derivadas do terminal carboxílico das proteínas IGFBP-3 e IGFBP-5, o NLS3 e o NLS5, respetivamente. Em seguida, foram geradas 2 sequências com o mesmo conteúdo de aminoácidos das duas sequências anteriores, mas com um novo alinhamento. Finalmente, criámos uma sequência de aminoácidos aleatória com a particularidade de não conter argininas e lisinas, que são os aminoácidos usualmente associados à função dos NLSs, à qual chamamos R-NLS. Para testar os nossos vetores não-virais otimizados, focamo-nos na Retinitis Pigmentosa (RP). A RP é uma doença caracterizada pela degeneração dos fotorrecetores, principalmente dos bastonetes, causando cegueira noturna e em casos mais avançados, cegueira total. Sabe-se que o gene PDE6B que codifica para a subunidade β do complexo PDE6 está mutado numa das formas desta doença. Assim, construímos um plasmídeo que codifica simultaneamente a sequência não mutada deste gene e a sequência do gene da GFP (Green Fluorescent Protein). Entre estes dois genes colocámos uma sequência designada P2A, que codifica para uma sequência que se auto-cliva após a tradução originando duas proteínas isoladas, o que permite monitorizar a expressão de PDE6β sem afetar a sua função como aconteceria por fusão com a GFP. Após a sua construção, o plasmídeo foi testado quanto à eficiência de expressão destes dois genes. Os resultados obtidos por imunocitoquímica e por Western blot mostraram que PDE6β e GFP são expressos separadamente, porém, por citometria de fluxo concluímos que a expressão de GFP é significativamente mais baixa quando comparado com células transfetadas com um plasmídeo que apenas codifica para GFP. Numa primeira fase foram sintetizados poliplexos com o plasmídeo que apenas codifica para GFP e com o polímero PAEMA em 4 diferentes rácios N/P (aminas/fosfatos – 7,5:1; 10:1; 16:1 e 20:1). De seguida, a análise destes poliplexos revelou que estes têm um tamanho abaixo de 500 nm, uma carga superficial positiva, o que favorece a entrada nas células e, por fim, uma polidispersividade menor que 0,5, o que significa que estamos perante uma população homogénea relativamente ao tamanho. Adicionalmente, verificámos que estes poliplexos são estáveis e capazes de proteger o DNA terapêutico contra a degradação por fatores externos como DNAses ou poli-aniões, que por sua vez promovem a destabilização dos poliplexos. Estas são características adequadas para um polímero ser usado para terapia génica. Testes in vitro, como citometria de fluxo e microscopia de fluorescência, realizados numa linha celular do epitélio pigmentado da retina (D407) revelaram que quanto maior o rácio N/P maior a eficiência de transfeção; portanto, os rácios mais elevados (16:1 e 20:1) foram selecionados para efetuar a otimização com os NLSs. Adicionalmente, a análise dos resultados de citometria de fluxo indicaram que não existe uma diminuição do número células vivas quando transfetadas com este polímero. Este resultado é encorajador visto que alguns polímeros estão associados a efeitos tóxicos para as células. A análise do número de células GFP positivas por citometria de fluxo mostrou que os poliplexos do rácio 16:1 quando otimizados com o NLS3 revelam um aumento na ordem de 60 % de eficiência de transfeção relativamente ao controlo com poliplexos do mesmo rácio não otimizados. Relativamente aos poliplexos do rácio 20:1, apesar de não serem estatisticamente significativo, existe também uma tendência para um aumento número de células GFP positivas quando comparado com o controlo. Pelo descrito podemos concluir que o polímero PAEMA é capaz de formar poliplexos com as características ideais para terapia génica. Devido à presença de aminas primárias foi possível otimizar os poliplexos através da ligação covalente a NLSs o que, em particular para os poliplexos otimizados com o NLS3 permitiu um aumento significativo n eficiência de transfeção. Conclui-se assim que os vetores não virais otimizados podem ser promissores não só para doenças da retina como também para outros tipos de doenças. Futuramente será importante efetuar testes in vivo no modelo de murganho de Retinitis Pigmentosa.

