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Taste alterations are common in patients with cancer, and can be the result of the disease itself and/or its treatment(s). Specifically, chemotherapy and/or radiotherapy to the head and neck area have been shown to induce significant taste changes. Alterations in taste are distressing for patients and can lead to food aversions, a reduction in food intake and nutritional deficits. Ultimately, this can lead to weight loss and, in severe cases, malnutrition, which has been associated with poor patient outcomes, including a negative effect on survival. Dietary counselling and advice tailored to the individual can improve nutritional status, and several effective strategies are available to accommodate taste changes and increase nutritional intake. Oral supplements may provide additional nutritional support when dietary intake is insufficient. The success of supplementation depends, however, on the product acceptability and on patient compliance over the long term. Patient compliance is linked to perceived supplement taste, which may be affected by a variety of taste changes reported by patients both before and after therapy, or as a consequence of disease progression. Supplements which offer a variety of flavours are likely to prove beneficial by helping to prevent taste fatigue. In addition, individuals appear to exhibit distinct preferences for particular flavours at different time points during treatment.

Background: Food and nutrition as major causes of colorectal cancer (CRC) are still debatable. Aim of the study: This cross-sectional study in a Portuguese population aimed to characterize and identify "high-risk" diets/life-styles and explore their associations with colorectal cancer. Methods: In 70 colorectal cancer patients and 70 sex, age-matched subjects without cancer history, we evaluated: diet history and detailed nutrient intake (DIET-PLAN5 2002, UK), alcohol (amount, type, years), smoking (number packages/year, years), physical activity, co-morbidities and body mass index. Age-adjusted Relative Risks were calculated, Proportional Hazards models adjusted the analysis for multiple risk factors. Results: Smoking was a risk factor (1.90). Increased colorectal cancer risk regarding the lowest vs the highest intake quartile emerged for: vitamin B12 (3.41), cholesterol (3.15), total fat (2.87), saturated fat (1.98), animal protein (1.95), energy (1.85), alcohol (1.70), iron (1.49), refined carbohydrates (1.39). Reduced colorectal cancer risk for the highest vs the lowest intake quartile was found for: n-3 fatty acids (0.10), insoluble fiber/folate (0.15), flavonoids/vitamin E (0.25), isoflavones/beta-carotene (0.30), selenium (0.36), copper (0.41), vitamin B6 (0.46). Conclusion: Our results corroborated well-established risk factors and identified emergent nutrients. Prolonged excessive intake of macronutrients and some micronutrients concurrent with marked deficits of fiber and protective compounds were dominant in colorectal cancer and more significant than alcohol and smoking. The interaction diet-colorectal cancer is consistent and the relevance of new nutrients is emerging.

“Changing times: Resilience” gather contributions about Resilience and adaptability through institutionalization, formal aesthetic shift , Graffiti as a Palimpsest, Framing Poetical Expression, Poetic Objects in Public Space. Geographically framed approached as The “black-and-white mural” in Polytechneio in Athens, The Evolution of Street art and Graffiti in India, Shark Graffiti On Reunion Island Russia - Specifics of Periodization in Russian Street Art . Temporal overview looks upon: strategies for creating village identity symbols using street art tactics, The commodification of alternative cultural spaces, English Language Video Documentaries On Contemporary Graffiti And Street Art, A brief history of street art as a term up to 2000. And finaly an article review of Glaser, K., 2017. Street Art and New Media. And the invited contribution of OPNI Group - Grupo OPNI graffiti and urban violence in present-day Brazil.

The lack of tools for direct identification of regulatory T cells (T(reg) cells) at the single-cell level has been one of the major hurdles for the study of T(reg) cells and their involvement in human disease. The identification of the transcription factor Foxp3 as a molecular correlate for T(reg) function offered the opportunity to directly identify T(reg) cells, but until recently adequate reagents were not available. The tools promising the solution for this problem have emerged through the development of transgenic mice in which Foxp3 expression drives the production of fluorescent proteins, as well as the development of mAb that are able to identify Foxp3(+) cells by histology or flow cytometry. With these new tools, the mAb in particular, it will become possible for the first time to directly probe the participation of Foxp3(+) T(reg) cells in human pathology in a quantitative fashion.

