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Background and aims: To assess the relationships between food intake and colorectal cancer risk. Methods: Systematic review of available prospective studies on dietary intake and colorectal cancer. Results: Twelve out of 15 studies found no significant relationship between vegetable intake and colorectal cancer risk; also, 11 out of 14 studies found no relationship with fruit consumption. Conversely, the combined consumption of vegetables and fruit reduced colorectal cancer risk in three out of six studies, although the relationship was somewhat inconsistent between genders and anatomical localizations. Most studies found no relationship between cancer risk and red meat (15 in 20) or processed meat (seven out of 11) consumption; still, most of the reported relative risks were above unity, suggesting that high consumption of red or processed meat might increase colorectal cancer risk. The consumption of white meat, fish/seafood, dairy products, coffee or tea was mostly unrelated to colorectal cancer risk, although the consumption of smoked or salted fish actually increased risk. Conclusions: The relationships between dietary intake and colorectal cancer risk might be less important than previously reported. The combined consumption of vegetables and fruit might be protective, whereas excessive consumption of meat or smoked/salted/processed food appears to be deleterious.

Este trabalho apresenta as propostas federalistas, regionalistas e municipalistas em Portugal entre 1920 e 1922. Na primeira parte apresentamos a influência das ideias federalistas e municipalistas no movimento republicano desde 1873, com a criação do Centro Federal de Lisboa. O federalismo será o ideal da primeira geração de republicanos, que deixarão a sua marca no programa de 1891 ao proporem a federação de concelhos, a federação de províncias e a autonomia das províncias ultramarinas, como modelo organizativo da futura República federal portuguesa. A parte II será dedicada aos congressos municipalistas e regionalistas realizados entre 1920 e 1922 e às propostas federalistas de personalidades que teimavam em recordar as promessas federais da propaganda republicana no tempo da monarquia. A constituição de 1911 consagra a República una e indivisível e com ela desaparece de vez a aspiração oficial à República federal. Doravante o ideal federalista surgirá por entre as aspirações regionalistas e de autonomia municipal que terão os seus momentos marcantes nos congressos municipalistas regionalistas e no III Congresso Nacional Municipalista. Será no jornal A Pátria que serão divulgados os congressos municipalistas e regionalista e onde regularmente surgirão nomes como Henrique Trindade Coelho, Jaime Magalhães Lima, Carlos Rates e Marques Guedes em defesa da República federal. De entre estes nomes será Trindade Coelho a personalidade mais activa. Fiel ao seu slogan de 1920: Lisboa manda, província obedece , Trindade Coelho divulgará em Fevereiro de 1922 o seu projecto constitucional para uma República federal no qual identificará a corrente municipalista e regionalista com o federalismo. Alguns meses depois, no III Congresso Nacional Municipalista, surgirá a proposta de uma Constituição Municipalista para a República portuguesa. Serão as últimas tentativas de um regresso as origens, ou seja ao espírito e à letra do programa republicano de 1891, ao ideal de Henriques Nogueira e ao que os seus defensores consideram ser a mais original e perene tradição nacional.

Suscitada pela teorização sociológica recente em torno da desinstitucionalização, individualização e risco, esta tese questiona o que constrói a família contemporânea mais do que aquilo que a torna «efémera», «fluida» e «frágil». Num cenário «fragmentado», de famílias dotadas de «incerteza» e «instabilidade», guiadas por um tempo escasso e ritmo acelerado, menos numerosas, atravessadas pelos processos de privatização, sentimentalização e democratização, aspirando à autonomia e desvalorizando a perenidade em função das experiências do hic et nunc, como captar, hoje, a família? Das várias portas de entrada possíveis, e a partir dos contributos teóricos de David Morgan (1996; 1999), reconhecemos nas «práticas familiares», em concreto nos «rituais familiares», instrumentos teórico-conceptuais ao serviço da imaginação sociológica e capazes de captar os fluxos, a fluidez e o sentido da família contemporânea simultaneamente construídos pelo observador e protagonistas da acção. Retratar e compreender, por dentro e na sua diversidade, o lugar dos rituais familiares na construção da família contemporânea é o objectivo geral a que nos propomos. De modo específico e complementar, constituem ainda objectivos de investigação a inventariação e caracterização dos principais rituais familiares, e a revelação das relações ocultas e modos de articulação com estruturas e dinâmicas familiares, contextos sociais de pertença e dinâmicas de género. Metodologicamente, foi empreendida uma investigação de tipo qualitativo, intensivo e em profundidade com o objectivo de captar experiências e significados associados a práticas e representações pluridimensionais dos rituais familiares enquanto processos interactivos e significantes, simultaneamente localizados na cultura, história e biografia pessoal. Com recurso a entrevistas qualitativas de episódio (Flick, 1997) foram reunidas e analisadas em profundidade as narrativas contextualizadas de homens e mulheres a viver em contextos familiares diversificados e numa fase particular do curso de vida familiar, a de famílias com filhos pequenos. A partir da discussão teórica e empírica dos dados recolhidos, explorados com recurso a técnicas de análise de conteúdo qualitativa, conclui-se sobre a validade dos rituais familiares para captar a textura policromática da vida familiar e, ao mesmo tempo, a sua afirmação enquanto lugar de construção – para dentro e para fora – da família contemporânea, espaço simultaneamente físico, relacional e simbólico. É num puzzle complexo, cujas peças principais são as do tempo, espaço e emoção que temos, afinal, de procurar a resposta para o que confere o significado «especial» ao ritual familiar.