Os tecidos epiteliais consistem num conjunto de células polarizadas ligadas entre si por junções celulares. Estes tecidos atuam como barreira protetora primária que deve ser reparada de imediato quando danificada de modo a prevenir infeções por parte de organismos patogénicos e a desidratação do tecido ou órgão. Em epitélios simples, como é o caso do epitélio do intestino ou epitélios embrionários, este processo de reparação inicia-se com a polarização do citoesqueleto nas células adjacentes à ferida, levando à formação de um cabo contráctil, composto por filamentos de actina e miosina, que se acumula em redor da ferida e que rapidamente une as células promovendo o fecho da lesão. Posteriormente, as células adjacentes à ferida entram num processo de migração celular ao mudarem de forma e se reorganizarem entre elas. Pensa-se que estes movimentos celulares sejam controlados, não só pela dinâmica do citoesqueleto, mas também pelas proteínas de junção que regulam a adesão celular e transmitem sinais mecânicos entre células. Estas proteínas de junção incluem as junções de adesão e as junções de oclusão (OJs). Por fim, assim que a ferida está selada, estas junções celulares e a polaridade das células necessita de se restabelecer para recuperar a estrutura normal e funcionalidade do tecido. As OJs controlam o transporte paracelular de moléculas ao longo do epitélio, ao estabelecer uma barreira entre as zonas apical e basal das células epiteliais, mais conhecida por barreira de permeabilidade. São ainda essenciais para estabelecer a polaridade apical-basal uma vez que separam a membrana apical e baso-lateral de uma célula epitelial. Estudos recentes têm sugerido que as OJs também podem desempenhar um papel na mecânica do tecido epitelial independentemente das suas funções de barreira. Por exemplo, foi demonstrado que as OJs influenciam a forma das células e são necessárias para uma reorganização celular adequada durante o fecho da ferida. No entanto, os mecanismos moleculares pelos quais esta influência ocorre ainda não são conhecidos. A polaridade numa célula epitelial é crucial para manter a arquitetura do tecido e as suas funções. A polaridade apical-basal é determinante para o desenvolvimento e função de tecidos e órgãos, como por exemplo, o transporte de fluidos e a direção da secreção. Para além desta polaridade, existe uma outra polaridade que se estabelece ao longo do plano do tecido, localizada perpendicularmente ao eixo apical-basal, conhecida por polaridade planar (PCP). A PCP é responsável por regular vários processos celulares ao nível do tecido, como é o caso de divisões celulares, regulação da forma das células e direção da migração celular. Para além disso, a PCP também regula a formação de estruturas planares polarizadas, como por exemplo, os pelos que cobrem o corpo dos insetos e mamíferos e que apontam todos para o lado posterior do animal ou os estereocílios que cobrem o ouvido interno em mamíferos. A PCP é regulada por duas vias de sinalização evolutivamente conservadas: a via “core” e a via “Fat-Dachsous (Ft-Ds)”. Para estabelecer esta polaridade é necessário que haja uma segregação assimétrica das proteínas que a constituem. Para propagar a polaridade, estas proteínas estabelecem pontes entre si em células epiteliais adjacentes. No caso da via “core”, as proteínas Frizzled, Disheveled e Diego ficam de um lado da célula epitelial, Van Gogh e Prickle do outro e a proteína Flamingo estabelece a conexão entre Frizzled e Van Gogh entre células epiteliais adjacentes. Na via Ft-Ds, Ds localizado na zona anterior de uma célula interage com Ft localizado na zona posterior da célula adjacente. Por fim, a informação desta polaridade precisa de ser traduzida ao nível molecular e celular para eventualmente dar origem a estruturas ou a eventos celulares polarizados, como por exemplo a orientação de um pêlo ou a direção da migração celular. Contudo, os mecanismos moleculares que atuam a jusante de Ft e Ds ainda não