RCAAP Repository

Os experimentos realizados tiveram como objetivo determinar a taxa de sobrevivência in vitro e in vivo de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em meio contendo 9,0M de etileno glicol e 0,3M de sacarose. As soluções testadas foram denominadas de I e IS, quando a adição do crioprotetor foi realizada em duas etapas, e II e IIS, quando a adição deste foi realizada em apenas uma etapa. Na solução de vitrificação I, foi realizada inicialmente uma desidratação prévia dos embriões por um período de 2 minutos em solução de 1,8M de EG em PBS + 6% de BSA e, logo após, eles foram transferidos, por um período de 30 segundos, para a solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IS, o procedimento foi idêntico ao da solução I, apenas com o acréscimo de 0,3M de sacarose às soluções crioprotetoras. Na solução de vitrificação II, os embriões foram expostos diretamente a uma solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, onde permaneciam por 30 segundos antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IIS, o procedimento foi idêntico ao da solução II, apenas com a adição de 0,3M de sacarose à solução crioprotetora. No experimento I, foi determinada a taxa de sobrevivência de 299 blastocistos após a exposição às soluções crioprotetoras, não sendo observada diferença estatística entre os tratamentos e o grupo controle. O experimento II permitiu avaliar a sobrevivência embrionária in vitro (taxa de eclosão) após a vitrificação de 330 blastocistos, onde as soluções I e IS foram estatisticamente superiores às demais, apresentando taxas de eclosão de 49 e 40%, respectivamente. No experimento III, realizou-se a transferência de 141 blastocistos vitrificados, após a exposição às soluções I e IS, para fêmeas receptoras. Não houve diferenças estatísticas entre as taxas de sobrevivência embrionária determinadas aos 14 dias de prenhez, tanto para implantações (37 e 32%) quanto para fetos (27 e 27%), respectivamente. A presença de sacarose na solução de vitrificação não proporcionou uma maior sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em uma solução contendo 9,0M EG.

O objetivo do presente estudo foi de avaliar a amplitude da variação de pH em meios de maturação e de cultivo embrionário, com diferentes concentrações do tampão HEPES. Inicialmente, foi determinado o efeito de diferentes concentrações de HEPES (0, 12,5 e 25,0mM) na variação do pH dos meios de maturação (TCM-199 modificado) e desenvolvimento embrionário (KSOM modificado) em meio ambiente, à temperatura de 25ºC, e na estufa, em uma atmosfera de 5% de CO2 em ar a 39ºC. Em um segundo experimento, os oócitos foram maturados em TCM-199 modificado sem HEPES (142 oócitos) ou com 25,0mM de HEPES (137 oócitos) e foi avaliado índice de blastocisto. O meio Fert-TALP foi utilizado para a fecundação, sendo que os embriões foram co-cultivados com células epiteliais de oviduto (CEO) em KSOM modificado com 10% de SFB. Um terceiro experimento foi delineado para determinar a importância da presença do HEPES no meio de cultivo embrionário sobre o desenvolvimento de embriões bovinos in vitro. Para isso, após a retirada do cumulus, os zigotos foram divididos ao acaso e co-cultivados com CEO em KSOM modificado (com 10% de SFB) sem HEPES (grupo controle; n = 95) ou com 25,0mM de HEPES (grupo HEPES; n = 92). Foram mantidos em cultivo somente os embriões com duas ou mais células, sendo considerados desenvolvidos os que atingiram o estádio de blastocisto expandido (Bx), 7 e 9 dias após inseminação. O cultivo dos oócitos e embriões, em ambos os experimentos, foi efetuado em estufa a 39ºC, com uma atmosfera contendo 5% de CO2 e umidade saturada. Os resultados mostram que os meios contendo 25,0mM de HEPES foram mais eficientes em minimizar a variação do pH que os meios com 12,5mM ou sem HEPES. Além disso, a adição de HEPES ao meio de maturação aumentou os índices de Bl sobre o total de oócitos e sobre o total de clivados (21,9% e 42,86%) com relação ao controle (10,56 e 16,67%; p<0,05). Na determinação da importância do HEPES no desenvolvimento embrionário, o grupo HEPES apresentou índices superiores de Bx (45,65%) em relação ao controle (11,58%; p<0,01). A uniformidade dos resultados foi um dos aspectos positivos observados quando o HEPES estava presente no meio de cultivo embrionário. Portanto, o uso do HEPES, durante a maturação e o cultivo embrionário, é recomendável para o aumento da produção de embriões in vitro com maior repetibilidade.