This work evaluates the impact of phytoplankton blooms on metal availability driven by dredging, in an area of the Sado estuary (Portugal), subject to ongoing dredging operations during the entire sampling period. In situ changes of chlorophyll a concentration, bioavailable trace metals (Cr, Mn, Co, Ni, Cu, Zn, Cd and Pb) in the water column, metal content in particulate matter, and particulate metal to bioavailable metal ratios were investigated during pre-bloom, bloom and post-bloom conditions to evaluate the potential of the phytoplankton-mediated metal removal. Metals in particulate matter significantly enhanced concomitantly with the decline of metals (mostly Mn, Co, Cu, Zn, and Pb) in the water column during the bloom, in comparison with pre- and post-bloom periods. During the peak of the phytoplankton bloom, bioavailable Cr, Mn, Co, Ni, Cu, Zn, Cd and Pb were reduced to 30, 99, 100, 87, 98, 72, 84 and 88% of their original levels (pre-bloom values). Copper and Pb, and to a lesser extent, Zn and Mn, were ranked as more particle reactive. Volume particulate matter concentrations of Mn, Ni, Cu and Pb much higher than the bioavailable concentrations, indicated that phytoplankton is likely to be a dominant sink of these metals during the bloom period. Thus, Mn, Ni, Cu and Pb are prone to be transferred and biomagnified into the marine food web. These results highlight phytoplankton blooms as important biological sinks of trace metals during dredging, which should be taken into consideration in planning and management of dredging, to minimise environmental impacts and protect estuarine and coastal ecosystems.

In this study normative data were obtained on measures of IQ, visual/motor, motor and memory functions among Portuguese elementary school children. Subjects were 228 females and 275 males, 8.0 to 11.9 years of age, in grades 2 through 4, who participated in a dental study. Performance on all tests improved with increasing age. Females performed better in rote verbal learning, psychomotor speed, and speed of information processing. Males had higher scores on tests of visual learning, visual memory, and fine motor speed and coordination. Nonverbal IQ had a significant impact on all tests except motor speed and coordination. Results represent an initial attempt to evaluate Portuguese children in educational and medical settings.

Gilman (1984) proposed that an "Upper Paleolithic Revolution" triggered by technological progress and demographic growth, and standing for the emergence of ritual reciprocity mechanisms, explained the major behavioral innovations se en in Europe after 40,000 years ago. Subsequent developments have shown that the notion remains valid but that early manifestations of those behaviors can be se en in the archeological record since at least the beginning of the Last Interglacial, and across the Old World. Thus, the process that brought a world of many, diverse, ethnically bounded Humanities out of the womb of the unbounded single Humanity of earlier times was rather more gradual and longer; the beginning of the Middle Paleolithic/Middle Stone Age was the initial stage of such a revolution, the beginning of the Upper Paleolithic was the lasto The finding that, in Neandertal Iberia, cave art dates back to >65,000 ago has been key to this reassessment of the Middle-to-Upper Paleolithic transition and, not unexpectedly, underwent sorne questioning. The arguments used, devoid of empirical basis as they are, highlight the extent to which the debate of Paleoanthropology's "Big Issues" is biased by often implicit, obsolete assumptions inherited from the origins of the discipline and by the social! cultural context of knowledge production.

As células estaminais hematopoiéticas (HSCs) são indispensáveis para a vida, no entanto, se apresentarem um funcionamento anormal, este pode contribuir para o desenvolvimento de graves doenças do sangue como, leucemias, linfomas e mielomas. As HSCs são responsáveis pela formação de todas as células sanguíneas num organismo e caracterizam-se por serem: - multipotentes; - capazes de reconstituir todo o sistema hematopoiético a longo-prazo, quando transplantadas para um recipiente irradiado; - capazes de se autorrenovarem. Tendo em conta estas características, as HSCs são alvo de múltiplos estudos, cujo objetivo será o desenvolvimento de novas terapias celulares relacionadas com doenças do foro hematológico. No entanto, a produção e manutenção de HSCs terapeuticamente viáveis in vitro tem-se mostrado um processo altamente complexo, sendo necessário entender os mecanismos intrínsecos da sua formação e manutenção in vivo. Nos vertebrados, a hematopoiese ocorre em três fases durante o desenvolvimento embrionário, sendo uma delas a primitiva e as restantes as definitivas. Em embriões de ratinho, a primeira fase ocorre no dia de desenvolvimento 7 (E7) no saco vitelino, onde se originam as primeiras células primitivas de eritrócitos, megacariócitos e macrófagos. Estas células oferecem o suporte necessário ao rápido crescimento do embrião, ao nível da remodelação de tecidos e da oxigenação. Sendo transitórias, estas células são incapazes de sustentar a hematopoiese a longo-prazo. A segunda fase ocorre um pouco mais tarde no dia E8.25, onde surgem progenitores bipotentes de eritrócitos-mielócitos que entram em circulação. As primeiras HSCs que definem a última fase definitiva só são geradas na região da aorta-gónadas-mesonefros (AGM), no dia E10.5. No dia E11, devido à entrada das células na circulação sanguínea, as HSCs são encontradas no saco vitelino, placenta, cabeça e fígado, antes de colonizarem a medula óssea onde ficarão durante toda a vida adulta. As HSCs surgem a partir de uma transição de células endoteliais com potencial hematopoiético, localizadas na parede ventral da aorta dorsal, formando aglomerados celulares intra-aórticos hematopoiéticos. Esta transição é controlada pela expressão do gene runx1. No entanto, pouco se sabe sobre outros sinais provenientes deste microambiente que sejam importantes para a formação e manutenção das HSCs. Fica por descobrir que sinais e células desempenham esse papel crucial no nicho. Estudos desenvolvidos in vitro mostraram que linhas de células mesenquimais do estroma (MSCs) derivadas da AGM conseguem suportar a hematopoiese, papel esse que se observa também com células do estroma da medula óssea adulta. Estas linhas celulares possuem também a capacidade de se diferenciarem em osso, tecido adiposo e cartilagem. O nosso laboratório definiu com sucesso as três camadas principais do estroma que circundam a aorta dorsal, aquando do aparecimento das primeiras HSCs no embrião de ratinho. A primeira camada, mais próxima do endotélio, foi definida como CD31-C-kit-CD45-NG2+PDGFRβ+, a segunda CD31-C-kit-CD45-NG2-PDGFRβ+ e a terceira CD31-C-kit-CD45-NG2-PDGFRβ‾. Curiosamente, PDGFRβ é expresso nas células mesenquimais perivasculares do estroma, nas camadas celulares mais próximas da aorta dorsal, podendo ter um papel decisivo na formação e manutenção das HSCs in vivo. Inclusive, estudos em peixe-zebra já demonstraram a importância da sinalização PDGF-B/PDGFRβ no controlo da geração de HSCs. Para determinar o papel desta sinalização no suporte da hematopoiese durante o desenvolvimento embrionário de ratinho, utilizámos neste projeto um modelo knockout na linha germinativa para PDGFRβ. Os dados preliminares do nosso laboratório mostraram que na ausência de PDGFRβ, tanto o número de progenitores hematopoiéticos, como a atividade de HSCs na AGM no dia E11, são afetados. Isto leva à hipótese de que a sinalização por via de PDGF-B/PDGFRβ, é necessária para apoiar HSCs ex vivo e que a sua ausência afeta o nicho in vivo no embrião de ratinho. Para confirmar esta hipótese, derivámos MSCs a partir de AGMs recolhidas no dia E11 de embriões knouckout para PDGFRβ, heterozigotos e embriões selvagens (wild type). A ausência de PDGFRβ nas linhas celulares mutantes foi confirmada por citometria de fluxo, validando o modelo utilizado. As células em cultura foram caracterizadas por citometria de fluxo e imunocitoquímica e mostraram ser altamente heterogéneas fenotipicamente, mas morfologicamente semelhantes. Pudemos também confirmar que se tratava de células mesenquimais do estroma, pelo padrão de expressão de marcadores típicos (PDGFRβ, CD146, αSMA). Para além deste passo de caracterização, realizámos experiências de co cultura in vitro para verificar o suporte hematopoiético das células derivadas. Os nossos dados indicam que a deleção de PDGFRβ afeta a capacidade das MSCs de suportarem progenitores hematopoiéticos, assim perturbando o processo normal de hematopoiese. De modo a perceber melhor o papel destas células perivasculares que expressam PDGFRβ no nicho e no suporte da hematopoiese, realizámos single-cell RNA-sequencing (scRNA-seq) em AGMs de embriões knockout para PDGFRβ e selvagens no dia E11. Através desta análise de transcriptómica, fomos capazes de demonstrar o papel de PDGFRβ no nicho. Processos e genes envolvidos na diferenciação e função de MSCs, assim como na sinalização TGFβ/BMP, encontraram-se infra regulados na AGM knockout in vivo. Também verificámos que vários processos relacionados com o desenvolvimento do coração e artérias estavam infra regulados. Para investigar melhor o potencial osteogénico das linhas celulares mutantes in vitro, realizámos um ensaio de osteogénese. Juntamente com os dados de sequenciação, concluímos que a deleção de PDGFRβ afeta o nicho na AGM no dia E11, tem um papel direto na diferenciação osteogénica e, consequentemente, no suporte da hematopoiese. Com este estudo, a nossa abordagem contribuiu para uma melhor compreensão sobre o nicho que sustenta a formação e manutenção de HSCs no embrião de ratinho em desenvolvimento, permitindo assim otimizar protocolos para obter e manter HSCs in vitro a partir de células estaminais pluripotentes induzidas. Como perspetiva futura, fica por caracterizar melhor o papel de PDGFRβ, em processos de ciclo celular, uma vez que este recetor é conhecido por estar envolvido na proliferação e divisão celular. E também a relação de PDGFRβ com CD146 que é expresso na maioria das células derivadas em cultura. Fica também por completar as experiências em curso de co cultura de resgate com BMP4.