estão caracterizados. O papel da PCP durante o processo de fecho da ferida no epitélio foi pouco explorado até ao momento. Dado que as OJs também estão envolvidas na regulação da forma das células e nos rearranjos celulares e como consequência provocam defeitos no fecho da ferida, surgiu a hipótese de que as OJs poderiam influenciar o estabelecimento da PCP. Assim, esta tese pretende investigar se as OJs interagem com as vias da PCP e se essa interação é necessária para promover o fecho da ferida no tecido epitelial. Neste estudo, foi usada a Drosophila melanogaster (vulgo mosca-da-fruta) como modelo de estudo. Este modelo possuí vantagens significativas em comparação com outros modelos animais, nomeadamente, ser fácil e barata de manter e manipular tanto fisicamente como geneticamente e ter um ciclo de vida de apenas dez dias. Este ciclo apresenta diferentes estádios (embrião, três estádios de larva, pupa e fase adulta) cada um com as suas próprias vantagens. O estádio escolhido para desenvolver esta tese foi o embrionário uma vez que, para além de estar bem estabelecido no nosso laboratório, é um modelo bastante adequado à aquisição de imagens em tempo real. Adicionalmente, a dinâmica das células epiteliais no fecho da ferida no epitélio do embrião é muito semelhante ao que acontece em vertebrados. Para além disso, por ser constituído por células grandes e facilmente visualizadas em imagens de tempo real, o embrião constitui um modelo ideal para estudar os mecanismos celulares e moleculares associados à PCP. Com o intuito de analisar o papel da PCP no fecho da ferida, optou-se primeiramente por fazer um screen genético baseado em feridas induzidas por laser. Este screen revelou que a via Ft-Ds é essencial para este processo, ao contrário do que é observado para a via “core”. Deste modo, prosseguiu-se o estudo com a análise da via Ft-Ds. Assim, o primeiro objetivo desta tese foi perceber a possível interação entre esta via e as OJs. Os nossos dados demonstram que a perda de função da proteína Kune, pertencente às OJs, leva a uma alteração na localização apical das proteínas Ft e Ds nas células epiteliais antes da ferida e a uma alteração na localização de Ds no bordo de uma ferida. Por outro lado, a perda de função da proteína Ft não causa qualquer alteração na localização da proteína Coracle, também pertencente às OJs. Estes resultados sugerem-nos que as OJs podem influenciar a função da via Ft-Ds ao destabilizar a sua localização, mas que o contrário não é observado. A próxima abordagem seria tentar perceber quais os mecanismos moleculares que levam a estas alterações. O segundo objetivo deste estudo foi perceber de que modo a via Ft-Ds participa no processo de fecho da ferida. Para tal, o processo de fecho da ferida foi observado ao longo do tempo, em tempo real e através de microscopia confocal, em embriões com mutações para as proteínas Ft e Ds, de modo a acompanhar todo o processo e dinâmica de fecho da ferida. Os nossos resultados sugerem que a proteína Ft não desempenha um papel essencial neste processo. Por outro lado, foi demonstrado que embriões mutantes para a proteína Ds apresentam defeitos no fecho da ferida caracterizados por uma diminuição nos níveis de filamentos de actina, um aumento na área celular, antes e durante o fecho da ferida, e uma diminuição dos rearranjos celulares. Este é um fenótipo semelhante ao descrito anteriormente para mutantes para a proteína Kune. Desta forma, os nossos resultados apresentam a primeira evidência de um papel essencial da via Ft-Ds no fecho de feridas epiteliais. Em suma, aqui propomos que as OJs regulam o fecho da ferida no tecido epitelial ao controlar a localização das proteínas da via Ft-Ds, que por si são necessárias para modular as formas e reorganização celular. Este estudo acrescenta assim um novo elemento essencial ao processo de fecho da ferida e poderá ser bastante importante para perceber os mecanismos deste processo em sistemas de maior complexidade.