O presente trabalho foi conduzido no período de 14 de julho a 06 de outubro de 1992, nas dependências do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Santa Maria, com o objetivo de avaliar o efeito de duas fontes protéicas (grão de soja vs farelo de soja) sobre o desempenho de terneiros de corte em confinamento. O período experimental teve duração de 84 dias, subdivididos em quatro períodos de 21 dias. Foram utilizados 20 terneiros inteiros cruza Nelore x Charolês, com média de peso inicial de 160kg e média de idade de 7 meses, distribuídos em quatro piquetes com 800m² cada um. Os animais foram submetidos aos seguintes tratamentos: T1 - silagem de sorgo mais concentrado (farelo de soja + milho + mistura mineral), e T2 - silagem de sorgo mais concentrado (soja grão + milho + mistura mineral). O grão de soja foi utilizado in natura e triturado no momento do preparo da ração. As proporções de volumoso : concentrado utilizadas no experimento foram de: 75,04 : 24,96; 71,04 : 28,96; 67,53 : 32,47 e 62,72 : 37,28, no 1º, 2º, 3º e 4º períodos, respectivamente. As dietas foram isoprotéicas, contendo um teor médio de proteína bruta de 12,5% na matéria seca. Os resultados (média dos quatro períodos) para ganho de peso médio diário (kg/an/dia), consumo de matéria seca (kg/an/dia) e conversão alimentar para T1 foram de 1,114kg; 6,03kg e 5,55, respectivamente e, para T2, foram de: 0,975kg; 5,69kg 5,91, respectivamente. Os animais submetidos ao T1 apresentaram maior ganho de peso médio diário (P < 0,05). Quando o consumo de matéria seca foi avaliado em kg/an/dia, a análise de variância demonstrou diferença significativa entre os tratamentos (P < 0,05). No entanto, quando se avaliou o consumo de matéria seca por 100kg de peso vivo e por unidade de tamanho metabólico, não ocorreu diferença significativa entre os mesmos (P > 0,05). Quanto à conversão alimentar, não houve diferença significativa (P > 0,05) entre os tratamentos.

O trabalho foi realizado no Setor de Ovinocultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Santa Maria, objetivando determinar o crescimento das principais partes da carcaça e suas proporções em relação ao peso de corpo vazio e peso de carcaça fria de cordeiros abatidos com diferentes pesos. Foram utilizados 22 cordeiros machos inteiros, filhos de carneiros Texel e ovelhas cruzas (Texel x Ideal). Destes, quatro foram abatidos no início do experimento (24 horas após o nascimento), seis ao desmame (45 dias de idade) e os remanescentes aos 28 (6 animais) ou 33 kg (6 animais). Os cordeiros foram confinados em baias individuais, com suas respectivas mães, até o desmame. A determinação do crescimento dos cortes da carcaça foi realizada através de equações alométricas, utilizando-se o logaritmo do peso de cada região da carcaça, em função do logaritmo do PCF ou PCV. As proporções de quarto, paleta e pescoço, em relação ao PCV, foram semelhantes (P>0,05) nos pesos de abates estudados, no entanto, houve diferença (P<0,05) entre costela e espinhaço. Em relação ao PCF, houve diferença (P<0,05) entre os pesos de abate para as proporções de quarto, costela e pescoço. Os coeficientes de alometria encontrados demonstram que a costela é o corte de crescimento mais tardio, enquanto que as demais partes da carcaça são de crescimento precoce.

A maciez da carne geralmente é o atributo mais importante para o consumidor. Vários são os fatores que influem sobre esSe aspecto no animal, como por exemplo: genótipo, idade, sexo, entre outros. Neste estudo, verificou-se a influência da idade e do sexo na maciez do músculo Longissimus dorsi de ovinos da raça Corriedale, através de métodos sensoriais e instrumentais. Após o abate, realizou-se a avaliação visual da textura do músculo pela granulação da superfície do mesmo. As amostras foram congeladas por 5 meses. Após a cocção, foi analisada a maciez da carne pelo equipamento Warner-Bratzler shear medindo a força de cisalhamento, e por avaliação sensorial realizada por uma equipe treinada de julgadores. Resultados obtidos pela avaliação sensorial e instrumental indicaram que o músculo Longissimus dorsi de fêmeas e de animais de menor idade foram mais macios.