Phenylketonuria (PKU; OMIM #261600) is an autosomal recessive disorder, caused mostly by missense mutation in the PAH gene, which encodes human phenylalanine hydroxylase (hPAH).Human PAH is a nonheme, homotetrameric, iron-containing enzyme, which catalyzes the conversion of LPhenylalanine (L-Phe) into L-Tyrosine, by para-hydroxylation of the aromatic side chain in the presence of the co-factor (6R)-L-erytro-5,6,7,8-tetrahydrobiopterin (BH4), non-hemic iron and molecular oxygen (O2). Presently, classical PKU patients must follow restricted diets in order to control L-Phe levels in the blood. Compliance is difficult and cognitive and social development impaired. PKU can be classified as a misfolding disease, since the majority of the PKU causing mutations result in misfolded hPAH variants which, in the cellular context, will form soluble aggregates targeted for degradation, leading to a loss-of-function phenotype. Therefore, pharmacological chaperone therapy imposes a viable alternative to PKU treatment. By stabilizing the variant protein, and avoiding its degradation, rescue of enzyme residual activity may be attained, improving patient’s quality of life by increasing dietary LPhe tolerance and alleviating some of the dietary restrictions imposed. Among the high number of PAH variants already identify, the p. G46S is considered an excellent model to the in vitro study of the hPAH aggregation process, as it presents a high tendency to selfassociate and form non-amyloid fibrils, when overexpressed in E.coli, and to be rapidly degraded in eukaryotic systems, representing the most severe form of Classical PKU phenotype. In the presence of maltose binding protein (MBP) added N-terminally to p.G46S, it is possible to obtain soluble metastable tetramers with a normal enzyme activity rate. Upon MBP tag cleavage with Factor Xa protease the hPAH p.G46S aggregates in a process efficiently followed in vitro. Our aim was to identify, among an in-house compound library, molecules able to modulate this behavior in vitro, and to characterize the underlying mechanism by studying the full-length (FL) and a truncated form of p.G46S representing the unstable N-terminal regulatory domain (N1-120) harboring the allosteric site. For this, the p.G46S forms were expressed in a prokaryotic system in fusion with the MBP tag and purified. The rate of self-association of the isolated FL tetramers and N1-120 dimers (variant and wild-type) were studied by real-time turbidimetry, upon cleavage of the MBP tag, in the presence and absence of studied molecules. Following in vitro studies, molecules with a positive impact on p.G46S aggregation were submitted to in cellullo studies to evaluate their influence on enzyme activity and stability. From the aggregation assays, five molecules had positive effects on the self-association pattern of the FL p.G46S, either by inhibiting aggregation or by delaying it. From those molecules, two (C4 and C14) also inhibited the wild-type and p.G46S RD1-120 aggregation, and one (C17) only impacted the aggregation of the wild-type RD1-120, suggesting that these molecules bind to the unstable N-terminal domain and particularly C4 and C14 will be interacting with helix a1 of the ACT domain, the main driver of p.G46S-RD1-120 instability while C17 is acting on a different region. In cellullo assays showed that C17 and C14 could improve enzyme activity when compared to p.G46S in the absence of compounds (control). Enzyme content in cell lysates, however, was at the same level as the p.G46S control, thus suggesting that these two compounds are promoting a stabilization of the enzymatic reaction, allowing it to present higher activity levels than it normally would have (activity chaperone), instead of acting as stabilizers of the protein helping it to avoid the cell protein control quality mechanisms (pharmacological chaperone). Although further studies were not carried out due to the restrictions and contingency plans applied by the Research institutions to respond to SARS-CoV-2_COVID-19 pandemics, here we present possible hit structures for the development of a new class of pharmacological/activity chaperones, specifically designed for the treatment of classical PKU.

Atualmente, manter o estado da qualidade do ar dentro dos padrões estabelecidos pela legislação vigente e não prejudiciais para a saúde humana tem sido uma das principais preocupações da sociedade em geral. Para se manter tal qualidade, deve-se realizar o monitoramento constante das concentrações dos poluentes atmosféricos existentes no ar ambiente, realizar a sua analise e avaliação, e com base nos resultados obtidos, promover a gestão da qualidade do ar de forma adequada. Neste trabalho efetuou-se o estudo da qualidade do ar atmosférico da Área Metropolitana de Lisboa, no ano de 2018, por meio de análise e avaliação, utilizando-se os dados obtidos por monitoramento. Os resultados encontrados foram comparados com os limites fixados pela legislação europeia e portuguesa vigente para a proteção da saúde humana, tendo sido demonstradas as excedências ocorridas, bem como indicadas as suas principais causas e as medidas que já foram ou que devem ser tomadas para manutenção dos padrões de qualidade do ar. Verificou-se que, no ano de 2018, que a qualidade do ar ambiente na Área Metropolitana de Lisboa, de uma forma geral, foi boa, com pequenas exceções quanto ao dióxido de nitrogênio e ao ozônio. As principais causas, que influenciaram nas elevações e excedências das concentrações dos poluentes, foram os grandes volumes do tráfego de veículos e as condições meteorológicas favoráveis à formação dos mesmos, ou então, desfavoráveis à sua dispersão.

The SAUC V5 Issue 1, “Desire Lines: Literal” is about: Street art and heritage conservation: From values to performativity; Development of art in Kosovo after World War II “The artist’s Art Works after the Second War and their similarities with the famous painters” ; The Local text of a city and public art: in search of a post-Soviet identity; The Brigada Ramona Parra and the art of muralising protest during the Pinochet Regime; From the street to the walls: the “yellow vests” movement in France; Red Army Gra ti: Reconstructing a lieu de mémoire; Con icts of Memory: Red Army Gra ti in the Reichstag 1945-2015; Street Art in Lisbon.