Clostridioides difficile (anteriormente conhecido como Clostridium difficile) é um microrganismo de coloração Gram-positivo, anaeróbio obrigatório, produtor de endósporos, toxinas e biofilme, capaz de colonizar o intestino humano provocando uma infeção (ICD). Normalmente associada a um contexto hospitalar, esta infeção tem uma sintomatologia semelhante à da doença inflamatória do intestino, com sintomas que vão desde diarreia ligeira ou moderada, à colite fulminante. Podendo afetar qualquer parte do cólon, é mais frequente no segmento distal. Em casos mais graves pode causar desidratação, distensão abdominal, megacólon tóxico, perfuração do cólon, paralisia intestinal, síndrome de resposta inflamatória sistémica, septicémia e, em casos severos, morte. Alguns dos fatores de risco associados a esta doença incluem a idade do paciente e a terapia com antibióticos acompanhada de hospitalizações prolongadas. No entanto, existe outra forma da doença, associada à comunidade, cujos fatores de risco são desconhecidos. Especula-se que estes estejam relacionados com o aumento de prescrições de antibióticos a pacientes não hospitalizados, a um aumento no número de portadores assintomáticos e à contaminação dos alimentos ou água. De acordo com o Centro Europeu para a Prevenção e Controlo de Doenças (ECDC) entre 2011 e 2012 foram identificados cerca de 124 000 casos de ICD associada ao contexto hospitalar, sendo esta na altura considerada a oitava infeção nosocomial mais frequente na Europa. Em 2017, nos EUA, a ICD foi considerada uma ameaça à saúde pública tendo sido registados cerca de 223 900 casos. Para além do impacto na qualidade de vida dos pacientes, esta doença atinge também a economia dos países afetados, com um custo anual de 3 mil milhões de euros na Europa e aproximadamente mil milhões de dólares nos EUA. A doença apresenta ainda o desafio da reincidência. A taxa de reincidência é elevada, 15% a 35% dos pacientes diagnosticados com ICD sofrem uma nova infeção após tratamento bem-sucedido. Para que a infeção ocorra é necessário que os endósporos (doravante designados por esporos) sejam ingeridos. Estas células sobrevivem na presença de oxigénio e desinfetantes, e às barreiras gastrointestinais do hospedeiro. Quando chegam ao intestino, e se as condições forem favoráveis, germinam, multiplicam-se e infetam o hospedeiro. Durante a infeção, C. difficile produz toxinas que provocam danos nos tecidos, sendo esta a causa primária dos sintomas da doença. A produção de esporos no trato gastrointestinal permite não só a disseminação da bactéria no ambiente, mas também a sua permanência no hospedeiro. No intestino de um adulto saudável, a microbiota é composta maioritariamente por Bacteroidetes e Firmicutes, responsáveis por diversas transformações metabólicas e regulação da resposta imunitária. Um pequeno grupo destas bactérias é capaz de fazer uma reação enzimática, 7α-dehidroxilação, que converte os sais biliares primários, como o colato (CA), em secundários, como o deoxicolato (DOC), que normalmente se encontram conjugados com taurina ou glicina. Os sais biliares, quer sejam primários ou secundários, induzem a germinação dos esporos de C. difficile. No entanto, apenas alguns dos sais biliares primários permitem o seu crescimento vegetativo. Estes e outros subprodutos do metabolismo bacteriano previnem a colonização de C. difficile. Contudo, num estado de disrupção da microbiota conhecido como disbiose, a presença destes metabolitos diminui enquanto os seus precursores aumentam, promovendo a colonização de C. difficile e consequente infeção. Este estado de disbiose é provocado por terapias com antibióticos, aos quais C. difficile é resistente. Para além dos esporos, C. difficile é capaz de produzir biofilme, uma estrutura que protege as bactérias de insultos externos, como antibióticos, e permite uma convivência em comunidade. Tal como noutras bactérias, a matriz extracelular é composta por exopolissacáridos (EPS), DNA extracelular (eDNA) e proteínas. Dentro do biofilme existem vários tipos de células, entre as quais, células esporulantes, que podem atuar sinergisticamente com o biofilme e permitir a permanência da bactéria no hospedeiro, mesmo após o tratamento da infeção. Estirpes de C. difficile toxina A-negativa/toxina B-positiva que causam doença em humanos têm sido isoladas com frequência crescente em todo o mundo, nomeadamente estirpes multirresistentes pertencentes ao ribotipo (RT) 017. Em Portugal o ribotipo 017 tem uma taxa de incidência de 10%, mas a sua epidemiologia não é bem compreendida. Estão identificadas três sublinhagens (denominadas por A, B e C) deste ribotipo a circular em Portugal, que possuem