Glyphosate is the main active component of the commercial formulation Roundup®, the most widely used chemical herbicide worldwide. However, its potential high toxicity to the environment and throughout trophic webs has come under increasing scrutiny. The present study aims to investigate the application of bio-optical techniques and their correlation to physiological and biochemical processes, including primary productivity, oxidative stress, energy balance, and alterations in pigment and lipid composition in Phaeodactylum tricornutum, a representative species of marine diatoms, using the case study of its response to the herbicide glyphosate-based Roundup® formulation, at environmentally relevant concentrations. Cultures were exposed to the herbicide formulation representing effective glyphosate concentrations of 0, 10, 50, 100, 250, and 500 μg L−1. Results showed that high concentrations decreased cell density; furthermore, the inhibition of photosynthetic activity was not only caused by the impairment of electron transport in the thylakoids, but also by a decrease of antioxidant capacity and increased lipid peroxidation. Nevertheless, concentrations of one of the plastidial marker fatty acids had a positive correlation with the highest concentration as well as an increase in total protein. Cell energy allocation also increased with concentration, relative to control and the lowest concentration, although culture growth was inhibited. Pigment composition and fatty acid profiles proved to be efficient biomarkers for the highest glyphosate-based herbicide concentrations, while bio-optical data separated controls from intermediate concentrations and high concentrations.