A previsão dos preços dos índices bolsistas é uma das mais desafiadoras, complexas e fascinantes tarefas, uma vez que os conjuntos de dados onde estes se inserem, chamadas séries temporais, apresentam várias irregularidades (ruído, não-estacionariedade, não linearidades, entre outras). Vários têm sidos os estudos feitos ao longo dos anos com vista a encontrar técnicas mais eficazes, que sejam capazes de contornar essas irregularidades. Com o crescimento exponencial dos dados e a não homogeneidade dos mesmos, torna-se cada vez mais difícil a verificação dos pressupostos nos modelos econométricos. Tendo em conta os presentes desafios, a presente dissertação terá como principal objetivo comparar os métodos clássicos de econometria com os novos métodos de machine learning, para tal ir-se-á recorrer aos dados do índice bolsista S&P 500, no qual pretende-se prever no final os preços de fecho da série. Numa primeira fase, com vista a uma melhor compreensão das temáticas que serão abordadas faz-se uma contextualização sustentada na literatura científica e num conjunto de conceitos considerados essenciais para a compreensão dos temas abordados. Numa segunda fase, prossegue-se com o estudo empírico, onde ir-se-á analisar as estatísticas descritivas, os gráficos, os pressupostos dos modelos e depois escolhidos os potenciais modelos. Este capítulo será divido em dois subcapítulos. No primeiro subcapítulo o estudo será feito sob a alçada do programa estatístico Eviews onde serão abordadas as técnicas clássicas da econometria. No segundo subcapítulo o estudo será feito no software Python, considerado atualmente um dos softwares mais populares no mundo científico, académico e empresarial. No Eviews, uma vez obtida a estacionariedade da série procede-se com a modelização através da metodologia de Box-Jenkins, mais especificamente o modelo Autorregressivo Integrado de Médias Móveis – ARIMA. Uma vez escolhido o modelo, procede-se com a previsão dos preços de fecho da série. Por outro lado, no Python, serão abordadas vertentes mais inovadoras, sendo uma delas a aplicação das feature engineering que resultarão em trinta e uma (31) novas variáveis. Ao contrário dos modelos clássicos, os modelos obtidos pelos algoritmos de machine learning não necessitam da verificação dos pressupostos habituais econométricos, uma vez que a máquina aprende de forma “autónoma” a contornar certas irregularidades. Os algoritmos utilizados serão o de Regressão Linear/Linear Regression (LR), Suport Vector Regression (SVR) e Random Forest (RF). Por fim, é feita uma interpretação critica dos resultados obtidos ao longo de todo o estudo e comparam-se os resultados, atingindo assim o objetivo inicialmente delineado para a dissertação.

Gamma-aminobutyric acid (GABA) is the predominant inhibitory neurotransmitter in the central nervous system. Its activity at the synapse is terminated by re-uptake into nerve terminals and astrocytes, through membrane located specific GABA transporters (GATs), which therefore shape GABAergic transmission. There are three main high affinity subtypes of GATs, GAT-1, GAT-2 and GAT-3, and a low affinity one, the betaine transporter. GAT-1 is the predominant GABA transporter in the brain and is expressed in neurons and astrocytes. Several factors can regulate the continuous traffic of GATs to and from the neuronal plasma membrane. For instance surface expression of GAT-1 in cultured neurons and isolated nerve terminals is decreased by protein kinase C (PKC)-dependent phosphorylation. In contrast, surface expression of GAT-1 in neurons is enhanced by brain derived neurotrophic factor (BDNF)-mediated tyrosine kinase-dependent phosphorylation. Though reuptake of GABA might occur at different places of the neuronal membrane, its reuptake by the nerve terminal is the process that allows quick refilling of the released stores. On the other hand, uptake by astrocytes contributes to a fast removal of GABA from the synapse and delays its delivery to the neuronal release stores. To understand how GABAergic transmission can be shaped, it is therefore important to know how a single modulator can affect both processes of GABA removal from synapse. Thus, in the work presented on this thesis I evaluated the influence of BDNF upon GAT-1 transporters on presynaptic nerve terminals and cortical primary astrocyte culture. BDNF decreased GAT-1 mediated GABA uptake by isolated hippocampal rat nerve terminals (synaptosomes), an effect that occurred within 1 min of incubation with BDNF through activation of TrkB receptor. In contrast with what has been observed for other synaptic actions of BDNF, the inhibition of GABA transport by BDNF does not require tonic activation of adenosine A2A receptors, nevertheless is facilitated by activation of A2A receptors. On the other hand, BDNF enhances GAT-1 mediated GABA transport in cultured astrocytes, an effect mostly due to an increase in Vmax kinetic constant. This effect involves the truncated form of TrkB receptors (TrkB-t) coupled to a non-classic PLC-y/PKC-δ and Erk/MAP kinase pathway and requires active adenosine A2A receptors. To elucidate the trafficking of GAT-1 when astrocytes were treated with BDNF, a functional mutant of the rat GAT-1 was generated in which hemagglutinin epitope (HA) was incorporated into the second extracellular loop. By ELISA experiments, performed with astrocytes expressing HA-rGAT-1 transporter, it was possible to observe an exocytosis of HA-GAT-1 to plasma membrane when cells were treated with BDNF. In addition, cell surface biotinylation experiments, performed with astrocytes overexpressing the wild type rat GAT-1 (rGAT-1), also demonstrate an increase of GAT-1 2 transporter at plasma membrane when astrocytes were treated with BDNF. Results from experiments using selective inhibitors of endocytosis or selective inhibitors of recycling of molecules back to the plasma membrane allowed concluding that BDNF enhances GAT-1 expression at surface astrocytic membrane by slowing down exocytosis. A new role for BDNF is proposed whereby the effect of BDNF on GAT-1 transporter differs between pre-synaptic nerve terminals and astrocytes, suggesting that this neurotrophin operates in a much localized way, so that it may retard GABA uptake by the nerve terminal, enhancing synaptic actions of GABA, and accelerate its reuptake at extracellular neuronal areas allowing replenishment of neuronal pools of GABA. The results suggest that BDNF plays an active role in the regulation of GABAergic synaptic signalling, contributing to information processing.