In vitro protein digestibility of protein sources has been correlated with in vivo digestibility values. However, factors like protein origin, enzyme used and its concentration, pH and processing have been related with the significance of the correlation between the estimates. To address only the enzyme concentration factor, this paper had the objective of testing pepsin at 0.2, 0.02, 0.002 and 0.0002% using the standard AOAC (1995) procedure. Two meat and bone meals (MBM) with low and high crude protein (CP) content were used to determine the coefficient of solubility of CP in pepsin and HCl (CSCPPEPH). Centrifugation was used to establish the nitrogen (N) in the soluble phase, instead of filtration and analysis of N in the residue. The variance analysis and a non-linear asymptotic model were adjusted. The CSCPPEPH under different pepsin concentrations for the two MBM showed higher solubility discrimination with low pepsin concentration. The level of 0.0002% pepsin is better to predict the CP soluble in MBM. This finding implies the assumption that 0.2% pepsin found in the AOAC is not correct for the purpose of determining the range of solubility in high and low CP content in MBM.

Com o objetivo de estudar o feno do terço superior da rama da mandioca no desempenho de coelhos em crescimento, foram utilizados 32 coelhos da Raça Nova Zelândia Branco, de 50 a 70 dias de idade. Os animais foram distribuídos num delineamento experimental, em blocos casualizados dentro de sexo, com 4 tratamentos (4 níveis de inclusão de feno de mandioca 0, 10, 20 e 30%) e 8 animais em cada bloco, com duas repetições dentro de cada bloco, sendo as repetições de um animal por unidade experimental. O peso vivo aos 70 dias de idade diminuiu linearmente (P<0,05) à medida que se aumentou o nível de inclusão do feno da rama da mandioca nas dietas. Por outro lado, as demais características de desempenho e carcaça não foram afetadas com os níveis de inclusão do feno. Os dados indicam que o feno da rama da mandioca é viável até o nível de 20% nas rações.

Desenvolveu-se este trabalho com o objetivo de avaliar o efeito de ácidos orgânicos adicionados à dieta de aves de postura. Foram utilizadas 75 frangas Isa Brown de 4 meses de idade, divididas em três grupos experimentais (I, II e III) de 25 aves cada e avaliadas por um período de 8 semanas. O grupo I recebeu ração tratada com ácidos orgânicos por quatro semanas, enquanto que o grupo II recebeu ração com ácidos orgânicos por oito semanas, permanecendo o grupo III sem a suplementação de ácidos orgânicos durante todo o período experimental, sendo definido como grupo controle. Ao final do experimento, foram observados dados de produção de ovos, peso das aves, qualidade e peso de ovos. Os resultados demonstraram que a produção de ovos foi melhor nas aves tratadas com o aditivo acidificante (grupos I e II), sendo que os acidificantes também proporcionaram um melhor peso corporal nas aves (P<0,05). A qualidade e o peso dos ovos não foram afetados pela suplementação desses aditivos.

O presente trabalho foi realizado com o objetivo de verificar o efeito da suplementação alimentar com Artemia franciscana no desempenho de larvas de jundiá (Rhamdia quelen). Os tratamentos foram: T1 - Suplementação com náuplios de Artemia durante 7 dias; T2 - Suplementação com cistos de Artemia durante 7 dias; T3 - Suplementação com náuplios de Artemia durante 3 dias; T4 - Suplementação com cistos de Artemia durante 3 dias; T5 - Sem suplementação. Cada tratamento possuía 4 repetições. O experimento, realizado em sistema com recirculação de água, teve duração de 20 dias. Em todos os tratamentos, as larvas receberam ração ad libitum com 41% de PB e 4293Kcal EB/kg. Os resultados demonstraram que o fornecimento de náuplios proporcionou melhor crescimento que o de cistos ou somente ração. Com relação ao peso e produto peso x sobrevivência, constataram-se diferenças significativas dos tratamentos 1 e 3 (náuplios) para os tratamentos 2 e 4 (cistos). A baixa sobrevivência do T5 foi responsável pelo pior resultado deste tratamento com relação ao produto peso x sobrevivência, porém sem diferenças de peso em relação ao T2 e T4. Não se constataram diferenças significativas com relação à sobrevivência entre os tratamentos que receberam cistos e náuplios de Artemia. Somente o T5 apresentou menores taxas de sobrevivência que os demais. As melhores taxas de crescimento específico (TCE) foram de 25,6 e 25,4%/dia, respectivamente para o T1 e T3 durante os 20 dias de experimento.