A Doença de Alzheimer (Alzheimer’s disease, AD) é atualmente considerada a forma mais prevalente de demência a nível mundial, representa 60-80% dos casos diagnosticados. É uma doença neurodegenerativa progressiva do cérebro e divide-se em duas formas de doença: a familiar que afeta preferencialmente pessoas com idade inferior a 65 anos e a esporádica que afeta maioritariamente pessoas com idade acima dos 60 anos. Sendo esta uma doença relacionada com o envelhecimento, e sendo que atualmente a esperança média de vida tem vindo a aumentar, em Portugal estima-se que 5,9% das pessoas com mais de 60 anos possuam demência. Esta patologia é caracterizada por perda neuronal que culmina em défices cognitivos e numa diminuição do volume cerebral. Estas consequências provêm de alterações moleculares características desta patologia como é o caso da hiper-fosforilação da proteína tau - levando à formação de fibrilhas - e a acumulação do péptido Beta-Amilóide (Aβ) que tem propensão para agregar e formar placas amilóides. Tais alterações provocam danos cognitivos na memória, disfunção sináptica e perda de neuroprotecção. Foi descoberto que em algumas doenças neurodegenerativas, como a AD, que são caracterizadas por um declínio cognitivo e perda de memória, a sinalização mediada pelo factor neurotrófico derivado do cérebro (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF) se encontra diminuída. O BDNF é uma neurotrofina importante uma vez que desempenha funções cruciais a nível fisiológico no sistema nervoso central, participando em mecanismos como a diferenciação, sobrevivência e crescimento neuronal bem como em processos de plasticidade sináptica. Existem estudos que demonstram que os níveis de BDNF e do seu recetor tirosina cinase de forma completa, TrkB-FL (full-length isoform of tropomyosin-related receptor B) se encontram diminuídos, tanto em modelos animais como em amostras post-mortem recolhidas a doentes com AD. Adicionalmente, o BDNF tem a capacidade de se ligar a várias isoformas truncadas dos recetores TrkB (truncated TrkB, TrkB-Tc), no entanto estes recetores são modeladores negativos dos recetores TrkB dado que não possuem o domínio tirosina cinase intracelular, essencial para a ativação das vias de sinalização mediadas pelo BDNF. Recentemente, vários estudos tiveram como principal foco de investigação a tentativa de perceber ao detalhe qual o mecanismo fundamental através do qual a sinalização mediada pelo sistema BDNF/TrkB-FL se encontra desregulada no contexto de AD. Os ensaios revelaram que a acumulação de Aβ, característica da AD, leva a uma sobre ativação dos recetores N-metil-D-aspartato extrasinápticos (eNMDARs) - importantes mediadores da plasticidade sináptica e permeáveis ao cálcio - o que possibilita uma maior passagem e acumulação de cálcio no interior da célula. O aumento exorbitante de cálcio no espaço intracelular resulta na ativação de um grupo específico de proteases, denominados por calpaínas (dependentes de cálcio), que vão clivar os recetores TrkB-FL. Desta proteólise advém a formação de um novo recetor, TrkB truncado (TrkB-T’) e de um fragmento intracelular (intracelular domain, TrkB-ICD) que com o passar do tempo é translocado e se acumula no núcleo. Para além disso, o fragmento TrkB-ICD é estável e tem a capacidade de fosforilar proteínas neuronais e axonais. Nos últimos anos, a neuroinflamação tem sido apontada como um importante componente patofisiológico na AD, que contribui para a progressão e agravamento da doença. A neuroinflamação consiste na inflamação do tecido nervoso e na ativação do sistema imune inato no cérebro, que tem como função central a proteção do sistema nervoso contra infeções, ferimentos e/ou doença, como acontece neste caso concreto. Esta reação inflamatória requer uma combinação de respostas e ativações de células gliais especificas do sistema nervoso central (SNC), que incluem a microglia, os astrócitos, entre outras. A microglia é considerada o macrófago residente do SNC e pode apresentar-se num estado de vigilância não-polarizado enquanto a homeostase cerebral é mantida, mas quando existe um estímulo esta pode rapidamente polarizar ficando ativa. Dependendo do estímulo e da sua magnitude, estas células quando ativadas podem exibir diferentes fenótipos: podem apresentar-se 1) num estadio neurotóxico e pró-inflamatório, onde são libertadas citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias ou 2) num estadio antinflamatório e de recuperação, em que há a secreção de citocinas anti-inflamatórias e remoção de detritos celulares. Relativamente aos astrócitos, estes são as células mais abundantes do SNC e participam num vasto número de processos essenciais à homeostase cerebral, como por exemplo a captação de neurotransmissores em excesso, modulação e transmissão sináptica, processos inflamatórios, entre outros. Estas células também podem existir sobre várias formas, distinguidas pela diferente morfologia, fenótipo ou distribuição, assim como a microglia estas células também têm a capacidade de libertar citocinas pró-inflamatórias em situações especificas, como é o caso da AD. Descrições da literatura referem que em contexto de AD, a microglia e os astrócitos são ativados pela presença de oligómeros e fibrilhas provenientes da acumulação de Aβ. Paralelamente, as regiões mais afetadas nesta doença são o hipocampo e o córtex, observando-se uma reação inflamatória primeiramente nestas áreas. Estes fatos, juntamente com a inexistência de tratamento para esta doença que afeta um elevado número da população a nível mundial, levou a que fossem levantadas várias questões às quais este trabalho tentou dar resposta. Assim, o objetivo global deste trabalho é o estudo do impacto da clivagem do recetor TrkB-FL na neuroinflamação em contexto de AD. Sabendo que o TrkB-ICD é um fragmento que se acumula no núcleo e que tem a capacidade de fosforilar proteínas nucleares e axonais, o primeiro objetivo é perceber se a sobre-expressão do fragmento TrkB-ICD per se é um estímulo suficientemente poderoso para dar origem a reações inflamatórias exacerbadas. Para isso, foram injetadas no hipocampo de ratinhos partículas virais induzindo a expressão do TrkB-ICD apenas em neurónios piramidais e, após dois meses de expressão, vários testes moleculares foram efetuados. O segundo objetivo prende-se com o ensaio de uma estratégia farmacológica para prevenir a clivagem dos recetores TrkB-FL e por consequente a perda de função do BDNF. Um dos grupos onde este trabalho foi realizado desenvolveu um péptido, TAT-TrkB, que previne a clivagem dos recetores TrkB-FL evitando a perda de função do BDNF e consequentes vias de sinalização. Para isso foi estudado o impacto da administração intraperatoneal diária de TAT-TrkB (25 ou 50 mg/kg) num modelo animal de AD, 5xFAD, tendo posteriormente estes animais sido sujeitos a vários testes comportamentais e a estudos moleculares. Os resultados obtidos neste projeto revelam que a sobre-expressão do fragmento TrkB-ICD não é um estímulo suficientemente forte para desencadear um processo de neuroinflamação generalizado, no entanto é possível que esta sobre-expressão induza alterações focais nos locais de expressão. A memória de reconhecimento dos ratinhos foi avaliada utilizando o teste “reconhecimento do objeto novo” (Novel Object Recognition test, NORt) onde se quantifica o tempo despendido a explorar os objetos e se existe preferência de exploração de um objeto específico. No entanto, os resultados obtidos não demonstraram uma recuperação dos danos cognitivos depois da administração de TATTrkB (25 ou 50 mg/kg) no modelo animal de AD. Curiosamente, os animais controlo também não apresentaram um perfil de aprendizagem no fim deste teste. Para além dos testes comportamentais, parâmetros moleculares como: níveis de TrkB-FL, TrkB-ICD, disfunção sináptica e neuroinflamação foram avaliados nestes animais. Como seria de esperar, os animais 5xFAD apresentaram uma elevada prevalência de inflamação comparativamente aos animais controlo, assim como uma diminuição da função sináptica, demonstrada por uma diminuição da presença da proteína pós-sináptica de densidade 95 (PSD-95). Curiosamente, a administração de TAT-TrkB permitiu uma recuperação dos níveis de PSD-95. Em suma, os resultados obtidos neste projeto sugerem que: 1) A sobre-expressão do fragmento TrkB-ICD não é um estímulo suficientemente forte para provocar uma resposta inflamatória generalizada; 2) O péptido TAT-TrkB parece promover a recuperação de alguns marcadores que estão alterados nos animais 5xFAD. Este projeto apresenta alguns resultados promissores, no entanto como se trata de um estudo preliminar é necessário complementar estes ensaios com análises mais específicas. Para validação do TAT-TrkB como possível terapia será necessário desenvolver vários ensaios, incluindo ensaios farmacocinéticos, farmacodinâmicos e avaliar as interações célula-péptido de forma a perceber qual será a melhor estratégia terapêutica associada à administração de TAT-TrkB.