The SAUC V5 Issue 2, “Desire Lines: Metaphorical” is about: The Disappearance/Virtualisation of Graffiti and Street Art – From Urban to Institutional to Virtual Space; Whose Wall is it Anyway? Using street art to navigate the private and the public in a community; Polysemiotic Communication vs. Multimodality: a conceptual and terminological distinction applied in street art; The Past in Public Space “Der Jahrhundertschritt”: A Lieu de Memoire As An Urban Intervention of Memory (2018); Zero Tolerance = 100 New Techniques Swedish / Nordic Street Art; Contextualizing graffiti and street art in suitable museum settings: Street Art Today’s upcoming museum in Amsterdam; There and Back Again: Redistributing Visibility between the Virtual and Real Alleys of Graffiti; From Post-Posters to Un gilet; Streetness & Inopinatum: the “sense of the street” and the “unexpected impertinence”. For a binary code in street art.; Street Art is dead. Again and again. Brief State of the (Urban) Art.

The city is an imagined and drawn space, a densified and volumetric landscape. But it is also a living space, and is memory, work and leisure, tradition and innovation, technology and capital markets; an asymmetric mosaic of wealth and misery, abundance and deprivation, inclusion and exclusion; a place of arrival, both to migrants and tourists, and for people seeking new opportunities. The city is, first and foremost, people! To build a city of citizens -a city for us -is a purpose and a greatest responsibility of a collective effort including elected officials, administration, technicians, business and citizens. This is why public participation in urban planning processes -from diagnosis to strategy and the intervention proposal -should become a more effective practice. Sustainable spatial planning and urban design are keys to human well being. We need a new vision of cities and regions for sustainable urban life after human-cause or natural crisis. Many of the decisions made today will have long-term consequences, and we are certain that we must strive towards creating more inclusive and healthy cities, that are more green and sustainable, more innovative and smart, with greater support for leisure and tourism, economically more robust, and supplying more and better jobs, with inclusive governance models, opening a new era where cities are more livable, effective, competitive, attractive, learning, equitable, and resilient.

We place here in discussion the maturity of the academic and pedagogical field that graffiti, urban and street art, urban creativity constitute. It’s in fact identified a consistency of knowledge and structure of thought in the several disciplinary areas. As we are convinced that this trend will continue in multiple forms including experimental ones bridging theory and practice, here’s the result of the invite for participation in this reflection.

O crescimento da população mundial associado às elevadas taxas de consumo, têm contribuído para o aumento da quantidade de resíduos antropogénicos, em particular de plástico, causando uma séria ameaça para o meio ambiente. Dentro da categoria de resíduos de plástico, o poliestireno expandido (EPS) e o poliestireno extrudido (XPS) constituem um problema particularmente preocupante devido às grandes quantidades encontradas em meio marinho. De modo a compreender a recetividade de diversos setores de atividade e do público em geral à substituição e redução da utilização de produtos EPS e XPS, bem como à diminuição das suas perdas no meio ambiente, realizou-se um estudo com o objetivo principal de avaliar a viabilidade de produtores e utilizadores de EPS e XPS contribuírem para a sua redução no meio marinho. A recetividade de produtores e outros stakeholders para substituir, reduzir e/ou minimizar as perdas destes produtos no ambiente, foi avaliada através de várias sessões participativas desenvolvidas num workshop realizado no âmbito do Projeto Oceanwise. Os resultados destas sessões permitiram concluir que existe uma grande divergência de opiniões relativamente à mudança. A sensibilidade ambiental dos consumidores de produtos e a forma como a recolha de resíduos influencia o comportamento do público em geral, foi avaliada através da realização de um inquérito online que permitiu colmatar as lacunas de informação sobre a relação que o consumidor tem com o material poliestireno utilizado diariamente. Os participantes no inquérito foram na sua maioria, do sexo feminino (73%), entre os 31 a 55 anos com área de residência na região Centro, tendo cerca de 87% dos inquiridos classificado o sistema de recolha de resíduos entre “Suficiente” e “Muito bom”. Em relação às utilizações mais importantes das espumas, a maioria dos homens (32%) não associou o uso dos produtos de espuma às proteções para os eletrodomésticos. 68,5% dos inquiridos referiu que deposita os tabuleiros de espuma no contentor dos plásticos, enquanto que 30,7% admitiu depositá-los no contentor dos indiferenciados. Apesar da faixa etária dos inquiridos não ter efeito significativo na escolha de contentor, a região de residência apresentou um efeito significativo. O comportamento do público em geral foi, ainda, analisado à luz do sistema de recolha de resíduos instalado em Portugal, que foi compilado no âmbito deste trabalho, tendo-se concluído que o baixo investimento na manutenção da gestão de resíduos e na implementação de pontos de separação poderá justificar as diferenças de comportamento entre regiões. Com este trabalho, concluiu-se que é importante continuar com ações de educação e sensibilização sobre a importância da separação de resíduos e apoiar o desenvolvimento de produtos ecológicos para reduzir a quantidade de resíduos e as suas perdas para o meio ambiente.