A densidade de estocagem (DE) é um fator que pode afetar o crescimento dos peixes. Como a DE ótima varia de acordo com a espécie e o sistema de cultivo utilizado, o presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da DE sobre o crescimento de alevinos de Rhamdia quelen mantidos em sistema de circulação fechada. Foram utilizadas 3 DE nos experimentos: 114, 227 e 454 alevinos/m³. Ao final de 50 dias, verificou-se uma correlação significativa entre comprimento, peso, sobrevivência, taxa de crescimento específico, DE final, biomassa por volume e a DE. O aumento da DE (dentro dos limites estudados) provocou um aumento nesses parâmetros. Portanto, o presente experimento demonstra que é mais vantajoso criar alevinos de jundiá em circuito fechado na DE de 454 alevinos/m³ do que em DE menores. Experimentos adicionais devem ser realizados para se verificar se é possível aumentar ainda mais a DE sem reduzir o crescimento dos alevinos dessa espécie.

O soro de leite fermentado pela levedura Kluyveromyces fragilis, após secagem em spray drier, foi submetido à avaliação da qualidade protéica através de uma análise aminoacídica e de um estudo biológico pelos métodos: Relação da Eficiência Protéica (PER), Relação da Eficiência Líquida da Proteína (NPR) e Utilização Líquida da Proteína (NPU). Na análise aminoacídica, foram utilizadas como comparativo a composição de aminoácidos das proteínas padrão do ovo e da FAO. Os resultados indicaram um alto nível de lisina (65,60mg/g de proteína) e baixos níveis de metionina e valina, respectivamente, 14,90mg e 45,80mg/g de proteína. A avaliação biológica foi conduzida durante 4 semanas, sendo utilizados 24 ratos desmamados aos 23 dias de idade. Os resultados para PER, NPR e NPU foram respectivamente, 19,75%, 46,33% e 26,54%, comparados com os valores obtidos com a proteína padrão caseína. A qualidade da proteína do soro seco fermentado apresentou-se inferior à proteína da caseína.

Eight five-month-old male lambs received a diet with marginal levels of sodium (0.5 g Na/kg DM); four lambs were given a single dose of infective Haemonchus contortus larvae (4,600 L3/ head) and four were kept uninfected. The lambs were slaughtered 30 days after the infection. Sodium concentration was determined in the abomasal fluid at the slaughter. The balance between intake and faecal excretion of sodium was evaluated. Saliva was collected at days zero, 20 and 30 to determine the Na:K ratio. The mean total worm burden retrieved was 1390. The infection increased abomasal sodium concentration (p< 0.001) and reduced faecal sodium excretion (p<0.02), but there was not a significant relationship between worm burden and abomasal (p >0.082) or faecal sodium excretion (p>0.5). The higher the abomasum sodium concentration, the lower the faecal sodium excretion (p < 0.001). Apparent digestibility of sodium was similar between infected and uninfected. At the end of the experiment a slight decrease in the salivary Na:K ratio was observed, in animals of both groups, caused mostly by diet rather than the parasitism. It was concluded that although H. contortus infection increased the loss of sodium into the abomasum there was a greater compensatory intestinal absorption to prevent a significant change in the sodium status of sheep.

São descritos três casos de leishmaniose cutânea em cobaias (Cavia porcellus) machos de dois anos de idade que eram criadas como animais de estimação. As lesões macroscópicas eram semelhantes em duas cobaias e consistiam de nódulos cutâneos ulcerados no aspecto dorsal do pavilhão auricular de ambas as orelhas. Na outra cobaia, a lesão consistia de engrossamentos irregulares na pele do escroto que apareceram após uma orquiectomia realizada dois meses antes. A histopatologia era semelhante nos três casos e consistia de acentuada dermatite granulomatosa, com ulceração e numerosas formas protozoárias amastigotas no citoplasma de macrófagos, sugestivas de Leishmania sp. A microscopia eletrônica confirmou o diagnóstico de leishmaniose.