Conhecer a estrutura de uma proteína é uma das características mais importantes para perceber qual a atividade biológica da mesma. Sendo a estrutura tridimensional de uma proteína uma das características mais importantes para compreender a sua função, várias técnicas foram desenvolvidas ao longo do tempo para obter informação sobre a mesma. Entre estas destacam-se a cristalografia de raio-X, a ressonância nuclear magnética e a cryo-EM. Contudo, a necessidade de utilizar uma grande quantidade de amostra e existência de limitações para complexos quaternários de elevada massa molecular eram algumas das desvantagens destas técnicas. No entanto, nos últimos anos, a espetrometria de massa tem vindo a tornar-se uma abordagem cada vez mais usada em biologia estrutural e molecular, devido ao grande avanço tecnológico dos instrumentos utilizados. O desenvolvimento de técnicas de ionização suaves e o surgimento do nano electrospray permitiu que pequenas quantidades de amostra fossem analisadas através desta técnica, trazendo muitas vantagens em comparação com as técnicas disponíveis para o estudo da estrutura de uma proteína. Com o aparecimento da espetrometria de massa nativa passou a ser possível a análise de complexos proteicos intactos e, com esta abordagem, informações como a massa molecular, a estequiometria e a topologia dos complexos proteicos passou a ser imediatamente conhecida. Uma das características da espetrometria de massa é a necessidade de purificação da amostra para que esta pudesse ser analisada e produzisse um espetro claro. No entanto, os tampões utilizados durante a purificação de complexos proteicos contêm sais e agentes solubilizantes incompatíveis com espetrometria de massa. Para além disso, durante o processo de purificação, o complexo passa por vários passos que podem levar à perda das ligações não covalentes e à alteração da conformação do mesmo. A purificação é também uma desvantagem no estudo de complexos proteicos, uma vez que não têm em conta o efeito de crowding macromolecular que controla as interações entre proteínas na célula. Assim, a purificação limita a informação obtida sobre estas interações. Contudo, recentemente foi desenvolvido um método que permite a análise de proteínas diretamente do extrato celular, sem necessidade de purificação. Para tal, é necessário que a proteína seja sobre expressa e a sua abundância relativa seja superior às proteínas endógenas para que o sinal que produz seja dominante no espetro de massa. Adicionalmente, para estudos estruturais é necessário usar a ionização por nanoESI, ainda mais suave e eficiente que o ESI mas cuja implementação é muito variável entre diferentes espetrómetros de massa e requer considerável otimização para o estudo de proteínas no seu estado nativo. Deste modo, o estudo de complexos proteicos no estado nativo a partir do extrato celular através de espetrometria de massa exige a necessidade de ajustar parâmetros para ser possível ionizar a proteína, mas não destruir as ligações não covalentes que mantêm o complexo proteico. Deste modo, o objetivo principal do trabalho é a otimização de um método que permita melhorar a eficiência de ionização e a transmissão de complexos proteicos diretamente de um extrato celular crude e que possa ser usado em diferentes espetrómetros de massa. Para tal foi necessário o desenvolvimento de capilares adequados, que maximizassem a ionização de complexos proteicos, a otimização da expressão proteica e da preparação da amostra e por fim, o ajuste dos parâmetros para a transmissão de iões com m/z elevado num Q-TOF e num FT-ICR. Estes dois espetrómetros de massa partilham algumas características comuns ao nível da sua ótica de iões, mas têm características muito distintas entre si e que podem ser exploradas no âmbito de estudos estruturais. Como modelo foi usado o complexo proteico glioxalase I de Leishmania infantum, uma vez que é um homodímero, cujas interações são mantidas por ligações não covalentes, e a sua estrutura determinada por cristalografia é conhecida. Para otimizar a transmissão do sinal e melhorar o espetro dos complexos proteicos, um dos aspetos mais importantes é o processo de ionização. A forma do capilar utilizado influência a qualidade do espetro, uma vez que controla o fluxo. Quanto menor for o diâmetro da ponta do capilar, melhor a eficiência de ionização. Assim, foram produzidos diversos capilares, tendo sido obtido a variação da corrente iónica e os respetivos espetros. Como amostras foram utilizadas duas proteínas, a mioglobina, uma proteína monomérica com cerca de 17 kDa e o álcool desidrogenase, uma proteína tetramétrica com cerca de 147 kDa, ambas no estado desnaturado e nativo. Durante o estudo com o álcool desidrogenase foi possível acompanhar a formação da estrutura tetramérica, uma vez que ao longo do tempo se viu a diminuição da intensidade da espécie monomérica e o aumento da espécie tetramérica. O facto de não se detetar a espécie dimérica sugere que a cinética de formação desta espécie é demasiado rápida para ser detetada por espetrometria de massa com o método utilizado. Para otimizar a qualidade do espetro, as condições de expressão da amostra foram também otimizadas. Foram testados dois meios de cultura, LB e TB. O meio TB, sendo um meio nutricionalmente rico foi capaz de induzir a expressão da proteína, mesmo sem a adição de indutor e a quantidade produzida foi suficiente para a proteína dominar o espetro. A temperatura de expressão também foi otimizada e observou-se que a expressão foi maior quando o crescimento foi induzido a 28ºC, temperatura a qual ocorre a expressão no parasita, em comparação com o crescimento a 37ºC. Assim, para a otimização dos parâmetros que permitem o estudo dos complexos proteicos a partir do extrato celular nos espectrómetros de massa, a expressão da proteína foi induzida a 28ºC em meio TB. Apesar de o Q-TOF ser um espetrómetro de massa modificado para a transmissão de iões com elevado m/z, parâmetros como a temperatura da fonte e a voltagem da energia de colisão foram otimizados para melhorar a transmissão de complexos proteicos a partir do extrato celular. A temperatura demonstrou não influenciar a conformação da proteína, não havendo diferença na distribuição dos estados de carga obtidos com a temperatura da fonte a 37º e a 100ºC. Uma voltagem de 30 V demonstrou ser a que melhora a qualidade do espetro, uma vez que diminui a intensidade de outros picos não correspondentes à proteína, aumentando a intensidade do sinal pretendido. Por sua vez, uma energia de colisão demasiado baixa como 10 V, levou a um aumento da intensidade de outros picos e uma voltagem demasiado alta levou à alteração da conformação da proteína, uma vez que ocorre o aparecimento de estados de carga superiores. No entanto, 100 V não foi suficiente para destruir as ligações não covalentes, uma vez que a espécie monomérica não apareceu no espetro. Com estes resultados foi possível concluir que a elevada temperatura da fonte não foi capaz de destruir as ligações não covalentes, produzindo o melhor espetro quando combinada com uma energia de colisão de 30 V. Para a análise do complexo proteico através do FT-ICR foi utilizada uma fonte de nano-electrospray em desenvolvimento. Os espetros obtidos apresentavam uma distribuição dos estados de carga menores e mais ruído, quando comparados com os obtidos por Q-TOF, devido à presença de aductos típicos de espetros nativos. No entanto, foi possível observar a presença do dímero e não foram detetados picos correspondentes ao monómero, indicando que não ocorreu dissociação durante o processo de ionização, embora tenha sido usada uma energia de colisão de 30 V, que melhorava a qualidade do espetro. Demonstrou-se ser possível estudar a estrutura de uma proteína a partir do extrato celular por espetrometria de massa nativa, sem necessidade de purificação, preservando as condições do complexo no interior da célula, tanto no Q-TOF previamente modificado para transmissão de iões de elevado m/z, como no FT-ICR através do ajuste de parâmetros que permitem a transmissão e análise de iões de elevado m/z.