A procura e utilização de Fontes de Energia Renovável (FER) tem tido um crescimento elevado nos últimos anos, concentrado nos centros eletroprodutores do país, como os parques eólicos. Este crescimento levou a que Portugal atingisse o limite de capacidade para esta energia onshore e que assim fossem procuradas estratégias que permitissem ultrapassar esta saturação. Uma das soluções comuns passa pela repotenciação (repowering) dos parques, processo que permite a manutenção ou aumento da potência instalada sem aumentar o número de aerogeradores presentes. Este facto é particularmente importante para a redução do impacte habitualmente gerado por estas infraestruturas para com a biodiversidade local, nomeadamente as mais afectadas: as comunidades de aves e quirópteros. Entre os impactes diretos, como a colisão dos indivíduos com as pás dos aerogeradores, e indiretos, como a alteração de comportamentos, existe sempre um potencial de perturbação que deve ser estudado à luz do quadro legal em vigor, que enquadram a Avaliação de Impacte Ambiental (AIA), e das metodologias de monitorização mais adequadas. Os Estudos de Impacte Ambiental (EIA) surgem assim como uma ferramenta indispensável à análise da convivência das comunidades faunísticas com empreendimentos eólicos e avaliação de possíveis efeitos decorrentes da sua atividade. O presente trabalho visou estudar o efeito da remodelação do Parque Eólico (PE) de Vila Lobos (Viseu, Portugal) nas comunidades de aves em geral, aves de rapina e outras planadoras, e quirópteros no decorrer do seu 2º ano de exploração (2018-2019). O projeto de remodelação passou pela repotenciação do parque e consequente redução do número de aerogeradores de 20 para 3, com aumento da potência unitária das 3 novas máquinas. O projeto inicial de Vila Lobos não foi sujeito ao processo de AIA e o único indício do impacte potencial da sua operação é considerado como o ponto de partida do projeto de remodelação, correspondendo à sua fase de pré-construção (2014-2015). Assim, este estudo visou identificar um eventual efeito de exclusão sobre as comunidades consideradas, alterações no uso da área do PE pelas aves de rapina e outras planadoras, a influência na utilização de abrigos de quirópteros, e determinar a mortalidade de indivíduos associada ao PE. Os resultados para o 2º ano de exploração indicam que a remodelação do PE de Vila Lobos não se encontra a exercer um efeito de exclusão nas comunidades consideradas e que, de um modo geral, a área aparenta estar a ser progressivamente colonizada. Tal poderá ser consequência da redução do número de aerogeradores existentes e respetiva substituição por novas máquinas, com características diferentes das originais, que contrariam um potencial risco de colisão. O historial de incêndios surge como um importante factor de perturbação local que poderá explicar as variações encontradas na abundância relativa e riqueza específica das comunidades em anos anteriores. Verificou-se ainda uma intensificação da utilização da área PE pelas aves de rapina e outras planadoras, associada a um natural aumento do risco de colisão. No que diz respeito à comunidade de quirópteros, denotou-se a tendência esperada de aumento da sua atividade de acordo com o aumento da temperatura e com menores velocidades de vento, bem como a ausência de perturbação quer pela análise acústica, quer pela amostragem de abrigos na área de influência do PE. Não foi registada qualquer carcaça de ave ou quiróptero no 2º ano de exploração do PE de Vila Lobos, pelo que se considerou a mortalidade como sendo eventualmente residual por motivos de eficácia técnica. O estudo permitiu assim corroborar o potencial do processo de repotenciação de parques eólicos na redução global do seu impacte paisagístico e na biodiversidade local, aliada à sua sustentabilidade financeira e energética.