elementos genéticos distintos. Um dos objetivos deste trabalho foi a caracterização de estirpes deste ribotipo na expectativa de contribuir para a compreensão da sua epidemiologia e emergência em Portugal. Caracterizámos fenotípica- e genotípicamente 13 estirpes RT017, isoladas de diversos hospitais, analisando o seu perfil de resistência a antibióticos, a eficiência de esporulação e germinação, as características dos esporos, a sua produção de biofilme e a taxa de crescimento. Foi selecionado um painel de oito antibióticos: vancomicina, metronidazol, rifampicina, clindamicina, imipenem, eritromicina, tetraciclina e moxifloxacina. Todas as estirpes analisadas foram consideradas multirresistentes, sendo apenas sensíveis à vancomicina e ao metronidazol, usados no tratamento de ICD. Foram observadas algumas exceções como a estirpe CD470, sensível ao imipenem e à moxifloxacina, CD1214, CD1649 e CD1976, sensíveis à tetraciclina, e CD97435, sensível à moxifloxacina. Estas exceções estão relacionadas com a ausência de mutações e/ou genes que conferem resistência a estes antibióticos. Observámos diferentes eficiências de esporulação: 60% a 80%, correspondem a boas produtoras de esporos (CD157, CD392, CD470, CD1017, CD1045, CD1089, CD1517 e CD97435), e 10% a 30%, correspondem a fracas produtoras de esporos (CD324, CD678, CD1214, CD1649 e CD1976). No que respeita à eficiência de germinação observaram-se dois fenótipos: eficiências semelhantes (CD157, CD324, CD470, CD678, CD1214, CD1517, CD1649, CD1976 e CD97435) e superiores (CD392, CD1017, CD1045 e CD1089) à estirpe de referência 630Δerm. Procurámos também caracterizar as camadas mais externas dos esporos. Após extração destas camadas, observámos por SDS-PAGE que os padrões das bandas eram semelhantes entre todas as estirpes do RT017. Caracterizámos em maior detalhe, através de um ensaio de imunodeteção, quatro proteínas ricas em resíduos de cisteína, CdeA, CdeB, CdeC e CdeM, que constituem o exosporo (camada mais externa dos esporos de C. difficile). Por fim, todas as estirpes produziram mais biofilme após 48 h, com a exceção das estirpes CD470, CD1976 e CD97435 que produziram mais após 24 h. Estas diferenças não são, no entanto, explicadas por diferenças na taxa de crescimento, uma vez que estas são semelhantes entre si. Durante a análise do genoma de cada estirpe, em comparação com a estirpe de referência para o ribotipo 017 (M68) detetámos apenas 87 polimorfismos (SNPs) indicando uma elevada conservação do genoma. Foi possível também agrupar as estirpes conforme os polimorfismos partilhados, coincidindo parcialmente com as sublinhagens a que pertencem. No primeiro grupo encontram-se as estirpes: CD1017, CD1089, CD1517 e CD1976; partilham 23 SNPs e pertencem à sublinhagem C, à exceção da CD1017, que pertence à sublinhagem A. No segundo grupo encontram-se as estirpes: CD157, CD324, CD392, CD678, CD1045, CD1214 e CD1649; partilham 25 SNPs e pertencem à sublinhagem A. As estirpes CD470 (sublinhagem B) e CD97435 (sublinhagem A) destacaram-se das restantes por serem a que mais se assemelha e difere da estirpe M68, respetivamente. Apesar da análise efetuada não encontrámos uma correlação entre os SNPs no genoma nuclear das estirpes e os fenótipos observados. O segundo objetivo principal deste trabalho foi a identificação de componentes proteicos da matriz do biofilme. Para tal começámos por caracterizar a produção de biofilme de 27 estirpes clínicas e de animais da cadeia alimentar de diferentes ribotipos predominantes em Portugal (RT005, RT014, RT020, RT027, RT039, RT078, RT085, RT106 e RT126). As estirpes foram classificadas com base na produção de biofilme às 48 h como: baixa (DO600nm ≤ 16), média/alta (DO600nm = [16, 24]) e alta (DO600nm ≥ 16). A estirpe CD1560 foi selecionada para extração das proteínas da matriz por produzir grandes quantidades de biofilme. A identificação por espectrometria de massa destas proteínas revelou que a maioria são enzimas citoplasmáticas envolvidas em vias metabólicas. Das 13 proteínas identificadas três tinham um péptido sinal previsto na sua sequência (CdtB, OppA e 3-hidroxilbutiril-CoA desidrogenase); duas não possuíam este sinal, mas a sua localização à superfície da célula já foi demonstrada (piruvatoferrodoxina oxidoredutase e proteína chaperona DnaK); as restantes sete proteínas eram citosólicas. Especulamos que, como noutros patógenos, em vez de produzir componentes dedicados da matriz, C. difficile usa proteínas citoplasmáticas para formar a matriz extracelular. Esses resultados serviram como base para descobrir os principais determinantes genéticos e celulares da morfogénese do biofilme e deste comportamento social em C. difficile.