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Present demographic trends suggest a rise in the contributions of human pharmaceuticals into coastal ecosystems, underpinning an increasing demand to evaluate the ecotoxicological effects and implications of drug residues in marine risk assessments. Propranolol, a non-selective β-adrenoceptor blocker, is used worldwide to treat high blood pressure conditions and other related cardiovascular conditions. Although diatoms lack β-adrenoceptors, this microalgal group presents receptor-like kinases and proteins with a functional analogy to the animal receptors and that can be targeted by propranolol. In the present work, the authors evaluated the effect of this non-selective β-adrenoceptor blocker in diatom cells using P. tricornutum as a model organism, to evaluate the potential effect of this compound in cell physiology (growth, lipids and energy metabolism and oxidative stress) and its potential relevance for marine ecosystems. Propranolol exposure leads to a significant reduction in diatom cell growth, more evident in the highest concentrations tested. This is likely due to the observed impairment of the main primary photochemistry processes and the enhancement of the mitochondrial respiratory activity. More specifically, propranolol decreased the energy transduction from photosystem II (PSII) to the electron transport chain, leading to an increase in oxidative stress levels. Cells exposed to propranolol also exhibited high-dissipated energy flux, indicating that this excessive energy is efficiently diverted, to some extent, from the photosystems, acting to prevent irreversible photoinhibition. As energy production is impaired at the PSII donor side, preventing energy production through the electron transport chain, diatoms appear to be consuming storage lipids as an energy backup system, to maintain essential cellular functions. This consumption will be attained by an increase in respiratory activity. Considering the primary oxygen production and consumption pathways, propranolol showed a significant reduction of the autotrophic O2 production and an increase in the heterotrophic mitochondrial respiration. Both mechanisms can have negative effects on marine trophic webs, due to a decrease in the energetic input from marine primary producers and a simultaneous oxygen production decrease for heterotrophic species. In ecotoxicological terms, bio-optical and fatty acid data appear as highly efficient tools for ecotoxicity assessment, with an overall high degree of classification when these traits are used to build a toxicological profile, instead of individually assessed.

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Purpose: To compare the quality-of-life (QoL) and psychosocial changes in a group of patients with early breast cancer who underwent conservative surgery (BCS) or modified radical mastectomy(MRM). Methods: Self-administered questionnaire assessing body image perception, social habits, sexual attraction and self-consciousness with relatives/friends, was randomly assigned to 125 patients (61 BCS, 64 MRM; aged 53 +/- 8 and 50 + 9 years, respectively, p = NS). Results: MRM patients reported a significantly higher frequency of changes in body image perception and other related social behaviour such as avoiding going to the beach or using low-cut clothes, and reticence with friends. Conversely, no differences were found regarding sexuality, denial of the disease by the husband/partner, or concealing the disease from family members. Also, no significant differences were found between patients above and below the age of 50 years, for all variables studied after adjustment for surgical procedure. Conclusions: Modified radical mastectomy has a negative effect on body image perception and in social behaviour patterns of patients and with a concomitant decrease in QoL. The sexuality of the patient is not significantly affected.