A Fibrose Quística (FQ) é a doença autossómica recessiva letal mais comum na população caucasiana, afetando 1 em cada 2500-6000 recém-nascidos. A doença é causada por mutações no gene Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) que codifica a proteína CFTR. Até à data já foram descritas mais de 2000 variantes neste gene, a maioria das quais causadora de FQ. A mutação mais comum é a deleção do resíduo de fenilalanina na posição 508 (F508del) e causa um defeito no tráfego e função devido à conformação incorreta da proteína. Clinicamente a FQ é caracterizada por insuficiência respiratória e doença pulmonar crónica que é a principal causa de mortalidade e morbilidade. A desregulação de CFTR leva a uma redução do volume de líquido superficial das vias respiratórias e consequentemente a um muco espesso e desidratado que impede a limpeza mucociliar e leva à acumulação de bactérias e agentes patogénicos que conduzem à doença pulmonar crónica. A glicoproteína CFTR pertence à superfamília dos transportadores ABC (do inglês ATP-binding cassette) e funciona como um canal de cloreto e bicarbonato regulado por cAMP, sendo expressa na membrana apical de várias células epiteliais, onde regula o movimento de água essencial para a manutenção da homeostase celular. Estruturalmente, a proteína é constituída por cinco domínios: dois domínios transmembranares, que constituem o poro do canal; dois domínios de ligação ao ATP e um domínio regulador, responsável pela abertura e fecho do canal. Durante a síntese proteica, a proteína CFTR é inserida co-traducionalmente na membrana do retículo endoplasmático, onde adquire a sua conformação nativa e passa por um processo de glicosilação inicial dando origem a uma forma imatura (designada banda B). Depois a proteína é transportada ao complexo de Golgi onde sofre processamento originando a forma madura (banda C). A forma madura de CFTR é então transportada por vesículas até à membrana plasmática onde exerce a sua função. Os níveis de proteína na membrana plasmática são ainda controlados por dois processos, endocitose e reciclagem. Na membrana plasmática a ancoragem da proteína ao citoesqueleto de actina contribui para a sua estabilidade membranar. Esta ancoragem está dependente da interação com diversas proteínas e consequente formação de complexos proteicos. A identificação do complexo CFTR-EPAC1 que depende da proteína NHERF1, veio destacar um duplo papel de regulação do canal por cAMP – baixas concentrações de cAMP ativam a proteína PKA para regular a função de CFTR, enquanto concentrações mais elevadas de cAMP promovem o aumento dos níveis da proteína na membrana plasmática num processo dependente da ativação de EPAC1. Recentemente esta comunicação entre as vias de sinalização de cAMP e o citoesqueleto de actina foi mais detalhadamente caracterizada pela identificação de duas novas proteínas que interagem com CFTR, INF2 e CAPZA2, que são proteínas reguladoras da dinâmica do citoesqueleto de actina. A proteína INF2 é um membro da família das forminas que se associa às terminações farpadas dos filamentos de actina e pode acelerar o processo de nucleação do filamento, mover de forma processiva com o filamento em elongação, impedir o bloqueio das terminações farpadas e ainda acelerar a despolimerização do filamento de actina, sendo que esta atividade é única quando comparada com os outros membros da família das forminas. A proteína CAPZA2 é um componente da proteína heterodimérica CapZ que também se associa às terminações farpadas e impede a substituição de monómeros de actina na terminação do filamento, levando à paragem da elongação. Estes dois reguladores do citoesqueleto de actina interagem com a proteína CFTR nos complexos proteicos macromoleculares que se formam na membrana plasmática após ativação de EPAC1. Foi identificado que INF2 atua como regulador negativo e CAPZA2 como regulador positivo dos níveis de CFTR na membrana plasmática, uma vez que a subexpressão (knockdown - KD) de INF2 provoca um aumento de CFTR na membrana e por contraste o KD de CAPZA2 conduz a uma diminuição. Dados anteriores sugerem que o efeito negativo da proteína INF2 na ancoragem de CFTR à membrana plasmática se deva a processos de despolimerização nos filamentos farpados ou corte junto desses filamentos. Por outro lado, a proteína CAPZA2 promove a ancoragem de CFTR na membrana plasmática através de um efeito estabilizador do citoesqueleto de actina nos filamentos farpados. Os mecanismos pelos quais INF2 e CAPZA2 atuam em conjunto para promover um efeito na regulação da dinâmica do citoesqueleto de actina e na estabilidade de CFTR wt na membrana plasmática não estão totalmente caracterizados e compreendidos e para além disso não há informações quanto ao efeito na proteína CFTR mutante. Deste modo, este trabalho teve como objetivo principal caracterizar o papel do citoesqueleto de actina na regulação de CFTR na membrana plasmática após ativação de EPAC1, com foco no impacto da modulação de INF2 e CAPZA2 na proteína CFTR wt e F508del, dividindo-se em três tarefas: 1) Estudar os mecanismos pelos quais os reguladores de citoesqueleto de actina influenciam a expressão e localização de CFTR wt. 2) Determinar o impacto da modulação dos reguladores de citoesqueleto na atividade de CFTR wt. 3) Determinar o impacto da modulação dos reguladores de citoesqueleto na expressão, localização e estabilidade de CFTR F508del resgatada. Os resultados da primeira tarefa confirmam o efeito oposto do KD de INF2 e CAPZA2 na expressão de CFTR wt na membrana plasmática já conhecido, observando-se que o KD de INF2 aumenta os níveis de CFTR na forma madura e que o KD de CAPZA2 leva à diminuição. Para o KD combinado de ambos os reguladores de citoesqueleto observa-se um efeito similar ao KD de CAPZA2, ou seja, uma diminuição nos níveis de CFTR wt na membrana plasmática - no entanto esta diminuição é menos acentuada do que a observada para o KD de CAPZA2 individualmente. Este resultado sugere que o efeito do KD de CAPZA2 domina sobre o efeito do KD de INF2, o que sugere que CAPZA2 também domine sobre INF2 na regulação da ancoragem de CFTR à membrana plasmática. Para além disso, este resultado aponta para um modelo de competição CAPZA2/INF2 ao regular a ancoragem de CFTR à membrana plasmática, modelo este em que a proteína CAPZA2 domina na associação às terminações barbadas dos filamentos de actina e por isso o seu efeito positivo sobrepõem-se ao efeito negativo de INF2. Para a segunda tarefa, optou-se por estudar o impacto da modulação dos reguladores de citoesqueleto na atividade de CFTR em organóides intestinais, pois este é um modelo mais relevante do ponto de vista fisiológico uma vez que é derivado de materiais de indivíduos com FQ. Os resultados mostraram que a ativação de EPAC1 em organóides intestinais não altera a função de CFTR. Após um teste que confirmou a correta atividade do composto utilizado para ativar EPAC1 (007-AM), identificou-se que não há expressão detetável da proteína EPAC1 em organoides intestinais, independentemente da mutação de CFTR que estes possam ter. Este resultado justifica a ausência de efeito na função de CFTR após ativação de EPAC1. Alternativas para estudar o impacto da modulação de reguladores do citoesqueleto na atividade de CFTR, podem ser a utilização de ensaios baseados no quenching de YFP (do inglês Yellow fluorescent protein) ou ensaios em câmara de Ussing efetuados em linhas celulares. Os resultados da terceira tarefa mostram que o KD de INF2 aumenta o resgate de CFTR F508del promovido pelo corretor VX-661. Este efeito, apesar de não depender da ativação de EPAC1, é aumentado nessas condições, o que contrasta com o efeito conhecido para o KD de INF2 em CFTR wt que está dependente da ativação de EPAC1. Os resultados mostram ainda que o KD de INF2 tem um forte efeito de estabilização da forma imatura de CFTR F508del, sugerindo que INF2 possa ter um papel na fase inicial de tráfego de CFTR, ainda não caracterizado. Para além disto, identificou-se que o KD de INF2 promove uma diminuição do turnover de CFTR F508del resgatada, com um aumento de semi vida de 15.7 min no controlo negativo para 68.8 min. Estes resultados sugerem que a diminuição na degradação de proteína seja o mecanismo subjacente ao efeito estabilizador do KD de INF2 no resgate de CFTR F508del observado, podendo envolver uma diminuição na endocitose ou um aumento na reciclagem. Assim, estes resultados fornecem evidência para que INF2 seja considerado como um potencial alvo terapêutico para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas combinadas de modo a melhorar a estabilidade de CFTR F508del resgatada na membrana plasmática. Globalmente, este trabalho constitui uma importante caracterização do efeito dos reguladores do citoesqueleto de actina sobre a proteína CFTR após ativação de EPAC1, ligando a comunicação entre vias de sinalização de cAMP e o citoesqueleto de actina à modulação de CFTR e possivelmente ao tratamento de FQ.