Relata-se o caso de uma gata Siamês de seis meses de idade que desde o nascimento apresentava paraplegia espástica associada à incontinência fecal e urinária. No exame neurológico, exibia paralisia, analgesia, hiperreflexia e perda das reações posturais nos membros posteriores. Radiografias simples e contrastadas (mielografia) da coluna vertebral toracolombar evidenciaram estreitamentos do canal vertebral na região lombar e da medula espinhal, vértebras torácicas e lombares. Na necropsia e exame histopatológico, verificou-se hipoplasia segmentar caracterizada pelo afinamento localizado da medula espinhal em T4-T6 e L2-L3, depleção neuronal na substância cinzenta e filetes nervosos interligando as partes craniais e caudais, todos recobertos por dura mater íntegra e espessada. Essas alterações permitiram concluir o diagnóstico de mielodisplasia segmentar múltipla.

Muitos aspectos ecológicos envolvidos nas interações entre espécies leguminosas e estirpes de rizóbio têm sido facilmente entendidos com o emprego de técnicas que utilizam genes marcadores. A introdução de um gene marcador específico tem se mostrado altamente viável para análises dessas interações. Os genes marcadores são capazes de codificar para produtos que podem ser facilmente identificados ou medidos, especialmente, enzimas que podem atuar em diferentes substratos, fornecendo produtos coloridos ou fluorescentes facilmente detectáveis. De uma maneira geral, os genes marcadores têm sido utilizados em diferentes aspectos da ecologia microbiana, como nos estudos de competição entre estirpes de rizóbio, expressão de genes simbióticos, colonização da rizosfera e raízes, entre outros. Em todos esses estudos, os genes repórteres precisam ser introduzidos no genoma alvo através de um plasmídeo ou por inserção cromossomal. Nesta revisão, são enfatizados, principalmente, os diversos usos e aplicações de genes marcadores nos estudos de ecologia microbiana, com ênfase no sistema GUS (b-glucuronidase).

No presente artigo, os autores fazem uma revisão dos aspectos epidemiológicos da teníase e cisticercose. A cisticercose é produzida pelo desenvolvimento da forma larval da Taenia, o Cysticercus, nos tecidos, sendo transmitida pela ingestão de ovos de Taenia. A cisticercose humana e animal são consideradas um grande problema sócio-econômico em muitos países. É considerada uma zoonose endêmica, estando distribuída nos países em desenvolvimento, especialmente nas áreas rurais. A invasão da larva no sistema nervoso central em humanos constitui uma séria complicação. A cisticercose é um dos maiores problemas de saúde pública dos países em desenvolvimento e a neurocisticercose é considerada a doença parasitária mais comum do sistema nervoso humano. A conservação da carne em temperatura inferior a -15ºC durante seis dias, sua cocção adequada, além da inspeção sanitária das carnes e o diagnóstico e tratamento da teníase humana em áreas endêmicas constituem as principais medidas de controle.

A utilização de métodos indiretos para estimar o consumo e a digestibilidade dos alimentos por ruminantes é bastante importante, porque pode representar uma economia de tempo, dinheiro e trabalho em relação aos experimentos convencionais e, também, por permitir tais estimativas sob condições extensivas de pastejo. Dentre esses métodos, sobressai-se o dos indicadores fecais. Várias substâncias têm sido utilizadas para esse fim. Este artigo é uma revisão de alguns aspectos sobre o uso de n-alcanos como indicadores em estudos de nutrição de ruminantes.