A malária é uma doença parasitária que se inicia quando um mosquito fêmea Anopheles injeta esporozoítos, a forma do parasita Plasmodium invasora de hepatócitos, na derme do hospedeiro enquanto se alimenta do seu sangue. De seguida os esporozoítos injetados invadem a corrente sanguínea e migram para o fígado, onde infetam e se desenvolvem dentro de hepatócitos, originando formas exoeritrocitárias (EEFs). Apesar de assintomática, esta fase é obrigatória e culmina na libertação de merozoítos para a corrente sanguínea, os quais infetam eritrócitos, originando os sintomas da doença. Alguns merozoítos diferenciam-se em gametócitos, as formas sexuais do parasita, os quais podem ser ingeridos por um mosquito fêmea Anopheles numa refeição de sangue posterior. Dentro do mosquito ocorre replicação sexual do parasita, a qual culmina com a formação de esporozoítos que se deslocam para as glândulas salivárias do vetor, onde permanecem até serem injetadas no próximo hospedeiro. Em 2019, a Organização Mundial de Saúde (OMS) reportou 229 milhões de casos de malária e 409 mil mortes causadas por esta doença, das quais 67% ocorreram em crianças com menos de 5 anos de idade. No entanto, outros grupos populacionais com um risco acrescido de contrair malária incluem mulheres grávidas, pacientes infetados com o vírus da imunodeficiência adquirida (VIH)/síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA) e ainda migrantes, populações móveis e viajantes. Apesar de décadas de investigação ainda não existe uma vacina eficaz contra esta doença. Dada a sua natureza obrigatória e assintomática, a fase hepática da infeção é considerada o alvo clínico mais apelativo para o desenvolvimento de vacinas, uma vez que bloqueando a proliferação inicial do parasita nos hepatócitos, a fase sintomática não ocorreria. No entanto, o candidato a vacina mais avançado, a vacina de subunidade RTS,S, apenas fornece uma proteção limitada de aproximadamente 29.5%. Estratégias de vacinação de organismo inteiro estão entre as alternativas mais promissoras às vacinas de subunidade e dependem da administração de esporozoítos vivos, mas atenuados, a fim de se obter proteção imune. Uma dessas estratégias baseia-se na administração de esporozoítos atenuados por radiação (EAR), os quais retêm motilidade e capacidade de infetar hepatócitos, mas são incapazes de replicar o seu ADN e crescer significativamente, abortando o seu desenvolvimento em pontos iniciais da infeção hepática, mas desencadeando uma forte resposta imunitária. Uma dessas vacinas, desenvolvida pela empresa Sanaria, Inc., baseia-se na administração de esporozoítos criopreservados, assépticos, purificados e metabolicamente ativos de P. falciparum atenuados por radiação X, a vacina PfSPZ. Esta vacina foi administrada por injeção intravenosa e demonstrou fornecer uma proteção robusta e duradoura contra infeção de malária humana controlada (IMHC) de uma estirpe homóloga, assim como, embora em menor grau, contra IMHC de uma estirpe heteróloga e ainda contra infeção naturalmente adquirida num cenário de transmissão sazonal intensa em Mali, África. No entanto, um ensaio clínico recentemente realizado na Tanzânia demonstrou uma perda total de eficácia da vacina PfSPZ em indivíduos infetados com o vírus da imunodeficiência humana (VIH) sob terapia antirretroviral (TARV) estável, enquanto que 80% dos voluntários negativos ao VIH ficaram protegidos. A malária e a SIDA, causada pela infeção pelo VIH, encontram-se na lista das dez doenças infeciosas humanas mais mortais, existindo uma co-endemicidade geográfica considerável entre estas especialmente na África Subsariana. Em 2019, 68% das pessoas que vivem com VIH (25.8 milhões) e 94% dos casos de malária ocorreram na região Africana. Desta forma, coinfecção entre o VIH e Plasmodium é altamente comum e está demonstrado que pode ter um impacto negativo no desenvolvimento de ambas as doenças. Um estudo reportou que um excesso de 3 milhões de casos de malária clínica e 65,000 mortes causadas por malária podem ser atribuídos à infeção por VIH todos os anos, em África. Assim sendo, uma vez que a maioria dos indivíduos infetados pelo VIH vive em África, estes beneficiariam bastante de uma vacina contra a malária, especialmente as crianças. Torna-se então fundamental perceber qual a causa da perda total de eficácia reportada no ensaio clínico da vacina PfSPZ em indivíduos infetados pelo VIH. Embora esta perda se possa dever à desregulação imune causada pela infeção pelo VIH, trabalhos anteriores do laboratório de acolhimento demonstraram que várias TARVs têm um impacto negativo significativo na infeção hepática por parasitas Plasmodium in vivo. Desta forma, colocamos a hipótese de que a perda de eficácia da vacina de EAR observada em indivíduos infetados com o VIH, sob TARV estável, pode ser devida à atividade direta das TARVs nos parasitas hepáticos, diminuído o número de parasitas imunizantes e, consequentemente, limitando a sua capacidade de funcionarem como agentes de imunização de organismo inteiro. Esta tese de mestrado teve como principais objetivos: 1) perceber qual o efeito dos antirretrovirais (ARVs) e TARVs recomendadas pela OMS na infeção hepática pelo parasita Plasmodium e 2) avaliar o impacto da administração concomitante de TARVs na eficácia de proteção da imunização com EAR contra malária. Com o objetivo de perceber se a falta de eficácia observada para a vacina candidata de EAR poderia ser atribuída à atividade das TARVs nos parasitas imunizantes e identificar TARVs que, mantendo a sua ação antirretroviral, não impactassem negativamente a eficácia de imunização com EAR contra malaria em indivíduos infetados com VIH. Os nossos resultados demonstraram que dois ARVs, o efavirenz (EFV) e a combinação lopinavir/ritonavir (LPV/r), inibem significativamente a infeção hepática por Plasmodium in vitro e que as TARVs que contêm estes compostos apresentam uma atividade inibitória semelhante. Análise comparativa in vivo de murganhos tratados com TARVs ou DMSO como controlo, confirmou o efeito inibitório observado in vitro para o EFV e o LPV/r na infeção hepática por Plasmodium, indicando que a administração destes ARVs leva não só à redução do número de parasitas que infetam com sucesso o fígado, mas também afeta significativamente o seu desenvolvimento. É importante referir que o dolutegravir (DTG), um ARV recentemente introduzido como primeira linha nas diretrizes da OMS para substituir o EFV como TARV preferida, não apresentou qualquer impacto significativo in vitro ou in vivo na infeção hepática por Plasmodium, quer individualmente quer em combinação. A avaliação do impacto das TARVs de primeira linha na eficácia de imunização com uma dose subótima de EAR contra a malária, revelou uma redução significativa na força de imunização em murganhos que estavam sob administração concomitante de EFV ou LPV/r, mas não DTG, medida pelo período de pré-patência necessário para o aparecimento dos primeiros parasitas no sangue após a infeção. No entanto, estudos utilizando uma dose mais elevada de imunização com EAR mostraram que não havia diferenças significativas na proteção entre murganhos sob administração concomitante de TARVs ou DMSO. Além disso, a probabilidade de desenvolver malária cerebral experimental foi a mesma para murganhos sob TARV ou DMSO, em ambas as doses de imunização. Em conjunto, os nossos resultados demonstram que enquanto algumas TARVs impactam significativamente a capacidade dos parasitas Plasmodium para funcionar como agentes imunizantes de vacinação de organismo inteiro, outras, como as que incluem o DTG, não apresentam esse efeito. Contudo, os nossos resultados também indicam que os protocolos de imunização com EAR podem ser otimizados para superar o impacto negativo da administração concomitante de TARVs, mantendo a sua capacidade de conferir proteção estéril. Consequentemente, o nosso estudo aponta para fatores adicionais, tais como o sistema imunitário potencialmente enfraquecido dos indivíduos infetados com o VIH, como contribuintes para a falta de eficácia da imunização com doses elevadas de EAR nestes indivíduos. Além disso, este estudo indica que futuras campanhas de vacinação de organismo inteiro contra a malária de populações infetadas com VIH devem ter em conta o efeito da administração concomitante de TARVs sobre o agente imunizante, adotando TARVs que contêm DTG sempre que possível.