Com o aumento da esperança média de vida registada nas últimas décadas, problemas relacionados com os ossos começaram a ter cada vez mais impacto na nossa sociedade e por esse motivo, houve a necessidade de se desenvolver substitutos ósseos capazes de auxiliar e acelerar a regeneração óssea. Contudo, problemas como infeções peri-implantares começaram a ser bastante comuns, provocando consequências gravíssimas ao nível da saúde do paciente. Para combater estas infeções, a toma de antibióticos é o procedimento base a ser aplicado, porém este tipo de infeção é tipicamente causado por microrganismos que crescem em biofilme, dificultando e muito a ação dos antibióticos. Posto isto, tornou-se urgente a necessidade de se procurar novas estratégias para combater este tipo de infeções. Face a essa problemática, esta dissertação tem como objetivo a produção de pós de hidroxiapatite contendo características antibacterianas através da incorporação de cobre na sua estrutura. A síntese da hidroxiapatite dopada com cobre foi feita usando o método de sol-gel, tendo sido utilizado o nitrato de cálcio tetrahidratado, pentóxido de fósforo e nitrato de cobre (II) hidratado, como os precursores do cálcio, fósforo e cobre, respetivamente. Foram sintetizadas amostras com uma percentagem molar de cobre de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 6% e 8%. Os estudos feitos quanto à citotoxicidade revelam que para uma concentração de 20 mg/mL todas as amostras apresentaram altos níveis de citotoxicidade, sendo que para 10 mg/mL as amostras HAp-Cu (0,5%) e HAp-Cu (1%) já foram consideradas não citotóxicas e para 5 mg/mL somente a amostra HAp-Cu (8%) ainda exibia níveis consideráveis de citotoxicidade. As análises de FTIR e de DRX mostraram a preservação dos grupos funcionais e da estrutura cristalina da hidroxiapatite. Quanto à temperatura de sinterização ideal para a produção de pós de hidroxiapatite dopada com cobre, conclui-se que é a 700 °C. Para o tempo de envelhecimento de 4 horas verificou-se um aumento generalizado do grau de cristalinidade e do tamanho do cristalito. Os ensaios de bioatividade mostraram a formação de aglomerados de fosfatos de cálcio na superfície das amostras. Os ensaios da atividade antimicrobiana revelaram que apenas a amostra HAp-Cu (6%) se mostrou ser eficaz contra a bactéria gram-negativa Escherichia coli.

Here can be understood the maturity of the academic and pedagogical field that graffiti, urban and street art, well, urban creativity in general have. On the 2020 conference was in fact proven that the consistency of knowledge and structure of thought in the several disciplinary areas regarding the urban creativity topics, are giving way to multiple approaches to classes integrated in master courses, informing the teaching of art historians, the work of designers, and research of cognitive scientists and educators. It was evident that this trend will continue in multiple forms including experimental ones bridging theory and practice, sometimes inverting the role of researchers and authors, but always enlarging audiences, practitioners and studious.