O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar variações no índice de área foliar, altura das plantas, número de nós, comprimento dos entrenós na haste principal e altura das vagens em relação à superfície do solo do feijoeiro irrigado e cultivado em diferentes populações de plantas e espaçamentos entre linhas de cultivo. O experimento foi conduzido no ano agrícola 1997/98, em área experimental do Departamento de Engenharia Rural da Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, RS. A cultivar de feijão preto BR-FEPAGRO 44 - Guapo brilhante, de crescimento indeterminado (tipo II), foi cultivada em três populações de plantas (175, 250 e 325 mil plantas há-1) e três espaçamentos entre linhas de cultivo (35, 50 e 65cm). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, bifatorial, com quatro repetições. Irrigações por aspersão foram aplicadas quando a evapotranspiração máxima da cultura, estimada com base na evaporação do tanque classe "A", indicava um valor acumulado de 25mm. Os resultados demonstraram que o aumento da população de plantas ocasionou aumento no índice de área foliar durante a fase de crescimento vegetativo da cultura, sendo que na fase reprodutiva, o índice de área foliar foi afetado pelo espaçamento entre as linhas de cultivo. A área foliar, a altura de plantas e o número de nós na haste principal aumentaram com a redução na população de plantas. A altura da extremidade da primeira vagem das plantas em relação ao solo apresentou comportamento quadrático com o aumento na população de plantas. Os diferentes espaçamentos e populações de plantas não afetaram o comprimento dos entrenós na haste principal das plantas.

O objetivo deste experimento foi avaliar o efeito de diferentes populações de plantas e espaçamentos entre linhas de cultivo na produção de massa seca, rendimento de grãos e componentes do rendimento da cultura do feijoeiro irrigado. O experimento foi conduzido no ano agrícola 1997/1998, em área do Departamento de Engenharia Rural da Universidade Federal de Santa Maria, RS. A cultivar de feijão preto BR-FEPAGRO 44 - Guapo brilhante, habito de crescimento indeterminado (tipo II), foi submetida a três populações de plantas (175, 250 e 325 mil plantas há-1) e três espaçamentos entre linhas de cultivo (35, 50 e 65cm). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, bifatorial, com quatro repetições. Irrigações por aspersão foram aplicadas quando a evapotranspiração máxima da cultura, estimada a partir da evaporação do tanque classe "A", indicava um valor acumulado de 25mm. Os resultados demonstraram que as diferentes populações de plantas e espaçamentos entre linhas de cultivo não ocasionaram alterações no rendimento de grãos e massa de mil sementes. No entanto, o número de sementes por vagem e de vagens por planta aumentaram com a redução na população de plantas. Na fase do enchimento de grãos, a redução do espaçamento entre linhas de cultivo aumentou a massa seca da parte aérea das plantas. A cultivar de feijoeiro, BR-FEPAGRO 44 - Guapo brilhante, apresenta elevada plasticidade dos componentes do rendimento, havendo compensação no rendimento de grãos nas menores populações de plantas com aumento da produção por planta.

Limonium latifoKum Kuntze é uma flor de corte cuja produção comercial de mudas é viabilizada através do cultivo de tecidos. Com o objetivo de aperfeiçoar o protocolo para a propagação clonal in vitro, fez-se uma sequência de estudos em que foram avaliados: viabilidade do uso de segmentos nadais do eixo da inflorescência imatura como explantes; tipos e concentrações de citocininas (cinetina-KIN e benzilaminopurina-BAP) na regeneração; tipos e concentrações de auxinas (ácido naftalenoacético-ANA e ácido indolbutírico-AIB) na fase de enraizamento in vitro; e técnicas de aclimatizaçao. Explantes oriundos de segmentos nadais da parte apical do eixo da inflorescência imatura são viáveis para a micropropagaçao de L. latifolium. Na fase de regeneração, os melhores resultados foram obtidos com o uso de meio de cultivo MS com 0,7mg de BAP/l por 35 dias. A fase de enraizamento m vitro foi feita com a manutenção dos explantes por 30 dias em meio MS acrescido de 1mg de AIB/l , garantindo ótimo índice de sobrevivência após a transferência para in vivo. A aclimatiwção foi feita sob cobertura plástica, em bancada de casa de vegetação, à temperatura ambiente e com irrigação por nebulização. Utilizaram-se, como recipientes, bandejas multicelulares de isopor, com 242 células e aproximadamente 10cm³ cada, preenchidas com casca de arroz carbonizada e esterilizada. As mudas receberam, quinzenalmente, adubação líquida com 0,5g/l de um adubo comercial (15:5:l5+micronutrientes). O processo in vitro dura 100 a 120 dias e um explante origina 15 a 30 mudas.