A pandemia COVID-19 representa um desafio sem precedentes para a humanidade e para a ciência. O estudo do vírus SARS-CoV-2 e da doença COVID-19 atingiu dimensões nunca antes verificadas para uma doença individual, envolvendo o maior financiamento para investigação de que há memória. Em poucos meses, a comunidade científica mobilizou-se num esforço coletivo na procura de soluções de tratamento e prevenção, dando origem a um fenómeno recentemente descrito por Ed Yong no The Atlantic (dezembro 2020), como “COVID-ized science”. Embora reconheçam a necessidade e os benefícios deste investimento, os autores deixam um alerta para o impacto negativo que a concentração quase exclusiva de recursos financeiros, tecnológicos e humanos na investigação COVID-19 poderá ter noutras áreas igualmente críticas, entretanto desaceleradas ou abandonadas.

Esta Newsletter (NL) resulta de uma parceria entre o Instituto de Saúde Baseada na Evidência e a Cochrane Portugal, e tem como objectivo disponibilizar informação sobre áreas interessantes para a prática clínica, com base na melhor evidência científica. São incluídos estudos relevantes, criticamente avaliados pela sua validade, importância dos resultados e aplicabilidade prática, resumidos numa óptica de suporte à decisão. É dada prioridade a estudos de causalidade incluindo-se ainda, quando justificado, estudos qualitativos e metodológicos, assim como revisões científicas. O conteúdo da NL é da exclusiva responsabilidade do(s) seu(s) autor(es).

Objective: To assess the prevalence and factors related to hypnotic intake in Portugal. Methods: Data from the National Health Survey conducted in 1998-1999 in a representative sample of 39 640 subjects aged > 18 years. Subjects were asked if they took hypnotics, for how long and also for how many days they had taken them the previous 2 weeks. Results: Overall, 13% of subjects reported taking hypnotics, and this frequency was higher for women (19%) than for men (7.4%, p < 0.001) and increased from 1.5% among age group [18-25[ to 26.2% among subjects aged > 75 years (p < 0.001). In both genders, the Lisbon region had the higher prevalence (15.4%) and Algarve the lowest (10%, p < 0.001); also ex-smokers the highest (15.4%), and current smokers the lowest prevalence (6.8%, p < 0.001). Women took hypnotics continuously during the previous 2 weeks more frequently than men (75 vs. 70%, p < 0.001), and the main reason for intake also differed between genders (p < 0.001). Finally, 69% of the subjects reported taking hypnotics for more than 3 years, and this prevalence was higher in women (71.6%) than in men (62.0%, p < 0.001). Multivariate analysis showed hypnotic intake to be positively related with age and inversely related with a sedentary lifestyle in both genders, and positively related with smoking and negatively related with obesity in men. Conclusion: A significant percentage of the Portuguese population takes hypnotics in an almost continuous manner, and the intake is related to gender, age, obesity, and physical activity status.

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Objective: To assess the relationships between milk intake and body mass index (BMI) in a representative sample of the mainland Portuguese population. Design: Cross-sectional study. Setting: National Health Interview Survey 1998-1999. Average daily milk intake was calculated by a frequency questionnaire that also assessed the average volume of one serving. BMI was derived from the subject's reported height and weight. Subjects: A total of 17,771 men and 19 742 women aged > or =18 y. Results: In men, milk intake was inversely related to BMI (r = -0.10, P < 0.001), whereas the relationship in women was weaker (r = -0.06, P < 0.001). In men, prevalence of milk consumers was lower in obese (62%) and in overweight (68%) than in normal weight subjects (71%, P < 0.001). After adjusting for age, region, physical activity, smoking, number of meals and educational level, milk intake decreased with increasing BMI (adjusted mean +/- s.e.: 280 +/- 5, 266 +/- 5 and 246 +/- 7 ml/day for normal, overweight and obese subjects, respectively, P < 0.001), even after excluding subjects who did not consume milk (368 +/- 5, 353 +/- 6 and 346 +/- 8 ml/day, P < 0.02). In women, prevalence of milk consumers was lower in obese (71%) and in overweight (72%) than in normal weight subjects (76%, P < 0.001). In women younger than 55 y, milk intake decreased with increased BMI categories (291 +/- 9, 271 +/- 10 and 269 +/- 11 ml/day for normal, overweight and obese subjects, respectively, P < 0.001), whereas no relationship was found in the older group. Conclusions: Increased calcium intake is slightly but significantly negatively related with BMI in men and premenopausal women. The lack of relationship in older women might be due to the hormonal status, but awaits further investigation.