As travelers come and go worldwide, many leave marks in a silent exchange, communicating that I was here, I exist. They embrace and taunt each other over time and distance, sharing in-jokes, and making rude gestures against surveillance and control. Marks about seeking community, personal bests, creating a customized, personalized experience of neighborhoods. This is ours. You are welcome. Some people and some experiences are still free. Unsurprisingly, some graffiti and experience design professionals connect, emerge, cross over, and enhance the many disciplines in each. Artists bring graffiti writing and design skills to the digital, sculptural, and architectural worlds. Experience designers document, facilitate, and embrace graffiti culture and experience in their own lives and work, recognizing the importance of people owning, co-creating, and humanizing the artifacts and environments we share. With this journal, we hope to illuminate some of the compelling work being done at these intersections of people, concerns, design, research, media, environments, liberty, trespass, and aesthetics.

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The term osteoimmunology was used for the first time in 2000 to describe the interaction of cells from the immune system and bone These two systems have several regulatory factors in common, such as cytokines, transcription factors and receptors. Consequently, they interact with each other both in physiological and pathological conditions. The aim of this dissertation thesis was to understand the effect of immune mediated inflammation on bone structural, mechanical and biological behaviour, using rheumatoid arthritis (RA) and fracture healing as a model. The first study of this thesis focused on the analysis of the effect of arthritis on bone biomechanical behavior. An animal model of arthritis, the SKG mice, was used and bone behavior was evaluated by mechanical three-point bending tests. Scanning electron microscopy (SEM) and multiphoton microscopy (MPM) were applied to study, respectively, bone structure and the collagen network organization in trabecular bone. Results from this study have shown that arthritic bones had poor biomechanical quality compared to control bones. MPM and SEM observations disclosed signs of impaired collagen organization and poor trabecular architecture. In this work we verified that chronic inflammation per se leads to impairment of bone biomechanics in terms of stiffness, ductility and ultimate strength. In the same model, we then proceed to study the effect of inflammation on collagen metabolism and organization. The evaluation of bone included mechanical tests, SEM, MPM and serum bone turnover markers, specifically procollagen type - amino-terminal peptide (P1NP) and carboxy-terminal crosslinked telopeptide of type I 6 collagen (CTX). Femoral bones of SKG mice revealed increased fragility expressed by deterioration of mechanical properties. In accordance, as observed by SEM, intertrabecular distance was increased and trabecular thickness decreased. MPM depicted a disorganized matrix and loose collagen structure compared to controls. Moreover, the collagen metabolism assessed in the serum was also highly increased in arthritic mice. In this work we found that the bone weakening effect of arthritis was due to high bone turnover and disorganized collagen type I matrix. Following these initial animal model data, the first to describe a direct effect of arthritis on collagen structure and bone biomechanics, we confirmed and further detailed these observations in human RA bone. Patients with RA submitted to hip replacement surgery were recruited. Trabecular bone microarchitecture was assessed by microcomputed tomography (microCT) and mechanical behavior by compression tests of a bone cylinder extracted from the femoral epiphysis. Bone cell activity was analyzed by studying gene expression in the bone microenvironment. Genes that code for proinflammatory cytokines were upregulated in RA patients, particularly IL-17, which plays an important role in stimulating osteoclastogenesis. RA bone microenvironment had a gene expression profile characterized by upregulated pro-osteoclastogenic cytokines and dickkopf homolog 1 (DKK1) and increased RANKL/OPG ratio. This was paralleled by raised expression of factors that promote osteoblastic activity, such as IGF-I, FGF2 and PDGF, but with low type I collagen expression. DKK1 is a negative regulator of the WNT/β- catenin signaling, which is a key pathway in the stimulation of osteoblast differentiation, meaning that its upregulation in RA patients is limiting the effects of pro-osteoblastic factors. Bone loss in a chronic inflammatory disease, such as RA, thus appears to result from enhanced bone resorption and impaired bone formation, which 7 constitutes a detrimental imbalance of bone remodeling and precipitates the rapid loss of bone mass. Indeed, differences were observed in gene expression between RA and primary osteoporosis (OP) bone in spite of the fact that these two patient groups had similar bone microarchitecture and biomechanical properties. These observations might indicate that the differences in gene expression reflect biologically specific mechanisms responsible for bone fragility in RA and that the inhibition of DKK1 can be a possible treatment strategy for tackling the effects of RA on bone. In the final work of this thesis, we have used the post-fracture inflammatory reaction as a model for characterizing the kinetics of inflammatory and bone remodeling related genes. Unlike the chronic inflammation seen in RA, fracture healing is a highly regulated and brief process. Patients submitted to hip replacement surgery after a low-energy hip fracture were enrolled in this study. Patients were grouped according to the time interval between fracture and surgery: bone collected within 3 days after fracture; between the 4th and 7th day; and one week after fracture. Inflammation and bone metabolism related genes were assessed at the fracture site. Our results indicate that the expression of inflammation related genes, especially IL-6, is highest at the very first days after fracture but from day 4 onwards there is a shift towards bone remodeling genes, suggesting that the inflammatory phase triggers bone healing. Sclerostin expression, an inhibitor of osteoblast differentiation, has an initial high expression level that is diminished after the reduction of inflammatory gene expression. We propose the existence of a two step process in bone healing, dependent on an initial inflammatory stimulus and a latter decrease in sclerostin-related effects, with a consequent proosteoblastic effect. Therefore, local promotion of these events might constitute a promising medical intervention to accelerate fracture healing. 8 The work herein discussed clearly shows that inflammation has a complex role in bone regulation. The identification of key regulators of this system will be crucial both for RA and fracture healing future management.