No âmbito do Mestrado em Educação e Formação, na especialização em Desenvolvimento Social e Cultural, foi realizado o presente relatório de estágio. O estágio aconteceu na Junta de Freguesia de Agualva e Mira Sintra, no concelho de Sintra. Com este relatório de estágio pretendo demonstrar os conhecimentos que adquiri, tanto práticos como teóricos, ao longo do estágio, bem como expor algumas experiências que vivi durante este período, dando a conhecer todas as atividades que planeei, apliquei e avaliei, assim como tudo o que fiz fora destes projetos por mim criados. Os principais objetivos do estágio foram: conhecer uma realidade profissional; aplicar todos os conhecimentos teóricos que fui adquirindo ao longo de todo o meu percurso académico; compreender o que faz um técnico de educação numa junta de freguesia; Este relatório de estágio é composto por três capítulos. O primeiro capítulo reúne a teoria relevante para a realização do estágio e a reflexão subjacente à sua realização. O segundo capítulo diz respeito à contextualização do local de estágio e à contextualização do estudo face à pandemia do Covid-19. O terceiro capítulo são as conclusões retiradas no fim deste estágio académico. O estágio permitiu adquirir importantes aprendizagens para o futuro, tanto a nível pessoal como profissional, no que diz respeito a competências mobilizadas e adquiridas com o desenvolvimento dos dois projetos, sendo eles o projeto “Cidadania Ativa” e “O Cinema vai à Escola”. Participei ainda no projeto JUNTAr+, criado pela Junta de Freguesia.

A presente investigação vista compreender de que forma as Salas de Aula do Futuro (SAF) ou Ambientes Educativos Inovadores (AEI) transformaram o trabalho dos professores, quais as suas novas preocupações e qual o papel e influencia que a formação teve para a utilização e a dinamização das suas aulas nestes ambientes. Este estudo incide numa realidade específica do AEI - ICL@b “Innovative Classroom Lab” do Centro de Formação EduFor em Mangualde. Para atingir os objetivos desta investigação recorreu-se à metodologia do Focus Group realizado a um conjunto de professores, escolhidos aleatoriamente, que cumpriam o requisito de serem utilizadores frequentes do AEI em análise. Após a análise dos dados, concluiu-se que o AEI a nível do espaço físico cumpre com as orientações de natureza ambiental. A taxa de ocupação da sala é bastante elevada o que impossibilita uma maior utilização por estes e outros professores. Constatou-se que a utilização do espaço requer mais tempo para a preparação das aulas e que tira vantagem do trabalho colaborativo entre docentes. As estratégias utilizadas pelos professores são variadas e recorrem às tecnologias disponibilizadas no AEI. Para estarem atualizados realçam a importância da formação, discordando, no entanto, quanto ao tipo de formação que assumem impacto mais positivo sobre o seu trabalho.

O Envelhecimento Saudável representa um tema importante na atualidade da Saúde Mundial. Devido ao aumento demográfico desta faixa etária e face aos problemas sociais, físicos e psicológicos encontrados pelos idosos ao longo desta etapa, é importante analisar problemáticas frequentes e atuais, como é o Isolamento Social, para que se possa encontrar soluções duradouras e eficazes. Analisou-se então a génese do Isolamento Social em idosos (incluindo a sua relação com a situação atual de COVID-19) e as principais implicações na sua vida: o aumento das visitas a intuições de saúde, a sua análise como um fator preditivo de mortalidade e a sua correlação direta com as doenças do foro mental. Espera-se que com esta revisão se possa investigar mais sobre consequências diretas do Isolamento social nos idosos de modo a estabelecer estratégias de prevenção e combate.

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